So sánh hiệu quả thu nhận DNA tự do từ huyết tương thai phụ

Phát hiện và định lượng DNA thai tự do (cffDNA) trong huyết tương thai phụ đang trở thành hướng đi mới trong sàng lọc tiền sản không xâm lấn (NIPS). Rất nhiều phòng thí nghiệm đã ứng dụng cffDNA như là một nguồn vật liệu di truyền quan trọng để xác định giới tính thai nhi, các bệnh lí di truyền và một số lệch bội nhiễm sắc thể.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học SO SÁNH HIỆU QUẢ THU NHẬN DNA TỰ DO TỪ HUYẾT TƯƠNG THAI PHỤ Lương Bắc An*,***, Quách Thị Hoàng Oanh**, Trịnh Nhựt Thư Hương**, Nguyễn khắc Hân Hoan**, Lê Quang Thanh**, Đỗ Thị Thanh Thủy* TÓM TẮT Mở đầu: Phát định lượng DNA thai tự (cffDNA) huyết tương thai phụ trở thành hướng sàng lọc tiền sản không xâm lấn (NIPS) Rất nhiều phòng thí nghiệm ứng dụng cffDNA nguồn vật liệu di truyền quan trọng để xác định giới tính thai nhi, bệnh lí di truyền số lệch bội nhiễm sắc thể Trong NIPS, hạn chế lớn phân tích cffDNA huyết tương thai phụ hàm lượng cffDNA thấp (chỉ chiếm - 13% tổng số cfDNA huyết tương thai phụ tùy theo tuổi thai) độ tinh cfDNA sau tách chiết, hai yếu tố tác động tới độ nhạy xét nghiệm Vì vậy, phương pháp tối ưu để tách chiết cfDNA từ huyết tương thai phụ đóng vai trò quan trọng xét nghiệm NIPS Mục tiêu: So sánh hiệu kít tách chiết cfDNA từ mẫu huyết tương thai phụ Phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang Nghiên cứu so sánh hiệu quy trình tách chiết gồm phương pháp sử dụng công nghệ hạt từ (MagMAX circulating DNA (Applied Biosystems)) phương pháp sử dụng công nghệ cột lọc (QIAamp Curculating Nucleic Acid Kit (QIAGen) Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research)) để thu nhận cfDNA từ 30 mẫu huyết tương thai phụ Nồng độ cfDNA đo hệ thống Qubit flourometer phân bố kích thước xác định hệ thống Labchip GX Touch Kết quả: Hàm lượng cfDNA khác tách chiết từ kít (p = 9e - 11) So sánh nồng độ thu kít, chúng tơi nhận thấy kít MagMAX circulating DNA thu nồng độ cfDNA cao kít QIAamp Circulating Nucleic acid (p = 0,00016) Quick-cfDNATMSerum & Plasma (p = 3,7e - 11) Kết luận: Phương pháp ly trích cfDNA ảnh hưởng chất lượng kích thước sản phẩm cfDNA thu nhận Chúng nhận thấy kít MagMAX circulating DNA thể nhiều ưu điểm vượt trội so với QIAamp Curculating Nucleic Acid Kit (QIAGen) Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research) Từ khóa: cfDNA, cffDNA, NIPS ABTRACTS COMPARING THE EFFICIENCY OF THREE METHODS IN EXTRACTION OF CELL-FREE DNA FROM MATERNAL BLOOD Luong Bac An, Quach Thi Hoàng Oanh, Trinh Nhut Thu Huong, Nguyen Khac Han Hoan, Le Quang Thanh, Do Thi Thanh Thuy * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 185 – 191 Introduction: Detection and quantification of circulating free fetal (cffDNA) in maternal plasma has recently emerged as an alternative method for prenatal genetic diagnosis Many laboratories have shown the utility of fetal circulating DNA as a unique source of genetic material for noninvasive