Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm xây dựng quy trình giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin ở bệnh nhân mắc bệnh loạn dưỡng cơ duchenne. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 XÂY DỰNG QUY TRÌNH GIẢI TRÌNH TỰ XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN ĐIỂM CỦA GEN DYSTROPHIN Ở BỆNH NHÂN MẮC BỆNH LOẠN DƯỠNG CƠ DUCHENNE Nguyễn Thị Băng Sương* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Loạn dưỡng cơ Duchenne (DMD: Duchenne muscular dystrophy) là bệnh di truyền lặn liên kết giới tính X, gây nên bởi đột biến gen dystrophin. Dạng đột biến phổ biến nhất là đột biến xóa đoạn gen, chiếm tỷ lệ 60‐65%. Đột biến điểm đứng thứ hai về mức độ thường gặp, chiếm 20‐30%. Đột biến lặp đoạn, khoảng 10‐ 15%. Việc phát hiện đột biến điểm chưa được thực hiện rộng rãi tại Việt Nam do khó khăn trong việc xây dựng quy trình chẩn đốn. Mục tiêu: Xây dựng quy trình giải trình tự phát hiện đột biến điểm của gen dystrophin Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Hai gia đình bệnh nhân mắc bệnh DMD, hai bệnh nhân này được phân tích gen dystrophin bằng kỹ thuật MLPA nhưng khơng có đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen dystrophin. Ly trích DNA của hai bệnh nhân cùng hai người mẹ, tiến hành giải trình tự trực tiếp gen dystrophin để phát hiện đột biến điểm. Kết quả: Một bệnh nhân bị đột biến tại vị trí p.E2468X, một bệnh nhân đột biến dạng p.N2414fr*X2425. Kết luận: Xây dựng thành cơng quy trình giải trình tự để xác định đột biến điểm của gen dystrophin, đây là tiền đề giúp ứng dụng xác định bản đồ đột biến gen dystrophin trên các bệnh nhân loạn dưỡng cơ Duchenne tại Việt Nam. Từ khóa: DMD, loạn dưỡng cơ Duchenne, dystrophin, đột biến điểm ABSTRACT ESTABLISH SEQUENCING PROCEDURE TO IDENTIFY DYSTROPHIN GENE POINT MUTATION CAUSING DUCHENE MUSCULAR DYSTROPHY Nguyen Thi Bang Suong* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 1 ‐ 2014: 508 ‐ 513 Introduction: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a recessive X‐linked form of muscular dystrophy caused by mutations on dystrophin gene. DMD disease results in muscle degeneration and eventual death. The most common dyptrosin gene mutation is deletion, accounting for 60‐65%. Point mutation is the second common mutation which accounting for 20‐30%. Duplication attributes about 10‐15% mutations. The detection of point mutations has not been widely applied in Vietnam because of difficulties in establishing diagnostic procedures. Objective: Establish diagnosis procedure to identify point mutations on dystrophin gene. Patients and Methods: Two DMD patients whosedystrophin genes were analyzed by MLPA method but no deletion or duplication mutants were identified. The DNA of these two patients and their mothers were sequenced to found point mutants. Results: One patient carries p.E2468X mutant, the other patient have p.N2414fr*X2425 mutant. Conclusion: Successfully establishing sequencing procedure to diagnose point mutations of the dystrophin gene, which is the premise for mapping mutations in dystrophin gene of Duchenne Vietnam