Nghiên cứu thực hiện với mục tiêu đánh giá nồng độ bạch cầu trung tính (BCTT) nước bọt ở các tình trạng sức khỏe nha chu và mối liên quan giữa nồng độ BCTT nước bọt với các chỉ số nha chu lâm sàng.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học NỒNG ĐỘ BẠCH CẦU TRUNG TÍNH NƯỚC BỌT VÀ TÌNH TRẠNG SỨC KHỎE NHA CHU Đỗ Thu Hằng*, Thị Hồng Tươi** TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu thực với mục tiêu đánh giá nồng độ bạch cầu trung tính (BCTT) nước bọt tình trạng sức khỏe nha chu mối liên quan nồng độ BCTT nước bọt với số nha chu lâm sàng Đối tượng phương pháp: Đây nghiên cứu cắt ngang mô tả với cách chọn mẫu thuận tiện 60 đối tượng, chia thành nhóm: nhóm mơ nha chu khỏe mạnh, nhóm viêm nướu nhóm viêm nha chu Các đối tượng đánh giá tình trạng sức khỏe nha chu qua số PLI, GI, BOP PPD; định lượng nồng độ BCTT nước bọt cách cho đối tượng súc miệng 30 giây, nhuộm tế bào mẫu nước bọt AO đếm trực tiếp kính hiển vi huỳnh quang Kết quả: nghiên cứu cho thấy trung bình nồng độ BCTT nước bọt (của mẫu súc miệng 30 giây) mô nha chu khỏe mạnh, viêm nướu viêm nha chu là: 4,55x104; 1,89x105 4,01x106 tế bào/ml Sự khác biệt nhóm có ý nghĩa thống kê Nồng độ BCTT nước bọt có tương quan yếu với số nha chu: PLI, GI BOP có tương quan mạnh với PPD Kết luận: Nghiên cứu đề nghị dùng nồng độ BCTT nước bọt dấu ấn đánh giá tình trạng nhiễm trùng mơ nha chu Từ khóa: nồng độ BCTT nước bọt; mơ nha chu khỏe mạnh, viêm nướu, viêm nha chu, độ sâu túi nha chu ABSTRACT THE ORAL NEUTROPHIL LEVEL AND PERIODONTAL HEALTH STATUS Do Thu Hang, Thi Hong Tuoi * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: 185 - 189 Objects: The objectives of this study were to measure oral neutrophil level obtained in a standardized oral rinse from periodontally healthy and diseased subjects and to assess the association between the oral neutrophil level and the clinically periodontal parameters Methods: 60 subjects were recruited They were divided into three groups based on the Gingival Index (GI) and the probing pocket depth (PPD) as clinically healthy (group 1), gingivitis (group 2) and chronic periodontitis (group 3) The subjects were assessed for PLI (plaque index), GI, BOP (bleeding on probing), PPD The rinse samples were collected by asking subjects to rinse with 15 ml of 0.9% saline for 30 seconds Cells in the rinse samples were stained with acridine orange and neutrophil counts were carried out using a fluorescence microscope Results: Average oral neutrophil levels of subjects with periodontally healthy, gingivitis and periodontitis were 4.55x104; 1.89x105 and 4.01x106 cell/ml, respectively There was statistically significant difference between groups The strength of association was the strongest between PPD and oral neutrophil level Conclusion: the oral neutrophil level was a good marker of periodontal inflammation Keywords: oral neutrophil level, periodontal healthy, gingivitis, periodontitis, probing pocket depth *Bộ môn Nha Chu- Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Tp.HCM **Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược Tp.HCM Tác giả liên lạc: ThS Đỗ Thu Hằng ĐT: 0938141091 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Email: rhm.hang.do1@gmail.com 185 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 MỞ ĐẦU Dưới chất kích thích IL-8 ICAM-1 (phân tử bám dính tế bào), hàng ngày có khoảng 1-2% bạch cầu từ mạch máu nướu di chuyển qua lớp biểu mơ kết nối vào khe nướu, BCTT chiếm đến 95%(4) Tại chúng tạo thành hàng rào chống hình thành màng bám vi khuẩn Từ khe nướu, bạch cầu trung tính vào nước bọt đa phần bạch cầu nước bọt có nguồn gốc từ khe nướu Ở mô nha chu khỏe mạnh (khơng viêm) có diện BCTT khe nướu Các nhà nghiên cứu cho di chuyển bạch cầu vào khe nướu khỏe mạnh trình sinh lý giúp trì sức khỏe đáp ứng viêm thực Tuy nhiên bạch cầu trung tính khơng phải lúc có tính bảo vệ(1) Tốc độ di chuyển BCTT vào khoang miệng tăng theo mức độ nhiễm trùng mô nha chu Ở mô nha chu nhiễm trùng, gia tăng số lượng chức hoạt động BCTT tương ứng với mức độ phá hủy sang thương(2,6) Có khác biệt có ý nghĩa nồng độ BCTT nước bọt VNC trung bình nặng so với mô nha chu khỏe mạnh Bender JS, 2006(6) Tuy