Đột biến gen H-ras trong ung thư hốc miệng

Đề tài nghiên cứu này được thực hiện vớ mục tiêu phân tích sự liên quan giữa đột biến gen H-ras với đột biến gen p53, biểu hiện các protein p53, MDM2 và Ki-67 trong ung thư hốc miệng. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 ĐỘT BIẾN GEN H-RAS TRONG UNG THƯ HỐC MIỆNG Nguyễn Thị Hồng* TĨM TẮT Mục tiêu: Phân tích liên quan đột biến gen H-ras với đột biến gen p53, biểu protein p53, MDM2 Ki-67 ung thư hốc miệng Phương pháp: Thực nghiên cứu cắt ngang 18 ca ung thư tế bào gai hốc miệng cách tiến hành giải trình tự chuỗi DNA exon gen H-ras nhuộm hóa miễn dịch khảo sát biểu protein p53, MDM2 Ki-67 Kết quả: Phát ca có đột biến H-ras, chiếm tỉ lệ 16,7%, gồm có đột biến thêm nucleotid (GGC) codon 10 codon 11 tạo thêm glycin (10Gly11) khung, đột biến điểm codon 12 (GGC>AGC) đột biến điểm codon 13 (GGT>CGT) làm thay đổi axít amin Ngồi ra, có đột biến im lặng (27,8%) biểu đa hình nucleotid đơn C81T Đối chiếu với ca trước phát có đột biến gen p53 cho thấy ca (22,2%) có đột biến hai gen p53 H-ras, nhiên có đột biến p53 sai nghĩa hay ghép nối sai đột biến H-ras im lặng Đột biến H-ras liên quan với thói quen nhai trầu biểu mức protein MDM2 (P < 0,05), không liên quan với biểu protein p53 Ki-67 (P > 0,05) Kết luận: Đột biến H-ras phối hợp với biến đổi protein MDM2 tham gia vào trình sinh ung thư hốc miệng người Việt Nam có thói quen nhai trầu-xỉa thuốc Đột biến H-ras đột biến p53 độc lập loại trừ lẫn Từ khóa: Đột biến H-ras, đột biến p53, biểu mức, MDM2, Ki-67, ung thư hốc miệng ABSTRACT H-RAS GENE MUTATION IN ORAL CANCER Nguyen Thi Hong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 36 - 42 Objectives: To investigate the correlation between H-ras gene mutation and p53 gene mutation, p53, MDM2, and Ki-67 expression in oral carcinoma Methods: In this cross-sectional study, DNA samples obtained from the same 18 primary oral squamous cell carcinomas were screened for mutations of hot spots in exons and of the H-ras gene by DNA sequencing Formalin-fixed paraffin-embedded tissues were stained by immunohistochemistry for p53, MDM2 and Ki-67 proteins Results: H-ras mutations were detected in cases (16.7%), including one insertion of three nucleotide (GGC) between codons 10 and 11 resulting in in-frame insertion of glycine (10Gly11), one missense point mutation in codon 12 (GGC>AGC) and one missense point mutation in codon 13 (GGT>CGT) resulting in amino acid changes Silent mutations with C81T single nucleotide polymorphism (SNP) were found in of 18 tumors (27.8%) Compared to p53 mutation previously detected in cases, cases (22.2%) had simultaneously H-ras mutation (silent mutation) and p53 mutation (missense or aberrant splicing mutation) H-ras mutation showed significant association with the betel chewing habit and MDM2 expression (P < 0.05), but not with p53 and Ki-67 expression (P > 0.05) * Khoa Răng Hàm Mặt – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS.BS Nguyễn Thị Hồng Email: nguyopat@hcm.vnn.vn 36 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Conclusion: H-ras mutation can be associated with MDM2 alteration in the tumorigenesis of betel and tobacco-related oral carcinoma in Vietnamese