patients. Keywords: DMD, Duchenne muscular dystrophy, dystrophin gene, point mutation. * Bộ mơn Hóa sinh, Trung Tâm Y Sinh Học Phân Tử, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS. BS. Nguyễn thị Băng Sương, ĐT: 0914007038 Email: suongnguyenmd@gmail.com 508 Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 ĐẶT VẤN ĐỀ Loạn dưỡng cơ Duchenne (DMD: Duchenne muscular dystrophy) là bệnh lý cơ do di truyền với tần suất bệnh vào khoảng 1/3500 trẻ trai. Đây là bệnh di truyền lặn liên kết giới tính, gây nên bởi đột biến gen dystrophin. Gen này nằm trên nhiễm sắc thể X ở locus Xp21, gồm 79 exon với 7 promoter khác nhau. Gen dystrophin sao mã ra mRNA 14kb và tổng hợp sản phẩm protein tương ứng là dystrophin. Đột biến gen làm ảnh hưởng đến quá trình tổng hợp protein dystrophin, cấu trúc protein thay đổi và mất chức năng bảo vệ tế bào cơ, do vậy tế bào cơ của bệnh nhân bị tổn thương(9). Triệu chứng điển hình của bệnh DMD là yếu cơ đối xứng gốc chi, teo cơ tiến triển và bệnh nhân thường tử vong do suy hơ hấp. Bên cạnh đó nồng độ enzyme creatine kinase tăng cao do tế bào cơ bị thối hóa. Theo các nhà nghiên cứu, dạng đột biến phổ biến nhất xảy ra trên gen dystrophin là đột biến xóa đoạn gen, chiếm tỷ lệ 60‐65%. Đột biến điểm đứng thứ hai về mức độ thường gặp, chiếm 20‐30%. Đột biến lặp đoạn, khoảng 10‐15%(9,11). Hiện nay có nhiều phương pháp giúp chẩn đốn đột biến mất đoạn gen dystrophin như kỹ thuật multiplex PCR (polymerase chain reaction), RT‐PCR (reverse transcriptase PCR), MLPA (multiplex ligation probe amplification), Trong đó, kỹ thuật MLPA được đánh giá cao khi ứng dụng để chẩn đốn đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen dystrophin. Ở Việt Nam, đã có nhiều tác giả sử dụng kỹ thuật multiplex PCR và MLPA để xác định đột biến mất đoạn gen gây bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne(4, 5). Để phát hiện đột biến điểm của gen dystrophin, kỹ thuật giải trình tự thường được sử dụng và có hiệu quả cao(3). Tại Việt Nam, việc chẩn đốn đột biến điểm của gen dystrophin gặp nhiều khó khăn do kích thước gen khá lớn (gồm 79 exon), vì vậy đa số phòng xét nghiệm Sinh học phân tử Nhi Khoa Nghiên cứu Y học khơng xây dựng quy trình chẩn đốn này. Tuy nhiên, dạng đột biến điểm chiếm tỷ lệ 20‐30% ở bệnh nhân Duchenne nên việc chẩn đốn chính xác dạng và vị trí đột biến của gen dystrophin ở bệnh nhân DMD là điều rất cần thiết, từ đó có thể giúp chẩn đốn người lành mang gen và chẩn đốn trước sinh cho thai nhi. Bên cạnh đó nếu khơng xây dựng quy trình xác định đột biến điểm chúng ta sẽ khơng xác định được bản đồ đột biến gen dystrophin trên các bệnh nhân DMD Việt Nam. Xuất phát từ thực tiễn đó chúng tơi tiến hành đề tài này nhằm mục tiêu: “Xây dựng kỹ thuật giải trình tự xác định đột biến điểm của gen dystrophin”. ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Gồm 2 bệnh nhân được chẩn đốn mắc bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne trên lâm sàng với các triệu chứng sau: Yếu cơ tiến triển nặng dần, dấu hiệu giả phì đại cẳng chân, khó leo cầu thang, dấu hiệu Gower dương tính. Định lượng CK huyết thanh tăng cao (tăng ít nhất 40 lần so bình thường), xét nghiệm đo điện cơ đồ có biểu hiện bệnh lý Duchenne. Hai bệnh nhân này đã được phân tích gen dystrophin bằng kỹ thuật MLPA nhưng không phát hiện được đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen dystrophin. Phương pháp nghiên cứu ‐ Thiết kế nghiên cứu: mô tả loạt ca ‐ Các kỹ thuật thực hiện: Ly trích DNA từ máu ngoại vi Lấy 2 ml máu tĩnh mạch của các bệnh nhân và mẹ bệnh nhân cho vào ống nghiệm có chứa chất chống đơng EDTA. Sau đó tiến hành ly trích DNA từ tế bào bạch cầu máu ngoại vi theo quy trình của kit QiAgen. Tiến hành phản ứng PCR Tiến hành khuếch đại toàn bộ gen dystrophin bằng các cặp mồi đặc hiệu, các cặp mồi được chúng tôi thiết kế bằng phần mềm 509 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nghiên cứu Y học LightScanner Primer Design. Các mồi được kiểm tra nhiệt độ bắt cặp, khơng có các SNP (single nucleotide polymorphism), không tạo cấu trúc hairpin và dimer. Điện di sản phẩm PCR trên agarose 1,5% để kiểm tra kết quả của phản ứng khuếch đại: Phản ứng PCR được tối ưu hóa về thành phần phản ứng, chu kỳ luân nhiệt sao cho sản phẩm điện di chỉ xuất hiện 1 băng ứng với kích thước của sản phẩm khuếch đại. Băng điện di rõ, có bờ đều, sắc gọn, khơng có băng phụ. ‐ Tinh sạch sản phẩm PCR: sử dụng kit của hãng QiAgen ‐ Thực hiện phản ứng cycle sequencing với BigDye version 3.1 của công ty Applied Biosystems, theo 2 chiều xuôi và ngược: ‐ Đọc trình tự DNA bằng máy sequencer ABI PRISMR 3500. ‐ Phân tích kết quả, so sánh trình tự chuẩn từ NCBI Blast server để chẩn đốn tình trạng đột biến của các exon, trình tự chuẩn của gen dystrophin mang accession number NG_012232. Giải trình tự gen dystrophin KẾT QUẢ Kết quả của gia đình bệnh nhân DMD 28 Kết quả giải trình tự của bệnh nhân DMD 28 GenBank BN MD 28 Hình 1: Kết quả giải trình tự exon 51 của bệnh nhân DMD_28 glutamin) thành TAG là codon kết thúc, làm q Nhận xét: Tại vị trí c.7402, nucleotid của trình tổng hợp protein dystrophin bị kết thúc genbank là G, trong khi đó của bệnh nhân là sớm. Đột biến được ký hiệu là p.E2468X và đã nucleotid T. Đột biến làm thay đổi codon 2468 được Hwa cơng bố vào năm 2008(6). bình thường là GAG (mã hóa cho acid amin Kết quả giải trình tự của mẹ bệnh nhân DMD 28 GenBank Mẹ BN DMD 28 Hình 2: Kết quả phân tích exon 51 của mẹ bệnh nhân 510 Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 Nhận xét: Kết quả của mẹ bệnh nhân DMD 28 cho thấy, tại vị trí c.7402 mà bệnh nhân bị đột biến, chúng ta thấy xuất hiện sóng đơi, trong đó 1 đỉnh tương ứng với nucleotid G (giống genbank) và 1 đỉnh nucleotid T (giống kết quả bị Nghiên cứu Y học đột biến ở bệnh nhân). Điều này chứng tỏ người mẹ bị đột biến dị hợp tử tại c.7402G>T, và người mẹ đã truyền allele bị bệnh cho con trai là bệnh nhân DMD 28. Kết quả của gia đình bệnh nhân DMD 45 GenBank BN DMD_45 Mẹ DMD_45 Hình 3: Kết quả phân tích exon 50 của bệnh nhân DMD 45 và người mẹ khẳng định, đột biến chủ yếu của gen là đột biến Nhận xét: xóa đoạn gen, chiếm tỷ lệ 60‐65%, đột biến lặp ‐ Đối với mẫu bệnh nhân: Vị trí c.7241 và đoạn chiếm khoảng 10‐15%, phần còn lại là đột c.7242 của genbank lần lượt