Nghiên cứu với mục đích chứng minh tác dụng kéo dài của dạng thuốc nanosparfloxacin, chúng tôi tiến hành nghiên cứu và so sánh dược động học của dạng thuốc viên chứa sparfloxacin và viên nang có chứa sparfloxacin trong cấu trúc nano (nano-sparfloxacin) từ Poly (D,L-lactide-co-glycolide).
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU DƯỢC ĐỘNG HỌC CỦA VIÊN NANG NANO - SPARFLOXACIN VÀ VIÊN NÉN SPARFLOXACIN Bùi Thị Hương Quỳnh*, Nguyễn Tuấn Dũng*, Alyautdin RN** TÓM TẮT Đặt vấn đề - Mục tiêu nghiên cứu: Với mục đích chứng minh tác dụng kéo dài dạng thuốc nanosparfloxacin, tiến hành nghiên cứu so sánh dược động học dạng thuốc viên chứa sparfloxacin viên nang có chứa sparfloxacin cấu trúc nano (nano-sparfloxacin) từ Poly (D,L-lactide-co-glycolide) Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Viên nang chứa nano-sparfloxacin sản xuất phòng thí nghiệm ChemRar, Liên Bang Nga; viên nén chứa sparfloxacin công ty Dr Reddy’s cung cấp Nghiên cứu tiến hành thỏ đực thí nghiệm giống Shinshilla Quy trình xác đinh nồng độ sparfloxacin máu xây dựng thẩm định kỹ thuật HPLC Water X Tera MS, cột C18 Kết quả: Điều kiện sắc ký: Xây dựng quy trình định lượng sparfloxacin huyết tương phương pháp HPLC với điều kiện sắc ký sau: Cột C18 (3x50 mm; 5µm); pha động gồm acetonitril dung dịch đệm pH 3,0 có nồng độ natri dihydrophosphat 0,025M (20:80); tốc độ dòng 1,0 ml/phút; đầu dò UV đặt 297 nm Quy trình định lượng đạt tiêu đánh giá độ xác, tính đặc hiệu, giới hạn định lượng đạt 80,0 ng/ml Xác định thông số dược động học dạng thuốc nghiên cứu chứng minh tác dụng kéo dài dạng viên nang chứa nano-sparfloxacin Kết luận: Viên nang chứa hạt nano-sparfloxacin tác dụng kéo dài dạng thuốc viên Vì sử dụng thuốc dạng nano làm giảm liều sử dụng, giảm tác dụng phụ thuốc kháng sinh chống lao Từ khóa: sparfloxacin, nano-sparfloxacin, dược động học, HPLC ABSTRACT PHARMACOKYNETIC STUDY OF CAPSULES WITH NANOSOMAL FORMULATION AND TABLETS WITH FREE FORMULATION OF SPARFLOXACIN Bui Thi Huong Quynh, Nguyen Tuan Dung, Alyautdin RN * Y Hoc TP Ho Chi Minh* Vol 15 - Supplement of No - 2011: 343 - 347 Introduction-Aims: In order to prove the prolonged effect of nanosomal formulation of sparfloxacin, we compared the pharmacokinetics of the nanosomal formulation of sparfloxacin (nano-sparfloxacin) based on Poly (D,L-lactide-co-glycolide) in capsules and its free formulation in tablets Subjects and methods: Capsules of nano-sparfloxacin were supplied by ChemRar, Russia; and tablets Sparfloxacin by Dr Reddy's Laboratories Ltd Drugs were tested in male rabbit Shinshilla Sparfloxacin in serum was determined by HPLC Water X Tera MS, and C18 column Results: A Standardized HPLC method was developed for quantitative determination of sparfloxacin in serum of rabbits with following chromatographic conditions: Water X Tera MS C18 (3x50 mm; 5µm); eluent – a mixture of acetonitrile and 0,025M phosphate buffer pH 3,0 (20:80); flow rate of ml/min; UV-detector at 297 nm The procedure met all requirements of quantitative method validation such as precision, specificity, and limit of quantification – 80,0 ng/ml Pharmacokinetic parameters of each drug formulation were determined and the prolonged effect of capsules