Phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ lá bạch quả (ginkgo biloba)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BẤCH KHOA LÊ ĐOÀN QUỲNH NHƯ PHÂN LẬP ISORHAMNETIN, KAEMPFEROL VÀ QUERCETIN TỪ LÁ BẠCH QUẢ (GINKGO BILOBA) Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số: 60520301 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỊ CHÍ MINH, 2017 2/100 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BACH KHOA -ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học: Tiến sĩ Huỳnh Khánh Duy Tiến sĩ Tống Thanh Danh Cán chấm nhận xét : PGS.TS NGUYỄN THỊ LAN PHI Cán chấm nhận xét : TS TRẦN NGỌC QUYÉN Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 12 tháng 01 năm 2017 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: Chủ tịch hội đồng: PGS.TS PHẠM THÀNH QUÂN Thu ký hội đong: TS PHAN THỊ HOÀNG ANH ủy viên Phản biện LPGS.TS NGUYỄN THỊ LAN PHI ựỹ viên Phản biện 2: TS TRẦN NGỌC QUYÊN ủý viện Hội đồng: TS LÊ XUẨN lĨẾN Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đảnh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau khỉ luận văn sửa chữa CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA 3! 100 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHÙ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Lê Đoàn Quỳnh Như MSHV: 1570176 Ngày, tháng, năm sinh: 21/03/1992 Nơi sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số: 60 52 03 01 I TÊN ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP ISORHAMNEHN, KAEMPFEROL VÀ QUERCETIN TỪ LÁ BẠCH QUẢ (GINKGO BILOBA) II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Khảo sát hệ dung mơi định tính cao bạch phương pháp TLC - Phân lập tinh chế isorhamnetin, kaempferol quercetin có cao bạch - Khảo sát điều kiện thủy phân cao bạch (cao FL) phương pháp chiết Soxhlet onepot, phương pháp có sử dụng hỗ trợ vi sóng, siêu âm; từ tìm điều kiện tốt phương pháp III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 04/07/2016 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHỆM VỤ: 04/12/2106 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: Tiến sĩ Huỳnh Khánh Duy- Tiến sĩ Tống Thanh Danh Tp HCM, ngày tháng năm 2017 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC 4/100 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực luận văn này, tơi nhận giúp đỡ vô quý báu quý thầy cô, anh chị, bạn trường Đại học Bách khoa Tp.HCM, gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình thực luận văn Tơi xin tỏ lòng biết ơn chân thành đến: TS Huỳnh Khánh Duy, TS Tống Thanh Danh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi nhiều trình nghiên cứu thực đề tài Quý thầy cô trường Đại học Bách khoa Tp.HCM tận tình giảng dạy giúp đỡ tơi q trình học tập thực đề tài Chị Nguyễn Lê Mỹ Tiên bạn Trần Đỗ Anh Khoa bạn Lâm Quốc Hoàng tạo điều kiện hỗ trợ cho tơi suốt khóa học thời gian thực đề tài Gia đình bạn bè động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn 6/100 TÓM TẮT LUẬN VĂN • Đề tài “Phân lập isorhamnetin, kaempferol quercetin từ bạch (Ginkgo 011000)” phân lập ba flavonoid cao bạch isorhamnetin, kaempferol quercetin thông qua việc thực khảo sát số phương pháp tìm điều kiện tốt việc