prenatal evaluation of fetal gender, genetic disease and aneuploidy Limitations in using cell-free fetal DNA in plasma for NIPS include the fetal fraction is low (about - 13% in total cfDNA in maternal plasma with depending on gestational age) and failure to recover highly purified total cfDNA, both of which impact to assay sensitivity Therefore, optimal methods to isolate cell-free fetal DNA from maternal plasma are critical in developing noninvasive fetal DNA *Đại học Y Dược TP HCM, ** Bệnh viện Từ Dũ TP.HCM, *** Đại học Khoa Học Tự Nhiên TP HCM Tác giả liên lạc: CN Lương Bắc An ĐT: 0933.908.241 Email: luongbacan1991@gmail.com 185 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 testing strategies Objective: We aimed to compare the efficiency of three methods in extraction of cell free DNA from maternal blood Methods: A cross-sectional study The present study compares the one magnetic-bead based (MagMAX circulating DNA (Applied Biosystems)) and two column-based (QIAamp circulating Nucleic acid (QIAgen) and Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research)) using 30 plasma samples from maternal blood CfDNA concentration was measured using the Qubit flourometer DNA fragments length was assessed using the Labchip GX Touch Results: CfDNA concentration were different among the three methods tested (p = 9e - 11) Intermethod comparisons, we observed that MagMAX circulating DNA method significantly extracted more cfDNA than QIAamp circulating Nucleic acid (p = 0.00016) and Quick-cfDNATMSerum & Plasma (p = 3.7e - 11), respectively Conclusion: Methods for isolation of cfDNA can affect DNA yield and molecular weight fractions recovery We confirm that the MagMAX circulating DNA method provides the highest cfDNA yield than QIAamp circulating Nucleic acid (QIAgen) and Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research) Key words: circulating free DNA (cfDNA), NIPS, cffDNA thành phần gây ức chế phản ứng phân tích ĐẶT VẤN ĐỀ Hãng QIAgen phát triển kít thương mại Khám phá diện của DNA thai chuyên biệt tách chiết cfDNA nhằm thu tự (cffDNA) huyết tương thai phụ hồn tồn cfDNA với đoạn có kích trở thành chủ đề quan tâm thước nhỏ (75bp) Trong có kít QIAamp CffDNA xuất sớm giai đoạn Circulating Nucleic Acid chuyên dụng để thu đầu thai kì (tuần thứ thai kì) hàm lượng nhận cfDNA từ huyết tương Nghiên cứu cffDNA tăng dần theo tuổi thai, sau biến Gabrila cộng so sánh khả thu hoàn toàn sau sinh(8) Trong sàng lọc nhận cfDNA từ kít khác hãng tiền sản khơng xâm lấn (NIPS), cffDNA có ý QIAgen cho thấy khả tách chiết nghĩa quan trọng việc phát QIAamp Circulating Nucleic acid tốt so số bệnh lí thai nhi gồm số lệch bội với QIAamp DSP Virus kit (p < 0.001) nhiễm sắc thể T21, T18, T13 QIAamp DNA Blood Mini kit (p < 0.0001)(9) rối loại di truyền đơn gen khác rối loạn Tuy nhiên, giá thành cho kít QIAamp liên quan đến nhiễm sắc thể giới tính, nhóm Circulating Nucleic acids thông thường cao máu Rhesus (RhD), -thalasemia, tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh,… Do đặc điểm cfDNA khó thu hồi Trở ngại lớn áp dụng cffDNA vào NIPS hàm lượng cffDNA thấp so cfDNA mẹ mẫu huyết tương (3 - 13% tổng số cfDNA huyết tương thai phụ tùy theo tuổi thai) kích thước ngắn (50 150bp)(2,10) Chính vậy, phương pháp tách chiết phù hợp thu nhận tối đa lượng cfDNA với độ tinh cao điểm mấu chốt xét nghiệm NIPS CfDNA có chất lượng tốt giúp hạn chế kết âm tính giả thất DNA q trình thao tác tồn 186 kít li trích tay thơng thường nên hầu hết hãng thực xét nghiệm NIPT thực bước chuẩn bị mẫu kít ly trích thực hệ thống máy tách chiết tự động Macherey & Nagel hãng phát triển kít li trích cho máy li trích tự động, bên cạnh hãng phát triển kít tách cfDNA quy trình thường quy kít NucleoSpin Plasma XS (Macherey & Nagel (MN)), có đặc điểm bật thu hồi Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 đoạn cfDNA có kích thước 50 - 1000bp, sử dụng cơng nghệ cột lọc cải tiến cho phép lượng buffer dung giải dùng thu hồi cfDNA cần từ - 30ul Tuy nhiên, theo số chuyên gia xét nghiệm NIPS, công nghệ cột lọc hãng Macherey & Nagel không tốt hãng QIAGen(5) Nghiên cứu Clause cộng so sánh phương pháp tách chiết hạt từ (NucliSens Magnetic Extraction) phương pháp cột lọc (QIAamp DSP Virus QIAamp DNA Blood Mini) cho thấy hiệu tách chiết công nghệ hạt từ cho kết tốt kít QIAamp DSP Virus tách nồng độ cfDNA cao QIAamp DNA Blood Mini(4) Từ cho thấy, xác định kít phù hợp điều vơ cần thiết tách chiết cfDNA từ mẫu huyết tương Ngoài ra, số yếu tố liên quan tới hiệu tách chiết cfDNA điều kiện xử lí mẫu ban đầu, điều kiện phòng thí nghiệm kỹ thuật thao tác Với mục tiêu so sánh hiệu quy trình tách chiết cfDNA từ huyết tương thai phụ, chúng tơi thực so sánh quy trình tách chiết hãng sản xuất khác gồm quy trình sử dụng công nghệ cột lọc (QIAamp Curculating Nucleic Acid Kit (QIAGen) Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research)) quy trình sử dụng cơng nghệ hạt từ (MagMAX circulating DNA (Applied Biosystems)) để thu nhận cfDNA từ huyết tương thai ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Thiết kế nghiên cứu Mô tả cắt ngang Phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu thai phụ Bệnh viện Từ Dũ thời gian từ tháng 10/2017 đến tháng 5/2018 Số lượng mẫu nghiên cứu 30 mẫu Nghiên cứu sử Nghiên cứu Y học dụng ống Streck BCT để thu nhận mẫu máu Thai phụ lấy 10ml máu chứa ống Streck BCT, đảo ống 180o khoảng 10 lần để máu trộn với chất bảo quản bên ống Nếu chưa xử lý kịp thời, lưu mẫu nhiệt độ phòng (18oC - 25oC) vòng 14 ngày Li tâm ống máu với tốc độ 1,600 rpm 10 phút nhiệt độ phòng Sau nhẹ nhàng hút lớp huyết tương phía trên, ý khơng chạm phần buffy coat Li tâm lần huyết tương vừa thu với tốc độ 13,000 rpm 10 phút 4oC Dịch thu nhận vào ống eppendorf, ống chứa ml huyết tương Mẫu huyết tương trữ tủ -80oC Nghiên cứu thực Trung tâm Y Sinh học Phân tử - Đại học Y Dược TP.HCM Tách chiết mẫu huyết tương 30 mẫu huyết tương