nhiên số lượng nghiên cứu Việt Nam chưa có nghiên cứu đánh giá nồng độ BCTT nước bọt tình trạng sức khỏe nha chu khác Mục tiêu nghiên cứu đánh giá: nồng độ bạch cầu trung tính nước bọt tình trạng sức khỏe nha chu khác nhau; mối liên quan nồng độ BCTT nước bọt số nha chu lâm sàng ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Thiết kế nghiên cứu Cắt ngang mô tả với cách chọn mẫu thuận tiện Đối tượng nghiên cứu 60 đối tượng tham gia nghiên cứu từ bệnh nhân đến khám khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y Dược, TP HCM, tuổi từ 18 đến 60, 186 có sức khỏe tồn thân tốt, khơng có bệnh lý cấp tính Tiêu chuẩn loại trừ Có bệnh tồn thân: đái tháo đường, bệnh hơ hấp (bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính), viêm khớp dạng thấp, bệnh tim mạch Tình trạng dinh dưỡng: suy dinh dưỡng (BMI < 18,5) hay béo phì (BMI > 25) Còn 20 Chải ngày: lần Sử dụng thuốc kháng sinh, kháng viêm, ức chế miễn dịch vòng tháng trước Điều trị nha chu vòng tháng trước Có tổn thương niêm mạc miệng vết loét, áp-tơ, viêm lưỡi hay sâu nhiều Bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu sau giải thích qui trình nghiên cứu Bệnh nhân khám tồn miệng với số nha chu: PLI, GI, BOP PPD chia thành nhóm, nhóm gồm 20 đối tượng, theo tiêu chuẩn sau: Nhóm mơ nha chu khỏe mạnh: vị trí có PPD = 5mm kèm BOP (+) Các tiêu chí đánh giá lâm sàng Chỉ số mảng bám (PLI); Chỉ số viêm nướu (GI); Chỉ số chảy máu thăm dò (BOP); Độ sâu khe nướu/túi nha chu (PPD)(5) Thu thập nước bọt Việc rửa miệng thực cách cho bệnh nhân ngậm 15ml nước muối sinh lý miệng, đưa qua đưa lại súc miệng vòng 30 giây nhả vào ly nhựa vô trùng Sau chuyển mẫu sang ống nhựa polypylene đem lưu giữ thùng đá (40C) xử lý Việc đếm BCTT phải thực sớm tốt, buổi Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Tất việc khám lâm sàng điều trị nha khoa khác miệng thực trước lấy mẫu ngày để tránh mẫu bị nhiễm máu Bệnh nhân không ăn hay uống trước lấy mẫu để tránh loại bỏ BCTT trước lấy mẫu Bệnh nhân súc miệng sơ qua với nước để loại bỏ mảnh vụn thức ăn trước lấy mẫu 10 phút trước lấy mẫu yêu cầu bệnh nhân nuốt nước bọt Nghiên cứu Y học Công thức đếm tế bào Nồng độ BCTT = N x V (pha lỗng) x 104 (tế bào /ml) Trong đó, N trung bình số lượng tế bào BCTT đếm khu vực buồng đếm 104 thể tích buồng đếm Neubauer Improved Dưới kính hiển vi, mẫu nước bọt chứa đa số BCTT, tế bào biểu mô vụn thức ăn Huấn luyện định chuẩn Qui trình xử lý mẫu đếm tế bào Chỉ số Kappa đánh giá độ kiên định người khám lâm sàng cho số PLI, GI, BOP PPD là: 0,82; 0,74; 0,84 0,76; người đếm BCTT nước bọt 0,9 Mẫu quay ly tâm 3000 vòng/phút vòng 10 phút Loại bỏ dịch nổi, thêm 10 ml nước muối sinh lý Ly tâm lần 2: 3000 vòng/phút 10 phút Xử lý – phân tích số liệu Loại bỏ dịch nổi, thêm 500µl nước muối sinh lý (bảo quản mẫu 40c) Các thông tin số liệu thu thập phân tích xử lý phần mềm thống kê SPSS 20.0 Nhuộm mẫu Acrydin orange (AO) để đếm tế bào: 250 µl dung dịch mẫu + µg AO tối 15 phút: đếm BCTT buồng đếm thủy tinh Neubauer Improved, tráng bạc, VSlash (bright line), mark CE, loại cải tiến Marienfeld-Đức (code 650030) sử dụng kính hiển vi huỳnh quang So sánh khác biệt số PLI, GI, PPD nồng độ BCTT nước bọt cặp nhóm kiểm định t Xác định mối tương quan nồng độ BCTT nước bọt với số lâm sàng qua hệ số tương quan Pearson KẾT QUẢ Phân bố tuổi, giới tính mẫu nghiên cứu Bảng Số bệnh nhân trung bình tuổi nhóm Nhóm khỏe mạnh Nhóm viêm nướu Nhóm viêm nha chu Nam 11 16 Giới tính Nữ 13 Trung bình tuổi- So sánh nhóm 24,63 ± 0,50 33,85 ± 11,32 50 ± 7,8 P=0,002 P=0,000 Có khác biệt phân bố giới tính nhóm Bảng Trung bình, độ lệch chuẩn số lâm sàng PLI, GI, BOP, PPD nồng độ BCTT nước bọt nhóm Chỉ số lâm sàng PLI GI PPD %BOP BCTT/nước bọt (tế bào/ml) Khỏe mạnh 0,39 ± 0,16 0,27 ± 0,10 1,05 ± 0,04 4,55 ± 1,92 (x10 ) Nhóm mơ nha chu khỏe mạnh có tuổi trung bình nhóm viêm nướu, nhóm viêm nướu Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Viêm nướu 1,12 ± 0,28 1,28 ± 0,13 1,47 ± 0,14 0,40 ± 0,09 1,89 ± 1,00 (x10 ) Viêm nha chu 1,03 ± 0,41 1,05 ± 0,55 3,68 ± 0,55 0,44 ± 0,20 4,01 ± 4,02 (x10 ) có tuổi trung bình nhóm viêm nha chu Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p0,05: khơng có khác biệt P