phân lập, tạo tiền đề cho việc tiến hành xây dựng quy trình đánh giá chất lượng cao bạch nhằm phục vụ cho công tác kiểm chất lượng chế phẩm có thành phần cao bạch thị trường 5/ 100 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác 7/100 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT EtOAc Ethyl acetate CTPT Công thức phân tử CTCT Công thức cấu tạo KLPT Khối lượng phân tử DCM Dicloromethan DMSO CAN Dimethylsulfoxid Acetonitrile DNA Et Acid deoxyribonucleoic Ethyl h Giờ TLC Sắc ký mỏng HPLC Sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography) MS Khối phổ Me Methyl [M+H] Phân tử bị proton hóa (Protonated molecules) Ph Phenyl Pr Propyl Phổ *H NMR Pho cộng hưởng từ proton (*H) s Đỉnh đom d Đỉnh đôi dd Đỉnh đôi đỉnh đôi brs TES Đỉnh đom rộng Triethylsilyl Cao FL Cao flavanoid EGb Cao bạch 8/100 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT I Tổng quan tài liệu 12 1.1 Tính cấp thiết đề tài 12 1.2 Yêu cầu thực tiễn 14 1.3 Các cách tiếp cận công bố để giải vấn đề 15 1.4 Định hướng nghiên cứu 32 1.4.1 Đối tượng nghiên cứu 32 1.4.2 Nguyên liệu thiết bị 33 1.5 Phương pháp thực 34 1.6 Phương pháp kiểm định sản phẩm 41 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 41 II 2.1 Định danh dược liệu bạch 41 2.2 Khảo sát khả phân lập flavonoid cao bạch qua phương thức chiết- thủy phân bước 43 2.2.1 Thủy phân khơng có hỗ trợ vi sóng 43 2.2.2 Thủy phân có hỗ trợ vi sóng 51 2.3 Khảo sát khả phân lập flavonoid cao bạch qua phương thức chiết- thủy phân bước 56 2.3.1 Phương pháp chiết Soxhlet one-pot 56 2.3.2 Phương pháp chiết với hỗ trợ siêu âm 59 III KẾT LUẬN-KIẾN NGHỊ 64 3.1 3.2 Kếtluận: 64 Kiến nghị 65 IV TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 70 9/100 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1-1 Cây bạch (Gingko Bibola) 12 Hình 1-2 Lá bạch (Gingko Bibola) 13 Hình 1-3 Quả bạch (Gingko Bibola) 14 Hình 1-4 Cấu trúc phức vòng aluminium chloride quercetin 16 Hình 1-5 Quy trình phân tích theo Hasler 18 Hình II-1 Vi phẫu bạch 42 Hình II-2 TLC hệ dung môi khảo sát 44 10 /100 DANH MỤC BẢNG SỬ DỤNG Bảng 1-1 Cấu trúc hóa học Ginkgo Bibola flavonoids 15 Bảng 1-2 Quy trình phân lập phân tích flavonoid bạch 19 Bảng 1-3 Hàm lượng aglycone (mg/g) thu 20 Bảng 1-4 Kết khảo sát kết họp vói vi sóng (MAH) đun hồn lưu thơng thường (CRH) 21 Bảng 1-5 Kết nghiên cứu nhóm tác giả Jing Zhang 23 Bảng 1-6 Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch nghiên cứu tác giả A Chandra 24 Bảng 1-7 Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch nghiên cứu tác giả Amitabh 24 Bảng 1-8 Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch nghiên cứu tác giả Jiun-Lung Luo 25 Bảng 1-9 Nghiên cứu khả hấp phụ màng lọc kỵ nước màng trao đổi Ĩon27 Bảng 1-10 Đối chiếu điều kiện chạy HPLC hai phương pháp dược điển Anh (EP) NSF - INA : 29 Bảng I-11 Hàm lượng flavonoid tổng chiết qua hai phương pháp 29 Bảng 1-12 Hàm lượng flavone aglycone tổng 13 loại bạch 13 môi trường sống khác theo Dược điển Trung Quốc 30 Bảng 1-13 Hóa chất dùng chiết tách thủy phân hóa học 33 Bảng 1-14 Dung môi dùng tinh chế sắc ký 33 Bảng II-1 Ket khảo sát hệ dung mơi phân tích cao FL 43 Bảng II-2 Dữ liệu phổ 1H NMR chất K 45 Bảng II-3 Dữ liệu phổ 13C NMR chất K 45 Bảng II-4 Dữ liệu phổ 1H NMR chất Q 47 Bảng II-5 Dữ liệu phổ 13C NMR chất Q 48 Bảng II-6 Dữ liệu phổ 1H NMR chất 49 Bảng II-7 Dữ liệu phổ 13C NMR chất 50 Bảng II-8 Điều kiện phản ứng phương pháp chiết thủy phân có hỗ ttợ vi sóng 52 Bảng II-9 Điều kiện phản ứng phương pháp chiết Soxhlet one-pot 56 Bảng II-10 Điều kiện phản ứng phương pháp chiết với hỗ ttợ siêu âm.59 68/100 [42] [43] X.