Mục tiêu chính của đề tài là xây dựng được phương pháp định lượng đồng thời acyclovir và clorhexidin trong màng mỏng, bào chế được màng mỏng chứa acyclovir và clorhexidin kết dính niêm mạc miệng bằng phương pháp bốc hơi dung môi, khảo sát ảnh hưởng của tá dược và tỷ lệ dược chất đến khả năng giải phóng dược chất và khả năng kết dính của màng mỏng.
1 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong những năm gần đây, các dạng thuốc kết dính niêm mạc miệng là một trong những dạng thuốc mới đã và đang thu hút được sự quan tâm của nhiều nhà bào chế. Rất nhiều các chế phẩm đã ra đời như viên nén kết dính, viên đổ khn, miếng dán, cream, màng mỏng, gel, Trong các dạng bào chế trên, màng mỏng với ưu điểm nổi bật là đặc tính linh động và mềm mại hơn (so với dạng viên nén kết dính và miếng dán), tránh được sự rửa trơi hay bong ra do nước bọt (hay gặp ở dạng cream, gel) khi sử dụng nên có khả năng lưu giữ thuốc lâu hơn ở niêm mạc miệng; tạo điều kiện để dược chất dược hấp thu hiệu quả hơn, kéo dài và làm tăng hiệu quả điều trị bệnh của thuốc Theo thống kê, giới năm có khoảng 500.000 đến 1 triệu người bị các bệnh viêm nhiễm do virus Herpes (HSV1, HSV2). Trong đó HSV1 thường gây viêm nhiễm miệng. Thêm vào đó, tại ổ viêm nhiễm do HSV1 thường là môi trường thuận lợi cho vi khuẩn bội nhiễm gây ra viêm nhiễm trầm trọng hơn. Bởi vậy, việc phối hợp thêm một chất sát khuẩn vào công thức thuốc chống virus herpes để điều trị bệnh viêm nhiễm miệng cần thiết Acyclovir là một trong những lựa chọn hàng đầu để điều trị các bệnh do nhiễm virus Herpes ở da và niêm mạc, mắt, phổi, thần kinh, sinh dục Clorhexidin cũng là chất sát khuẩn phổ kháng khuẩn rộng trên các vi khuẩn Gr(+) và Gr() ở miệng, da, vết thương. Vì vậy chúng tơi thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu bào chế màng mỏng chứa acyclovir và clorhexidin kết dính niêm mạc miệng ” với các mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acyclovir và clorhexidin trong màng mỏng Bào chế được màng mỏng chứa acyclovir và clorhexidin kết dính niêm mạc miệng bằng phương pháp bốc hơi dung mơi Khảo sát ảnh hưởng của tá dược và tỷ lệ dược chất đến khả năng giải phóng dược chất và khả năng kết dính của màng mỏng CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Đại cương về acyclovir và clorhexidin 1.1.1. Acyclovir * Cơng thức hóa học Cơng thức phân tử : C8H11N5O3 Khối lượng phân tử: 225,2 Tên khoa học: 2 amino 9[(2 hydroxyethoxy)methyl]1,9dihydro6Hpurin 6 on [9], [20], [33], [44] * Tính chất lý hóa Acyclovir là dạng bột kết tinh trắng ít tan trong nước, rất ít tan trong alcol, tan tự do trong dung mơi dimethyl sulfoxyd, tan được trong dung dịch kiềm và acid lỗng [9], [33]. Nhiệt độ nóng chảy khoảng 2300C, sau đó bị phân hủy [9] Các hằng số phân tích: Acyclovir có 2 hằng số phân ly: pKa1= 2.41 0.27; pKa2= 9.06 0.88 * Dược động học Hấp thu: Sinh khả dụng theo đường uống thấp, chỉ khoảng 20%. Thức ăn không ảnh hưởng đến hấp thu thuốc [4], [5], [16], [32]. Nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt sau khi uống là 1,5 2h [4], [5], [16] Phân bố: Acyclovir phân bố rộng trong dịch cơ thể và các cơ quan như: não, thận, phổi, gan, lách, cơ, tử cung, niêm mạc, dịch âm đạo, nước mắt, thủy dịch, tinh dịch, dịch não tủy. Nồng độ trong dịch não tủy đạt tới 50% nồng độ trong huyết tương. Liên kết với protein huyết tương thấp 9 33%. Thuốc qua được nhau thai và phân bố trong sữa với nồng độ gấp 3 lần trong huyết thanh mẹ [4], [5], [16], [32] Chuyển hóa và thải trừ: Phần lớn thuốc đào thải qua thận dưới dạng biến đổi. 8 carboxy methoxy methyl quanine là chất chuyển hóa đáng kể nhất của acyclovir chiếm khoảng 14% tổng lượng thuốc này trong nước tiểu [4], [32]. Thời gian bán thải: Người lớn khoảng 3h. Trẻ em khoảng 23h. Trẻ sơ sinh là 4h. Ở bệnh nhân suy thận mãn t1/2= 19,5h [4], [5], [32] * Tác dụng dược lý Acyclovir là một chất tương tự nucleosid, có tác dụng chọn lọc trên tế bào nhiễm virus Herpes. Tác dụng của acyclovir mạnh nhất trên virus Herpes simplex typ 1 (HSV1) virus Herpes simplex typ (HSV2) virus Varicella zoster (VZV) [4], [5], [32] Để có tác dụng acyclovir phải phosphoryl hóa, lần do thymidinkynase đặc hiệu của virus HSV tạo thành dẫn chất monophosphat, lần thứ 2 và lần thứ 3 do các enzym của tế bào vật chủ để tạo thành dẫn chất diphosphat và triphospat. Ái lực của HSV