là 2 nucleotid A và biến điểm, đột biến nhỏ hoặc đột biến tại vị trí C, tuy nhiên ở bệnh nhân không xuất hiện 2 cắt nối intron‐exon(9). Do tần suất phân bố kiểu nucleotid này. Ngồi ra, nucleotid vị trí c.7243 đột biến như vậy nên quy trình chẩn đốn đột bình thường là C bị thay đổi thành T. Đột biến biến gen dystrophin được bắt đầu bằng việc này làm xuất hiện codon kết thúc tại codon 2425. chẩn đốn đột biến mất đoạn, có nhiều phương Đột biến có ký hiệu là p.N2414fr*X2425. pháp để phát hiện kiểu đột biến này, năm 2010 ‐ Đối với mẹ bệnh nhân: tại vị trí c.7243 bắt Madania đã phối hợp 2 phương pháp multiplex đầu xuất hiện sóng đơi, phân tích trình tự các PCR và real time PCR để chẩn đoán đột biến đỉnh chúng ta nhận thấy mẹ bệnh nhân có 1 mất đoạn gen dystrophin(8). Bên cạnh đó các allele bình thường (trình tự giống genbank) và 1 nghiên cứu cho thấy kỹ thuật MLPA có rất allele bị đột biến (có trình tự giống bệnh nhân). nhiều ưu điểm trong nghiên cứu bệnh DMD, vì BÀN LUẬN ngồi việc phát hiện đột biến mất đoạn, nó còn giúp phát hiện các đột biến lặp đoạn gen(5,2). Một Loạn dưỡng cơ Duchenne là bệnh di truyền trong những trở ngại lớn của việc chẩn đốn di liên kết với nhiễm sắc thể giới tính X, do đột truyền bệnh DMD là việc phân tích phát hiện biến gen Dystrophin nằm trên nhiễm sắc thể giới đột biến điểm, đây là nguyên nhân thường gặp tính X, do vậy bệnh thường biểu hiện ở trẻ em thứ hai sau đột biến mất đoạn. Do gen và hiếm khi gặp ở trẻ nữ. Các nhà nghiên cứu Nhi Khoa 511 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 dystrophin là một gen lớn, cấu trúc gồm 79 exon, trong khi đó đột biến điểm lại rải rác khắp chiều dài gen chứ khơng tập trung tại các vùng trọng điểm như đột biến mất đoạn nên việc phân tích rất tốn kém về cơng sức và thời gian cũng như kinh phí. Năm 2006, Hamed cùng cộng sự đã xây dựng quy trình RT‐PCR để giải trình tự cDNA của gen dystrophin. Hamed đã thiết kế 76 đoạn mồi gắn đặc hiệu với phân tử cDNA, sau đó tác giả khuếch đại cDNA và giải trình tự tồn bộ vùng gen mã hóa của dystrophin. Nghiên cứu này đã phát hiện được 10 bệnh nhân bị đột biến điểm và đột biến nhỏ(3). Ở Việt Nam, vào năm 2009, nhóm nghiên cứu chúng tơi đã ứng dụng kỹ thuật RT‐PCR trong chẩn đốn đột biến mất đoạn của gen dystrophin(10). Tuy nhiên kỹ thuật RT‐PCR đòi hỏi nhiều cơng đoạn, kinh nghiệm cũng như kỹ năng cao của người phân tích, do vậy tỷ lệ thành cơng của kỹ thuật khơng cao. Trong nghiên cứu của Hamed, tác giả phân tích 15 bệnh nhân DMD khơng có đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen dystrophin, nhưng chỉ phát hiện 10 bệnh nhân bị đột biến điểm, trong khi đó theo lý thuyết thì hầu hết các bệnh nhân này phải có đột biến điểm. Trong nghiên cứu trước của chúng tôi, kỹ thuật RT‐PCR chỉ phát hiện được 50% bệnh nhân DMD bị đột biến mất đoạn(10), trong khi đó nếu ứng dụng kỹ thuật MLPA thì tỷ lệ này là 63,6%(2). Do các hạn chế đó nên một số tác giả vẫn sử dụng kỹ thuật giải trình tự trên DNA của vùng gen dystrophin(12), trong nghiên cứu này chúng tơi cũng ứng dụng giải trình tự trực tiếp trên phân tử DNA. Đối với gia đình bệnh nhân thứ nhất, khi phân