DAI HOC QUOC GIA TP HCM TRUONG DAI HOC BACH KHOA
sy LLIce
TRAN THI THAO VY
NGHIEN CUU THANH PHAN HOA HOC CAO
Trang 2Công trình được hoăn thănh tại: Trường Đại học Bâch Khoa- ĐHQỌG- HCM
Cân bộ hướng dẫn khoa học: TS Mai Dinh Tri
Cân bộ chấm nhận xĩt 1:TS Phan Thị Hoăng Anh Cân bộ chấm nhận xĩt 2: TS Nguyễn Tú Anh Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại Trường Đại học Bâch Khoa, ĐHQG Tp HCM ngăy 04 thâng 08 năm 2015 Thănh phđn Hội đồng đânh giâ luận văn thạc sĩ gồm: Chủ tịch: PGS TS Phạm Thănh Quđn
Phản biện 1: TS Phan Thị Hoang Anh
Phản biện 2: TS Nguyễn Tú Anh
Ủy viín: TS Tống Thanh Danh
Thu ky: TS Ha Cam Anh + ® 9 NY Pe
Xâc nhận của Chủ tịch Hội đồng đânh giâ luận văn vă Trưởng Khoa quản lý chuyín ngănh sau khi luận văn được sữa chữa
Trang 3DAI HOC QUOC GIA TP HO CHiMINH CONG HOA XÊ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
TRUONG DAI HQC BACH KHOA Dĩc lap — Ty do — Hạnh phúc
NHIEM VU LUAN VAN THAC SI
Họ tín học viín: TRĂN THỊ THẢO VY MSSH: 12144441
Ngăy, thang, nam sinh: 11/ 04/ 1989 Noi sinh: Khanh Hoa
Chuyín ngănh: Công nghệ Hóa học Mê số ngănh: 12144441
I TÍN ĐẺ TĂI: “Nghiín cứu thănh phần hóa học cao ethyl acetate từ lâ
cđy Chđn Chim không cuống quả Schefflera Sessiljflora De.P.V”
II NHIEM VU VA NOI DUNG:
1 Trình băy tổng quan về dĩ tăi nghiín cứu
2 Cô lập vă xâc định cấu trúc hóa học một số hợp chất từ Lâ Cđy Chđn Chim Không Cuông Quả
— Điíu chí câc cao n-hexan, ethyl acetate từ cao ethanol
— _ Cô lập vă định danh bằng câc phương phâp phđn tích hiện đại 4 hợp chất
Ill NGĂY GIAO NHIỆM VỤ: ngăy 19 thâng 01 năm 2015
IV NGĂY HOĂN THĂNH NHIỆM VỤ: ngăy 14 thâng 06 năm 2015 V CÂN BỘ HƯỚNG DẪN: TS Mai Đình Trị
Tp HCM, ngay 03 thang 07 nam 2015
CAN BO HUONG DAN CHU NHIEM BO MON DAO TAO
Trang 4Luận văn năy được trực tiếp thực hiện tại phòng Hóa Học Câc Hợp Chất Thiín
Nhiín-Viện Công Nghệ Hóa Học- Viện Hăn lđm Khoa học vă Công Nghệ Việt Nam;
số 1 Mạc Đĩnh Chi, phường Bến Nghĩ, quận 1, TP Hồ Chí Minh, năm 2014
Với tắm lòng kính trọng vă biết ơn chđn thănh, tôi kính gửi lời cảm ơn đến: TS MAI ĐÌNH TRỊ
Nguoi Thay đê truyền đạt cho tôi những kiến thức chuyín môn vă nhiễu kinh nghiệm nghiín cứu quý bâu trong suốt thời gian tôi học tập, tận tình hướng dẫn vă quan tđm thường xuyín đến suốt quâ trình thực hiện công trình nghiín cứu của tôi
Người đê tạo mọi điều kiện thuận lợi tốt nhất cho tôi hoăn thiện luận văn năy
Tôi chđn thănh biết ơn ThS Nguyễn Tấn Phât đê giúp đỡ chđn thănh vă hỗ trợ
hết lòng để tôi hoăn thănh luận văn
Ban Giâm Hiệu vă Quý Thay, Cô công tâc tại Khoa Hóa học - Truong Dai Hoc
Bâch Khoa đê trang bị cho tôi những kiến thức nín tảng vững chắc trong suốt thời gian học cao học
Câc bạn học viín cùng lớp cao học tại Trưởng Đại Học Bâch Khoa, miín khóa
2012 - 2014 đê giúp đỡ, hồ trợ tôi trong suất quâ trình học tập
Xin chan thanh cam on!
