Khảo sát khả năng cải thiện sự suy giảm trí nhớ của cao chiết trà xanh (camellia sinensis) trên chuột nhắt

Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm đánh giá tác dụng cải thiện sự suy giảm trí nhớ của Cao chiết toàn phần từ búp non lá trà xanh (TX) trên chuột nhắt. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG CẢI THIỆN SỰ SUY GIẢM TRÍ NHỚ CỦA CAO CHIẾT TRÀ XANH (CAMELLIA SINENSIS) TRÊN CHUỘT NHẮT Nguyễn Hải Hà*, Dương Phước An*, Trần Lê Tuyết Châu*, Trần Phi Hồng Yến* TĨMTẮT Đặt vấn đề: EGCG, hoạt chất polyphenol Trà xanh (TX), chứng minh có khả bảo vệ tế bào não chống lại bệnh Alzheimer Đề tài thực nhằm góp phần khẳng định khả cải thiện suy giảm trí nhớ Cao chiết TX mơ hình gây suy giảm trí nhớ sử dụng trimethyltin, tác nhân gây tổn thương tế bào vùng hải mã não chuột làm rối loạn chức nhận thức nhớ Mục tiêu: Đánh giá tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ Cao chiết toàn phần từ búp non trà xanh (TX) chuột nhắt Phương pháp: Áp dụng mơ hình gây suy giảm trí nhớ trimethyltin (TMT) để đánh giá khả cải thiện suy giảm trí nhớ Cao chiết búp non trà xanh sử dụng mơ hình Mê cung bơi (Morris Water Maze - MWM) thông qua việc xác định số sinh hóa (Acetylcholine Acetylcholinesterase) Kết quả: Hai liều cao chiết toàn phần từ TX (30 mg/kg, 60 mg/kg, p.o x 14 ngày) thể khả chống lại tác dụng suy giảm học hỏi ghi nhớ TMT liều (2,4 mg/kg, i.p) thông qua thử nghiệm mơ hình MWM: Thử nghiệm ẩn chân đế (Hidden Platform Test, p < 0,01 so nhóm TMT với TX60 + TMT); thử nghiệm thăm dò (Probe Test, p < 0,01 so nhóm TMT TX30 + TMT nhóm TX60 + TMT); thử nghiệm trí nhớ hoạt động (Working Memory Test, p < 0,05 so nhóm TMT với TX30 + TMT; p < 0,01 so nhóm TMT với nhóm TX60 + TMT) Kết định lượng acetylcholine (Ach) Acetylcholinesterase (AchE) vùng hải mã tương ứng với kết đạt từ thử nghiệm hành vi Cả hai liều thử nghiệm Cao chiết TX thể khả phục hồi giảm nồng độ Ach (p < 0,01) gia tăng AchE (p < 0,01) TMT gây Kết luận: Cao chiết toàn phần từ búp non trà xanh thể khả cải thiện suy giảm học hỏi ghi nhớ qua mơ hình MWM hiệu có liên quan đến hệ cholinergic, làm tăng Ach giảm hoạt tính AchE vùng hải mã não chuột Từ khóa: Trimethyltin, suy giảm khả học hỏi ghi nhớ, acetylcholine, Trà xanh ABSTRACT STUDY ON AMELIORATE OF MEMORY IMPAIRMENTS BY TRA XANH EXTRACT (CAMELLIA SINENSIS) IN MICE Nguyen Hai Ha, Duong Phuoc An, Tran Le Tuyet Chau, Tran Phi Hoang Yen * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 118 -123 Background: EGCG, one of polyphenol compound of Green tea (Camellia sinensis) (TX), was demonstrated to neuroprotective effect in Alzheimer’ Disease This study is carried out to assert amelioration of memory impairment of extracts from fresh bud of TX applying memory impairments model by trimethyltin, a reagent caused degeneration of hippocampus in brain and memory and cognition dysfunction * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS Trần Phi Hồng Yến ĐT: 0937878365 118 Email: tranyen73@gmail.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Objective: Evaluate effect of extract from fresh bud of Green tea leaf in memory impairments caused by trimethyltin in mice Methods: Applying trimethyltin (TMT) model for memory impairments to evaluate the effect of TX extract using Morris Water Maze (MWM) protocol and biochemical detection (acetylcholine and acetylcholinesterase) Results: Two doses of TX (30 mg/kg, 60 mg/kg, p.o x 14 days) show the protective role in impairments of learning and memory caused by TMT one dose exposure (2.4 mg/kg, i.p) by evaluation of MWM: Hidden Platform Test (p < 0.01 as compared between TMT and TX60 + TMT group); Probe Test (p < 0.01 as compared between TMT and TX30 + TMT or TX60 + TMT group); and Working Memory Test (p < 0.05 as compared between TMT and TX30 + TMT; p < 0.01 as compared between TMT and TX60 + TMT) Results in acetylcholine (Ach) content and Acetylcholinesterase (AchE) activity in hippocampus are correlated to results in behavior study Two doses of TX ameliorate the decreases in Ach content (p < 0.01) and increases in AchE (p < 0.01) caused by TMT Conclusion: Extracts from fresh bud of TX leaf ameliorate memory impairments using MWM