Tác dụng chống oxy hóa in vitro và in vivo của các phân đoạn từ cao chiết vỏ chôm chôm

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm khảo sát hoạt tính chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự do in vitro và in vivo của các phân đoạn chiết từ vỏ chôm chôm. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO VÀ IN VIVO CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN TỪ CAO CHIẾT VỎ CHÔM CHƠM Lê Huy Thơng*, Huỳnh Thị Ngọc Hạnh*, Nguyễn Ngọc Khơi* TĨM TẮT Mở đầu: Vỏ chơm chơm chứa hàm lượng lớn polyphenol có tác dụng chống oxy hóa mạnh, bắt giữ gốc tự do, bảo vệ tế bào trước công gốc tự độc hại Cao chiết tồn phần vỏ chơm chơm làm giảm số AST, ALT, vi phẫu thể phục hồi tổn thương tế bào gan độc tính CCl4 mà không ảnh hưởng đến thông số sinh hóa, huyết học gan, thận đại thể vi thể sử dụng thời gian dài Mục tiêu: Nhằm khảo sát hoạt tính chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự in vitro in vivo phân đoạn chiết từ vỏ chôm chôm Phương pháp: Hoạt tính chống oxy hóa in vitro cao toàn phần phân đoạn khảo sát phương pháp với DPPH β-caroten-acid linoleic, có đối chiếu với chất chống oxy hóa vitamin C BHT Hoạt tính chống oxy hóa in vivo khảo sát qua việc xác định hàm lượng MDA hàm lượng GSH gan sau gây độc CCl4 0,2%, định lượng enzym gan AST ALT huyết thanh, có so sánh đối chiếu với silymarin Kết quả: Cao toàn phần với liều 0,3g/kg thể tốt tác dụng chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự do, bảo vệ gan Kết luận: Kết làm sở cho việc nghiên cứu cao tồn phần vỏ chơm chơm phân tích thành phần hóa học để định danh hoạt chất có tác dụng chống oxy hóa chính, nghiên cứu độc tính, tác dụng gan chất Từ khóa: Chơm chơm, Nephelium lappaceum, hợp chất polyphenol, tác động chống oxy hóa, peroxid tế bào ABSTRACT ANTIOXIDANT ACTIVITIES OF RAMBUTAN RIND EXTRACT (NEPHELIUM LAPPACEUM L.) Le Huy Thong, Huynh Thi Ngoc Hanh, Nguyen Ngoc Khoi * Y Hoc TP Ho Chi Minh* Vol 15 - Supplement of No - 2011: 334 - 342 Background: The rind of rambutan is considered potentially useful as a source of natural antioxidants because of its high antioxidant activity and non-toxic property to normal cells It is also showed a low subchronic toxicity and is potent hepatoprotective agent that could protect liver against the acute injury Objectives: Aim of the present study was to assess the in vitro and in vivo antioxidant effects of different fractions from rambutan rind extracts Method:The antioxidant potency of different rambutan rind extracts were investigated by employing different assays, including thiobarbituric acid reactive species (TBARS), and 2,2-diphenlyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical The hepatoprotective activity was studied against CCl4-induced hepatotoxicity in mice by monitoring biochemical parameters Results: The extracts showed significant free radical scavenging activity and could protect the hepatocytes *Khoa Dược – Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS Lê Huy Thông ĐT: 01228922947 334 Email: dsthong@gmail.