with nano-sparfloxacin was proved * Bộ môn Dược lâm sàng – Khoa Dược – ĐH Y Dược Tp.HCM ** Bộ môn Dược Lý – Khoa Dược – Học viện Y khoa Moscow Tác giả liên lạc: TS Bùi Thị Hương Quỳnh ĐT: 0912261353 Email: huongquynhtn@gmail.com Chuyên Đề Dược Khoa 343 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Conclusion: Capsules with nano-sparfloxacin showed a prolonged effect, therefore, suggesting that the nanosomal formulation may help reduce the frequency of dose administration and the toxicity of antimicrobial and antitubercular drugs Keywords: sparfloxacin, nano-sparfloxacin, pharmacokinetic, HPLC xuất (Số 011913/01, hạn dùng 2010) Thỏ đực thí ĐẶT VẤN ĐỀ nghiệm giống Shinshilla Hiện hướng nghiên Hóa chất, dung mơi cứu điều trị bệnh nhiễm khuẩn nội bào sử Natridihydrophosphat, acid phosphoric, dụng hệ vận chuyển thuốc dạng nano, sản ethylacetate đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck, xuất từ polymer tự nhiên, dung hợp với Đức), acetonitril đạt tiêu chuẩn dùng sắc thể Những hạt nano vận chuyển thuốc ký (Merck, Đức) xác tới đại thực bào Khi đưa vào máu hạt nano mang thuốc lập lại đường vi khuẩn, tức bị bao bọc đại thực bào monocyte Trong tế bào, hạt nano tác dụng enzyme nội bào giải phóng dược chất, dược chất đạt nồng độ cao tế bào tăng khả tiêu diệt vi khuẩn(3) Các nghiên cứu giới gần chứng minh hệ vận chuyển thuốc dùng hạt nano làm tăng tác dụng điều trị, làm giảm liều tác dụng phụ thuốc kháng sinh, kháng lao truyền thống (isoniazid, rifampicin) Fluoroquinolon nhóm thuốc sử dụng rộng rãi hiệu điều trị bệnh nhiễm khuẩn lao vấn đề kháng thuốc chưa phổ biến với nhóm kháng sinh này(2) Nghiên cứu dạng thuốc nano sparfloxacin hướng nghiên cứu mới, với mục tiêu tăng tác dụng kéo dài giảm tác dụng phụ thuốc Đề tài thực nhằm nghiên cứu tính chất dược động học dạng thuốc nano thu so sánh với dạng thuốc viên sparfloxacin ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU – PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu Viên nang chứa nano-sparfloxacin tương đương với 400 mg sparfloxacin phòng thí nghiệm ChemRar cung cấp (Số 091008) Viên nén bao phim Sparflo chứa 200mg sparfloxacin công ty Dr Reddy's Laboratories Ltd sản 344 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu sử dụng 12 thỏ đực thí nghiệm giống Shinshilla có trọng lượng 2,7-3,1 kg Thỏ nuôi điều kiện thường (ăn, uống), chiếu sáng tự nhiên 12h trước bắt đầu thí nghiệm, ngừng cho thỏ ăn, để uống bình thường Thỏ chia làm nhóm, Nhóm – gồm con, dùng viên nang nanosparfloxacin 400 mg, Nhóm – gồm con, dùng viên nén sparfloxacin loại 200mg Thuốc đưa vào dày thỏ lần với dụng cụ hỗ trợ liều 400mg thuốc (1 viên nang viên nén) Lấy máu thỏ tiến hành trước dùng thuốc sau 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36 48 sau dùng thuốc Máu lấy từ tĩnh mạch vành tai thỏ, cho vào ống nghiệm chứa heparin Huyết tương lọc phương pháp ly tâm, dùng máy ly tâm Beckman J-6B tốc độ 5000 vòng/phút Mẫu huyết tương xử lý theo sơ đồ sau: Lấy khoảng 0,5 ml huyết tương thêm vào 2,5 ml ethylacetate, lắc máy lắc vòng 15 phút quay ly tâm 10 phút tốc độ 5000 vòng/phút Phần dung mơi hữu cho bay cách thủy nhiệt độ 70 độ C, lượng chất khô pha với 0,1 ml dung dịch pha động Dùng bơm tiêm dành