Trong nghiên cứu này, tiến hành tạo hạt từ miễn dịch nhằm phân tách tế bào Jurkat T ra khỏi dịch nuôi tế bào. Kháng thể kháng tế bào Jurkat T (anti-pan T) được gắn định hướng lên bề mặt hạt từ thông qua protein A/G, một protein bắt đặc hiệu vùng Fc của kháng thể. Việc gắn protein A/G lên bề mặt hạt từ được hình thành nhờ một liên kết cộng hóa trị giữa các gốc amine trên bề mặt hạt từ và protein thông qua chất xúc tác 3-(2-pyridyldithio) propionic acid -hydroxysuccinimide ester (SPDP). Hạt từ miễn dịch tạo thành có khả năng gắn kết khoảng 85 μg protein A/G và 21 μg kháng thể trên một mg hạt từ. Hiệu quả phân tách tế bào Jurkat T của hạt từ miễn dịch khoảng 53,3%.
Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 Bài Nghiên cứu Tạo đánh giá khả loại bỏ tế bào Jurkat T hạt từ miễn dịch anti-pan T Huỳnh Kiến Quang1 , Trần Văn Thuận1 , Trần Nguyễn Thảo Sương1 , Tạ Thị Kiều Hạnh2 , Trần Văn Hiếu1,* TÓM TẮT Cấy ghép tế bào gốc tạo máu phương pháp điều trị mang lại nhiều hi vọng cho bệnh nhân ung thư máu Tuy nhiên, định cấy ghép, đặc biệt cấy ghép tế bào gốc đồng lồi, người bệnh có nguy mắc biến chứng vật ghép chống chủ (GvHD) Nguyên nhân gây xác định diện tế bào T mô ghép người cho Để khắc phục khó khăn này, việc loại bỏ tế bào T mô ghép trước đưa vào thể bệnh nhân điều cần thiết Hiện nay, kỹ thuật MACS ứng dụng hạt nano từ tính để loại bỏ tế bào T giải pháp tiềm việc cấy ghép tế bào gốc tạo máu Trong nghiên cứu này, tiến hành tạo hạt từ miễn dịch nhằm phân tách tế bào Jurkat T khỏi dịch nuôi tế bào Kháng thể kháng tế bào Jurkat T (anti-pan T) gắn định hướng lên bề mặt hạt từ thông qua protein A/G, protein bắt đặc hiệu vùng Fc kháng thể Việc gắn protein A/G lên bề mặt hạt từ hình thành nhờ liên kết cộng hóa trị gốc amine bề mặt hạt từ protein thông qua chất xúc tác 3-(2-pyridyldithio) propionic acid -hydroxysuccinimide ester (SPDP) Hạt từ miễn dịch tạo thành có khả gắn kết khoảng 85 μg protein A/G 21 μg kháng thể mg hạt từ Hiệu phân tách tế bào Jurkat T hạt từ miễn dịch khoảng 53,3% Từ khố: ghép tế bào gốc đồng lồi, GvHD, hạt từ miễn dịch, MACS Bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử Môi trường, khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Bộ môn Vật liệu Từ Y sinh, khoa Khoa học Công nghệ Vật liệu, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Liên hệ Trần Văn Hiếu, Bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử Môi trường, khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Email: tvhieu@hcmus.edu.vn Lịch sử • Ngày nhận: 03-12-2018 • Ngày chấp nhận: 24-4-2019 • Ngày đăng: 24-6-2019 DOI : https://doi.org/10.32508/stdjns.v3i2.802 Bản quyền © ĐHQG Tp.HCM Đây báo công bố mở phát hành theo điều khoản the Creative Commons Attribution 4.0 International license GIỚI THIỆU Cấy ghép tủy xương hay gọi cấy ghép tế bào gốc tạo máu phương pháp thay tế bào gốc máu bị hư hỏng tế bào gốc tạo máu khỏe mạnh Đây phương pháp trị liệu ứng dụng phổ biến điều trị ung thư nay, đặc biệt ung thư máu Phương pháp mang lại nhiều lợi ích so với phương pháp điều trị truyền thống hóa trị xạ trị người bệnh hạn chế nguy nhiễm trùng, suy giảm miễn dịch hay tử vong Khi định điều trị phương pháp cấy ghép tủy xương, người bệnh xem xét chọn lựa việc cấy ghép tự thân hay cấy ghép đồng loài Cấy