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học from CCl4- induced liver damage perhaps, by their anti-oxidative effect on hepatocytes, hence eliminating the deleterious effects of toxic metabolites from CCl4 Total phenol contents of these fractions were also analyzed Conclusion: The results indicate that this plant possesses potential antioxidant and hepatoprotective properties and has therapeutic potential for the treatment of liver diseases Keywords: Rambutan; Nephelium lappaceum, phenolic compounds, antioxidant activity, lipid peroxidation ĐẶT VẤN ĐỀ Hóa chất thuốc thử Chôm chôm (Nephelium lappaceum L.) lồi ăn trái thuộc họ Bồ Hòn (Sapindaceae) Vỏ chôm chôm chứa hàm lượng lớn hợp chất phenol có tác dụng chống oxy hóa mạnh, bắt giữ gốc tự do, bảo vệ tế bào trước công gốc tự độc hại, cải thiện khoảng 60% số lượng tế bào chuột chết theo chu trình tự nhiên (apoptosis) không độc tế bào(2) Gần đây, nghiên cứu tác dụng vỏ chôm chôm việc bảo vệ gan cho thấy cao chiết tồn phần vỏ chơm chơm làm giảm số AST, ALT, vi phẫu thể phục hồi tổn thương tế bào gan độc tính CCl4 Hơn cao vỏ chôm chôm không ảnh hưởng đến thơng số sinh hóa, huyết học gan, thận đại thể vi thể sử dụng thời gian dài(6) Dung môi sử dụng loại dược dụng, dung mơi hóa chất dùng phân tích, định lượng dùng loại PA (Pure Analysis) AR (Analysis Reagent) bao gồm: acid linoleic, acid thiobarbituric, β-caroten, DPPH, EDTA, glutathione reduced, 1,1,3,3tetramethoxypropan (Sigma-Aldrich, Đức); acid tricloroacetic, BHT, pyrogallol (Merck, Đức); carbon tetraclorid (Prolabo, Pháp); chloroform, KCl, KH2PO4, methanol, Tris HCl (Trung Quốc) Để làm sở cho việc nghiên cứu vỏ chôm chôm, đề tài tiến hành nhằm nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa cao chiết từ vỏ chơm chơm qua việc khảo sát hoạt tính chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự in vitro in vivo phân đoạn chiết từ vỏ chôm chôm ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Dược liệu Vỏ chôm chôm thu mua Long Khánh, tỉnh Đồng Nai, tháng 7/2008, mẫu nghiên cứu có lưu Ban Nghiên Cứu Khoa Học, Khoa Dược, Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh Động vật thí nghiệm Chuột nhắt đực chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình từ 18-22 g, Viện Văcxin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Chuột cung cấp đầy đủ thức ăn nước uống Sau thời gian ngày để chuột thích nghi, tất chuột đưa vào thử nghiệm Chuyên Đề Dược Khoa Chiết xuất phân lập phân đoạn Từ cao toàn phần chiết cồn 95% theo phương pháp ngấm kiệt(2), phân đoạn cao vỏ chôm chôm từ cao toàn phần cách triển khai qua cột Diaion HP-20 với hệ dung mơi có độ phân cực giảm dần: nước, MeOH 50 %, MeOH 100%, chloroform, phân đoạn kiểm tra sắc ký lớp mỏng trước chuyển hệ dung môi Định lượng hợp chất phenol toàn phần(4) Định lượng hợp chất phenol cao toàn phần cao phân đoạn phương pháp đo quang với thuốc thử Folin-Ciocalteu Thí nghiệm lặp lại lần lượng hợp chất phenol toàn phần biểu diễn theo pyrogallol Thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa in vitro Phương pháp đánh bắt gốc tự DPPH(5) Dùng 1ml dung dịch DPPH (0,1mmol/L MeOH) cho vào 3ml dung dịch thử có nồng độ khác (0,2-100µg/ml) Hỗn