thimidinkynase mạnh gấp 200 lần so với enzym của tế bào vật chủ nên acyclovir được hoạt hóa hầu như chọn lọc trong các tế bào nhiễm HSV. Acyclovir triphosphat ức chế tổng hợp ADN virus và sự nhân lên của virus mà khơng ảnh hưởng đến chuyển hóa của tế bào bình thường [4], [5], [32] * Chỉ định Dự phòng và điều trị các bệnh do nhiễm virus HSV1 và HSV2 da và niêm mạc. Điều trị khởi đầu và tái phát nhiễm virus Herpes sinh dục Điều trị nhiễm virus Herpes zoster cấp tính ở mắt, phổi, thần kinh Dự phòng và điều trị nhiễm virus ở người suy giảm miễn dịch, bệnh thủy đậu [4, 5] * Liều dùng Thơng thường người lớn: 200mg/lần x 5 lần/ ngày (người suy giảm miễn dịch 400mg/lần). Đợt điều trị 5 7 ngày Trẻ em dưới 2 tuổi: dùng 1/2 liều người lớn [4], [5] * Một số chế phẩm acyclovir trên thị trường Viên nén, viên nang: Zovirax 200mg, 400mg, 800mg Thuốc mỡ dùng ngồi: Zovirax 5% Lọ bột pha tiêm: Acirax 250mg, 500mg, 1g/5ml Cream bơi ngồi da: Acirax cream 5 %, Acyclovir Denk 5% [4], [14] 1.1.2. Clorhexidin * Cơng thức hóa học Cơng thức phân tử: C22H30Cl2N10 Khối lượng phân tử: 625,56 Tên khoa học: 1,1’ hexamethyllenebis[5pchlorophenyl] bisguanid [33] * Tính chất lý hóa Trong đề tài chúng sử dụng dạng clorhexidin dược dụng là clorhexidin gluconat. Clorhexidin gluconat là chất lỏng khơng màu hay vàng nhạt, tỉ trọng 1.07, dung dịch 5% trong nước có pH = 5,5 7,0, tan được trong nước và ethanol và aceton * Dược động học Clorhexidin ít hấp thu vào cơ thể qua đường tiêu hóa khi rà miệng, qua da cũng như khi rửa âm đạo. Vết cặn giữ trên bề mặt nơi bơi còn tác dụng trong 1 2 ngày. Hoạt tính của thuốc khơng bị ảnh hưởng bởi dịch cơ thể, nhưng bị mất tác dụng khi gặp các chất diện hoạt anionic *Tác dụng dược lý Clorhexidin có phổ tác dụng rộng, trên cả vi khuẩn Gr(+) và vi khuẩn Gr(), nấm men, nấm da và virus ưa lipid (kể cả HIV). Thuốc khơng có hoạt tính trên các bào tử vi khuẩn (trừ ở nhiệt độ cao) Clorhexidin dùng để khử khuẩn trên da, vết thương, vết bỏng, đường âm đạo, làm sạch dụng cụ Clorhexidin có thể phòng ngừa việc tạo thành cao răng và bảo vệ chống lại viêm lợi, thậm chí ở nồng độ thấp [4], [9]. * Chỉ định Viêm miệng, viêm lợi, viêm amidan, viêm họng, sát khuẩn tại chỗ sau phẫu thuật khoa răng Viêm nhiễm trong trường hợp phẫu thuật, chấn thương và lt (do dãn tĩnh mạch, đái tháo đường và do dinh dưỡng), rách da, cơn trùng đốt, vết thương do chọc dò Tiệt trùng dụng cụ trước khi phẫu thuật [4], [9] * Liều dùng Nhiễm khuẩn ở miệng: Người lớn ngậm 1 viên/lần x 4 lần/ngày. Trẻ em ngậm 1 viên/lần x 2 lần/ngày Bệnh nấm da, trứng cá: dùng dung dịch rửa 0,050,1%/ngày [4], [9] * Một số chế phẩm clorhexidin trên thị trường Dung dịch rửa: Dung dịch clorhexidin 2%, 4%, 5% Dung dịch súc miệng: Dung dịch clorhexidin 0,025%, 0,1%, 1% Dạng gel bôi da: Gel clorhexidin 60g 1.2. Đại cương về thuốc kết dính niêm mạc 1.2.1. Khái niệm Khoảng 10 15 năm gần đây, dạng thuốc kết dính niêm mạc được nghiên cứu và phát triển với mục đích cải thiện SKD của dạng thuốc dùng tại chỗ hoặc qua niêm mạc. Đây là dạng thuốc kiểm sốt giải phóng dược chất khi tiếp xúc với niêm mạc nhằm phát huy tác dụng tại chỗ hoặc dược chất thấm qua niêm mạc vào tuần hồn để có tác dụng tồn thân. 1.2.2.Phân loại Hệ kết dính niêm mạc có thể được phân loại theo nhiều cách khác nhau: Theo vị trí dính của thuốc có thể chia thành loại kết dính niêm mạc miệng, niêm mạc mũi, niêm mạc đường tiêu hóa, niêm mạc âm đạo và hệ kết dính giác mạc. Theo dạng bào chế có viên nén kết dính, miếng dán, vi cầu, pellet, gel, film, hỗn dịch, a) Dạng viên Viên nén: Viên nén kết dính niêm mạc miệng được phát triển với mục đích cải thiện sinh khả dụng của dạng thuốc dùng qua khoang miệng. Dạng thuốc này có thể đặt ở các vị trí như vòm miệng, niêm mạc má giữa mơi trên và lợi. Vị trí đặt viên có thể ảnh hưởng đến thời gian lưu và khả năng dung nạp của thuốc (ở vòm miệng và niêm mạc dưới lưỡi thời gian lưu có thể thay đổi từ 4 12h) [31]. Viên thường mềm và dính vào vị trí hấp thu (hay còn gọi chất nền) nhờ sự có mặt của nước bọt, duy trì ở vị trí đó đến khi tan và giải phóng dược chất hồn tồn. Sau một thời gian ngắn thì nó khơng còn gây chú ý cho bệnh nhân nữa [23], [45]. Viên nén kết dính thường nhỏ, nhẵn phẳng hoặc hình oval có đường kính khoảng 58mm. Tuy nhiên dạng bào chế này có tính linh động cơ học thấp dẫn đến bệnh nhân khó chịu khi