tách chiết với kít hãng sản xuất khác Trong đó, phương pháp cột lọc gồm kít QIAamp Circulating Nucleic acid (QIA) kít Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo)) kít sử dụng hạt từ (MagMAX circulating DNA (MagMAX)) Quy trình thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Tất phương pháp sử dụng lượng mẫu đầu vào ml huyết tương Thể tích dung dịch đệm sử dụng thu hồi cfDNA 30ul cho tất phương pháp Đo nồng độ cfDNA sau tách chiết CfDNA sau tách chiết xác định nồng độ kít Qubit dsDNA HS (High Sensitivity) Assay kit (Thermo Fisher) hệ thông Qubit 3.0 Flourometer (Invitrogen, Lie Technologies, CA, USA) Các bước chuẩn bị gồm: chuẩn bị buffer đo cách pha Qubit dsDNA HS Reagent Qubit dsDNA HS buffer theo tỉ lệ 1:200 Mẫu đo pha từ 2µL mẫu cfDNA với 198µL buffer đo (chuẩn bị riêng cho lần đo) mẫu chuẩn pha từ 10µl chất chuẩn (cung cấp theo kít) với 190µL Sử dụng ống Qubit để chứa mẫu đo 187 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Vortex ống mẫu ống chuẩn Ủ mẫu ống chuẩn nhiệt độ phòng phút (tránh sáng) tiến hành đo Phân tích kích thước cfDNA Kích thước cfDNA phân tích hệ thống điện di mao quản LabChip GX Touch 24 (PerkinElmer), sử dụng kít DNA High Sensitivity Reagent Kit (PerkinElmer) kèm thang chuẩn LapChip DNA Extended Range (50 - 7000bp) (PerkinElmer) Kết phân tích phần mềm Labchip®GX Reviewer Xử lí số liệu Tất số liệu xử lí phần mềm R (phiên 3.4.4) Sự khác biệt nồng độ cfDNA thu từ phương pháp tách chiết khác kiểm định phương sai ANOVA-một chiều (với p < 0.05 coi có ý nghĩa thống kê) Kiểm định Tukey đánh giá khác biệt nhóm KẾT QUẢ So sánh nồng độ cfDNA kít Sản phẩm cfDNA thu sau tách chiết xác định nồng độ hệ thống Qubit®3.0 Fluorometer Nồng độ cfDNA thu từ kít khác tóm tắt bảng động từ 0,1 - 0,312ng/µl Trong ba kít kít MagMAX cho kết nồng độ cfDNA trung bình cao với 0,263ng/µl (95% CI: 0,205 0,291), biên độ dao động từ 0,093 - 0,591ng/µl Kiểm tra khác biệt nồng độ cfDNA thu từ kít cho thấy có khác biệt có ý nghĩa thông kê (p = 9e - 11)(kiểm định ANOVA) Nồng độ cfDNA trung bình thu từ kít MagMAX cao 1,38 lần so với kít QIA (p = 0.0019) cao 2,53 lần so với kít Zymo (p = 3,7e - 11) Trong đó, nồng độ cfDNA trung bình thu từ kít QIA cao 1,83 lần so với kít Zymo (p = 0,00016) Sự khác biệt nồng độ có ý nghĩa thống kê (hậu kiểm định Tukey với p < 0.05) Vì vậy, kít kít MagMAX cho phép thu nồng độ cfDNA cao nhất, ngược lại kít Zymo có nồng độ cfDNA thu thấp (hình 1) Trong 30 mẫu huyết tương tách kít Zymo có 18 mẫu (60%) đạt nồng độ nhỏ 0,1ng/µl Trong đó, mẫu (3,3%) tách kít MagMAX đạt nồng độ thấp 0,1ng/µl khơng có mẫu tách kít QIA thấp nồng độ Bảng 1: Nồng độ cfDNA thu từ kít khác Nồng độ TBình (ng/µl) Zymo 0,104 QIA 0,190 MagMAX 0,263 Bộ kít Nồng độ Nồng độ thấp cao (ng/µl) (ng/µl) 0,052 0,277 0,100 0,312 0,093 0,591 Khoảng tin cậy 95% (CI) (ng/µl) 0,065-0,110 0,150-0,227 0,205-0,291 Kết nồng độ cfDNA thu sau tách chiết 30 mẫu huyết tương cho thấy nồng độ cfDNA thu từ kít