hợp lắc để nhiệt độ phòng 30 phút đo độ hấp thu bước sóng 517nm Mẫu chứng có 1ml dung dịch DPPH ml MeOH Thí nghiệm lăp lại lần 335 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Phương pháp thử nghiệm β-caroten-acid linoleic(3) Dùng 10ml dung dịch β-caroten/chloroform (1mg/ml) cho phản ứng với 0,2ml acid linoleic 2ml Tween 20 Bay hết chloroform áp suất giảm Cho thêm vừa đủ 500ml nước cất (đã bão hòa với oxygen vòng 15 phút) thu hỗn hợp nhũ tương Lấy 5ml nhũ tương cho vào ống nghiệm chứa 0,2ml dung dịch thử có nồng độ xác định Hỗn hợp phản ứng ủ 500C Đo độ hấp thu bước sóng 470nm, lập lại 15 phút (trong thời gian trên) Thí nghiệm lặp lại lần Thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa in vivo Mơ hình thử nghiệm Chuột chia thành 11 lô, lô 12 Lô 1: lô chứng (uống nước cất) Lô 2: lô gây bệnh lý (với CCl4)(uống nước cất) Lô 3: lô thử (uống cao tồn phần liều 0,3g/kg) Lơ 4: lơ thử (uống cao tồn phần liều 0,12g/kg) Lơ 5: lơ thử (uống cao phân đoạn nước liều 0,3g/kg) Lô 6: lô thử (uống cao phân đoạn nước liều 0,12g/kg) Lô 7: lô thử (uống cao phân đoạn MeOH 50 liều 0,3g/kg) Lô 8: lô thử (uống cao phân đoạn MeOH 50 liều 0,12g/kg) Lô 9: lô thử (uống cao phân đoạn MeOH 100 liều 0,3g/kg) Lô 10: lô thử (uống cao phân đoạn MeOH 100 liều 0,12g/kg) Lô 11: lô đối chiếu [uống silymarin (Legalon) liều 100mg/kg] Ở lô thử, cao vỏ chôm chôm cho uống liên tục suốt ngày trước tiêm CCl4, ngày lần vào buổi sáng Vào ngày thứ 8, 336 chuột tiêm phúc mô CCl4/dầu oliu 0,2% liều (0,1ml/10 g) 24 sau tiêm CCl4 giết chuột Tách gan xác định hàm lượng MDA, GSH Lấy máu để định lượng ALT, AST Phương pháp xác định hàm lượng MDA(1) Nghiền đồng thể gan chuột dung dịch KCl 1,15% (1:10) nhiệt độ 0-5 0C Dùng 2ml dịch đồng thể phản ứng với 1ml đệm Tris HCl, ủ 37 0C 60 phút Thêm 1ml acid tricloacetic 10%, ly tâm lấy dịch Lấy 2ml dịch phản ứng với 1ml acid thiobarbituric 0,8% 100 0C 15 phút Để nguội đến nhiệt độ phòng đo quang bước sóng 532nm Hàm lượng MDA (nmol/ml dịch đồng thể) tính dựa theo phương trình đường chuẩn, từ suy hàm lượng MDA gan (nmol/g gan) Phương pháp xác định hàm lượng GSH(1) Nghiền đồng thể gan chuột dung dịch KCl 1,15% (1:10) nhiệt độ 0-5 0C Dùng 1ml dịch đồng thể phản ứng với 2ml đệm Tris HCL, ủ 37 0C 60 phút Thêm 1ml acid tricloacetic 10%, ly tâm lấy dịch Lấy 1ml dịch phản ứng với 2,8ml đệm EDTAPhosphat 0,2ml thuốc thử Ellman Để yên phút nhiệt độ phòng đo quang bước sóng 412nm Hàm lượng GSH (nmol/ml dịch đồng thể) tính dựa theo phương trình đường chuẩn trên, từ suy hàm lượng GSH gan (nmol/g gan) Định lượng hoạt tính men gan AST, ALT Lấy máu chuột để định lượng men gan AST, ALT Xét nghiệm tiến hành khoa xét nghiệm, bệnh viện Chợ Rẫy, Thành Phố Hồ Chí Minh Xử lý thống kê Các liệu biểu thị dạng Mean ± SEM (trung bình ± sai số chuẩn trung bình) Xử lý thống kê phần mềm Minitab phiên 15, dùng phép kiểm t-test dãy số liệu phân phối chuẩn dùng phép kiểm MannWhitney dãy số liệu phân phối chuẩn Sự khác biệt xem có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Bảng Kết chiết xuất cao phân đoạn Kết chiết xuất Phân đoạn Kết chiết xuất phân đoạn từ 110 gam cao