patients H-ras mutation and p53 mutation are independent and mutually exclusive Key words: H-ras mutation, p53 mutation, overexpression, MDM2, Ki-67, oral carcinoma ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đột biến gen đè nén bướu p53 phổ biến nhất, chiếm 50% loại ung thư người(12) Tỉ lệ đột biến gen p53 ung thư hốc miệng (UTHM) người Việt Nam 44,4%(6) Nhiều trường hợp khơng có đột biến gen p53 gợi khả đột biến gen khác Mẫu nghiên cứu Trong oncogen, gen ras thường bị đột biến nhất(10,11) Khoảng 30% ung thư người có đột biến gen này(10) Họ gen ras, gồm có gen H-ras, K-ras N-ras, mã hóa protein p21(12) định vị màng tế bào giữ vai trò trung tâm điều hòa đường dẫn truyền tín hiệu tăng trưởng tế bào Đường dẫn truyền tín hiệu EGFR–Ras– Raf–MEK–ERK điểm đích hấp dẫn cho điều trị ung thư(10) Trong UTHM, đa số đột biến tìm thấy gen H-ras mà gen K-ras N-ras(10) Bất hoạt gen đè nén bướu hoạt hóa oncogen làm kiểm sốt chu trình tế bào khiến cho tế bào sinh sản liên tục Protein Ki-67 xem chất đánh dấu sinh sản tế bào Mặt khác, biểu mức protein p53 đột biến gen p53 bất thường protein MDM2 - protein gắn phân hủy protein p53 Trong UTHM nước có thói quen nhai trầu, đột biến oncogen H-ras biểu mức protein MDM2 phổ biến(10) Do vậy, thực nghiên cứu nhằm khảo sát đột biến gen H-ras, phân tích liên quan đột biến gen H-ras với số đặc điểm lâm sàng-giải phẫu bệnh, với đột biến gen p53, biểu protein p53, MDM2 Ki-67 UTHM Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh 18 ca ung thư tế bào gai hốc miệng chưa điều trị đặc hiệu, điều trị Bệnh viện Ung Bướu Tp.HCM tháng năm 2000 Thiết kế nghiên cứu Cắt ngang mô tả Các phương pháp thực Khám lâm sàng sinh thiết bướu nguyên phát Ly trích DNA Từ mẫu mơ sinh thiết ly trích QIAmp DNA Mini Kit (QIAGEN) Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) Thực PCR khuếch đại exon exon (Bảng 2) Bảng 1: Trình tự đoạn mồi gen H-ras Exon Trình tự mồi (5’- 3’) Exon AGACCCTGTAGGAGGACC (cùng chiều) GAGGAAGCAGGAGACAGG (ngược chiều) Exon AGACGTGCCTGTTGGACATC (cùng chiều) GGGCCAGCCTCACGGGGTTC (ngược chiều) Sản phẩm PCR 280 bp 167 bp Bảng 2: PCR khuếch đại vùng exon Thành phần PCR Dung dịch đệm 10X Các dNTP Đoạn mồi chiều Đoạn mồi ngược chiều Thể tích 2,0 μl 0,4 μl 0,4 μl 0,4 μl Nước cất 15,2 μl Takara Ex Taq polymerase (5 unit/μl) DNA ly trích 0,1 μl 1,5 μl Tổng cộng 20,0 μl 37 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Chương trình PCR o 94 C x phút o 94 C x phút o o 56 C (exon 1) hay 62 C (exon 2) x phút o 72 C x 30 giây o 72 C x phút 35 chu kỳ nhiệt Mỗi đợt thí nghiệm ln có chứng dương biết cho kết PCR (+) chứng âm thay DNA nước cất Kết PCR đánh giá điện di gel agarose 2% Giải trình tự chuỗi DNA Tinh sản phẫm PCR Tiếp theo, thực PCR để khuếch đại đoạn cần xác định trình tự Bảng 3: PCR giải trình tự Thành phần PCR Dung dịch đệm 5X Đoạn mồi Nước cất Sản phẩm PCR tinh BigDye Terminator v3.1 Tổng cộng Thể tích 1,0 μl 0,5 μl 3,9 μl 4,0 μl 0,6 μl 10,0 μl Chương trình PCR nucleotid bình thường, mẫu DNA định chuỗi có chuỗi bình thường chuỗi đột biến Kết đối chiếu với trình tự nucleotid DNA bình thường hệ thống liệu NCBI (GenBank accession number J00277) để xác định xác nucleotid đột biến Nhuộm hóa mơ miễn dịch Mẫu