Mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát liên quan của đột biến precore và basal core promoter với diễn biến thể bệnh viêm gan bùng phát ở bệnh nhân viêm gan B mạn. Nghiên cứu tiến hành từ tháng 10/2012 đến 08/2013 trên 100 bệnh nhân ≥ 15 tuổi được chẩn đoán viêm gan siêu vi B mạn đợt tiến triển cấp hay viêm gan siêu vi B mạn đợt bùng phát điều trị nội trú hay ngoại trú tại bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới TP.HCM.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 ĐỘT BIẾN PRECORE VÀ BASAL CORE PROMOTER Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN SIÊU VI B MẠN ĐỢT BÙNG PHÁT Nguyễn Thị Phương Thảo*, Nguyễn Thị Cẩm Hường**, Phạm Thị Lệ Hoa** TÓM TẮT Mở đầu: Đột biến Precore (PC), Basal core promoter (BCP) gen C siêu vi viêm gan B gây thay đổi biểu HBeAg đề cập đến nguyên nhân gây nên đợt bùng phát viêm gan siêu vi B (VGSV B) mạn Hiện chưa có nghiên cứu nước ảnh hưởng đột biến PC, BCP với diễn biến viêm gan bùng phát Mục tiêu: Khảo sát liên quan đột biến PC BCP với diễn biến thể bệnh viêm gan bùng phát bệnh nhân viêm gan B mạn Phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang thực từ tháng 10/2012 đến 08/2013 100 bệnh nhân ≥ 15 tuổi chẩn đoán VGSV B mạn đợt tiến triển cấp hay VGSV B mạn đợt bùng phát điều trị nội trú hay ngoại trú BV Bệnh Nhiệt Đới TPHCM Đột biến PC/ BCP xác định kỹ thuật giải trình tự chuỗi gen, sử dụng kít Taq Takara BigDye V3.1 máy ABI 3130; phân tích kết phần mềm CLC Main Workbench; Trung tâm Y SHPT ĐHYD TP.HCM Kết quả: Tỷ lệ VG đợt bùng phát nhóm có đột biến PC cao ý nghĩa so với nhóm khơng có đột biến (61,4% so với 39,3%; OR=2,46 (1,09-5,52) Tỷ lệ VG bùng phát nhóm có khơng có đột biến BCP khơng khác Phân tích riêng 62 bệnh nhân khơng có BCP ghi nhận tỷ lệ VG bùng phát nhóm có PC cao nhóm khơng đột biến (60,6% so với 27,6%; p=0,009) Tuy nhiên nhóm có đột biến BCP, tỷ lệ VG bùng phát nhóm có khơng có đột biến PC không khác mức cao (55,3% 45,2%, p=0,33) Kết luận: Có liên quan ý nghĩa diện đột biến gen PC với thể bệnh viêm gan bùng phát, nhóm chưa có đột biến BCP (p=0,009) Từ khóa: Đột biến Precore, đột biến Basal core promoter, viêm gan siêu vi B mạn đợt bùng phát ABSTRACT PRECORE AND BASAL CORE PROMOTER MUTATION IN PATIENTS WITH ACUTE EXACERBATION OF CHRONIC HEPATITIS B Nguyen Thi Phuong Thao, Nguyen Thi Cam Huong, Pham Thi Le Hoa * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 19 - Supplement of No - 2015: 336 - 341 Background: Mutations in PC and CP region of HBV has been shown to be associated with acute exacerbation of chronic hepatitis B Currently, no study about the role of PC, BCP mutation in the acute exacerbation of CHB in Vietnam Objective: To investigate the association of PC, BCP mutation with the emergence of acute exacerbation in chronic hepatitis B patients Methods: Cross-sectional descriptive study of 100 patients ≥ 15 years old with a diagnosis of acute-onchronic hepatitis B or acute