toàn phần có độ ẩm 12,15% qua cột Diaion HP-20 trình bày Bảng 3.1 Cao đặc, màu nâu Cao khô, màu MeOH 50 nâu đen Cao khô, màu MeOH 100 nâu Cao mềm, màu Chloroform xanh Hình thức Nước Khối Độ ẩm Hiệu lượng(g) (%) suất (%) 38,37 9,62 35,89 30,96 4,96 30,45 8,83 4,06 8,76 0,51 * 0,52 *: Lượng cao thu q ít, khơng đủ khảo sát độ ẩm Kết phù hợp với tính tan hoạt chất tanin dung môi triển khai Kết định lượng cao thử Bảng Hàm lượng hợp chất phenol toàn phần mẫu cao thử Cao thử Toàn phần Pđ nước Pđ MeOH 50 Pđ MeOH 100 Pđ chloroform Hàm lượng hợp chất phenol (mg pyrogallol/ g cao) 265,5 ± 0,63 406,34 ± 0,74 328,55 ± 1,03 60,15 ± 0,1 25,87 ± 0,11 Hàm lượng (%) 26,55 40,63 32,85 6,01 2,58 dung mơi có độ phân cực giảm dần nước, MeOH 50, MeOH 100 chloroform Do tanin có tính phân cực mạnh nên tan nhiều dịch chiết nước MeOH 50, từ hàm lượng phenol tồn phần hai phân đoạn cao Kết cho thấy cao toàn phần phân đoạn có chứa hợp chất phenol, đặc biệt cao phân đoạn nước, cao phân đoạn MeOH 50 cao toàn phần có hàm lượng cao theo thứ tự 40,64%; 32,85% 26,55% Kết phù hợp với qui trình chiết xuất qua cột Diaion với Kết thử nghiệm đánh bắt gốc tự DPPH Tên mẫu thử Nồng độ khảo sát (µg/ml) Phương trình hồi quy nồng độ HTCO R IC50 (µg/ml) Cao tồn phần 0,2-2 yˆ = 33, 613x + 5,026 0,981 1,34 Pđ nước 0,2-2 yˆ = 34,1x + 5,963 0,987 1,29 Pđ MeOH 50 0,2-2 yˆ = 44,396x 0,986 1,13 Pđ MeOH 100 0,2-4 yˆ = 16,165x + 3,098 0,991 2,9 Pđ chloroform 0,2-100 yˆ = 0,894x + 3,335 0,981 52,2 Vitamin C 0,2-6 yˆ = 12,221x - 3,07 0,99 4,34 BHT 0,2-6 0,951 4,4 yˆ = 9,389x + 8,642 phân đoạn làm màu DPPH, tức có tác dụng bắt gốc tự nồng độ thấp, chứng tỏ phân đoạn cao vỏ chôm chôm có hoạt tính chống oxy hóa mạnh DPPH chất sản sinh gốc tự do, tạo loạt phản ứng chuỗi gây tổn thương mô, tế bào dẫn đến thối hóa mơ, lão hóa thể bệnh lý nguy hiểm khác Kết thử nghiệm cho thấy cao toàn phần cao Chuyên Đề Dược Khoa 337 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Kết thử nghiệm β-caroten-acid linoleic Hình Đồ thị so sánh hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) mẫu cao thử mẫu đối chiếu theo thời gian thử nghiệm β-caroten-acid linoleic thương nặng Hàm lượng MDA lô gây độc Kết chứng tỏ mẫu cao thử tăng gấp 2,16 lần so với lô chứng tiêm dầu oliu có khả chống oxy bảo vệ β-caroten tốt, (p < 0,05), chứng tỏ độc tính CCl4 làm tăng đặc biệt phân đoạn MeOH 50, phân đoạn lượng MDA nước cao toàn phần Kết thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa in vivo Xác định hàm lượng MDA(4) CCl4 sản sinh dẫn xuất gốc tự như: CCl3•, CCl3OO•, dẫn đến q trình peroxy hóa lipid màng tế bào, nguyên nhân gây tổn thương tế bào gan Sự tổn thương tế bào gan thể qua việc tăng sản phẩm q trình peroxy hóa lipid như: MDA, lượng MDA tăng cao tế bào gan bị tổn 338 So với lô gây độc, hàm lượng MDA lơ uống cao tồn phần liều 0,3g/kg thấp 3,3 lần có ý nghĩa thống kê (p < 0,01); lơ uống cao tồn phần liều 0,12g/kg thấp 2,5 lần có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với lô chứng lượng MDA lơ uống cao tồn phần khác khơng ý nghĩa thống kê chứng tỏ cao toàn phần ngăn cản tăng lượng MDA so với lô gây bệnh lý (với