TP Hồ Chí Minh, thâng 07 năm 2015
Trần Thị Thảo Vy
Trang 5TOM TAT
Từ lâ của Schefflera sessiliflora De P.V, ching tôi ẩ thuđược một mới chất lă
C20-gibberellin diterpene 28, 128-dihydroxygibberellin (126-hydroxy-GA110 hoặc
2Ø-hydroxy-GA112) (1), cùngớt ba hợp chất được biết, trans-tiliroside (2), kaempferol 3-@-Ø-D-glucuronopyranoside (3), acid 5-p-trans-coumaroylquinic (4), được phđn lập lần đầu tiín từ chỉ $cheffera bằng phương phâp sắc ký khâc nhau Cấu trúc của nó đê được lăm sâng tỏ thông qua câc phương phâp IR, UV, HR-ESI-
MS, NMR 1D vă 2D thí nghiệm vă so sânh với số liệu bâo câo trước đó
ABSTRACT
From the leaves of Schefflera sessiliflora De P V., one new C20-gibberellin diterpene 28,128 -dihydroxygibberellin (128 -hydroxy-GA110 or 28 -hydroxy- GA112) (1), together with three known compounds, trans-tiliroside (2), kaempferol 3-Ó-Ø6—D-glucuronopyranoside (3), 5-p-trans-coumaroylquinic acid (4), was
isolated for the first time from the genus Schefflera by various chromatography
methods Their structures were elucidated by IR, UV, HR-ESI-MS, NMR 1D and
2D experiments and comparison with previous reported data
Trang 6LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan lận văn năy được hoăn thănh dựa trín câc kết quả nghiín cứu
của riíng tôi, chưa từng được dùng trong bắt kì luận văn cùng cấp năo
Câc kết quả thu được trong luận văn đảm bảo tính chính xâc vă khâch quan TP HCM, ngăy 03 Thâng Ø7 năm 2015
Tâc giả
Trần Thị Thảo Vy
Trang 7MỤC LỤC 0/08/90 0000555541 1 DANH MỤC CÂC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮTT . -5 s5 cssssesssesssse vi /.9);8./00/9 9 (e8: viii I.9);8./00/90:7.)/ c1 ix II 9:0 09/0990 X I.9I:809 9 e.(ens:inni co ~ xi
CHƯƠNG 1 TÔNG QUAN 5° se 92 3g2xgnrxenrtseseereirossooerre 1
1.1 Đặc điểm họ nhđn sđm AraliaC€ae St 3v Set server seresxe 1
IZ®n 2/3/21 - 1 1.3 Văi nĩt sơ lược về Schefflera sessiÏifÏOFd - cv tvrkeEEetrreerrerrrkeres 5 1.4 Tâc dụng chữa bệnh cđy chđn chim trong dđn g1an 5s «sss+c<x+2 6 1.5 Câc nghiín cứu về tâc dụng được lý . - cv vrverrreerrkcree 7 1.6 Một số nghiín cứu câc loăi trong chỉ ŠcheƒfÏerd - ¿-cc Sex: 8 I0 i02) 12/27//2/5.//,721 721 — 8 1.6.2 Chan chim Schefflera leucantha .ccscescccccccecesssnssnsceccecccssssnsnsneseecesesssenns 9 1.6.3 Chan chim Schefflera octophylla (Lour.) Harms - 9 1.6.4 Chđn Chim Scheƒfflerd ĐOdÏiTHGFÍ cv n5 5 ke ss3 14
CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÂP NGHIÍN CỨU, THIẾT BỊ VĂ HÓA CHẤT 16
Pu o0) 09862058 0 16
2.1.1 Phương phâp phđn lập câc chất cv eervekererrkereree 16
2.1.2 Phương phâp xâc định cấu trúc hóa học . ¿- sex cxersrkererrred 18
2.2 Hoa chat- thigt Di ceeecesecsseecsseecsnseessscesneesseeessesecsnscesseesnsecsnsecsnseesneesneeesssessees 20 2.2.1 Hóa chất tt HH HH HH1 He 20
2.2.2 THiĩt nh 20
CHƯƠNG 3 THỤC NGHIỆỆM 50 G5250 So 29 9939 000505006 0605568056 22
3.1 Nguyín lIỆU - Q1 ng ng HH ng ng ng vn 22 3.2 Quy trình trích ly câC ÏOạI CaO . SH ng ng ng ve, 22 3.3 Phđn lập tinh chế một số hợp chất từ cao EtOAC ¿- cv 24 3.3.1 Khảo sât phđn đoạn ÏÏÏ., - c9 230 19 E1 vn ng vờ kg 25
Trang 83.3.2 Khảo sât phđn đoạn IIÏB, - Q1 1 1v HS ng ng ngu 26 3.3.3 Khảo sât phđn đoạn ÏÏÏC, - - S1 E13 vn ng ng 27
Trang 9DANH MỤC CÂC KÝ HIỆU, CHỮ VIET TAT
CC Colume Chromatography
CHC]1::MecOH Chloroform: Methanol CHCI::MeOH:H;O Chloroform: Methanol: Nước CD3OD Deuterated methanol
COSY Correlation pectroscopy
3C_NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance
d Doublet
dd Doublet of doublets
DEPT Detortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO Dimethyl Sulfoxide
EtOH:MeOH:H,O Ethyl acetate: Methanol: Nudĩc EtOH Ethanol
ESI-MS Electrospray Ionization Mass Spectrometry ‘H-NMR Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence HR-ESI-MS High Resolution Mass Spectrometry HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation H2SO4 Acid Sunfuaric J Coupling constant L Linneaus m Multiplet MS Mass Spectrometry no MeOD Methanol Number no
ppm Parts per million
ROESY Rotating frame nuclear overhauser effect spectroscopy
S Singlet
Sch Schefelera
Trang 11DANH MỤC CÂC HÌNH
Hinh 1.1 Schefflera octophylla (Lour.) Harms: Chan chim 8 lâ 2
Hình 1.2 Schefflera glomerulata H.L L1: Chần chim hoa chụm - 2
Hinh 1.3 Schefflera elliptica (Blume) Harms: Chan chim bầu dục .- - 3