dùng điều trị dài ngày và cần dùng nhiều lần [34]. Viên nén kết dính thường được bào chế bằng phương pháp nén, bề mặt của viên nén được bao bởi các polyme dính như ethylcelluosse, hydrogel. Viên nén kết dính cũng có thể sử dụng vi cầu, hoặc pellet để dập viên nhằm đạt được các đặc tính mong muốn như kiểm sốt giải phóng và tăng SKD [34] Một số chế phẩm viên nén kết dính thị trường Nicorette (nicotine), Suscard (glyceryl trinitrate), Striant (testosteron) [31]. Viên đổ khn: Viên đổ khn qui ước thường giải phóng dược chất lúc đầu cao trong khoang miệng sau đó giảm nhanh vì vậy cần dùng nhiều lần trong ngày. Viên đổ khn dính sinh học giải phóng chậm dẫn đến khả năng kéo dài giải phóng để làm giảm bất tiện cho bệnh nhân. Dạng bào chế này thường chứa dược chất tác dụng tại chỗ trong miệng như chất kháng khuẩn, kháng sinh, gây tê tại chỗ, chống nấm, glucocorticoid [1], [25], [45] b) Miếng dán Miếng dán là những lớp mỏng gồm lớp nền khơng thấm và kho chứa thuốc là nơi giải phóng một cách có kiểm sốt. Miếng dán niêm mạc miệng có những thiết kế khác nhau tùy theo mục đích điều trị, đặc tính lý hóa, dược động học của dược chất. Liên quan đến mục đích điều trị, miếng dán có thể thiết kế theo hai mục đích: miếng dán thiết kế để phân phối thuốc đến tuần hồn và miếng dán dùng tại chỗ. Một hệ phân phối thuốc dán phù hợp cần linh động, mềm dẻo, có độ bền cơ học thích hợp và trương nở ở một mức độ nhất định khi đặt trong mơi trường thân nước. Chúng cũng đảm bảo liều dùng chính xác khi so sánh với dạng gel và thuốc mỡ. Miếng dán khơng thích hợp với thuốc điều trị nhiễm khuẩn chân răng. Dạng bào chế này sử dụng polyme khơng phân hủy sinh học nên cần tháo bỏ ở cuối liệu trình điều trị [31] Phương pháp bào chế miếng dán kết dính: phương pháp bốc hơi dung mơi và phương pháp cán ép [34] c) Màng mỏng Là hệ phân phối thuốc được tạo ra nhờ sự gắn kết dược chất với các tá dược kiểm sốt giải phóng. Màng mỏng thường được bào chế bằng phương pháp bốc hơi dung mơi, tá dược polyme được hòa tan trong dung mơi hoặc hỗn hợp dung mơi thích hợp, sau đó hòa tan hoặc phân tán dược chất vào dung dịch polyme trên. Làm bay hơi dung mơi bằng phương pháp thích hợp để tạo ra màng mỏng. Màng mỏng có thể gắn được trên lớp màng nền [21]. Lớp màng nền giúp làm chậm sự khuyếch tán của nước bọt vào lớp thuốc do vậy tăng thời gian dính và giảm hao hụt thuốc. Phương pháp bốc hơi dung mơi có nhược điểm là thời gian bào chế dài, giá thành cao, chịu sự ảnh hưởng của mơi trường trong q trình bay hơi dung mơi. Hạn chế này có thể khắc phục bằng phương pháp đùn nóng chảy (hotmelt extrusion technology)[31], [34]. Phương pháp này được dùng để tạo cốt màng mỏng kết dính dùng cho khoang miệng chứa clotrimazol để điều trị nhiễm nấm candida [31]. d) Vi cầu kết dính Vi cầu kết dính cũng tương tự viên nén kết dính. Vi cầu kết dính có khả năng cải thiện khả năng hấp thu và nâng cao SKD của thuốc nhờ sự kết hợp chặt chẽ với lớp chất nhầy và giữ thuốc lâu hơn tại niêm mạc đường tiêu hóa và khả năng kết dính đặc hiệu của thuốc tại vị trí hấp thu. Các polyme như các receptor, có thể phá vỡ nhân tố ngăn cản tốc độ thay đổi chất nhầy và thời gian tiềm tàng ngắn. Sự đặc hiệu này cho phép chúng gắn với tế bào theo định hướng mong muốn hơn là chỉ gắn với lớp chất nhầy. Ngồi ra dạng bào chế này ít gây kích ứng tại vị trí kết dính hơn và ít gây cảm giác khó chịu hơn các dạng bào chế khác tại khoang miệng Vi cầu kết dính được bào chế bằng phương pháp vi nhũ tương hoặc phương pháp phun sấy [25], [34], [46]. e) Gel Hệ bán rắn được bào chế dựa trên các gel thân nước. Chúng được sử dụng trong các thuốc theo đường niêm mạc miệng hoặc bao quanh răng nhằm phát huy tác dụng tại chỗ. Gel được hydrat hóa trong mơi trường thân nước mà khơng cần hòa tan, hoạt động như một hệ phân phối thuốc từ từ bằng cơ chế khuyếch tán và sói mòn. Hệ bán rắn cũng thích hợp cho việc dùng xi lanh để phân phối chế phẩm một cách dễ dàng vào các túi quanh răng thơng qua khoang miệng. Hạn chế chính của dạng thuốc có thời gian lưu ngắn, có thể cải thiện bằng cách thêm các polyme dính sinh học vào cơng thức [31]. Dạng gel được sử dụng rộng trong các dạng thuốc dùng tại mắt, khoang miệng, âm đạo Polyme dính acid polyacrylic liên kết chéo như poloxame, NaCMC, Carbopol, gơm xanthan, Các polyme dính này được sử dụng để dính vào bề mặt niêm mạc miệng