mô vùi nến cắt thành lát mỏng μm liên tiếp Mỗi lát cắt trải phiến kính có tráng silane sấy khơ 37oC 12 Các kháng thể đơn dòng DO-7 kháng p53, IF-2 kháng MDM2, MIB-1 kháng Ki-67 (Dakopatts, Đan Mạch) Qui trình nhuộm theo phương pháp Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (ABC), sử dụng kit Histofine (Nichirei, Nhật Bản) Mỗi đợt nhuộm ln có tiêu chứng dương chứa mẫu mơ biết có chứa kháng ngun cần tìm cho phản ứng dương tính, tiêu chứng âm thay kháng thể thứ dung dịch đệm PBS o 96 C x phút o 96 C x 10 giây o 53 C x giây o 60 C x phút o Giữ C 25 chu kỳ nhiệt Kết tủa DNA cách 10 μl sản phẩm DNA từ PCR thêm 30 μl ethanol 100% 2,5 μl EDTA 125 mM Quay ly tâm 15000 vòng 15 phút Thêm 30 μl ethanol 70%, quay ly tâm 15000 vòng/phút 10 phút Đổ dịch nổi, lấy cặn lắng để khô tự nhiên Hòa tan tủa 20 μl dung dịch đệm Formamide Biến tính DNA 95oC phút, làm lạnh đột ngột để tách thành chuỗi đơn DNA Sau đưa vào giếng máy giải trình tự DNA tự động ABI-Prism 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystem) để phân tích trình tự nucleotid chuỗi DNA Mỗi đoạn DNA mẫu giải trình tự hai chiều với đoạn mồi chiều đoạn mồi ngược chiều Nếu có đột biến phát vị trí có hai nucleotid thay 38 Tế bào bướu xem nhuộm dương tính nhân tế bào bắt màu nâu Mức độ nhuộm tính dựa tỉ lệ % số tế bào bướu nhuộm dương tính tổng số tế bào bướu đếm vi trường x 200 kính hiển vi quang học Thang đánh giá biểu sau: P53 hay MDM2 (-): 0-10%, p53 hay MDM2 (+): 11-100% Ki67 (-): 0-20%, Ki67 (+): 21-100% Phân tích thống kê Tất liệu nhập phần mềm Excel xử lý phần mềm IBM-SPSS Phân tích liên quan yếu tố phép kiểm chi bình phương, xác Fisher, McNemar Mann-Whitney Liên quan có ý nghĩa phép kiểm có P < 0,05 KẾT QUẢ Đột biến gen H-ras Phát đột biến gen H-ras ca (38,9%), exon 1, với đột biến (Bảng 4): Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học -1 ca đột biến thêm nucleotid (GGC) vào codon 10 codon 11, nên tạo thêm axít amin glycin (10Gly11) khung Không kể đột biến im lặng, tỉ lệ đột biến Hras 16,7%, đột biến điểm chiếm đa số (66,7%) -1 ca đột biến điểm sai nghĩa codon 12 (GGC>AGC) đột biến im lặng codon 27 Đột biến H-ras với đột biến p53 -1 ca đột biến điểm sai nghĩa codon 13 (GGT>CGT) - Và ca đột biến im lặng C81T codon 27 biểu đa hình nucleotid đơn (SNP) Trong mẫu nghiên cứu này, phát ca (44,4%) có đột biến gen p53(6) Đối chiếu kết cho thấy ca (22,2%) đột biến đồng xảy hai gen p53 H-ras; nhiên có đột biến p53 sai nghĩa hay ghép nối sai, đột biến H-ras im lặng Bảng 4: Đột biến gen H-RAS gen p53 STT Tuổi Giới Thói quen Vị trí 75 75 Nữ Nữ Nhai trầu Nhai trầu Má Nướu 80 53 69 70 Nữ Nam Nữ Nam Nhai trầu Hút thuốc Nhai trầu Hút thuốc Má Lưỡi Má Sàn m 10 11 51 52 40 82 73 Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nhai trầu Nhai trầu Không Hút thuốc Nhai trầu Má Môi Má Lưỡi Má Đột biến H-RAS (exon 1và 2) Đột biến p53 Độ mô Giai học đoạn Nucl-eotid Codon Axit Amin Kiểu đ.biến (exon5-8) Gly I III 30_31 insGGC 10 11 Thêm (-) I IV 34 GGC-AGC G12S Sai nghĩa (-) 81 CAT-CAC H27H Im lặng I IV 37 GGT-CGT G13R Sai nghĩa (-) II III 81 CAT-CAC H27H Im lặng Sai nghĩa II III 81 CAT-CAC H27H Im lặng Sai nghĩa II III 81 CAT-CAC H27H Im lặng Sai nghĩa Ghép sai I IV 81 CAT-CAC H27H Im