Hình 1.4 Schefflera venulosa (Wight & Arn.) Harms: Chđn chim mđy 3
Trang 12DANH MỤC BÂNG Bang l.1: Trifterpen vă saponin triterpen nhóm olean vă ursan trong một số loăi 01119 ê910812/1277/2207Ẽ7Ẽ7Ẽ77— 4 Bảng 1.2: Triterpen va saponin triterpen nhom olean vă lupan trong một số loăi 1169)901012/72777/222 7778 .4 5 Bảng 1.3 : Tâc dụng chữa bệnh của một số loăi thuộc chỉ SCheƒflerd -«- 7
Bảng 1.4: Câc hợp chất cô lập được từ chđn chim bột . - 55c +<s++ 8
Bang 1.5: Một số hợp chat được phan lap tir Schefflera leucantha va Schefflera OCCOPHYLIG cccccsveesseecccccecessssnnscceceeccusussssnaeeeecccusessesenseeesseesessusagaaeeeeeeceseesssagueeseceesenses I1 Bảng 1.6 : Một số hợp chất của $chefflera bodinieri gắn với thụ thí 15 Bảng1.7: Một số cấu trúc glycoside triterpen 5 vòng đê phđn lập duoc tir Schefflera ĐÒTHIOTÌ, nh TH TK Ki ng HT 190 0019 9010 800 190 809 4 15 Bảng 3.1:Kết quả sắc ký cột trín cao EtOAC co cătnettrhkrirerrkrirrrried 24 Bảng 3.2 :Kết quả sắc ký cột phđn đoạn III của cao EtOAc s- s5s+s<vxce¿ 25
Bang 4.1 : Dữ liệu phố '”C, 'H-NMR, COSY, HMBC da SS01 vă so sânh với tăi
i0 ảẢẢẢẢẢĂẢĂẢĂẢĂẢĂẢằĂẮ .ẮỐ 31
Bảng 4.2 : Dữ liệu phố !°C, 'H-NMR, HMBC của SS02 vă so sânh với tăi liệu: 35 Bang 4.3 : Dữ liệu phố '”C, 'H-NMR, HMBC của SS03 vă so sânh với tăi liệu: 39 Bang 4.4: Dữ liệu phô °C, "H-NMR, COSY, HMBC aia SS04 va so sanh voi tai
i15 amỪCnDD ẢớẢớẢớẢẶẲẮốẮ` an 42
Trang 13DANH MỤC CÂC SƠ ĐÔ
Sơ đồ 3.1 Quy trình điều chế câc loại cao từ lâ cđy chđn chim không cuống quả 23 Sơ đồ 3.2 :Quy trình tâch câc phđn đoạn từ cao EtOAC c5 cccsrceexreerered 24 Sơ đồ 3.3 Quy trình phđn lập vă tỉnh chế câc hợp chất cao EtOAc từ lâ cđy chđn chim không cuống Quả .- - - c k+s S2 tk EEEkEEEE 3E gen ưyu 28
Trang 14DANH MỤC CÂC PHỤ LỤC PHU LUC 1: PHO CUA SSL01 Phu luc 1.1: Ph6 HR-ESI-MS SSLO1
Phu luc 1.2a: Phĩ 'H NMR SSLO1 Phụ lục 1.2b: Phố !H NMR SSLO1 Phụ lục 1.2c: Phố !H NMR SSL0I Phụ lục 1.3a: Phô !C NMR SSL0I Phu luc 1.3b: Phĩ '3C NMR SSLO1 Phu luc 1.3c: Phĩ 3C NMR SSLO1 Phu luc 1.4a: Phĩ DEPT SSLO1 Phu luc 1.4b: Ph6 DEPT SSLO1 Phu luc 1.5a: Ph6 HMBC SSLO1 Phu luc 1.5b: Ph6 HMBC SSLO1 Phu luc 1.5c: Ph6 HMBC SSLO1 Phu luc 1.5d: Ph6 HMBC SSLO1 Phu luc 1.6a: Phĩ HSQC SSLO1 Phu luc 1.6b: Ph6 HSQC SSLO1 Phu luc 1.6c: Ph6 HSQC SSLO1 Phu luc 1.7a: Ph6 COSY SSLO1 Phu luc 1.7b: Phĩ COSY SSLO1 Phụ lục 1.7c: Phổ COSY SSL0I1 Phụ lục 1.8a: Phô ROESY SSL0I Phụ lục 1.8b: Phố ROESY SSL01 Phụ lục 1.8c: Phô ROESY SSL0I Phu luc 1.9: Phĩ IR SSLO1
Trang 15PHU LUC 2: PHO CUA SSL02 Phụ lục 2.1: Phổ HR-ESI-MS SSL02 Phụ lục 2.2a: Phô !H-NMR SSL02 Phụ lục 2.2b: Phố !H-NMR SSL02 Phụ lục 2.2c: Phổ !H-NMR §SL02 Phụ lục 2.3a: Phô !C-NMR SSL02 Phụ lục 2.3b: Phố !C-NMR §SL02 Phụ lục 2.4a: Phổ DEPT SSL02 Phu luc 2.4b: Ph6 DEPT SSLO2 Phu luc 2.5a: Phĩ HMBC SSL02 Phu luc 2.5b: Ph6 HMBC SSLO2 Phu luc 2.5c: Ph6 HMBC SSL02 Phu luc 2.5d: PhO HMBC SSLO2 Phu luc 2.5e: Phĩ HMBC SSL02 Phu luc 2.6a: Ph6 HSQC SSLO2 Phụ lục 2.6b: Phổ HSQC SSL02 Phụ lục 2.6c: Phô HSQC SSL02
Trang 16PHU LỤC 3: PHỎ CỦA SSL03 Phụ lục 3.1: Phố HR-ESI-MS SSL03 Phụ lục 3.2a: Phô !H NMR SSL03 Phụ lục 3.2b: Phố '!H NMR SSL03 Phu luc 3.2c: Phĩ 'H NMR SSL03 Phu luc 3.2d: Phĩ 'H NMR SSL03 Phụ lục 3.2e: Phố !H NMR SSL03 Phụ lục 3.3a: Phố !C NMR SSL03 Phu luc 3.3b: Phĩ '3C NMR SSLO03 Phụ lục 3.4a: Phô DEPT SSL03 Phụ lục 3.4b: Phố DEPT SSL03 Phụ lục 3.5a: Phỏ HMBC SSL03 Phụ lục 3.5b: Phổ HMBC SSL03 Phụ lục 3.5c: Phô HMBC SSL03 Phụ lục 3.5.d: Phổ HMBC SSL03 Phụ lục 3.5e: Phô HMBC §SL03 Phụ lục 3.6a: Phơ HSQC SSL03 Phu luc 3.6b: Ph6 HSQC SSLO3 Phu luc 3.6c: Phĩ HSQC SSLO3
Trang 18MỞ ĐẦU
Xê hội ngăy căng phât triển nhu cầu về cuộc sống của con người ngăy căng tăng sức khỏe con người vă bệnh tật lă vấn đề quan tđm hăng đầu ngăy nay Trong những
năm gần đđy, thế giới đặc biệt chú ý đến câc cđy thuốc vă câc loại thuốc có nguồn
gốc thiín nhiín do phât hiện ra nhiều tâc dụng không mong muốn của nhiều loại thuốc được sản xuất bằng con đường tổng hợp hóa học Vì vậy mă nhu cầu của thế giới về cđy thuốc nói riíng vă được liệu nói chung ngăy căng tăng trong đó, câc dược liệu có tâc dụng bổ, tăng lực được chú ý hơn cả do đời sống ngăy căng được nđng cao nín nhu cầu về bảo vệ nđng cao sức khoẻ được con người ngăy căng được quan tđm Nhđn sđm lă vị thuốc bố đứng đầu , còn gọi lă thuốc trường sinh, đê được