kéo dài thời gian tác dụng và kiểm sốt giải phóng dược chất tại vị trí hấp thu thuốc. Hạn chế của dạng bào chế này là khó kiểm sốt liều so với viên nén, miếng dán, màng mỏng vì thế khơng sử dụng được với các dược chất có giới hạn điều trị hẹp [34], [25] e) Dung dịch Dạng dung dịch cũng có thể sử dụng tại chỗ ở khoang miệng. Các polyme được sử dụng để làm tăng độ nhớt của chế phẩm tạo thành dung dịch nhớt có thể phủ lên bề mặt niêm mạc vừa đủ để bảo vệ vừa phân phối thuốc vào niêm mạc, làm tăng thời gian lưu của thuốc trong khoang miệng. Dung dịch nước bọt 10 nhân tạo giúp bơi trơn bề mặt niêm mạc miệng có thể dùng điều trị bệnh khơ miệng [45] f) Dạng kết dính đặc hiệu Mặc dù đã có rất nhiều nghiên cứu về việc sử dụng các thuộc tính kết dính của polyme như một tác nhân kết dính sinh học, tuy nhiên các dạng này cũng bộc lộ một vài nhược điểm: viên nén, viên nang dính niêm mạc có thể gây tổn thương cho tế bào tại nơi dính, tương tác giữa thành phần cơng thức với chất nhầy trong ống tiêu hóa tạo lớp bao bên ngồi dạng thuốc do đó thuốc khơng được hấp thu tại vị trí đưa thuốc mà đi theo ống tiêu hóa ra ngồi. Trong khi đó, chất kết dính đặc hiệu có vai trò như một loại phân tử sinh học đặc biệt có khả năng nhận ra và gắn chặt với bề mặt tế bào hay trong chất nhầy. Một số phân tử kết dính đặc hiệu như lectin, fimbrin và invasin của vi khuẩn. Việc phối hợp những chất kết dính đặc hiệu này có thể làm tăng SKD của dạng thuốc kết dính dạng rắn, bán rắn, lỏng [25]. 1.2.3. Sơ lược về các thuốc kết dính niêm mạc miệng a) Đặc điểm Sử dụng dạng thuốc kết dính niêm mạc miệng là một đường dùng thuốc khá an tồn và tránh được sự chuyển hóa qua gan lần đầu, hơn nữa bề mặt niêm mạc miệng có tính thấm cao, được cung cấp lượng máu dồi dào nên thuốc hấp thu tốt hơn. Hơn nữa, dạng thuốc này có sự tiếp xúc trực tiếp giữa dạng bào chế và mơ hấp thu nên nồng độ thuốc tập trung cao tại vị trí dính tạo thành dòng thuốc lớn xun qua mơ hấp thu làm tăng khả năng hấp thu của thuốc. Sự hấp thu thuốc trong khoang miệng có thể đi theo 3 con đường chính: qua niêm mạc dưới lưỡi, qua niêm mạc miệng (vùng niêm mạc trong má) và tác dụng tại chỗ Việc lựa chọn con đường nào phải dựa trên cơ sở cấu tạo giải phẫu và tính thấm khác nhau của từng vị trí trong khoang miệng. Vùng niêm mạc dưới lưỡi có khả năng thấm tốt thuận lợi cho việc hấp thu và làm tăng sinh khả dụng của nhiều thuốc. Vùng niêm mạc miệng có tính thấm kém hơn vùng dưới lưỡi nên 24 đánh giá độ bền, độ kết dính, tương tác giữa phân tử chất nhầy với polyme, đánh giá giải phóng invitro và invivo. Kết quả nghiên cứu cho thấy về hình thái pellet hình cầu bề mặt trơn nhẵn, kích thước từ 1,51,7mm. Pellet bao bởi HPMC có độ bền cơ học tốt hơn pellet bao bởi NaCMC. Khi k ết h ợp HPMC/Carbopol thì khoảng chịu lực nén lớn hơn pellet HPMC. Pellet được bao bởi Na CMC có khả năng kết dính cao nhất. Pellet được bao bởi natri alginat có tương tác giữa polyme và chất nhầy thì cao nhất và có thời gian lưu tại dạ dày lâu nhất. Natri alginat và NaCMC làm tăng độ dẻo dai của pellet và có tốc độ giải phóng dược chất đều đặn và ổn định hơn hai loại pellet còn lại [27]. Noha Adel Nafee và các cộng sự đã tiến hành nghiên cứu về đặc tính của miếng dán kết dính niêm mạc miệng chứa cetylpyridinium clorid. Miếng dán sử dụng tá dược polyvinyl alcohol (PVA), hydroxyethyl cellulose (HEC), chitosan với tỷ lệ 1%, 1.5%, 2%, Glycerin được cố định là 5%. Miếng dán được bào chế bằng phương pháp hòa tan. Miếng dán được đánh giá độ đồng đều khối lượng và bề dày, pH, độ nhớt, co dãn, thời gian tiềm tàng, lực kết dính sinh học, nồng độ dược chất và khả năng giải phóng và tuổi thọ của thuốc. Kết quả nghiên cứu cho thấy: miếng dán có đường kính 10mm, bề dày 0,6 0,2mm, khối lượng từ 84 234mg, pH bề mặt chênh lệch nhau khoảng 1,5 đơn vị do đó khơng kích ứng niêm mạc, thời gian tiềm tàng từ 3 10h , miếng dán chứa PVA có lực kết dính sinh học và khả năng giải phóng dược chất cao nhất và ổn định trong 7h [35] Nhằm mục đích điều trị bệnh nhiễm nấm vùng âm đạo Afat A. Ramadam nghiên cứu bào chế đánh giá gel kết dính sinh học chứa miconazol nitrat. Gel được tạo thành bằng cách phối hợp miconazol nitrat với các gel HPMC, natri alginat, Carbopol 934. Đánh giá gel tạo thành thu được kết quả: Độ tan của dược chất trong đệm pH 4,75 là 10,88 mg/ml, đây là môi tương tự pH