Đề tài này được tiến hành với mục tiêu nhằm xác định đột biến đảo đoạn intron 22 ở bệnh nhân hemophilia A thể nặng và người nữ dị hợp tử trong gia đình bệnh nhân. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 5 * 2014 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT INVERSE‐SHIFTING PCR XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN ĐẢO ĐOẠN INTRON 22 GÂY BỆNH HEMOPHILIA A THỂ NẶNG Nguyễn Hữu Huy*, Nguyễn Thị Băng Sương**, Đỗ Thị Thanh Thủy**, Ngơ Thị Hồng Phước** TĨM TẮT Mở đầu: Hemophilia A là bệnh di truyền lặn liên kết với nhiễm sắc thể giới tính X do sự thiếu hụt hoặc khiếm khuyết yếu tố VIII, một loại protein đơng máu. Tần suất mắc bệnh hemophilia A là 1/5000 trẻ trai. Bệnh Hemophilia A thể nặng (nồng độ yếu tố VIII thấp hơn 1%) chiếm khoảng 40% các trường hợp mắc bệnh. Bệnh nhân mắc bệnh dễ xuất huyết do chấn thương hay tự phát, tụ máu trong cơ, chảy máu ở khớp. Đột biến đảo đoạn intron 22 gây ra 40‐50% các trường hợp Hemophilia A thể nặng. Mục tiêu: Xác định đột biến đảo đoạn intron 22 ở bệnh nhân Hemophilia A thể nặng và người nữ dị hợp tử trong gia đình bệnh nhân. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Thực hiện phân tích 2 gia đình với 2 bệnh nhân nam được chẩn đốn Hemophilia A thể nặng và 5 thành viên nữ. Phản ứng Inverse PCR gồm 3 bước: (a) cắt bằng enzyme BclI; (b) nối lại sản phẩm cắt tạo DNA vòng; (c) thực hiện phản ứng multiplex PCR và đọc kết quả. Kết quả: Phát hiện 2 bệnh nhân nam mang đột biến đảo đoạn intron 22, 4 người nữ dị hợp tử là người lành mang gen bệnh và 1 người nữ đang có thai là người bình thường. Kết luận: Chúng tơi đã ứng dụng thành cơng kỹ thuật Inverse PCR để phát hiện đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh Hemophilia A thể nặng ở bệnh nhân và người lành mang gen bệnh. Từ khố: Inverse PCR, đảo đoạn intron 22, Hemophilia A ABSTRACT APPLICATION INVERSE‐SHIFTING PCR TO IDENTIFY INVERSION INTRON 22 CAUSE OF SEVERE HEMOPHILIA A Nguyen Huu Huy, Nguyen Thi Bang Suong, Do Thi Thanh Thuy, Ngo Thi Hong Phuoc * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 5‐ 2014: 202 ‐ 207 Introduction: Hemophilia A is a recessive X‐linked genetic disorder caused by missing or defective factor VIII, a clotting protein. Hemophilia A occurs in approximately 1 in 5,000 live births. Severe hemophilia A (factor levels less than 1%) represents approximately 40% of cases. People with severe hemophilia A experience bleeding following an injury and may have frequent spontaneous bleeding episodes, often into their joints and muscles. Factor VIII intron 22 inversions (Inv22) cause 40%–50% of severe cases of hemophilia A. Objective: Identify inversion intron 22 in severe Hemophilia A patients and heterozygous female carriers. Patients and Method: To conduct the genetic analysis in 2 families of 2 patients diagnosed of severe hemophilia A and 5 female members. Inverse PCR involved 3 steps: (a) BclI restriction; (b) self‐ligation of restriction fragments, providing BclI rings; and (c) standard multiplex‐PCR analysis. Results: 2 male patients had intron 22 inversion, 4 female members were carrier and 1 female member, who was pregnant, was fortunately non carrier. Conclusion: We have successfully applied inverse PCR to identify inversion intron 22 cause of severe Hemophilia A. This helped for the detection of patients and identification of female carriers. Keywords: Inverse PCR, inversion intron 22, Hemophilia A * Khoa sinh học, Đại học Khoa học tự nhiên,TPHCM. ** Đại học Y Dược TPHCM. Tác giả liên lạc: TS.BS Nguyễn Thị băng Sương , ĐT: 0914007038 , Email: suongnguyenmd@gmail.com 202 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 5 * 2014 ĐẶT VẤN ĐỀ Hemophilia A là căn bệnh rối loạn đơng máu di truyền nghiêm trọng do sự thiếu hụt hay khiếm khuyết yếu tố VIII đồng thời đây cũng là căn bệnh di truyền lặn liên kết với nhiễm sắc thể giới tính X phổ biến nhất với tần suất mắc bệnh là 1/5000 trẻ trai(1). Ngun nhân gây bệnh là do đột biến trên gen F8 nằm trên cánh dài nhiễm sắc thể giới tính X tại vị trí Xq28, gen có chiều dài 186 kb, gồm 26 exon và mã hóa cho RNA dài 9 kb(3). Sản phẩm của gen F8 là yếu tố VIII nằm trong phức hợp hoạt hóa yếu tố X đóng vai trò rất quan trọng trong con đường đông máu, sự thiếu hụt yếu tố VIII sẽ dẫn đến rối loạn đông máu và các biểu hiện lâm sàng là xuất huyết tự phát hay do chấn thương nhẹ, tụ máu trong cơ, chảy máu ở khớp, đơi khi có tiểu máu. Bệnh Hemophila A được chia thành 3 loại dựa vào nồng độ yếu tố VIII trong huyết thanh: thể nặng khi yếu tố VIII có nồng độ rất thấp (