tích kết quả giải trình tự exon 51 của bệnh nhân DMD 28 chúng ta nhận thấy tại vị trí c.7402, nucleotid của genbank là G, trong khi đó của bệnh nhân là nucleotid T. Đột biến làm thay đổi codon 2468 bình thường là GAG (mã hóa cho acid amin glutamin) thành TAG là codon kết thúc, làm quá trình tổng hợp protein dystrophin bị kết thúc sớm. Việc tổng hợp protein dystrophin bị cắt cụt sẽ làm mất chức năng của protein, làm protein khơng bảo vệ 512 được tế bào cơ, do vậy tế bào cơ bị thối hóa dần và gây nên bệnh lý DMD. Kiểm tra kết quả trên NCBI chúng tơi xác định đột biến này đã được Hwa cơng bố vào năm 2008 trên tạp chí J Formos Med Assoc(6). Đột biến được ký hiệu là p.E2468X. Một đặc điểm của bệnh nhân DMD là 2/3 bệnh nhân nhận gen bệnh từ người mẹ mang kiểu gen dị hợp tử, 1/3 bệnh nhân là do đột biến mới phát sinh. Do vậy khi phát hiện đột biến ở bệnh nhân chúng ta phải kiểm tra kiểu gen của người mẹ xem có mang gen bệnh hay khơng, điều này rất quan trọng trong tư vấn di truyền cũng như giúp chẩn đốn trước sinh bệnh DMD. Kết quả của mẹ bệnh nhân DMD 28 cho thấy, tại vị trí c.7402 mà bệnh nhân bị đột biến xuất hiện sóng đơi, trong đó 1 đỉnh tương ứng với nucleotid G (giống genbank) và 1 đỉnh nucleotid T (giống kết quả bị đột biến ở bệnh nhân).Điều này chứng tỏ người mẹ bị đột biến dị hợp tử tại c.7402G>T, và người mẹ đã truyền allele bị bệnh cho con trai là bệnh nhân DMD 28. Đối với gia đình thứ hai, kết quả giải trình tự của bệnh nhân DMD 45 cho thấy ở vị trí c.7241 và c.7242 của genbank lần lượt là 2 nucleotid A và C, tuy nhiên ở bệnh nhân khơng xuất hiện 2 nucleotid này. Ngồi ra, nucleotid vị trí c.7243 bình thường là C bị thay đổi thành T. Đột biến ở bệnh nhân làm thay đổi codon 2414 AAC (mã hóa cho acid amin asparagine) thành ATG (mã hóa cho acid amin methionine), đồng thời gây lệch toàn bộ khung đọc kể từ codon 2414 đến codon 2425, và codon 2425 là TAG, đây là codon kết thúc. Như vậy sự tổng hợp protein dystrophin bị cắt cụt, làm thay đổi cấu trúc và chức năng của protein dystrophin và gây bệnh DMD. Dạng đột biến này được ký hiệu là p.N2414fr*X2425. Đối với mẹ bệnh nhân: tại vị trí c.7243 bắt đầu xuất hiện sóng đơi, phân tích trình tự các đỉnh chúng ta nhận thấy mẹ bệnh nhân có 1 allele bình thường (trình tự giống genbank) và 1 allele bị đột biến (có trình tự giống bệnh nhân). Như vậy chúng ta kết luận người mẹ mang kiểu gen dị hợp tử và truyền gen bệnh cho con trai. Chuyên Đề Sức Khỏe Sinh Sản và Bà Mẹ Trẻ em Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 1 * 2014 KẾT LUẬN Cùng với việc ứng dụng thành cơng quy trình MLPA trong chẩn đốn đột biến mất đoạn và lặp đoạn gen dystrophin đã được chúng tơi cơng bố trong nghiên cứu trước(2), việc xây dựng thành cơng quy trình giải trình tự để phát hiện đột biến điểm và đột biến nhỏ của gen dystrophin đã giúp cho việc chẩn đoán di truyền bệnh DMD ngày càng hoàn thiện hơn. Đây là tiền đề cho việc thiết lập bản đồ đột biến gen dystrophin tại Việt Nam. TÀI LIỆU THAM KHẢO Bennett RR, Schneider HE, Estrella E, Burgess S, Cheng AS, Barrett C, Lip V, Lai PS, Shen Y, Wu BL, Darras BT,Beggs AH, Kunkel LM (2009).Automated DNA mutation detection using universal conditions direct sequencing: application to ten muscular dystrophy genes.BMC Genet. 