âm đạo (pH 4 5). Đánh giá pH, độ nhớt, độ dính giữa 3 gel trên thì pH của gel HPMC và Na alginat nằm trong vùng 4 5, độ nhớt và độ dính của gel Na alginat cao nhất. Tốc độ giải phóng của gel giảm dần từ gel HPMC> gel Carbopol> gel 25 natri alginat. Khi thêm tween 80 thì khả năng thấm của gel qua màng cellulose, qua da được tăng rõ rệt và mức độ ảnh hưởng của tween 80 nồng độ 1% là cao nhất [15] 1.3.2. Màng mỏng kết dính niêm mạc miệng Nguyễn Thị Thảo đã sử dụng các tá dược chitosan, Carbopol, HPMC khi nghiên cứu màng mỏng kết dính niêm mạc miệng chứa acyclovir bằng phương pháp tráng film. Kết quả cho thấy loại tá dược và tỷ lệ tá dược có ảnh hưởng đến khả năng giải phóng dược chất từ màng mỏng Tăng lượng chitosan và Carbopol, HPMC thì khả năng giải phóng ACV giảm. Khả năng giải phóng ACV màng mỏng HPMC cao hơn màng mỏng chitosan. Khi Carbopol phối hợp với HPMC E6 thì khả năng giải phóng ACV tăng lên và giảm khi phối hợp với HPMC E15. Khi natri alginat phối hợp với HPMC E6 thì khả năng giải phóng ACV tăng lên và giảm khi phối hợp với HPMC E15. Màng mỏng tạo ra có khả năng giải phóng dược chất cao, đều đặn, kéo dài trong 4 giờ [12] Lê Ngọc Bích đã tiến hành nghiên cứu bào chế và đánh giá độ dính và khả năng giải phóng dược chất invitro màng mỏng chứa ACV kết dính niêm mạc miệng Polyme dính sử dụng nghiên cứu HPMC, natri alginat Màng mỏng được bào chế bằng phương pháp tráng film. Kết quả nghiên cứu cho thấy khi tăng lượng HPMC thì khả năng giải phóng dược chất và thời gian dính giảm. Tăng tỷ lệ chất hóa dẻo tốc độ và mức độ giải phóng dược chất tăng nhưng thời gian dính giảm, trong 3 loại chất hóa dẻo sử dụng, thời gian dính dài nhất ở màng mỏng chứa PG và ngắn nhất màng mỏng chứa PEG 400, tuy nhiên ảnh hưởng của loại chất hóa dẻo lên khả năng giải phóng dược chất khơng theo quy luật. Từ phân tích ảnh hưởng trên tác giả đưa ra cơng thức tối ưu trong phạm vi khảo sát đạt u cầu về giải phóng trong 6h [11] Padmavathy Tallury và cộng sự đã nghiên cứu sử dụng poly(ethylen co vinyl acetat) (EVA) để bào chế màng mỏng dạng cốt chứa hỗn hợp clorhexidin (CHX) và acyclovir (ACV) dính niêm mạc miệng. Màng mỏng được bào chế 26 bằng phương pháp bốc hơi dung mơi với tỷ lệ dược chất ACV/ CHX là 100/0; 75/25; 50/50; 25/75, 0/100. Màng mỏng sau khi bào chế được đánh giá sự ảnh hưởng của việc phối hợp dược chất và thành phần đồng polyme đến tốc độ giải phóng dược chất. Kết quả cho thấy khi chưa phối hợp dược chất, tỷ l ệ gi ải phóng của ACV ln cao hơn CHX. Khi phối hợp tỷ lệ 50/50 ACV giải phóng cao hơn CHX 30%. Các tỷ lệ khác, tỷ lệ giải phóng thuốc tương ứng với nồng độ của chúng trong hỗn hợp. Tăng lượng vinyl acetat trong cốt EVA làm tăng tỷ lệ giải phóng thuốc [36] S.Senel cộng nghiên cứu màng mỏng gel chitosan chứa clorhexidin gluconat (CHX) dùng cho niêm mạc miệng. Gel được bào chế với nồng độ 1% và 2%, màng mỏng chitosan chứa 0,1 và 0,2% có thêm glycerin và natri penta tripolyphosphat. Màng mỏng và gel sau khi bào chế được đánh giá khả năng hấp thu nước, độ nhớt đặc điểm hình thái và khả năng giải phóng dược chất invitro và hoạt tính chống nấm của chitosan. Kết quả cho thấy CHX khơng ảnh hưởng đến khả năng hút nước và độ nhớt của mẫu thử. Màng mỏng hút nước nhiều (180± 10%) và độ nhớt tăng đáng kể khi tăng nồng độ chitosan. Sự giải phóng dược chất từ gel được duy trì trong 3h, kéo dài hơn dạng màng mỏng. Suốt thời gian giải phóng màng mỏng vẫn ngun vẹn. Nồng độ CHX khơng ảnh hưởng đáng kể tới tốc độ giải phóng. Tăng chitosan sẽ làm tăng tốc độ giải phóng CHX [42] Amal Hassan và cộng sự đã nghiên cứu màng mỏng dính niêm mạc miệng dạng vi cốt điều trị tại chỗ bệnh viêm chân răng chứa metronidazol benzoat Màng film chỉ chứa chitosan với khối lượng phân tử khác nhau từ thấp (LCS), trung bình (MCS), cao (HCS) và chứa hỗn hợp chitosan/ caprolacton (CS/CPT) với các tỷ lệ khác nhau. Kết quả cho thấy Các chitosan khác nhau và tỷ lệ MCS:CPT ảnh hưởng đến kích thước tiểu phân. Thêm CPT làm giảm % hấp thụ nước và khả năng dính so với màng chỉ có chitosan. Màng mỏng 2 lớp có sự dẻo 27 dai nhất nhưng khả năng giải phóng dược chất thấp nhất. Loại chitosan có khối lượng phân tử cao làm giảm khả năng giải phóng dược chất [17] R.C.Mashru và các cộng sự đã phát triển và đánh giá màng film giải phóng nhanh chứa salbutamol sulfat đặt dưới lưỡi với mục tiêu tối ưu hóa