CCl4) mà giúp giữ lượng MDA mức thấp lô chứng Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 20 Lô chứng Lô bệnh lý Lô cao toàn phần 0,3g/kg Lô cao toàn phần 0,12g/kg Lô pđ nước 0,3g/kg Lô pđ nước 0,12g/kg Lô pđ MeOH 50 0,3g/kg Lô pđ MeOH 50 0,12g/kg Lôpđ MeOH 100 0,3g/kg Lô pđ MeOH 100 0,12g/kg Lô silymarin # 18 16 Hàm lượng MDA (nmol/g gan) Nghiên cứu Y học 14 12 10 * ** n=10 n=10 n=10 n=9 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 Hình Đồ thị so sánh hàm lượng MDA gan chuột lô thử nghiệm #: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lơ chứng p < 0,05; *: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lô bệnh lý p < 0,05; **: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lô bệnh lý p < 0,01 Kết xác định hàm lượng GSH 7000 & * 6000 # 5000 Hàm lượng GSH (nmol/g gan) Lô chứng Lô bệnh lý Lô cao toàn phần 0,3g/kg Lô cao toàn phần 0,12g/kg Lô pđ nước 0,3g/kg Lô pđ nước 0,12g/kg Lô pđ MeOH 50 0,3g/kg Lô MeOH 50 0,12g/kg Lô pđ MeOH 100 0,3g/kg Lô pđ MeOH 100 0,12g/kg Loâ silymarin ## ## 4000 ## ## ## 3000 2000 1000 n=10 n=10 n=10 n=10 n=9 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 Hình Đồ thị so sánh hàm lượng GSH gan chuột lô thử nghiệm *: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lơ bệnh lý p < 0,05; #: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lô chứng p < 0,05; ##: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lô chứng p < 0,01; &: khác có ý nghĩa thống kê so sánh với lơ đối chiếu p < 0,05 Chuyên Đề Dược Khoa 339 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học CCl4 làm tổn thương đến gan, làm giảm lượng GSH nội sinh có sẵn gan Đánh giá tác dụng chống oxy hóa, bắt gốc tự do, bảo vệ gan thơng qua việc ngăn chặn có ý nghĩa suy giảm lượng GSH gan Glutathion thành phần quan trọng hệ thống phòng vệ chống oxy hóa, có hoạt tính chống oxy hóa chống độc cao Hàm lượng glutathion nội bào xem tiêu đánh giá khỏe mạnh khả chống độc tế bào Trong mơ hình gây viêm gan cấp CCl4, glutathion khử độc nhờ nhóm -SH phản ứng trực tiếp với chất độc chuyển hóa CCl4 như: CCl3•, đồng thời gián tiếp ngăn cản hư hỏng tế bào q trình peroxy hóa lipid màng tế bào gốc tự như: CCl3•, CCl3OO• Sự tổn thương tế bào gan thể qua suy yếu hàm lượng glutathion nội bào Hàm lượng GSH lô uống cao tồn phần liều 0,3g/kg cao 1,88 lần có ý nghĩa thống kê so với lô gây bệnh lý (với CCl4) (p < 0,05), cao gấp 1,72 lần có ý nghĩa thống kê so với lô đối chiếu silymarin (p < 0,05) khác khơng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng, chứng tỏ cao tồn phần liều 0,3g/kg có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan theo hướng trì lượng GSH nội sinh sẵn có tế bào gan khơng bị giảm trước độc tính CCl4 Ta thấy hàm lượng GSH lơ gây bệnh lý (với CCl4) giảm 1,99 lần có ý nghĩa thống kê so với lô chứng tiêm dầu oliu (p < 0,01), chứng tỏ độc tính Kết định lượng men gan AST, ALT Lô chứng Lô bệnh lý Lô cao toàn phần 0,3g/kg Lô cao toàn phần 0,12g/kg Lô pđ nước 0,3g/kg Lô pđ nước 0,12g/kg Lô pđ MeOH 50 0,3g/kg Lô pđ MeOH 50 0,12g/kg Lô pđ MeOH 100 0,3g/kg Lô pđ MeOH 100 0,12g/kg Lô silymarin 7000 ### Chỉ số AST (U/L) 6000 ### 5000 ### ### * 4000 ### ### 3000 ** ### 2000 * ### * ### ** ### 1000 n=10 n=10 n=10 n=10 n=9 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 Hình Đồ thị so sánh số AST gan chuột lơ thử nghiệm *: khác có ý nghĩa so sánh với lô bệnh lý p < 0,05; **: khác có ý nghĩa so sánh với lơ bệnh lý p < 0,01; ###: khác có ý nghĩa so sánh với lô chứng p < 0,001 Kết thử nghiệm cho thấy nồng độ AST huyết lô gây bệnh lý (với CCl4) tăng gấp 50 lần có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng tiêm dầu oliu (p < 0,001) Kết phù hợp với mơ hình gây viêm gan cấp CCl4 340 Nồng độ AST tăng cao chứng tỏ tế bào gan bị tổn thương làm tăng tính thấm enzym qua màng tế bào, làm tăng nồng độ enzym máu Đánh giá tác dụng chống oxy hóa bảo vệ tế bào gan gián tiếp qua việc theo dõi khả Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 làm giảm nồng độ AST huyết lô uống cao thử nghiệm Các lô thử uống cao toàn phần liều 0,3g/kg liều 0,12g/kg làm giảm số AST 4,2 lần 4,6 lần có ý nghĩa thống kê so với lơ gây bệnh lý (với CCl4)(p < 0,01) Các lô uống cao phân đoạn nước liều 0,12g/kg, lô uống cao phân đoạn MeOH 50 liều 8000 0,12g/kg lô uống cao phân đoạn MeOH 100 liều 0,12g/kg làm giảm nồng độ AST huyết 3,8 lần; 2,3 lần 2,5 lần có ý nghĩa thống kê so với lơ gây bệnh lý (với CCl4) (p < 0,05) Kết chứng tỏ cao thử có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan thể qua việc làm giảm số AST Lô chứng Lô bệnh lý Lô cao toàn phần 0,3g/kg Lô cao toàn phần 0,12g/kg Lô pđ nước 0,3g/kg Lô pđ nước 0,12g/kg Lô pđ MeOH 50 0,3g/kg Lô pđ MeOH 50 0,12g/kg Lô pđ MeOH 100 0,3g/kg Lô pđ MeOH 100 0,12g/kg Lô silymarin ### 6000 Chỉ số ALT (U/L) Nghiên cứu Y học ### * ### ### 4000 ** ** ### ### n=10 n=10 ### ### * ### ** ### 2000 n=10 n=10 n=9 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 n=10 Hình Đồ thị so sánh số ALT gan chuột lơ thử nghiệm *: khác có ý nghĩa so sánh với lô bệnh lý p < 0,05; **: khác có ý nghĩa so sánh với lơ bệnh lý p < 0,01; ###: khác có ý nghĩa so sánh với lô chứng p < 0,001 ALT enzym nội bào, có chủ yếu tế bào gan Do xuất huyết phản ánh trước hết tổn thương gan, đặc hiệu so với AST CCl4 gây tổn thương nhiễm độc trực tiếp, hủy hoại tế bào gan, gây viêm gan cấp tính, làm tăng ALT từ 8-50 lần hay giới hạn Nồng độ ALT huyết lô gây bệnh lý (với CCl4) tăng cao, gấp 149 lần so với lô chứng (p < 0,001) Kết phù hợp với mơ hình gây viêm gan cấp CCl4 Nồng độ ALT tăng cao chứng tỏ tế bào gan bị tổn thương làm tăng tính thấm enzym qua màng tế bào, làm tăng nồng độ enzym máu Đánh Chuyên Đề Dược Khoa giá tác dụng bảo vệ tế bào gan gián tiếp qua việc theo dõi khả làm giảm nồng độ ALT huyết lô uống cao Các lơ thử uống cao tồn phần liều 0,3g/kg, cao tồn phần liều 0,12g/kg lô uống cao phân đoạn nước liều 0,12g/kg làm giảm nồng độ ALT huyết khoảng 3,2 lần, 2,8 lần 3,1 lần có ý nghĩa thống kê so với lô gây bệnh lý (với CCl4)(p < 0,01) Các lô thử uống cao phân đoạn MeOH 50 liều 0,12g/kg lô uống cao phân đoạn MeOH 100 liều 0,12g/kg làm giảm nồng độ ALT huyết lần 2,2 lần 341 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 có ý nghĩa thống kê so với lơ gây