-G Liu, H Yang, X.-L Cheng, L Liu, Y Qin, Q Wang, et al., "Dữect analysis of 18 flavonol glycosides, aglycones and terpene trilactones in Ginkgo biloba tablets by matrix solid phase dispersion coupled with ultra- high performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry," Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, vol 97, pp 123-128,2014 J s Beck and J Stengel, "Mass spectrometric imaging of flavonoid glycosides and biflavonoids in Ginkgo biloba L," Phytochemistry, 2016 69/100 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất K 71 Phụ lục Giãn phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) cua hợp chất K 72 Phụ lục Giãn phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất K (tiếp theo) 73 Phụ lục Phổ NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chat K 74 Phụ lục Phổ DSC hợp chất K 75 Phụ lục Phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất Q 76 Phụ lục Giãn phổ ’H NMR (500 MHz, DMSO-d6) cua hợp chất Q 77 Phụ lục Giãn phổ ’H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất Q (tiếp theo) 78 Phụ lục Phổ NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chat Q 79 Phụ lục 10 Phổ DSC hợp chất Q 80 Phụ lục 11 Phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất 81 Phụ lục 12 Giãn phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) cua hợp chất 82 Phụ lục 13 Giãn phổ *H NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chất I (tiếp theo) „83 Phụ lục 14 Phổ 15c NMR (500 MHz, DMSO-d6) hợp chat I „ 84 Phụ lục 15 Phổ DSC hợp chất 85 Phụ lục 16 Phổ khối hợp chất K (PC) 86 Phụ lục 17 Phổ khối hợp chất K 87 Phụ lục 18 Phổ khối hợp chất Q (PC) 88 Phụ lục 19 Phổ khối hợp chất Q 89 Phụ lục 20 Phổ khối hợp chất I (PC) 90 Phụ lục 21 Phổ khối hợp chất 91 Phụ lục 22 Phổ LC- MS chất Q (phuơng pháp chiết Soxhlet one- pot 92 Phụ lục 23 Phổ LC- MS chất K (phuơng pháp chiết Soxhlet one- pot) 93 Phụ lục 24 Phổ LC- MS chất Q (phuơng pháp chiết duới sụ hỗ trợ vi sóng ) 94 Phụ lục 25 Phổ LC- MS chất K (phương pháp chiết hỗ ttợ vi sóng ) ’ ' 95 Phụ lục 26 Phổ LC- MS chat I (phương pháp chiết hỗ ttợ vi sóng) 96 Phụ lục 27 Phổ LC- MS chất Q (phương pháp chiết hỗ ttợ siêu âm) ' ' 97 Phụ lục 28 Phổ LC- MS chất Q (phương pháp chiết hỗ ttợ siêu âm) ' ' 98 Phụ lục 29 Phổ LC- MS chat I (phương pháp chiết hỗ ttợ siêu âm) 99 70/100 Fsrroia c H w 28Ễ 23S3 w w i— - CMfrSlwg FigJtog 22>tov2O1607 552& ĨH ttrárc e553 fi Poto Count SiwrtunOfegfW 4Ĩ3Ĩ.9150 OHB K1-0MS0-1H Jiajusaap Tirne I'iBij 5343 Nunfef of r^iKionis 32 fttoSequMPi _ zg _ Orffl! Rearin'Gurr 90.50 ia33(X5 & SwwpWMftfNfl € 04 MlJ2id.7j I Is fl z Moe^br 5-161 1.0 01 irpT B.5 Clwnkzl Shifi (ppra) Phụ lục 1, PhắlH NMR (500 MHz, DMSO-Ó6) hợp chẩtK 5PỮ1Ĩ Sfltort _ ŨMSD