cơng thức. Film được bào chế bằng phương pháp bốc hơi dung mơi chứa polyme PVA, glycerin và manitol. Thiết kế đầy đủ 33 thừa số để tối ưu hóa sự ảnh hưởng của các biến độc lập là lượng PVA, glycerin và manitol đến biến phụ thuộc là đặc tính cơ học và khả năng giải phóng thuốc. Đặc tính cơ học như lực kéo căng, % dãn, lực đàn hồi, từ đó để lựa chọn cơng thức tối ưu. Kết quả thiết kế lựa chọn được cơng thức tối ưu với thành phần glycerin 3mg, PVA 20mg, manitol 6mg màng film trong suốt, mịn màng, đặc tính cơ học tốt. Trong dung dịch 1,2 tỷ lệ thuốc giải phóng là 2 phút với mức độ 92,11%. Hệ số tương quan cho thấy sự tương ứng khi hòa tan film trong mơi trường nước cất và mơi trường nước bọt nhân tạo pH 1,2 [38] Silvia Rossi và cộng sự đã nghiên cứu hệ phân phối ACV qua màng mỏng dính niêm mạc miệng chứa chitosan và poly acrylic acid (PAA) bằng phương pháp bốc hơi dung mơi, sử dụng glycerin làm chất hóa dẻo với hàm lượng ACV là 1mg/1cm2. Màng mỏng tạo ra được so sánh với cream ACV 5% (w/w) và hỗn dịch nước ACV trên thị trường. Màng mỏng có khả năng bám dính, khả năng hydrat hóa, tính chất lưu biến, lượng thuốc mất bị rửa trơi, giải phóng thuốc và tính thấm qua niêm mạc má lợn. Kết quả cho thấy thêm PAA vào chitosan làm tăng khả năng bám dính trên niêm mạc, giảm tỷ lệ hydrat hóa. Độ nhớt tăng khi thêm PAA vào chitosan ở tỷ lệ 1:0,25 và 1:0,75 các tỷ lệ khác độ nhớt giảm. Độ giải phóng dược chất giảm khi tăng dần lượng PAA, cao nhất màng chỉ có chitosan và thấp nhất ở màng có tỷ lệ chitosan/PAA là 1/1,3 [41] Kazuyo Takeochi và cộng sự đã nghiên cứu đánh giá invitro và trên lâm sàng màng mỏng kết dính niêm mạc miệng chứa indomethacin (IM). Màng mỏng 28 dùng để đánh giá độ kết dính độ ổn định loại đơn lớp với polyme carboxyvinyl (PC). Màng mỏng đánh giá trên lâm sàng với bệnh nhân đau vùng miệng là loại hai lớp: một lớp chứa dược chất 0,51% và PC.và lớp thứ 2 chứa HPC và PEG nhằm cải thiện bề mặt của màng mỏng. Kết quả nghiên cứu cho thấy khi tăng lượng PCV thì khả năng kết dính tăng. Tốc độ giải phóng IM từ film chứa 0,5% IM thấp hơn so với film chứa 1% IM và CP khơng ảnh hưởng đến tốc độ giải phóng dược chất. Hàm lượng IM hầu như khơng thay đổi trong 4 tuần thử độ ổn định. Film được thử trên lâm sàng trên 50 bệnh nhân đau vùng miệng, màng mỏng chứa 1% IM mất cảm giác đau sau nhanh nhất và tác dụng trên 100% bệnh nhân thử [29] 29 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu Màng mỏng chứa acyclovir và clorhexidin dính niêm mạc miệng 2.2. Nguyên liệu và phương tiện nghiên cứu 2.2.1. Nguyên vật liệu Tên nguyên liệu Nguồn gốc TCCL Acyclovir Trung Quốc USP Clorhexidin gluconat 20% Trung Quốc USP Carbopol 940 Trung Quốc USP HPMC E15 Trung Quốc USP Natri alginat Nhật FD C PVA (polyvinyl alcohol) Trung Quốc USP PVP (polyvinyl pyrolidon) Trung Quốc USP Glycerin Trung Quốc USP Nước cất Viêt Nam DĐVNIII 10 Acetonitril Mỹ TCPT 11 Triethylamin Việt Nam TCPT 12 Acid trifluoroacetic Việt Nam TCPT 13 Acyclovir chuẩn Việt Nam TCPT 14 Clorhexidin chuẩn Việt Nam TCPT STT Bảng 2.1: Bảng nguyên vật liệu 2.2.2. Thiết bị nghiên cứu Cân phân tích, cân kỹ thuật SATORIUS 30 Hệ thống đánh giá giải phóng qua màng HANSON RESEARCH Máy đo quang UV VISHITACHI 1800 Máy khuấy từ IKA WERKE Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Dụng cụ thủy tinh 2.3. Phương pháp nghiên cứu 2.3.1. Phương pháp bào chế Căn cứ vào tài liệu tham khảo, màng mỏng chứa acyclovir và clorhexidin kết dính niêm mạc miệng được dự kiến bào chế kéo dài giải phóng 6 giờ, hàm lượng ACV và CHX khoảng 1mg/cm2. Màng mỏng được bào chế bằng phương pháp bốc hơi dung mơi với các tá dược HPMC E15, PVA, glycerin, PVP, natri alginat, Carbopol theo các tỷ lệ khác nhau. Phương pháp bào chế như sau: Cân các thành phần trong cơng thức Ngâm polyme cho trương nở hồn tồn Phối hợp dược chất và tá dược: + Màng mỏng chỉ chứa ACV: Nghiền mịn ACV trong cối, phối hợp với glycerin tạo bột nhão. Phối hợp hỗn hợp trên với dung dịch polyme trên. + Màng mỏng chỉ chứa CHX: Phối hợp CHX với glycerin. Phối hợp hỗn hợp trên với dung dịch polyme trên + Màng mỏng hỗn hợp ACV và CHX: Nghiền mịn ACV trong cối, phối hợp với glycerin tạo bột nhão, thêm dung dịch CHX vào hỗn hợp trên. Phối hợp hỗn hợp trên với dung dịch polyme trên Hỗn hợp trên được khuấy trộn bằng máy khuấy từ trong 4h cho đồng nhất. Đổ ra đĩa petri