lặng Sai nghĩa I IV (-) Sai nghĩa II IV (-) Sai nghĩa I III (-) Ghép sai I II (-) Sai nghĩa Đột biến H-ras với lâm sàng-giải phẫu bệnh UTHM Tất ca đột biến H-ras xảy bệnh nhân Đặc điểm Thói quen nữ có thói quen nhai trầu, ung thư giai đoạn trễ, bướu có độ ác tính mơ học thấp khơng có đột biến p53 Phân tích thống kê tìm thấy liên quan có ý nghĩa đột biến H-ras với thói quen nhai trầu (P < 0,05) (Bảng 5) Bảng 5: Đột biến H-ras lâm sàng-giải phẫu bệnh UTHM Hras Mẫu Đặc điểm P 18 ca Không đột biến Đột biến 15 ca (83,3%) ca (16,7%) Tuổi ≤ 60 7 (100,0) 0,245 > 60 11 (72,7) (27,3) Giới Nam 7 (100,0) tính Nữ 11 (72,7) (27,3) 0,245 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Nhai trầu Hút thuốc Không Hras Mẫu P Không đột biến Đột biến 18 ca 15 ca (83,3%) ca (16,7%) (57,1) (42,9) 0,043 7 (100,0) 4 (100,0) 7 (100,0) (66,7) 0 (33,3) (100,0) Lưỡi Má Nướu Vị trí khác Bướu + (T) + Hạch N0 N+ Giai + đoạn + 4 (100,0) 11 12 15 (71,4) 10 (90,9) (100,0) (75,0) (100,0) 12 (80,0) (28,6) (9,1) (25,0) (20,0) 0,528 Độ mô 11 (72,7) (27,3) 0,245 Vị trí I 0,078 0,515 1,000 39 Nghiên cứu Y học Hras Mẫu Không đột biến Đột biến 18 ca 15 ca (83,3%) ca (16,7%) 7 (100,0) Đặc điểm học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 II P Đột biến gen H-ras gen p53 với biểu p53, MDM2 Ki-67 Mặc dù bướu có đột biến p53 hay ras tăng biểu Ki67 cao so với bướu khơng có đột biến gen này, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) (Bảng 6) Biểu MDM2(+) ca (38,9%), người nhai trầu (57,1%), liên quan với đột biến H-ras (P < 0,05) (Bảng 7) Bảng 6: Đột biến H-ras, đột biến p53 với Ki-67 Tổng Ki-67 (-) Ki-67 (+) Trung bình P ca ca 12 ca Ki67 ± độ (33,3%) (66,7%) lệch chuẩn Đột biến 10 (30,0) (70,0) 26,30 ± 0,687 p53 – 17,493 Đột biến p53 + Đột biến H-ras – Đột biến H-ras + (37,5) (62,6) 15 (40,0) (60,0) 3 (100,0) 30,25 ± 16,534 27,87 ± 18,023 0,437 29,0 ± 9,644 Bảng 7: Đột biến H-ras với p53, MDM2 Đột biến p53 – Đột biến p53 + Biểu p53 – Biểu p53 + MDM2– MDM2+ Tổng Không đột ca biến H-ras 10 (70,0) 8 (100,0) 3 (100,0) 15 12 (80,0) 11 11 (100,0) (57,1) Đột biến P H-ras (30,0) 0,216 0 0,396 (20,0) 0,043 (42,9) BÀN LUẬN Đột biến gen đè nén bướu p53 đột biến oncogen H-ras tương đối phổ biến UTHM Việt Nam, đột biến p53 (44,4%) thường gặp đột biến H-ras (16,7%) Mặt khác, đột biến p53 đột biến H-ras dường độc lập loại trừ lẫn nhau: bệnh nhân UTHM bị đột biến p53 đột biến H-ras, bị hai có đột biến p53 làm biến đổi protein đột biến H-ras im lặng Theo y văn, UTHM nước châu Á phổ biến thói quen nhai trầu thường có đột biến 40 H-ras (như 12,5-35% Ấn Độ)(5,9,10), gặp đột biến p53 (Ấn Độ: 17-21%, Đài Loan: 5,4%)(2,3,12) Ngược lại, tỉ lệ đột biến p53 cao Nhật Bản (63%), Mỹ (53%), Pháp (67%) - nơi mà hút thuốc uống rượu xem yếu tố nguy chính(1,2,8), tỉ lệ đột biến H-ras thấp (0-5%)(8,10,12) Trong đó, Việt Nam, tỉ lệ đột biến p53 cao gần tương tự Nhật Bản phương Tây, tỉ lệ đột biến H-ras tương đối cao Đây điểm khác biệt bệnh sinh UTHM nước ta so với nhiều nước khác Sự thay đổi nhiều tỉ lệ đột biến gen UTHM nước chủ yếu khác biệt thói quen nguy cơ(1,11); ngồi khác kỹ thuật phát hiện, vị trí ung thư(1), chế độ dinh dưỡng, tình trạng miệng(11) Mẫu nghiên cứu có ca (38,9%) nhai trầu (trong