con người tín nhiệm từ lđu đời Tuy nhiín, Nhđn sđm khó trồng, hiếm, thời gian thu
hoạch lđu, giâ thănh cao nín trong khoảng 50 năm qua câc nhă khoa học trong vă ngoăi nước vẫn tìm kiếm những loăi khâc thuộc họ Nhđn sđm (Araliaceae) dĩ thay thế Nhđn sđm cho một số tâc dụng: bổ, tăng lực, chống stress vă đê phât hiện nhiều loăi có tâc dụng sinh thích nghi vă tăng lực tương tự Nhđn sđm như Sđm XI-bí-ri {Eleutherococcus senticocus (Rupr & Maxim.) Maxim.), Định lăng (Polyscias yruticosa (L.) Harms), Ngi gia bi chan chim ( Schefflera heptaphylla (L.) Frodin), Sam My (Panax quinqueyolium L.), Tam that (Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen), Sđm Việt Nam (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) Chúng góp phần trong việc dự phòng văđi ỉu trị câc bệnh lý gđy bởi stress vật lý vă tđm lý anh
hưởng đến sự hằng định nội môi (homeostasis) của cơ thể con người vă lă nguyín
nhđn của những căn bệnh thời đại như ung thư ,tim mạch ,trầm cảm
Với những lý do trín chúng tôi chọn đề tăi “ Nghiín cứu thănh phần cao ethylaxtat từ lâ cđy chđn chim không cuống quả Scheffera sessiljflora” (loăi mới được phât
Trang 19CHUONG 1 TONG QUAN
1.1 Đặc diĩm ho nhan sAm Araliaceae
Thường lă cđy thđn gỗ, đôi khi lă cđy bụi hoặc bụi nhỏ Thđn cănh thường có gai ít ra ở gốc, vỏ vă lâ thường có mùi thơm Đặc trưng bởi có lâ kỉm vă khi lâ rụng để lại vết sẹo rõ trín cănh bởi có rênh tiết trong câc cơ quan dinh dưỡng Lâ kĩp chđn vịt hay lông chim nhiều lần, mọc câch gốc cuống lâ phình thănh bẹ ôm lấy thđn
Cụm hoa gồm những tân đơn vị tạo thănh chuỳ hay chùm Hoa đều, lưỡng tính, mẫu
5 Nhị đẳng số (5-10) vă xen lẽ với cânh hoa, ít khi 6 nhị gấp đôi hoặc nhiều bất
định Bầu dưới câc cânh hoa rụng sớm nín ít nhìn thấy.Quả nang hay quả hạch 1 hạt
trong mỗi ô.Thế giới có 70 chỉ vă 900 loăi, phđn bố ở vùng Nhiệt đới vă Cận nhiệt
đới, ít khi có ở vùng Ôn đới
Phđn loại: Căn cứ văo đặc điểm cơ quan dinh dưỡng vă sinh sản, người ta đê tâch ra
câc chi quan ng, ví dụ như: Hedera, Tefrapanax, Brassaiopsis, Trevesia có lâ đơn thường chia thuỳ; trong khi đó Arala, Polyscias, Acanthopanax, Panax,
Schefflera 14 kĩp Ho nay cĩ quan hĩ vĩi Apiaceae va Cornaceae Điều đó được thể hiện qua cụm hoa hình tân, hoa nhỏ, có một noên trong mỗi ô, bầu dưới
Giâ jr kính tế: Dùng lăm thuốc, nổi tiếng lă Nhđn sđm (Panax pseudogineng), nhiĩu cđy để lăm cảnh Polycias ƒruficosa.Theo tiếng kí 1985
(Grushvitsky, Hă Th Dụng) họ Nhđn Sđm ( Arahaceae) ở Việt Nam có 110 loăi, thuộc 18 chỉ (không kể chỉ Polyscias vă câc loăi được trồng) trong đó có 46 loăi vă
I1 tr lă đặc hữu trong hệ thực vật Việt Nam, đê có 40 loăi được sử dụng lăm
thuốc Đến nay số loăi chưa thống kí vă cập nhật đầy đủ nhưng trín thực tế số loăi
trong họ đê tăng lín trín 130 loăi với trín 60 loăi đặc hữu.'"”
1.2 Chi Schecfflera
Chi Schefflera 1A chi lớn nhất trong họ sđm, phong phú về loăi vă phđn bố rộng Chỉ Chđn chim Schefflera có trín 400 loăi phđn 6 chủ yếu ở: Nhật Bản, Trung Quốc,
Việt Nam, Lăo, Campuchia, Thâi Lan vă một số đảo ở Thâi Bình Dương Ở Việt
Trang 20Đảo Hiện nay số loăi Schefflera được sử dụng chưa nhiều, đặc biệt số loăi lăm
thuốc còn khâ ít so với tông số loăi đê định danh vă khảo sât về mặt phđn bố
Những nghiín cứu về tâc dụng sinh học vă hóa học trín đối tương Šchefflera còn rất
hạn chế Chỉ có văi loăi được khảo sât tâc dụng sinh học vă một số cầu trúc hóa học đê được xâc định trín những bộ phận dung được cho lă có tâc dụng theo kinh
Trang 23Bang 1.2: Triterpen va saponin triterpen nhóm olean vă lupan trong một số
loăi thuộc chỉ Scheffiera“ RI R2 R3 '14 :H #H CH; 15 :H #H H GlcA7-GIc7- 16 H CH; Rha GlcA’-Xyl’- 17 H CH; Rha
1.3 Vai nĩt so luge vĩ Schefflera sessiliflora
Năm 2004, Trần Công Luận vă cộng sự đê phât hiện Scheffiera sp3 lă một loăi mới vă được đặt tín lă -chđn chỉm không cũng quả có tín khoa học lă Schefflera
oye A A Aw « 1 ww oA 2 A ` A A
Trang 24Theo số liệu thống kí thì hiện nay trín thế giới hầu như chưa có một nghiín cứu day đủ về loăi Schefflera sessiljflora Ö Việt Nam, loăi Schefflera sessiljflora cũng có văi công trình nghiín cứu, tuy nhiín cũng chỉ dừng lại lă khảo sât sơ bộ về thănh phan hóa học, Khảo sât hoạt tính androgen, định lượng saponin tổng vă cô lập 2 sapogenin lă acid oleanolic vă hederagenin từ saponin tổng!”