sấy ở nhiệt độ 400C trong 24h. 2.3.2. Phương pháp đánh giá 2.3.2.1. Phương pháp xây dựng đường chuẩn 31 Đường chuẩn ACV và CHX được xây dựng nhằm xác định khoảng tuyến tính của nồng độ dung dịch ACV và CHX trong mơi trường nước bọt nhân tạo Theo tài liệu tham khảo thành phần nước bọt nhân tạo như sau: KH2PO4: 12mM NaCl: 40mM CaCl2: 1,5mM Nước vừa đủ 1lít Dung dịch NaOH vừa đủ điều chỉnh pH≈ 6,2 * Phương pháp đo quang Đường chuẩn của dung dịch acyclovir hoặc clorhexidin được xây dựng bằng phương pháp đo quang • Xây dựng đường chuẩn acyclovir: Cân chính xác 100mg acylovir, thêm khoảng 70ml nước bọt nhân tạo, rồi siêu âm khoảng 60 phút, thêm nước bọt nhân tạo cho vừa đủ trong 100ml. Pha lỗng thành các dung dịch có nồng độ 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 g/ml Qt phổ dung dịch trên để chọn bước sóng thích hợp Đo mật độ quang của các dung dịch này ở bước sóng vừa tìm được • Xây dựng đường chuẩn clorhexidin: Hút chính xác 0,5ml clorhexidin gluconat 20%, thêm nước bọt nhân tạo cho vừa đủ trong 100ml. Pha lỗng thành các dung dịch có nồng độ 5, 10, 15, 20, 30 g/ml. Qt phổ dung dịch trên để chọn bước sóng thích hợp Đo mật độ quang của các dung dịch này ở bước sóng vừa tìm được Từ các kết quả thu được xây dựng phương trình hồi qui, vẽ đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và mật độ quang của từng chất * Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Đường chuẩn của dung dịch hỗn hợp chứa acyclovir và clorhexidin được xây dựng bằng phương pháp HPLC 32 Điều kiện sắc ký: + Pha động: hỗn hợp A (95% nước; 5% acetonitril; 0,1% trifluoroacetic acid) và B (95% acetonitril; 5% nước; 0,1% trifluoroacetic acid). + Cột C18 (4,6mm x 150cm), đường kính hạt 5 m, nhiệt độ cột 250C + Tốc độ dòng 1,5ml/phút. + Thể tích tiêm 20 l. + Detector tử ngoại, bước sóng 253nm Cân chính xác 100mg acyclovir và 0,5 ml clorhexidin gluconat 20%, đem siêu âm với 70ml nước bọt nhân tạo, thêm pha động cho vừa đủ 100ml Pha lỗng dung dịch trên bằng pha động thành các nồng độ 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 g/ml Đem chạy sắc ký các dung dịch này với điều kiện sắc ký như trên Từ các diện tích pick thu được xây dựng phương trình hồi qui, vẽ đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và diện tích pick của từng chất 2.3.2.2. Phương pháp định lượng dược chất trong màng mỏng * Phương pháp đo quang Màng mỏng chứa một dược chất được định lượng bằng phương pháp đo quang theo các bước như sau: • Màng mỏng acyclovir: Cắt nhỏ màng mỏng, nghiền kỹ, siêu âm khoảng 1,5h với 70ml dung dịch NaOH 0,1N Chuyển tồn bộ dung dịch trên vào bình định mức 100ml, thêm dung dịch NaOH 0,1N đến vạch , lắc kỹ và lọc Bỏ 15ml dịch lọc đầu, hút chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức thêm nước tới vạch và lắc kỹ. ` Đo độ hấp thụ ở bước sóng = 250nm 33 Song song tiến hành một mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 80mg ACV chuẩn, siêu âm với 70ml dung dịch NaOH 0,1N sau đó tiến hành tương tự thu được dung dịch chuẩn có nồng độ 10 g/ml. • Màng mỏng CHX: Cắt nhỏ màng mỏng, nghiền kỹ, siêu âm khoảng 60 phút với 70ml nước cất Chuyển tồn bộ dung dịch trên vào bình định mức 100ml, thêm nước cất đến vạch , lắc kỹ và lọc Bỏ 15ml dịch lọc đầu, hút chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức thêm nước tới vạch và lắc kỹ. Đo độ hấp thụ ở bước sóng = 253nm Song song tiến hành một mẫu chuẩn: Hút chính xác 0,4ml dung dịch CHX chuẩn 20% (80mg CHX chuẩn), tiến hành tương tự thu được dung dịch chuẩn có nồng độ 20 g/ml. Kết quả được tính như sau: mt DT mc Dc Trong đó: mt: khối lượng dược chất trong màng film mc: khối lượng dược chất trong mẫu chuẩn Dt: mật độ quang của dung dịch thử Dc: mật độ quang của dung dịch chuẩn * Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ● Mẫu thử: Cắt nhỏ màng mỏng, nghiền kỹ, siêu âm khoảng 1,5h với 70ml pha động để hòa tan Chuyển tồn bộ dung dịch trên vào bình định mức 100ml, thêm pha động đến vạch , lắc kỹ và lọc 34 Bỏ 15ml dịch lọc đầu, hút chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức thêm pha động tới vạch và lắc kỹ. ● Mẫu chuẩn: Cân chính xác 80mg ACV và 0,4 ml CHX gluconat 20%, đem siêu âm với 70ml pha động, chuyển vào bình định mức 100ml và thêm pha động cho đến vạch Pha lỗng dung dịch trên bằng pha động thành nồng độ 10 g/ml Đem chạy sắc ký dung dịch này