test and this result correlates to cholinergic response, by increases in Ach content and decreases in AchE activity in hippocampus of mice Keywords: Trimethyltin, memory impairments, acetylcholine, Green tea ĐẶTVẤN ĐỀ Trimethyltin (TMT)(1) hợp chất hữu VẬTLIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Cao chiết tồn phần trà xanh Độc tính TMT chủ yếu hệ thần kinh Cao chiết ethanol toàn phần từ búp non trà xanh chuẩn hóa ThS Trần Lê Tuyết Châu* cung cấp (Hàm lượng EGCG đạt 65,3%) trung ương, tác động chủ yếu vùng Chuột thử nghiệm Hippocampus não chuột nhắt, làm suy Chuột nhắt trắng (đực) giống Swiss albino, trọng lượng 22 - 24 gam (khoảng - tuần tuổi), Viện Vắc Xin Sinh phẩm Y Tế Nha Trang cung cấp thiếc, thường dùng TMT chất ổn định plastic, diệt nấm mốc nơng nghiệp giảm chức nhận thức trí nhớ, gây triệu chứng ngộ độc: khiếm thính, bồn chồn, dễ kích động, điều hòa, lú lẫn, định hướng, rối loạn trí nhớ ngắn hạn dài Ngun liệu, hóa chất khảo sát chống suy giảm trí nhớ Do vậy, TMT Trimethyltin hydrochlorid (Sigma), Reminyl (Hoạt chất galantamin, Janssen); Memantine (Sigma); Coomassie [Bradford] (Thermo fisher Scientific); Amplex® Red Acetylcholine/ Acetylcholinesterase Assay Kit (A12217-InvitrogenTM/ Molecular Probe) ứng dụng nghiên cứu nhằm khảo Máy đo phổ hấp thu UV sát khả cải thiện suy giảm trí nhớ U-1900 UV/VIS Spectrophotometer 200V (HITACHI), máy Elisa (Thermo Electron) máy nghiền đồng thể SONICATOR 3080 (USA) hạn Hiện nay, TMT ứng dụng mơ hình vừa gây tổn thương tế bào thần kinh vừa gây suy giảm trí nhớ, nhằm khảo sát thuốc có khả bảo vệ tế bào thần kinh, Cao chiết TX, mối liên hệ với acetylcholine, chất trung gian hóa học hệ cholinergic, có vai trò quan trọng việc học nhớ Chuyên Đề Dược Khoa 119 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Thử nghiệm Morris Water Maze Là thử nghiệm dùng để đánh giá trí nhớ dài hạn chuột nhắt trắng Hồ bơi có kích thước 1500 x 80 (cm) (đường kính x chiều cao), chân đế kích thước 10 x 25 (cm) (đường kính x chiều cao) Hồ bơi đặt nơi có che kín, che có đặt hình vẽ với hình thù góc hồ bơi Nhiệt độ hồ bơi phải nằm khoảng 27 ± 0C suốt thử nghiệm(3) Thử nghiệm mê cung bơi gồm ngày thử nghiệm sau: 14 ngày uống cao TX 30 mg/ kg, TX 60 mg/ kg, (p.o) MEM 2,0 mg/ kg, i.p Gal 10 mg/ kg, i.p Ngày TMT 2,4 mg/ kg, ip Ngày Ngày Bắt đầu thử nghiệm hành vi Ngày Ngày 14 Khảo sát Ach AchE Hình Sơ đồ bố trí thử nghiệm mơ hình Morris Water Maze choline oxidase xúc tác phản ứng Ach bị - Chuột chia làm nhóm, nhóm chuyển thành choline xúc tác enzyme từ 8-10 con, thể tích tiêm uống thuốc 0,1 AchE, sau bị choline oxidase oxy hóa µl/ gam chuột): thành betain H2O2 Dưới xúc tác + Nhóm 1: Nước muối sinh lý (Sal.; n = 8) horseradish peroxidase (HRP), H2O2 phản ứng + Nhóm 2: TMT (2,4 mg/kg, i.p liều với 10 – acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine nhất; n = 10) (Amplex Red reagent) tạo chất có màu hồng + Nhóm 3: TX (30mg/kg, p.o x 14 ngày; n = Đo cường độ huỳnh quang 563 nm Cường độ 10) + TMT (2,4 mg/kg, i.p) huỳnh quang Amplex Red™ tỷ lệ thuận với + Nhóm 4: TX (60mg/kg, p.o x 14 ngày; n = nồng độ Ach AchE Kết biểu diễn 10) + TMT(2,4 mg/kg, i.p) số nmol Ach/ mg protein số mU AchE hoạt động/ mg protein + Nhóm 5: Memantine (MEM mg/kg, i.p x 10 ngày; n = 10) + TMT (2,4 mg/kg, i.p) + Nhóm 6: Galantamin (Gal 10 mg/ kg x 10 ngày, n = 10) + TMT (2,4 mg/kg, i.p) Định lượng Ach AchE Nguyên tắc Sử dụng kit Amplex Red™ để định lượng Ach AchE thông qua trung gian enzyme 120 Xử lý phân tích số liệu Số liệu biểu diễn dạng Mean ± SEM Sử dụng phương pháp phân tích ANOVA yếu tố với Fisher’s PLST test Ý nghĩa thống kê xác định p < 0,05 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học KẾTQUẢ Thử nghiệm ẩn chân đế Thời gian chuột tìm thấy chân đế (giây) 60 Sal TMT MEM 50 TX 30 TX 60 40 a 30 b 20 b 10 Ngày Ngày Ngày Ngày Hình Sự thay đổi thời gian chuột tìm thấy chân đế nhóm chứng (Sal n = 8), TMT (TMT 2,4 mg/kg i.p chờ ngày, n = 8), MEM (MEM 2,0 mg/ kg, i.p x 10 ngày, bắt đầu ngày trước tiêm TMT, n = 8), nhóm uống Cao TX (TX30 TX60 tương ứng với liều 30 60 mg/kg/ ngày x 14 ngày, bắt đầu trước tiêm TMT ngày, n = 8) thử nghiệm ẩn chân đế (Hidden Platform Test) mơ hình MWM ap