1.4 Tâc dụng chữa bệnh cđy chđn chim trong dđn gian
Trong dđn gian cđy chđn chim còn được gọi lă ngũ gia bì Đđy lă một trong những loại cđy kiếng thông dụng, đắt tiền Ở những vùng ẩm thấp, người ta trồng cđy chđn chim trong vườn nhă, quanh nhă đề vừa lăm cđy cảnh vừa có tâc dụng trừ muỗi
Theo y học hiện đại, thănh phản hóa học chính lă saponin, tanin, tỉnh du, vo thđn
chứa 0,9-1% tỉnh đu; vỏ cănh vă vỏ rễ chứa saponin triterpen khi thỷ phđn ch o
acid oleanic Bộ phận dùng: vỏ thđn, vỏ rễ, rễ vă lâ Theo y học cô truyền, Ngũ gia
bì chđn chim có vị đăng, chât, hơi thơm, tính mât, có tâc dụng giải nhiệt, lăm ra mô
hôi, khâng viím, tiíu sưng vă lăm tan mấ Dịch chiết vỏ cđy có tâc đụng tăng lực, kích thích thần kinh rõ rệt, chỗng lạnh, hạ đường huyết Ngũ gia bì chđn chim được dùng chữa đau nhức xương khớp, đau bụng, suy nhược.Trong Đông y, nó lă một vị thuốc quý có tâc dụng lăm mạnh gđn cốt, trừ phong, đau nhức xương
khớp, đau bụng, trẻ em vận động cơ bắp yếu, hạn chĩ di lại, chống suy nhược thần kinh, tăng trí nhớ, khâng viím, giảm đau, hạ sốt Ngũ gia bì có tâc dụng tốt tr ong
điều trị câc bệnh mạn tính ở người cao tuôi, tăng sức đề khâng, bồi dưỡng sức khỏe,
trị đau nhức khớp ở phụ nữ tuổi tiền mên kinh Nó có tâc dụng tốt với bệnh nhđn
Trang 25Bang 1.3 : Tâc dụng chữa bệnh của một số loăi thuộc chỉ Scbefflera Loăi Sch.kontumensis N.S.Bui(Blume) Harms Bộ phận dùng Vỏ vă rí Tâc dụng Bỏ, hạ nhiệt Sch.pes-avis Viguier Sch tonkinensis Viguier Sch Elliptica (Blume) Harms Sch Glomerulata H.L.Li La, vo va rĩ Vo than, 14 va rĩ Vo than, vo rĩ Vo va rĩ Bô, tăng sức khỏe Trị kĩm ăn, mất ngủ Bỏ, hạ nhiệt Kích thích tiíu hóa, †rphong thấp, đau nhức gđn cốt Chưa phong thâp đau xương Sch leucantha R.Vig Vỏ, lâ Trị ho, cầm mâu, đau xương Sch octophylla (Lour.) Harms Vỏ, rí, thđn, lâ Tri cam, viĩm BO Sch petelotii Merr Sch Chapana Harms Sch Venulosa (Wight et Arn.) Harms Vỏ, lâ Vỏ Thđn, lâ 1.5 Câc nghiín cứu về tâc dụng dược lý Tăng cường sinh lực, trị đau nhức gđn cốt Chữa đau nhức xương Trị viím, phong thấp
Năm 2001, Trần Công Luận vă cộng sự đê thử tâc dụng tăng lực trín cả 3 bộ phận
lâ, thđn, vỏ thđn Đối với lâ vă vỏ thđn liều 1 g/kg cho tâc dụng rõ, đạt ý nghĩa thống
kí với độ tin cđy 99%; đ th ử khả năng chịu đựng stress nóng mạnh ở liều 200
mg/kg đối với mẫu thđn”
Trang 26thđn với LDsọ = 1255 g/kg (đối với được liệu) vă LDso = 277,92 g/kg (khi phối hợp
với hồng sam)"
Năm 2008, Võ Duy Huẫn, Nguyễn Thị Thu Hương, Trần Công Luận, Huỳnh Thị Cẩm Hồng đê thử tâc dụng chống oxy hóa in vitro của câc mẫu cao chiết vă câc
genin bằng phương phâp DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl); đi thử khả năng ức chế peroxy hóa lipid bằng phương phâp MDA (malonyl dialdehyd)!?!