có biến động lớn Nồng độ cfDNA trung bình thu từ kít Zymo 0,104ng/µl (95% CI: 0,065 0,110) với dao động từ 0,052 - 0,277ng/µl Trong đó, kít QIA cho thấy nồng độ cfDNA thu cao với nồng độ trung bình đạt gần 0,2 ng/µl (95% CI: 0,150 - 0,227), khoảng dao 188 Hình 1: Nồng độ cfDNA tách chiết từ kít khác Phân bổ kích thước cfDNA kít Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Kích thước cfDNA dao động từ 150 300bp, phân tích nồng độ cfDNA vùng kích thước cho thấy có khác nồng độ cfDNA thu nhận từ kit Trong đó, hàm lượng cfDNA thu Nghiên cứu Y học với kít Zymo (đường màu xanh) thấp nhất, hàm lượng cfDNA tách kít QIA (đường màu đỏ) cao cfDNA tách kít MagMAX (đường màu đen) (hình 2) Hình 2: Sự phân bố kích thước cfDNA tách kít khác thu nhận cfDNA cao kít, Các kít sử dụng nghiên cứu nồng độ cfDNA chủ yếu tập trung vùng 100 nhà sản xuất thiết kế chuyên biệt cho li trích 300bp, cfDNA có kích thước > 300bp cfDNA nhằm mục đích thu tối đa lượng thu nhận Do cffDNA có kích thước nhỏ cfDNA Tuy nhiên, nhà sản xuất phát triển 150bp(2) nên phân mảnh lớn 300bp công nghệ riêng cho kít Bộ khơng có ý nghĩa nghiên cứu bất kít Zymo sử dụng cơng nghệ cột lọc màng silica thường cffDNA, ngược lại làm giảm để thu giữ cfDNA trình tách chiết, với hàm lượng cffDNA (fetal fraction) Do đó, kít cơng nghệ cột lọc cho phép dung giải cfDNA với MagMAX có hiệu tách chiết tối ưu thể tích nhỏ (25µl) nhằm tăng nồng độ cfDNA kít khảo sát nghiên cứu sau tách chiết Tuy nhiên, nồng độ cfDNA chúng tơi hàm lượng cfDNA có kích thước 100 - 300bp thấp so với kít lại, cfDNA có kích thước nhỏ bị thất q trình tách chiết Ngồi khả dung giải cfDNA với thể tích nhỏ kít QIA có bổ sung thêm RNA-carriers, giúp tăng khả thu nhận nhiều lượng cfDNA Nồng độ cfDNA thu từ kít QIA vùng 100 - 300bp, cao kít Zymo Ngồi kít QIA thu cfDNA có kích thước > 300bp cao kít lại (hình 2) Bộ kít MagMAX, sử dụng công nghệ hạt từ để thu nhận cfDNA, có hiệu BÀN LUẬN Thu nhận cfDNA chất lượng cao tác động lớn đến kết NIPS Do nồng độ kích thước cfDNA nhỏ, đồng thời huyết tương chứa nhiều thành phần khác protein, vi lượng, dễ gây ức chế phản ứng phân tích yếu tố gây kết âm tính giả Chính vậy, phương pháp tách chiết cần tối ưu hố với mục đích thu hồi tối đa lượng cfDNA mẫu huyết tương với 189 Nghiên cứu Y học độ tinh cao Trong nghiên cứu này, thực đánh giá hiệu tách chiết kít từ hãng sản xuất khác gồm: kít QIAamp Circulating Nucleic acid (QIAgen), kít Quick-cfDNATMSerum & Plasma (Zymo Research) kít MagMAX circulating DNA (Applied Biosystems) Khơng giống kít phát triển để phân lập DNA gen, kít phát triển chuyên biệt cho ly trích cfDNA với kích thước nhỏ nồng độ thấp Chính lượng mẫu đầu vào thay đổi điều chỉnh lượng buffer bước dung giải thu hồi nhằm tăng nồng độ cfDNA Trong nghiên cứu này, tất kít sử dụng lượng mẫu đầu vào ml huyết tương lấy từ thai phụ lượng mẫu buffer sử dụng bước dung giải thu hồi cfDNA 30µl Do đó, chúng tơi đánh giá hiệu tách chiết từ kít thơng qua nồng