với điều kiện sắc ký như mục 2.3.2.1: CX SX CS SS Trong đó : Cx: Nồng độ mẫu thử CS: Nồng độ mẫu chuẩn Sx: Diện tích (chiều cao) của pic mẫu thử. SS: Diện tích của pic mẫu chuẩn u cầu: Hàm lượng acyclovir trong màng mỏng chứa từ 98,5 101% và clorhexidin từ 98 101% so với khối lượng ghi trên nhãn 2.3.2.3. Phương pháp đánh giá khả năng giải phóng dược chất qua màng Sử dụng hệ thống đánh giá giải phóng qua màng Hanson research với các điều kiện sau: + Màng giải phóng: Màng cellulose acetat, kích thước lỗ xốp 0,45 m + Mơi trường khuyếch tán: Nước bọt nhân tạo + Nhiệt độ 370C±0,5 + Diện tích bề mặt khuyếh tán: S= 1,76cm2 + Tốc độ khuấy: v= 400 vòng/phút Mẫu thử: Màng mỏng có S= 1,76cm2 35 Lấy mẫu: tại các thời điểm 30, 60, 120, 180, 240, 300, 360 phút. Mỗi lần lấy 0,5ml đồng thời bổ sung 0,5ml mơi trường khuyếch tán mới Định lượng hàm lượng trong mẫu đem thử bằng phương pháp đo quang (màng mỏng chứa 1 dược chất) hoặc phương pháp HPLC (màng mỏng chứa 2 dược chất) được trình bày mục 2.3.2.2 Đánh giá mức độ giải phóng dược chất ra khỏi màng mỏng theo cơng thức: Qt Ct V v n Ci i Xt Qt mt 100 Trong đó : Xt: Tỷ lệ % dược chất giải phóng từ màng mỏng tại thời điểm t (%) Qt: Tổng lượng dược chất giải phóng tại thời điểm t (mg) V: Thể tích mơi trường khuyếch tán (ml) v: Thể tích mỗi lần lấy mẫu (ml) Ct : Nồng độ dược chất trong mơi trường khuyếch tán tại thời điểm t (mg/ml) Ci: Nồng độ dược chất trong mơi trường khuyếch tán tại các thời điểm trước đó (mg/ml) mt: Khối lượng dược chất có trong màng mỏng đem thử 2.3.2.4. Phương pháp đánh giá khả năng kết dính Phương pháp đánh giá lực kết dính Theo tài liệu tham khảo [28], bộ dụng cụ đánh giá lực kết dính được mơ phỏng theo hình 2.2: 36 Hình 2.2: Sơ đồ thiết bị đo lực kết dính Điều kiện thử: Mơi trường: dung dịch Kreb (đệm phosphat pH= 6,6) Tốc độ nhỏ giọt: 100giọt/phút Chất nền: niêm mạc má lợn Màng mỏng được cắt với diện tích 3cm 3cm đặt vào thí nghiệm như hình 2.1. Dung dịch Kreb được cho vào sao cho xấp mặt tế bào niêm mạc và duy trì trong suốt thời gian thí nghiệm. Đặt quả cân 5g để thiết lập lực kết dính giữa màng mỏng và tế bào niêm mạc. Sau 5 phút nhấc quả cân ra và nhỏ nước với tốc độ 100 giọt/ phút ở bên phải thiết bị thăng bằng hai cánh tay đòn cho tới khi nào màng mỏng tách ra khỏi bề mặt tế bào niêm mạc Phương pháp đánh giá thời gian dính Theo tài liệu tham khảo [11], bộ dụng cụ đánh giá thời gian dính được mơ phỏng theo hình sau: 37 Hình 2.3: Sơ đồ thiết bị đo thời gian dính Điều kiện thử: Mơi trường thử: Nước bọt nhân tạo Tốc độ giọt: v= 2ml/phút Thể tích mơi trường: V= 25ml Màng mỏng cắt với kích thước 3cm 3cm được đặt vào đáy bình nón, mở khố K1cho nước bọt nhân tạo chảy từ bình dịch truyền xuống với tốc độ v= 2ml/phút. Tại thời điểm này màng mỏng bắt đầu hút nước và xuất hiện tương tác dính giữa màng mỏng với bề mặt tiếp xúc. Khi thể tích trong bình nón đạt mức 25ml, mở khố K2 để chảy nhỏ giọt duy trì thể tích 25ml. Thời gian dính được tính là khoảng thời gian từ khi mở khố K1 cho tới khi màng mỏng bong ra khỏi bề mặt tiếp xúc 2.3.2.5. Phương pháp đánh giá độ đồng đều hàm lượng Màng mỏng sau khi được tháo khn được cắt thành các miếng nhỏ có diện tích 1,76cm2. Định lượng hàm lượng ACV và CHX trong từng miếng riêng rẽ theo phương pháp ghi mục 2.3.2.2. Đánh giá độ đồng đều hàm lượng được tiến hành theo DĐVN IV: 38 Độ đồng đều hàm lượng phải được tiến hành trên 10 miếng riêng rẽ được lấy bất kỳ Chế phẩm đạt u cầu phép thử nếu khơng q 1 đơn vị có giá trị hàm lượng nằm ngồi giới hạn 85 115% của hàm lượng trung bình và khơng có đơn vị nào có giá trị hàm lượng nằm ngồi giới hạn 75 125% của hàm lượng trung bình ... thay đổi tốc độ giải phóng của dược chất [2] 1.3. Một số nghiên cứu về thuốc kết dính niêm mạc và màng mỏng kết dính niêm mạc miệng 1.3.1. Về thuốc kết dính niêm mạc a) Thuốc kết dính niêm mạc chứa ACV: Nhằm cải thiện SKD của ACV, Yunying Tao và các cộng sự... Padmavathy Tallury và cộng sự đã nghiên cứu sử dụng poly(ethylen co vinyl acetat) (EVA) để bào chế màng mỏng dạng cốt chứa hỗn hợp clorhexidin (CHX) và acyclovir (ACV) dính niêm mạc miệng. Màng mỏng được bào chế ... năng giải phóng dược chất cao, đều đặn, kéo dài trong 4 giờ [12] Lê Ngọc Bích đã tiến hành nghiên cứu bào chế và đánh giá độ dính và khả năng giải phóng dược chất invitro màng mỏng chứa ACV kết dính niêm mạc miệng