Năm 2012, Trần Mỹ Tiín, Đặng Thị Thanh Nhăn, Trần Công Luận, Nguyễn Thị
Thu Hương (ð thử tâc dụng kiểu androgen trín chuột đực giâm năng sinh dục của cao lâ vă cao than”),
1.6 Một số nghiín cứu câc loăi trong chỉ Scheffiera
1.6.1 Chan chim Schefflera farinose
Năm 2012, Giang Kim Liín Lần dau tiín tâch được chất 4’,7-di-O-methyl
naringgenin, rutin, acid 3a,29-dihydroxy-olean-12-en-23,28 dioic va dit 7 a,29-
Trang 27ee 0 HQ MS YF - OH í Ì Axit 3-O-cafeoylquinic Rutin Axit 3,5-di-O-cafeoylquinic
1.6.2 Chan chim Schefflera leucantha
Nam 1996, Orasa Pancharoen, Pittaya Tuniwachwuttikul, Walter C Taylor, Kelvin
Picker đ& cô lập 3 từ la: acid betulinic 3-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(12)-f-D-
glucopyranosyl-(12)]-8-D-glucuronopyranosid (1), acid betulinic 3-O-[a-L- rhamnopyranosyl-(1>2)-8-D-xylopyranosyl-(12)]-8-D-glucuronopyranosid (2),
acid oleanolic3-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(12)-8-D-glucopyranosyl-(1 > 2)]-8-D- glucuronopyranosid (3)! '
1.6.3 Chan chim Schefflera octophylla (Lour.) Harms
Nam 1982, Adam G., Lischewski M., H V Phiet, Preiss A., Schmidt J., T V Sung,
đê cô lập từ lâ acid 3g-hydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic (4)!'“Ì
Năm 1984, Lischewski M., Schmidt J., Preiss A., H V.Phiet, Adam G., ê cô lập từ
Trang 28Nam 1984, Schmidt J., V V Nam, Lischewski M., H V.Phiet, Kuhnt C., Adam G.,
đê cô lập từ vỏ cđy 1 sĩ dan xuat cua acid 3a-hydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic voi
acid bĩo day dai (6)'"*!,
Năm 1989, Junichi KitaJima, Yasuko Tanaka, di c6 lap 2 triterpenoid glycosid tr la vă cwng lâ chđn chim 1a acid 3 a-hydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic 28-O-[a-L-
rhamnopyranosyl-(1>4)-O-$-D-glucopyranosyl-(16)]-8-D-glucopyranosid (7)va
acid 3-epi-betulinic 3-O-8-D-glucopyranosid (8)
Nam 1990, Junichi KitaJima, Masami Shindo, Yasuko Tarfakad ab 2
triterpenoid sulfat từ lâ tươi chan chim 1a acid 3 -epi-betulinic 3-O-sulfat (9)va acid
betulinic 3-O-sulfat (10)
Nam 1991, T V Sung, Adam G.,&ic6 Bp 1 triterpenoid sulfat từ lâ acid 3 -epi- betulinic 3-O-sulfat 28-Ó-[a-L-rhamnopyranosyl-(124)-Ó-Ø-D-glucopyranosyl- (1>6)]-8-D-glucopyranosid (11)''”,
Năm 1991, T V Sung, Steglich W., Adam G., da cĩ lap 4 triterpenoid từ lâ chđn chim: acid 3-epi-betulinic (12), acid 3a-hydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic 28-O-[a- L-rhamnopyranosyl-(1>4)-O-8-D-glucopyranosyl-(1>6)]-8-D-glucopyranosid (13), acid 3a,1 1a-dihydroxylup-20(29)-en-23,28-dioic 28-O-[a-L- rhamnopyranosyl-(1>4)-O-8-D-glucopyranosyl-(1 6)]-8-D-glucopyranosid (14)va acid 3-epi-betulinic 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(14)-O-8-D- glucopyranosyl-(1>6)]-8-D-glucopyranosid (15)"*),
Năm 1991, T V Sung, Peter-Katalimc J., Adam G., đê cô Ap tr la cay chan chim
acid oleanonic (16), acid 3-epi-betulinic 3-Ó-Ø-D-glucopyranosid 28-Ó-[a-L- rhamnopyranosyl-(1>4)-O-8-D-glucopyranosyl-(16)]-£-D-glucopyranosid (17)va 1 trisaccharid 1a a-L-rhamnopyranosyl-(1>4)-O-8-D-glucopyranosyl- (1>6)-f-D-glucopyranosid (18), Năm 1992, T V Sung, Adam G đê cô lập ti la 1 triterpenoid: acid 3 -epi-betulinic 3-O-Ø-D-6”-acetylglucopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(14)-O-8-D- ølucopyranosyl-(16)]-Ø-D-glucopyranosid (19)1”!
Nam 1992, T V Sung, Lavaud C., Porzel A., Steglich W., Adam G., @c6 Bp tir
vo cay chan chim 2 triterpenoid: asiaticosid (20), acid 3a-hydroxyurs-12-en-23,28-
Trang 29dioic (75), acid 3a-hydroxyurs-12-en-23,28-dioic 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl
(1>4)-O-B-D-glucopyranosyl (1>6)]-6-D-glucopyranosid (21) 7"
Nam 1994, Chizuko Maeda, Kazuhiro Ohtani, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasaki, Nguyễn Minh Đức, Nguyễn Thời Nhđm, Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ, đê cô lập 12 triterpenoid từ vỏ cđy lă asiaticosid (22), scheffoleosid A (23), cheffursosid B (24), scheffoleosid B (25), scheffursosid C (26), scheffursosid D (27), scheffoleosid D (28), scheffursosid E (29), scheffoleosid E (30), scheffursosid F (31), scheffoleosid
F (32)!
Năm 2005, Li Yaolan, But Paul P.H., Ooi Vincent E.C.,iic6 Bp 3 dẫn xuat acid
caffeoylquinic lă: acid 3,4-di-O-caffeoylquinic (32), acid 3,5-di-O-caffeoylquinic
(33), acid 3-O-caffeoylquinic (34) từ cuống lâ chđn chim!?
Trang 32(28) (29) (30) (32) (33) (31) (34)
1.6.4 Chan Chim Schefflera bodinieri
Tir dich chiĩt EtOH rĩ va 14 Schefflera bodinieri, qua sang loc tac dung trĩn hĩ than kinh trung ương cho tấy có âi lực nối kết với câc thụ thể al va ơ2-adrenergic,
SHT-1, SHT-2, opiate, kĩnh Ca”, sulphonylerea, dopamine 1 va 2, histamine,
GABA, vă GABAa Khảo sât về hóa học cho thay thanh phan cầu trúc chính lă câc ølycoside Người ta đê phđn lập được 14 hợp chất gồm: 9 glycoside triterpen 5 vong, 2 triterpen 5 vong, 1 glucoside triterpen 4 vong va 2 oligoosaccharid Nghiín
Trang 33cứu sđu hơn về hoạt tính đối với câc thụ thể trín một số hợp chất phđn lập được, người ta đê xâc định được hoạt tính gan chuyín biệt trín câc thụ thể như sau: !?°
Trang 34CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÂP NGHIÍN CỨU, THIẾT BỊ VĂ HÓA CHÂT
2.1 Phương phâp nghiín cứu
2.1.1 Phương phâp phđn lập câc chất Phương phâp cô quay âp suất thấp
Nhằm loại dung môi ra khỏi dung dịch, dung dịch được chứa trong bình thủy tinh 6 điều kiện âp suất thấp Đun nóng dung dịch để thúc đđy quâ trình bay hơi Hơi dung môi trong điều kiện ap suất thấp sẽ đi qua hệ thống lăm lạnh, ngưng tụ Kết quả loại
được đung môi Nhờ tiến hănh quâ trình bay hơi ở âp suất thấp nín nhiệt độ bay hơi
của dung môi giảm, lă một ưu điểm đối với câc mẫu kĩm bền nhiệt.” Phương phúp trích ly
Sử dụng phương phâp trích ly răn-lỏng với câc loại dung môi có tính phđn cực khâc nhau để phđn nhóm tương đối câc hợp chất theo sơ đồ 3.1 Theo đó, câc hợp chất không phđn cực hòa tan tốt trong dung môi không phđn cực, câc hợp chất có tính phđn cực trung bình hòa tan tốt trong dung môi có tính phđn cực trung bình vă dung môi phan arc manh sẽ hòa tan tốt câc hợp chất phđn cực Phương phâp năy giúp
cho quâ trình cô lập câc hợp chất để dăng hơn.”