bệnh lý (với CCl4)(p < 0,05) Kết chứng tỏ cao thử có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan thể qua việc làm giảm số ALT So với lô chứng tiêm dầu oliu, số ALT lô thử nghiệm tăng cao có ý nghĩa thống kê (p < 0,001), chứng tỏ gan bị tổn thương Tóm lại, chưa đưa số ALT trở mức bình thường lơ chứng cao vỏ chơm chơm tồn phần liều 0,3g/kg, liều 0,12g/kg, cao phân đoạn MeOH 50 liều 0,12g/kg cao phân đoạn MeOH 100 liều 0,12g/kg làm giảm đáng kể có ý nghĩa thống kê gia tăng nồng độ ALT độc tính CCl4 Kết cao tồn phần phù hợp với kết công bố trước tinh chế cao toàn phần, theo dõi độ ổn định cao, định lượng hoạt chất có cao theo chất chuẩn thử nghiệm liều uống khác cao tồn phần, thử nghiệm mơ hình thực nghiệm khác như: gây độc mãn…để có kết luận đầy đủ tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan cao tồn phần vỏ chơm chơm TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Qua thử nghiệm in vitro in vivo cho thấy cao toàn phần với liều 0,3g/kg thể tốt tác dụng chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự do, bảo vệ gan Các nghiên cứu tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học để định danh hoạt chất có tác dụng chống oxy hóa làm chất chuẩn, 342 Dalton S.R., Lee S.M.L., King R.N., Nanji A.A., Kharbanda K.K., Casey C.A., McVicker B.L (2009), Carbon tetrachlorideinduced liver damage in asialoglycoprotein receptor-deficient mice, Biochemical pharmacology Vol 77, pp 1283–1290 Nguyen Huu Chi, Nguyen Ngoc Khoi (2010), Hepatoprotective potential and subchronic toxicity of rambutan rind extract, Journal of Medicinal Materials-Ha Noi, Vol 15 (1), pp 43-47 Siddhuraju P., Becker K (2003), Antioxidant properties of various solvent extracts of total phenolic constituents from three different agroclimatic origins of drumstick tree (Moringa oleifera Lam.) leaves, J Agric Food Chem Vol 51, pp 2144-2155 Su X.Y., Wang Z.Y., Liu J.R (2009), In vitro and in vivo antioxidant activity of Pinus karaiensis seed extract containing phenolic compounds, Food Chemistry Vol 117, pp 681-686 Thitilertdecha N., Teerawutgulrag A., Rakariyatham N (2008), Antioxidant and antibacterial activities of Nephelium lappaceum L extracts, LWT, pp 1- Uma Palanisamy; Cheng Hwee Ming; Theanmalar Masilamani; Thavmanithei Subramaniam; Ling Lai Teng; Ammu K Radhakrishnan, “Rind of rambutan Nephelium lappaceum a potential source of natural antioxidant”, Food Chemistry, 109, 54-63 (2008) Chuyên Đề Dược Khoa ... vỏ chôm chôm, đề tài tiến hành nhằm nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa cao chiết từ vỏ chơm chơm qua việc khảo sát hoạt tính chống oxy hóa, bắt giữ gốc tự in vitro in vivo phân đoạn chiết từ vỏ. .. chuột đưa vào thử nghiệm Chuyên Đề Dược Khoa Chiết xuất phân lập phân đoạn Từ cao toàn phần chiết cồn 95% theo phương pháp ngấm kiệt(2), phân đoạn cao vỏ chôm chôm từ cao toàn phần cách triển... đủ tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ gan cao tồn phần vỏ chơm chơm TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Qua thử nghiệm in vitro in vivo cho thấy cao toàn phần với liều 0,3g/kg thể tốt tác dụng chống oxy hóa,