độ cfDNA thu phân bố kích thước cfDNA Thực tế cho thấy, nồng độ cfDNA huyết tương biến động tuỳ vào mẫu Nghiên cứu cho thấy nồng độ dao động khác tuỳ kít sử dụng để tách chiết, thí dụ kít Zymo thu nồng độ từ 0,052 đến 0,277ng/µl, kít QIA thu từ 0,1đến 0,312 ng/µl kít MagMAX thu từ 0,093 đến 0,591ng/µl Các yếu tố khách quan tác động nồng độ cfDNA tổng số thơng thường trạng thái sinh lí người mẹ thai nhi(1) Ngoài số yếu tố chủ quan q trình xử lí mẫu ban đầu, phương pháp tách chiết hay thao tác người thực ảnh hưởng nhiều tới nồng độ cfDNA thu nhận, đó, phương pháp tách chiết cho ảnh hưởng nhiều tới nồng độ cfDNA(5) Chiều dài cfDNA tương đối nhỏ (150 300bp), đặc biệt chiều dài cffDNA thường nhỏ 150bp có tính phân mảnh cao(2) Theo hướng dẫn kít Zymo màng lọc giữ lại đoạn cfDNA có kích thước lớn 100bp, hiệu suất thu nhận cfDNA chưa thật tối ưu, đặc biệt đoạn cffDNA Ngoài 190 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 ra, 30 mẫu tách chiết kít Zymo cho thấy có 60% lượng mẫu có nồng độ < 0,1ng/µl, chưa đạt lượng mẫu giới hạn cho phép bước chuẩn bị thư viện giải trình tự(3) Trong đó, kít QIA có khả thu cfDNA có kích thước lớn 75bp có bổ sung RNA-carrier, cfDNA giữ lại nhiều Tuy nhiên, phân tích kích thước cfDNA cho thấy đoạn có kích thước lớn 300bp thu nhận nhiều, hầu hết DNA genome người mẹ, khơng có giá trị phân tích bất thường DNA thai Sự tồn cfDNA có kích thước lớn 300bp làm cho hàm lượng cffDNA thấp bất thường, tác động lớn tới kết phân tích Ngoài ra, RNACarrier xem nhân tố ức chế hoạt tính số enzym phản ứng phân tích Chất lượng cfDNA thu kít MagMAX cho thấy có nhiều ưu điểm nồng độ thu cao so với kít lại, nồng độ tập trung chủ yếu vùng DNA có kích thước 100 - 300bp Do đó, xem kít tối ưu kít sử dụng tách cfDNA từ mẫu huyết tương thai phụ Có nhiều báo cáo kết so sánh từ nhiều phương pháp tách chiết khác Xue cộng so sánh kít QIAamp (Qiagen) với quy trình tách chiết mẫu huyết tương xử lí nhiệt dung dịch triton X-100 tinh với phenol/cloroform (THP) Kết cho thấy quy trình THP cho hàm lượng cfDNA thu cao so với phương pháp sử dụng cột lọc(11) Tuy nhiên quy trình THP tương đối độc hại tốn nhiều thời gian thực hiện, khơng thích hợp để tích hợp vào quy trình NIPS thường qui Năm 2005, nhằm xây dựng phương pháp tiêu chuẩn cho phân lập cfDNA từ mẫu huyết tương thai phụ, dự án với tham gia 12 tổ chức châu Âu thành lập so sánh hàm lượng DNA thu qui trình thường quy phòng thí nghiệm, kết kít QIAamp DSP Virus có kết tốt kít khảo sát(7) Tuy nhiên, năm 2009 hãng QIAgen giới thiệu kít Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 QIAamp Circulating Nucleic acid có hiệu tách chiết tốt hơn(9) Kết nghiên cứu tương đồng với kết công bố Jorgez cộng cho thấy cfDNA tách chiết công nghệ hạt từ cho kết tốt phương pháp khác(6) Tiềm ứng dụng cfDNA vô lớn, không NIPS mà đặc biệt hữu ích nghiên cứu ung thư Nồng độ cfDNA huyết tương có ý nghĩa chẩn đốn, tiên lượng theo dõi liệu pháp điều trị bệnh nhân ung thư, đột