ca có xỉa thuốc), ca (38,9%) hút thuốc ca (22,2%) thói quen Đa số đột biến gen p53 H-ras đột biến điểm Nhận định quán với y văn(12) Nghiên cứu phân tích exon gen H-ras, exon dễ bị đột biến nhất, có nhiều điểm nóng đột biến codon 12 13 exon (vùng gắn GTP), codon 61 (vùng GTPase) exon 2(9,10,11) Đột biến vị trí khiến cho protein ln trạng thái hoạt hóa (đột biến tăng chức năng) Kết tìm thấy đột biến codon 12 13 Theo Sathyan c.s (2007), đa số đột biến codon 12 (63%), codon 13 (32%), codon 61 (5%)(10) Quá trình sinh ung thư hốc miệng tiến trình đa giai đoạn, ước tính cần khoảng 6-10 lần biến đổi gen(12) Kết tỉ lệ cao đột biến H-ras (42,9%) biểu mức protein MDM2 (57,1%) UTHM người nhai trầu, liên quan H-ras với thói quen nhai trầu với protein MDM2 (P < 0,05), cho thấy UTHM người nhai trầu thường có đột biến H-ras biến đổi MDM2 Tại nước Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 có thói quen nhai trầu phổ biến, biểu mức MDM2 thường gặp UTHM, tỉ lệ 71% Ấn Độ(7) Theo y văn, nitrosamin thuốc nhai alkylat hóa DNA vị trí nucleotid guanin (G) thymin (T) dẫn tới chuyển vị G:C > A:T(2,10,11) Trong nghiên cứu này, đột biến chuyển vị (G:C > A:T) phổ biến nhất, gặp đột biến sai nghĩa người nhai trầu kèm xỉa thuốc tất đột biến im lặng bệnh nhân có sử dụng thuốc (4 ca nhai trầuxỉa thuốc ca hút thuốc) Như vậy, đột biến H-ras liên quan hóa chất nitrosamin thuốc nhai hay xỉa Các ca đột biến H-ras tăng biểu protein p53, MDM2 Ki-67 Điều giải thích qua vai trò H-ras, MDM2 p53 tế bào(11,12) Gen H-ras nằm nhiễm sắc thể 11 mã hóa protein p21ras định vị màng bào tương màng tế bào, “đóng” hay “mở” Ras giữ vai trò trung tâm điều hòa tiến trình dẫn truyền tín hiệu tăng trưởng tế bào Khi thụ thể tiếp nhận yếu tố tăng trưởng màng tế bào kích thích ras trạng thái hoạt động gắn vào GTP, ras gắn hoạt hóa chuỗi protein kiểm sốt sinh sản, tăng trưởng biệt hóa Ras–Raf–MEK–ERK(4,10) Là enzym GTPase, protein p21ras cắt rời phosphat khỏi GTP Sau chuyển GTP thành GDP, p21ras vào trạng thái “đóng” khơng hoạt động Tuy nhiên, oncogen ras bị đột biến, chuyển đổi không xảy thúc đẩy tế bào liên tục phân bào (thể Ki67 tăng) gây ung thư Protein p53 xem yếu tố bảo vệ gen ngăn cản tế bào bị tổn thương DNA tiếp tục sinh sản mà phải sửa chữa tổn thương chết theo lập trình(1,2) Điều hòa hoạt động protein p53 theo cách: tổn thương DNA, yếu tố chép nhân E2F, vòng kiểm sốt ngược tự điều hòa p53-MDM2(4) Protein MDM2 gắn phân hủy protein p53, biến đổi Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh Nghiên cứu Y học protein MDM2 làm cho protein p53 trở nên bền vững mà không cần đột biến(11) Mặt khác, E2F hoạt hóa p53, hoạt hóa p19ARF–là yếu tố ngăn cản hoạt động MDM2 giúp cho p53 khơng bị MDM2 hủy(4) Chuỗi phản ứng dẫn truyền tín hiệu theo đường Ras–Cyclin D1–pRb–E2F, E2F–19ARF– MDM2–p53 hay E2F–p53(4) cho thấy liên hệ ras với MDM2 p53 Trong mẫu nghiên cứu này, ca có đột biến H-ras xảy người nhai trầu, giai đoạn trễ, bướu có độ ác tính mơ học thấp Phân tích thống kê ghi nhận đột biến H-ras liên quan có ý nghĩa với biểu MDM2 với thói quen nhai trầu (P < 0,05) Tuy nhiên, số ca nên giải thích cần khẳng định cỡ mẫu lớn KẾT LUẬN Đột biến oncogen H-ras tham gia trình sinh ung thư hốc miệng