exacerbation of chronic hepatitis B at the Hospital for Tropical Diseases HCMC from October-2012 to August-2013 The PC and BCP detection were done by PCR and sequencing technique on Applied Biosystem 3130xl Gienetic Analyzer, using Taq Takara BigDye V3.1 Kit of ABI, using CLC Main * Bộ môn Nhiễm, ĐH Y Huế ** Bộ môn Nhiễm ĐHYD TP HCM Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Thị Phương Thảo ĐT: 0946886459 Email: nguyenphuongthao227@gmail.com 336 Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 Nghiên cứu Y học Workbench Sofware, at the Center for Molecular Biomedicine, University of Medicine and Pharmacy of HCMC Results: The rate of acute exacerbation of chronic hepatitis B in group with PC mutation was significantly higher than that in group without PC (61.4% versus 39.3%; OR=2.46 (1.09-5.52); p=0.028) Stratified analysis in subgroup without BCP (n=62), the rate of acute exacerbation of chronic hepatitis B in PC positive group was significantly higher than that in PC wild type group (60.6% vs 27.6%; p=0.009) The rate of acute exacerbation between PC mutant and PC wild type groups were both high but not significant different (55.3% versus 45.2%; p=0.33) Conclusions: There was significant association between the presence of PC mutation and the emergence of acute exacerbation of chronic hepatitis B, especially in group without BCP (p=0.009) Keywords: Precore, Basal core promoter, acute exacerbation of chronic hepatitis B p=0,05)(2) Tại Việt Nam, chưa có nghiên cứu ĐẶT VẤN ĐỀ liên quan đột biến PC, BCP diễn biến Hàng năm, có 10-30% bệnh nhân nhiễm đợt bùng phát VGSV B mạn Câu hỏi đặt cho HBV mạn tính có diễn biến đợt viêm gan nghiên cứu “Có liên quan đột biến bùng phát(7) Những đợt viêm gan bùng phát Precore Basal Core Promoter với xuất khơng có triệu chứng hay có thống đợt bùng phát VGSV B mạn hay khơng?” qua Tuy nhiên có bệnh nhân đợt tiến PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU triển kèm theo rối loạn chức gan trầm trọng đột ngột trước khơng có Thiết kế dấu hiệu gợi ý suy gan (APASL 2009) có Nghiên cứu mô tả cắt ngang thể gây tử vong nhanh chóng, thúc đẩy Dân số chọn mẫu bệnh gan diễn biến nhanh tới giai đoạn cuối(8) Bệnh nhân ≥ 15 tuổi chẩn đoán VGSV B Trong viêm gan B mạn, phản ứng viêm hoại tử mạn đợt tiển triển cấp hay chẩn đoán VGSV B tế bào gan hậu phản ứng miễn mạn đợt bùng phát điều trị nội trú hay ngoại trú dịch nhằm thải trừ tế bào gan nhiễm HBV Đợt BV Bệnh Nhiệt Đới TP HCM thời gian viêm gan bùng phát xảy có thay đổi cân từ tháng 10/2012 – 8/2013 động tình trạng dung nạp kích thích miễn dịch(3) Về vai trò kháng nguyên HBV, kháng nguyên HBeAg gây dung nạp miễn dịch kháng nguyên HBcAg có tính kích thích đáp ứng miễn dịch Đột biến vùng PC và/hoặc BCP gen C HBV làm ngưng giảm tổng hợp kháng nguyên HBeAg, sản xuất HBcAg đề cập đến nguyên nhân gây đợt bùng phát VGSV B mạn(7) Các nghiên cứu giới tìm thấy có diện đột biến PC và/hoặc BCP chiếm tỷ lệ cao bệnh nhân