cho sắc ký lỏng “Reodyne”, mẫu 7125 bơm 50 µl dung dịch thu vào cột sắc ký Xác định nồng độ sparfloxacin mẫu huyết tương tiến hành theo phương pháp HPLC đảo pha Lựa chọn pH thành phần pha Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 động(1,4) vào tính chất axit-base sparfloxacin, chất lưỡng tính chứa nhóm chức có tính axit (carboxyl) nhóm chức có tính base (amin bậc hai) Phải lựa chọn pH pha động để thuốc có dạng ion hóa, làm tăng độ xác sắc ký Điểm đẳng điện sparfloxacin pH 7,0 Vì có khuyến cáo khơng nên dùng pha động có pH 8,0 cho sắc ký này, nên định dùng môi trường axit Ở điều kiện pH 3,0, toàn sparfloxacin chuyển sang dạng cation Nên nghiên cứu dùng pha động với pH 3,0 Điều kiện tiến hành sắc ký: Cột sắc ký Water X Tera MS C18 (3x50 mm; 5µm); pha động gồm Nghiên cứu Y học acetonitril dung dịch đệm pH 3,0 có nồng độ natri dihydrophosphat 0,025M (20:80); tốc độ dòng 1,0 ml/phút; đầu dò UV đặt 297 nm, trùng với bước sóng hấp thu cực đại sparfloxacin; thể tích lần tiêm mẫu 50 µm KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Kết đo nồng độ sparfloxacin huyết tương theo thời gian (bảng 1) sở dựng đồ thị dược động học dạng thuốc viên nang nano-sparfloxacin viên nén sparfloxacin Đặc điểm dược động học dạng thuốc nghiên cứu trình bày hình Bảng Biến đổi nồng độ sparfloxacin huyết tương (µg/ml) theo thời gian, sau cho thỏ dùng dạng thuốc viên nén sparfloxacin viên nang nano-sparfloxacin liều 400 mg №№ 0.5 2 М SD 13.19 13.62 12.51 11.84 17.06 10.97 13.20 2.12 20.61 22.37 22.25 19.34 23.21 16.65 20.74 2.44 26.75 25.89 26.65 27.86 28.46 23.29 26.48 1.81 10 11 12 М SD 3.38 3.49 3.21 3.04 4.37 2.81 3.38 0.54 6.44 6.99 6.95 6.04 7.25 5.20 6.48 0.76 8.92 8.63 8.88 9.29 10.49 7.76 9.00 0.89 Chuyên Đề Dược Khoa Thời gian sau sử dụng thuốc, 10 12 Viên nén sparfloxacin 27.54 25.48 23.27 21.22 19.35 29.93 27.13 25.93 23.19 20.81 27.22 24.08 20.72 20.62 18.96 30.30 27.42 26.87 23.99 21.97 29.42 24.39 22.45 21.44 18.85 24.14 21.96 19.10 17.28 15.31 28.09 25.08 23.06 21.29 19.21 2.31 2.05 2.98 2.34 2.26 Viên nang nano-sparfloxacin 11.01 15.13 18.41 19.90 17.39 11.97 15.92 21.18 22.42 19.61 10.89 14.47 18.94 20.26 17.27 12.12 16.06 22.58 23.41 21.99 11.77 14.61 18.81 19.27 16.71 9.66 13.46 14.53 16.15 13.92 11.24 14.94 19.08 20.24 17.82 0.92 0.98 2.75 2.55 2.74 24 36 48 11.12 13.07 10.24 12.91 10.82 7.19 10.89 2.14 6.38 7.82 6.73 7.21 6.17 3.03 6.22 1.67 3.67 4.43 3.21 4.71 3.01 1.70 3.46 1.09 14.45 16.99 13.31 16.78 14.07 10.35 14.33 2.45 12.77 15.64 13.46 14.42 12.34 9.46 13.02 2.11 7.33 8.86 6.42 9.42 6.02 5.40 7.24 1.61 345 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Hình Đặc điểm dược động học – phụ thuộc nồng độ sparfloxacin theo thời gian sau cho thỏ dùng dạng thuốc viên nang nano-sparfloxacin viên nén sparfloxacin liều 400 mg Bảng Thông số dược động học sparfloxacin sau cho thỏ dùng dạng viên nang nano-sparfloxacin viên nén sparfloxacin với liều 400 mg № Tmax Cmax AUC(0→48) М SD - 28.09 2.31 617.48 88.81 М SD 10 - 20.24* 2.55 647.25 95.69 T1/2 kel Cl Viên nén sparfloxacin 14.52 0.048 0.595 1.83 0.007 0.121 Viên nang nano-sparloxacin 29.23** 0.024* 0.432 2.72 0.002 0.086 MRT Vd Сmax /AUC(0→48) 15.84 1.04 12.20 0.72 0.046 0.004 22.11 ** 0.43 