người Việt Nam Đột biến H-ras thường gặp UTHM người nhai trầu, biểu q mức MDM2, khơng có đột biến gen đè nén bướu p53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Chitra G., Chandramouli A., Chanchal C (2010) “ P53 mutations in head and neck squamous cell carcinoma”, Int J Pharm Biomed Res 1(3), pp.117-121 Greenblatt M.S., Bennett W.P., Hollstein M., Harris C.C (1994), “Mutations in the p53 tumor suppressor gene: Clue to cancer etiology and molecular pathogenesis”, Cancer Research 54, pp.4855-4878 Hsieh L.L., Wang P.F., Chen I.H., Liao C.T, Chen C.M., Chang C.J.T (2001), “Characteristics of mutations in the p53 gene in oral squamous cell carcinoma associated with betael quid chewing and cigarette smoking in Taiwaneses”, Carcinogenesis 22(9), pp.1497-1503 Michalides R.J.A.M (1999), “Cell cycle regulators: mechanisms and their role in aetiology, prognosis, and treatment of cancer”, J Clin Pathol 21, pp.555-568 Munirajan A.K., Mohanprasad B.K.C., Shanmugam G., Tsuchida N (1998), “Detection of a rare point mutation at codon 59 and relatively high incidence of H-ras mutation in Indian oral cancer”, Int J Oncol 13, pp 971-974 Nguyễn Thị Hồng, Phạm Hùng Vân, cộng (2002), “Đột biến gen p53 ung thư miệng: phát qua kỹ thuật PCRSSCP”, Tạp chí Y học Tp.HCM, phụ số 4, tập 6, trang 52-57 Ralhan R., Sandhya A., Meera M., Bohdan W., Nootan S.K (2000), “Induction of MDM2-P2 transcripts correlates with 41 Nghiên cứu Y học 42 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 stabilized wild-type p53 in betel- and tobacco-related human oral cancer”, Am J Pathol 157(2), pp 587-596 Sakai E, Rikimaru K, Ueda M, Matsumoto Y, Ishii N, Enomoto S, Yamamoto H and Tsuchida N (1992), “The p53 tumorsuppressor gene and ras oncogene mutations in oral squamouscell carcinoma”, Int J Cancer 52, pp 867-872 Saranath D., Chang S.E., Bhoite L.T., Panchal R.G., Kerr I.B, Mehta A.R., Johnson N.W., Deo M.G (1991), “High frequency of mutation in codon 12 and 61 of H-ras oncogene in chewing tobacco-related human oral carcinoma of India”, Br J Cancer 63, pp 573-578 10 11 12 Sathyan K.M., Nalinikumari K.R., Kannan S (2007), “H-Ras mutation modulates the expression of major cell cycle regulatory proteins and disease prognosis in oral carcinoma”, Modern Pathol 20, pp.1141-1148 Süzen S., Parry J.M (2001), “Analysis of ras gene mutation in human oral tumours by polymerase chain reaction and direct sequencing”, Turk J Med Sci 31, pp 217-223 Williams (2000), “Molecular pathogenesis of oral squamous cell carcinoma”, Modern Pathol 53(5), pp.165-172 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh ... lệ đột biến gen p53 ung thư hốc miệng (UTHM) người Việt Nam 44,4%(6) Nhiều trường hợp khơng có đột biến gen p53 gợi khả đột biến gen khác Mẫu nghiên cứu Trong oncogen, gen ras thư ng bị đột biến. .. BÀN LUẬN Đột biến gen đè nén bướu p53 đột biến oncogen H-ras tương đối phổ biến UTHM Việt Nam, đột biến p53 (44,4%) thư ng gặp đột biến H-ras (16,7%) Mặt khác, đột biến p53 đột biến H-ras dường... khung Không kể đột biến im lặng, tỉ lệ đột biến Hras 16,7%, đột biến điểm chiếm đa số (66,7%) -1 ca đột biến điểm sai nghĩa codon 12 (GGC>AGC) đột biến im lặng codon 27 Đột biến H-ras với đột biến