đợt bùng phát VGSV B mạn (55-60% có đột biến PC 48-75% có đột biến BCP)(9,10) Chu (2002) ghi nhận đột biến PC thường xảy khoảng thời gian chuyển huyết HBeAg (p=0,003) tương quan thuận với mức độ gia tăng ALT (r=0,271; Nhiễm Tiêu chuẩn chọn mẫu Bệnh nhân viêm gan B mạn chưa điều trị đặc hiệu VGSV B mạn đợt cấp Đủ tiêu chuẩn: (1) HBsAg (+) ≥ tháng chưa biết tiền sử nhiễm HBV có IgM-antiHBc (-) (2) ALT tăng gấp lần giới hạn giá trị bình thường (3) HBV DNA > 104 copies/ml bệnh nhân có HBeAg (-) HBV DNA > 105 copies/ml bệnh nhân có HBeAg (+) VGSV B mạn đợt bùng phát (APASL 2012)(5): đủ tiêu chuẩn: 337 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 (1) Thỏa tiêu chuẩn (1) (3) VGSV B mạn đợt cấp (2) ALT tăng gấp ≥ lần giới hạn giá trị bình thường Tiêu chuẩn loại trừ Có tình sau: Đồng nhiễm vi-rút viêm gan khác: IgM-anti HAV (+), anti HCV (+); tiền sử nghiện rượu nặng bệnh sử uống nhiều rượu, dùng thuốc có độc tính gan như: Thảo dược (thuốc Nam hay thuốc Bắc), thuốc kháng lao (INH, Rifampicine, Ethambutol), kháng sinh nhóm Sulfamide, Doxycyclin,Ciprofloxacin, Nitrofurantoin, thuốc kháng nấm (Itraconazole, Fluconazole, Ketoconazole), kháng viêm Diclofenac, nhóm điều hòa chuyển hóa lipid đặc biệt statin, thuốc tác dụng thần kinh (Phenytoin, Methyldopa)(4); tiền sử xơ gan bù ung thư gan; nhiễm trùng toàn thân ảnh hưởng đến gan Biến số kỹ thuật Nghiên cứu sử dụng nhóm biến số: Biến số nền, biến số độc lập (đột biến Precore, đột biến Basal Core Promoter), biến số phụ thuộc (thể bệnh lâm sàng: đợt cấp viêm gan B mạn (ALT tăng từ – < ULN) đợt bùng phát viêm gan B mạn (ALT tăng ≥ ULN)) (APASL 2012)(5) HBeAg Được thực theo phương pháp miễn dịch vi hạt hoá phát quang (Chemiluminescent Microparticles Immunoassay-CMIA) với thuốc thử ARCHITECT Abbott, máy ARCHITECT i System, Khoa Xét nghiệm BV Bệnh Nhiệt Đới HBV DNA định lượng Được thực theo phương pháp PCR thời gian thực, ngưỡng phát 250 copies/mL, sử dụng hoá chất LightCycler 480 ProbeMaster thực hệ thống máy LightCycler 480 Roche, phòng xét nghiệm Sinh học phân tử BV Bệnh Nhiệt Đới 338 Đột biến PC, BCP HBV Tách chiết DNA: sử dụng kit hoá chất tự pha theo phương pháp BOOM máy PCR Eppendorf Xác định đột biến PC, BCP phương pháp giải trình tự chuỗi gen, sử dụng kít Taq Takara BigDye V3.1 ABI, thực máy ABI 3130 (Applied Biosystem 3130xl Gienetic Analyzer) Phân tích kết giải trình tự dựa phần mềm CLC Main Workbench, thực Trung tâm Y Sinh học phân tử ĐHYD TP.HCM Phân tích số liệu Sử dụng phần mềm SPSS 16.0 So sánh giá trị liên tục phép kiểm trung vị hay phép kiểm U (Mann-Whitney U) So sánh tỷ lệ phép kiểm chi bình phương (hay Fisher’s Exact số liệu nhỏ) Giá trị p 2 lần giới hạn bình thường (ULN) có tiền sử nhiễm HBV > tháng, không mang tiêu chuẩn loại trừ chọn vào nghiên cứu Bảng 1: Đặc điểm dân số - xã hội mẫu nghiên cứu (n=100) Đặc điểm Tần số Tuổi < 20 20-40 57 >40 36 Trung bình: 36,25± 14,2 (tuổi) Giới Nam 60 Nữ 40 HBeAg Dương 63 Âm 37 HBV DNA (log cps/mL)