10:66. Đỗ Thị Thanh Thủy, Nguyễn Thị Băng Sương, Trần Thụy Vân Ngọc (2013).Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật MLPA để xác định đột biến mất đoạn gen Dystrophin gây bệnh loạn dưỡng cơ Duchenne, Tạp chí Y học TP. Hồ Chí Minh, tập 17(1), trang 83‐91. Hamed SA, Hoffman EP (2006). Automated sequence screening of the entire dystrophin cDNA in Duchenne dystrophy: point mutation detection.Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 5;141B(1):44‐50. Hung CC, Chen CP, Lin CP, Chen SC, et al (2006). Quantitative assay of deletion or duplication genotype by capillary electrophoresis system: application in Prader‐Willi syndrome and Duchenne muscular dystrophy, Clin Chem, 52, pp. 2203‐10. Nhi Khoa 10 11 12 Nghiên cứu Y học Hwa HL, Chang YY, Chen CH, et al (2007). Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification identification of deletions and duplications of the Duchenne muscular dystrophy gene in Taiwanese subjects, J Formos Med Assoc, 106, pp. 339‐46. Hwa HL, Chang YY, Huang CH, Chen CH, Kao YS, Jong YJ, Chao MC, Ko TM (2008). Small mutations of the DMD gene in Taiwanese families.J Formos Med Assoc. 107(6):463‐9. Laing NG, Davis MR, Bayley K, Fletcher S, Wilton SD (2011).Molecular diagnosis of duchenne muscular dystrophy: past, present and future in relation to implementing therapies.Clin Biochem Rev. 32(3):129‐34. Madania A, Zarzour H, Jarjour RA, Ghoury I (2010). Combination of conventional multiplex PCR and quantitative real‐time PCR detects large rearrangements in the dystrophin gene in 59% of Syrian DMD/BMD patients.Clin Biochem. 2010 Jul;43(10‐11):836‐42. Matsuo M. (2002). Duchenne and Becker muscular dystrophy: from molecular diagnosis to gene therapy, IUBMB Life, 53, pp.147‐52. Nguyễn Thị Băng Sương, Trần Vân Khánh, Nguyễn Thị Hà, Tạ Thành Văn (2009). Xác định đột biến mất đoạn gen dystrophin ở mức độ mRNA, Tạp chí Y học TP. Hồ Chí Minh, 13(2): 66‐72. Prior TW, Bridgeman SJ (2005). Experience and strategy for the molecular testing of Duchenne muscular dystrophin, JMD, 7, pp.317‐25. Stockley TL, Akber S, Bulgin N, Ray PN (2006). Strategy for comprehensive molecular testing for Duchenne and Becker muscular dystrophies.Genet Test;10(4):229‐43. Ngày nhận bài báo: 01/11/2013 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 25/11/2013 Ngày bài báo được đăng: 05/01/2014 513 ... cơng bố trong nghiên cứu trước(2), việc xây dựng thành cơng quy trình giải trình tự để phát hiện đột biến điểm và đột biến nhỏ của gen dystrophin đã giúp cho việc chẩn đốn di truyền bệnh DMD ngày càng ... Giải trình tự gen dystrophin KẾT QUẢ Kết quả của gia đình bệnh nhân DMD 28 Kết quả giải trình tự của bệnh nhân DMD 28 GenBank BN MD 28 Hình 1: Kết quả giải trình tự exon 51 của bệnh nhân DMD_28 glutamin) thành TAG là codon kết thúc, làm q ... lành mang gen và chẩn đoán trước sinh cho thai nhi. Bên cạnh đó nếu khơng xây dựng quy trình xác định đột biến điểm chúng ta sẽ không xác định được bản đồ đột biến gen dystrophin