Phương phâp sắc ký
Sắc ký lă một phương phâp vật lý dùng để tâch một hỗn hợp gồm nhiều loại hợp
chất ra riíng thănh từng loại đơn chất, đựa văo tính âi lực khâc nhau của những loại
chất đối với một hệ thống (hệ thông gồm hai pha: một pha động vă một pha tĩnh)
Phương phâp năy được sử dụng để phđn lập câc hợp chất từ hỗn hợp nhiều chất
Có nhiều loại sắc ký:
Sắc ký lớp móng (TLC)
Hay còn gọi lă sắc ký phẳng được thực hiện trín bản nhôm trâng sẵn silica gel như GF60F254, độ dăy lớp hấp phụ 0,2 mm Pha động lă dung môi hoặc hỗn hợp câc
dung môi di chuyển chằm chậm dọc theo bản mỏng vă lôi kĩo mẫu chất đi theo nó
Dung môi di chuyín lín cao nhờ văo tính mao quản Môi thănh phđn của mđu chđt
Trang 35sẽ di chuyển với vận tốc khâc nhau, đi phía sau mức dung môi Vận tốc di chuyển năy tùy thuộc văo hiện tượng hấp thu của pha tĩnh vă tùy văo độ hòa tan của mẫu
chất trong dung môi Mẫu cần phđn tích thường lă hỗn hợp gồm nhiều hợp chất với
độ phđn cực khâc nhau Sử dụng khoảng 1uL dung dịch mẫu với nồng độ loêng 2 -
5%, nhờ một vi quản để chấm mẫu thănh một điểm gọn trín pha tĩnh, ở vị trí phía
trín cao hơn một chút so với mặt thoâng của chất lỏng đang chứa trong bình Phât
hiện chất bằng đỉn tử ngoại ở bước sóng 254 nm hoặc dùng thuốc thử lă dung dịch
H;SO// Ethanol 10% '“
Sắc ký cột
Pha động lă chất lỏng, pha tĩnh lă lă câc hạt silicagel cỡ hạt 40-63 um Trín bề mặt những hạt năy có mang nhiều nhóm -OH nín đđy lă những pha tĩnh có tính rất phđn cực Sự hấp thu xảy ra lă do sự tương tâc lẫn nhau giữa câc phđn tử phđn cực, do sự tương tâc gữa những phđn tử có mang những nhóm phđn cực đối với pha rắn lă chất rất phđn cực Ở phương phâp sắc ký năy, câc chất của hỗn hợp sẽ hấp thu hoặc
dính lín bề mặt của pha tĩnh Câc hợp chất khâc nhau sẽ có những mức độ hấp thu
khâc nhau lín pha tĩnh vă chúng cũng phụ thuộc văo tính chất của pha động kết quâ
lă trong quâ trình pha động di chuyín chúng sẽ tâch nhau ra.”
Phương phâp kết tỉnh
Câc hợp chất tự nhiín để có thể xâc định được cấu trúc hóa học thì phải có độ
tỉnh khiết cao (>95%) Sau khi được cô lập bằng phương phâp sắc ký, dù một số hợp chất khi quan sât ở dạng bột trắng hoặc tinh thể không mău nhưng độ tinh khiết vẫn thấp hơn 95% Một trong những phương phâp để nđng độ tỉnh khiết lă kết tỉnh lại Nguyín tắc của phương phâp lă dựa văo độ hòa tan khâc nhau của câc chất đối
với một loại dung dịch Lập lại việc kết tỉnh nhiều lần sẽ mang lại độ tính khiết cao
Tuy nhiín, phương phâp năy lại lăm hao hụt một lượng lớn sản phẩm 51
Trang 362.1.2 Phương phâp xâc định cấu trúc hóa học
Phương phâp phố hồng ngoại
Phổ hồng ngoại được xđy dựng dựa văo sự khâc nhau về dao động của câc liín kết
trong phđn tử hợp chất đưới sự kích thích của tia hồng ngoại Mỗi kiểu liín kết sẽ
đặc trưng bởi một vùng bước sóng khâc nhau Chính vì vậy dựa văo liín kết phổ
hồng ngoại , người †a có thí xâc định được câc nhóm chức đặc trưng.”
Phương phâp khối pho (MS)
Cho phĩp xâc đnh khối lượng phđn tử của một chất sau khi chuyín chất đó thănh trạng thâi hơi rồi thănh ion bằng phương phâp thích hợp Theo đó, mẫu phđn tích sẽ bị phâ hủy trong quâ trình phđn tích 51
Phương phâp phố cộng hướng từ hạt nhđn một chiều
Phố cộng hưởng từ hạt nhđn lă một phương phâp phổ hiện đại vă hữu hiệu nhất hiện nay dùng ® xâc định cấu trúc hóa học của câc hợp chất hữu cơ nói chung vă hợp
chất thiín nhiín nói riíng
Với việc sử dụng kết hợp câc kỹ thuật pho NMR một chiều vă hai chiều, câc nhă
nghiín cứu có thể xâc định chính xâc cầu trúc câc hợp chất, kế cả cầu trúc lập thể
của phđn tử
Nguyín lý chung của câc phương phâp phố NMR (phổ proton vă cacbon) lă sự cộng
hưởng khâc nhau của câc hạt nhđn từ (ˆH vă '”C) đưới tâc dụng của từ trường ngoăi
Sự cộng hưởng khâc nhau năy được biểu diễn bằng độ dịch chuyển hóa học Ngoăi
ra , đặc trưng của phđn tử còn được xâc định dựa văo tương tâc spin giữa câc hạt nhđn từ với nhau
Phĩ ‘H-NMR
9 A
Trong pho ‘H-NMR , & dich chuyĩn hóa học của câc proton được xâc định trong thang ppm từ 0 ppm đến 14 ppm tùy thuộc văo mức độ lai hóa của nguyín tử cũng như đặc trưng riíng của từng phđn tử Mỗi loại proton cộng hưởng từ ở một trường
khâc nhau vă vì vậy chúng được biểu diễn bằng độ dịch chuyển hóa học khâc nhau
Trang 37Dựa văo những đặc trưng của độ dịch chuyển hóa học cũng như tương tâc spin
coupling mă người ta có thể xâc định được cấu trúc hóa hoc cia hop chat .°!