17.97* 2.40 0.031 0.001 * - Khác biệt thống kê (* - р ≤0,05; ** - р≤0,01) Dựa vào đồ thị dược động học thu được, tính thơng số dược động học cho dạng thuốc, kết trình bày bảng Kết cho thấy, sparfloxacin dạng viên nén hấp thu nhanh qua đường tiêu hóa Thời gian đạt nồng độ đỉnh máu dạng viên nén 4h, dạng viên nang 10h với nồng độ đỉnh tương ứng 28,09±2,31 µg/ml 20,24±2,55 µg/ml (khác biệt có tính thống kê p≤0,05) Chu kỳ bán thải T1/2 tăng lần sau dùng viên nang (29,23±2,72 giờ) so với dùng viên nén (14,52±1,83 giờ), khác biệt có tính thống kê (р≤0,01), thời gian lưu thuốc trung bình MRT sau dùng viên nang 22,11±0,43 so với 346 MRT sau dùng viên nén 15,84±1,04 (MRT khác biệt có tính thống kê р≤0,01) thuốc sau dùng viên nang chậm bị thải trừ tồn máu lâu Thể tích phân bố Vd sau dùng viên nang 17,97±2,40 l cao sau dùng viên nén 12,20±0,72 l, có tính chất thống kê, thuốc phân bố tới tế bào mô nhiều sau dùng dạng viên nang nano-sparfloxacin Trong diện tích đường cong AUC(0→48) hai dạng thuốc khơng khác biệt có tính thống kê, sinh khả dụng tương đối 104% Vì dạng viên nang nano-sparfloxacin có sinh khả dụng tương đương với dạng thuốc viên sparfloxacin Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 KẾT LUẬN Tóm lại, dùng viên nang chứa nano-sparfloxacin làm tăng thời gian tồn thuốc máu, tăng phân bố thuốc tới mơ tế bào, cho tác dụng kéo dài dạng thuốc viên nén thông thường Trong tương lai, việc sử dụng thuốc dạng nano làm giảm liều sử dụng, giãn khoảng cách liều làm giảm tác dụng phụ thuốc kháng sinh chống lao TÀI LIỆU THAM KHẢO Nghiên cứu Y học Jeong YI, Na HS, Seo DH, Kim DG, Lee HC Jang MK, Nang Sk, Roh SH, Kim SI, and Nah JW Ciprofloxacin-encapsulated poly (dl lactde-co-glycolide) nanoparticles and its antibacterial activity // Int J Pharm – 2008 Mar – Vol 352 (12) – P.317-323 Klose D., Siepmann F., Elkharraz K., Krenzlin S., Siepmann J How porosity and size affect the drug release mechanisms from PLGA-based microparticles // International Journal of Pharmaceutics – 2006 – Vol.314 – P 198-206 Srinivas N., Narasu L., Shankar B.P., and Mullangi R Development and validation of a HPLC method for simultaneous quantitation of gatifloxacin, sparfloxacin and moxifloxacin using levofloxacin as internal standard in human plasma: application to a clinical pharmacokinetic study.// Biomed Chromatogr – 2008 – Vol 22(11) – P: 12881295 Cao S.X., Zhang J.Y., Ji X.M., and Liu H.M Quantitative analysis of sparfloxacin injection by high performance liquid chromatography // Se Pu – 2001 – Vol.19(5) – P: 454-456 Chuyên Đề Dược Khoa 347 ... viên nén sparfloxacin liều 400 mg Bảng Thông số dược động học sparfloxacin sau cho thỏ dùng dạng viên nang nano- sparfloxacin viên nén sparfloxacin với liều 400 mg № Tmax Cmax AUC(0→48) М SD -. .. 345 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Hình Đặc điểm dược động học – phụ thuộc nồng độ sparfloxacin theo thời gian sau cho thỏ dùng dạng thuốc viên nang nano- sparfloxacin. .. thuốc viên sparfloxacin ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU – PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu Viên nang chứa nano- sparfloxacin tương đương với 400 mg sparfloxacin phòng thí nghiệm ChemRar cung cấp (Số 091008) Viên