quỵ, nhiễm trùng huyết,… Chính vậy, nghiên cứu so sánh khả thu nhận cfDNA từ mẫu huyết tương ứng dụng nhiều lĩnh vực khác ung thư bệnh truyền nhiễm KẾT LUẬN Phương pháp ly trích cfDNA ảnh hưởng nồng độ phân bố kích thước sản phẩm cfDNA thu nhận Chúng tơi nhận thấy kít MagMAX Circulating DNA thể nhiều ưu điểm nhanh chóng, đơn giản, nhạy đặc hiệu li trích cfDNA từ mẫu huyết tương TÀI LIỆU THAM KHẢO Ashoor G, Poon L, Syngelaki A, et al (2012) Fetal fraction in maternal plasma cell-free DNA at 11–13 weeks’ gestation: effect of maternal and fetal factors Fetal Diagn Ther, 31(4), 237–243 Nghiên cứu Y học Chan KA, Zhang J, Hui AB et al (2004) Size distributions of maternal and fetal DNA in maternal plasma Clin Chem, 50(1), 88–92 Chang BC, Chareonsirisuthigul T, Janchompoo P et al (2016) Setting Up of First NIPT Service Laboratory in a Thailand Hospital J Gener Seq Appl, 3(3), 1–5 Clausen FB, Krog GR, Rieneck K et al (2007) Improvement in fetal DNA extraction from maternal plasma Evaluation of the NucliSens Magnetic Extraction system and the QIAamp DSP Virus Kit in comparison with the QIAamp DNA Blood Mini Kit Prenat Diagn, 27(1), 6–10 Huang DJ, Mergenthaler-Gatfield S, Hahn S et al (2008) Isolation of cell-free DNA from maternal plasma using manual and automated systems Prenatal Diagnosis Springer, 203–208 Jorgez CJ, Dang DD, Simpson JL et al (2006) Quantity versus quality: optimal methods for cell-free DNA isolation from plasma of pregnant women Genet Med, 8(10), 615 Legler TJ, Liu Z., Mavrou A et al (2007) Workshop report on the extraction of foetal DNA from maternal plasma Prenat Diagn, 27(9), 824–829 Lo YD, Zhang J, Leung TN et al (1999) Rapid clearance of fetal DNA from maternal plasma Am J Hum Genet, 64(1), 218–224 Repiská G, Sedláčková T, Szemes T et al.(2013) Selection of the optimal manual method of cell free fetal DNA isolation from maternal plasma Clin Chem Lab Med, 51(6), 1185–1189 10 Straver R, Oudejans C, Sistermans EA et al (2016) Calculating the fetal fraction for noninvasive prenatal testing based on genome-wide nucleosome profiles Prenat Diagn, 36(7), 614–621 11 Xue X, Teare MD, Holen I et al (2009) Optimizing the yield and utility of circulating cell-free DNA from plasma and serum Clin Chim Acta, 404(2), 100–104 Ngày nhận báo: 10/06/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 191 ... bẩm sinh,… Do đặc điểm cfDNA khó thu hồi Trở ngại lớn áp dụng cffDNA vào NIPS hàm lượng cffDNA thấp so cfDNA mẹ mẫu huyết tương (3 - 13% tổng số cfDNA huyết tương thai phụ tùy theo tuổi thai) kích... để thu đầu thai kì (tuần thứ thai kì) hàm lượng nhận cfDNA từ huyết tương Nghiên cứu cffDNA tăng dần theo tuổi thai, sau biến Gabrila cộng so sánh khả thu hoàn toàn sau sinh(8) Trong sàng lọc nhận. .. diện của DNA thai chuyên biệt tách chiết cfDNA nhằm thu tự (cffDNA) huyết tương thai phụ hoàn toàn cfDNA với đoạn có kích trở thành chủ đề quan tâm thước nhỏ (75bp) Trong có kít QIAamp CffDNA xuất