Phổ C-NMR
Phổ năy cho tín hiệu vạch phố của carbon , mỗi nguyín tử carbon sẽ cộng hưởng ở
một trường khâc nhau vă cho một tín hiệu phổ khâc nhau Thang đo cho Phố °C-
NMR cũng được tính bằng ppm vă với dêy thang đo rộng hơn so với phố proton từ
0 ppm đến 240 ppm."
Phĩ DEPT
Phổ năy cho tín hiệu phđn loại câc loại carbon khâc nhau Trín câc phố DEPT, tín hiệu của carbon bậc bốn biến mất, tín hiệu phô của >CH- , >CH= va CH; nam vĩ
một phía vă của -CH;- về một phía trín phô DEPT 135 Còn trín phổ DEPT 90 thi chỉ xuất hiện tín hiệu phố của câc >CH- , >CH= !”Ì
Phố cộng hướng từ hạt nhđn 2 chiều
Đđy lă câc kỹ thuật phô 2 chiều, cho phĩp xâc định được câc tương tâc của câc hạt nhđn từ của phđn tử trong không gian 2 chiều Một số kỹ thuật chủ yếu thường được sử dụng như sau:
Phố HSỌC
Câc tương tâc trực tiếp H-C được xâc định nhờ phố năy Trín phố một trục phô lă
Phố 'H-NMR còn trục kia lă Phổ !“C-NMR Câc tuong tac HMQC VA HSQC mm
trín đỉnh câc ô vuông trín phổ.!”)
Phố !H-1H COSY
Phố nay biíu diễn câc tương tâc H-H, chủ yíu của câc proton đính với carbon liín
kề nhau Chính nhờ phố năy mă câc phần của phđn tử được nối ghĩp với nhau.!”Ì
Phố HMBC
Đđy lă phổ biíủ diễn câc tương tâc xa của H vă C trong phđn tử Nhờ văo câc tương tâc trín phổ năy mă từng phần của phđn tử cũng như toăn bộ phđn tử được xâc định
về cấu trúc.”
Trang 382.2 Hóa chất- thiết bị 2.2.1 Hóa chất
% Silica gel pha thường 230-240 mesh (Merck) = Silica gel pha đảo C18 (Merck)
+ Thuốc thử 10% H;SO„/EtOH
“ n-hexane (Trung Quĩc)
chloroform (Trung Quĩc) + ethyl acetate (Trung Quĩc)
= methanol (Trung Quĩc)
* DMSO (Trung Quốc)
®% Na;SO¿ (Trung Quốc) 2.2.2 Thiết bị Thiết bị dùng để trích ly * Becher 100ml, 250ml, 500ml, 1000ml * Binh long 500ml, 1000ml 4 Ong dong 10ml, 100ml, 500ml, 1000ml % Erlen 100ml , 250ml, 500ml, 1000ml % Bình cô quay 50ml, 100ml, 250ml, 500ml, 1000ml
+ Phễu đũa thủy tỉnh giấy lọc
Thiết bị dùng để phđn lập vă tinh chế câc chất
Ban nhĩm silica gel Merck-GF60F254 trâng ấn, kích thước 20x20 m, độ
dăy lớp hấp phụ 0,2 mm (Merck, Germany)
% Cđn điện tử (TANITA KD-200 vă PRECISA XB 2207)
% Mây cô quay chđn không ( BUCHI Rotavapor R~200)
Trang 39®% Mây siíu đm ( Elma S 100 H, Elmasonic, USA) Thiết bị dùng để xâc định cầu trúc câc chất
+ Mây đo phô cộng hưởng từ hạt nhđn được đo trín mây Bruker AM500 FT-
NMR, Viện Hóa Học
® Mây đo khối phô phun mù điện tử phđn giải cao (HR-ESI-MS) được đo trín
mây Bruker MicrOTOF-QII spectrometer cua Truong Đại học Tự nhiín
Trang 40CHƯƠNG 3 THỤC NGHIỆM 3.1 Nguyín liệu
Nguyín liệu được cung cấp bởi Trung tđm trồng vă chế biến cđy thuốc Đă Lạt, số 18 Hoang Van Thu, Tp Da Lat văo thâng 7/ 2013 do TS Phan Văn Đệ - Trung tđm
Sam va Dwe liệu Tp Hồ Chí Minh định danh Mẫu tiíu bản được lưu giữ tại
Phòng Câc hoạt chất có hoạt tính sinh học - Viện Công Nghệ Hóa Học
3.2 Quy trình trích ly câc loại cao
Lâ cđy chđn chinmửa sạch roi say khô xay nhuyễn thănh bột được tận trích với EtOH 96” bằng phương phâp ngđm dầm, lọc bỏ bê, phần dịch chiết được cô quay vă thu hồi dung môi dưới âp suất thấp Thực hiện nhiều lần thu được cao EtOH dạng
sệt
Cao EtOH hòa tan trong nột ít nước, sau đó được chiết lần lượt với câc dung môi
theo thứ tự độ phđn cực tăng dần: n-hexane, EtOAc Lọc lấy phần dung dịch tan sau
khi chiết với 5L n-hexane đem cô quay thu lồi dung môi âp suất thấp thu được cao n-hexane (300g) Phần không tan trong n-hexane tiếp tục được chiết với 5L EtOAc lọc lẫy phần dung dịch tan sau khi chiết Đem cô quay thu hồi dung môi dưới âp suất thấp thu được cao EtOAc (15g) Toăn bộ qui trình điều chế câc loại cao được
tóm tắt ở sơ đồ 3 l