ghép đồng loài phương án quan tâm chúng giải nhược điểm cấy ghép tự thân, đồng thời giai đoạn khan tuỷ ghép cấy ghép đồng lồi phương pháp hứa hẹn mang lại nhiều hy vọng Tuy nhiên, nhược điểm lớn cấy ghép đồng lồi biến chứng vật ghép chống chủ (Graft versus Host Disease/GvHD) Nguyên nhân biến chứng tế bào miễn dịch lympho B, lympho T, đại thực bào, tế bào giết tự nhiên nhân tố kích thích yếu tố hoại tử khối u (TNF), interleukin-1 (IL-1),… tủy người cho nhận diện tế bào người nhận kháng nguyên lạ, dẫn đến công, làm thương tổn tế bào mô người nhận Nhiều nghiên cứu diện tế bào lympho T người hiến tặng mô ghép nguyên nhân gây đáp ứng miễn dịch khơng mong muốn triệu chứng có hại cho người nhận mơ ghép Đã có nhiều nghiên cứu chứng minh diện ngưỡng định tế bào lympho T mô tủy ghép có khả gia tăng hội đậu ghép cho bệnh nhân hỗ trợ di cư tế bào gốc tạo máu vị trí mong muốn có khả tiêu diệt tế bào ung thư sót lại thể người nhận Do vậy, để khắc phục GvHD việc loại bỏ phần tế bào lympho T điều cần thiết Hiện có nhiều kỹ thuật phân tách tế bào ứng dụng rộng rãi lĩnh vực y sinh phân tách tế bào cách nuôi cấy, phân tách ly tâm, cột sắc ký lực, đánh dấu huỳnh quang, đánh dấu từ tính,… Tùy thuộc vào mục đích người nghiên cứu, kỹ thuật phân tách tế bào phù hợp lựa chọn Đối với mô ghép tế bào gốc máu, yêu cầu độ tinh đặc hiệu cao phương pháp phân tách tế bào từ tính (MACS) phương pháp thích hợp, ứng dụng lâm sàng cấy ghép với nhiều ưu điểm bật tương thích sinh học, độ tinh hiệu suất thu hồi Trích dẫn báo này: Quang H K, Thuận T V, Sương T N T, Hạnh T T K, Hiếu T V Tạo đánh giá khả loại bỏ tế bào Jurkat T hạt từ miễn dịch anti-pan T Sci Tech Dev J - Nat Sci.; 3(2):74-81 74 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 cao, thao tác đơn giản 3,4 Kỹ thuật MACS dựa đánh dấu tế bào mục tiêu kháng thể gắn với hạt nano có từ tính Dịch huyền phù tế bào sau đánh dấu đặt từ trường mạnh, tế bào đánh dấu từ trường di chuyển tập trung nơi có lượng từ trường, từ dễ dàng thu tế bào mục tiêu Trong nghiên cứu này, tiến hành tạo hạt từ miễn dịch nhằm phân tách tế bào Jurkat T khỏi dịch nuôi tế bào Với đặc điểm tương tự tế bào lympho T khả tăng sinh mạnh, Jurkat T dòng tế bào mơ hình sử dụng Kháng thể kháng tế bào Jurkat T (anti-pan T) gắn định hướng lên bề mặt hạt từ thông qua protein A/G, protein tái tổ hợp protein A protein G, có sáu vùng bắt đặc hiệu vùng Fc kháng thể, làm vùng Fab kháng thể quay ngồi Sau đó, việc đánh giá khả phân tách hạt từ miễn dịch tiến hành thông qua thử nghiệm bắt tế bào Jurkat T mơi trường ni cấy PHƯƠNG PHÁP Hố chất, mơi trường , dòng tế bào Hạt nano từ tính Fe3 O4 @SiO2 -NH2 cung cấp Bộ môn Vật liệu từ Y sinh, khoa Khoa học Vật liệu, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHCM Dòng tế bào Jurkat T cung cấp Bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử Môi trường, khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Tế bào Jurkat T ni mơi trường RPMI-1640 (Himedia) có chứa 10% FBS (Sigma) 37o C, 5% CO2 Kháng thể kháng tế bào T cung cấp Bộ môn Công nghệ Sinh học Phân tử Môi trường, khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM Thang protein phân tử lượng thấp (GE Healthcare) có kích thước 97, 66, 45, 30, 20.1 kDa Khảo sát nồng độ, thời gian phản ứng tạo liên kết hạt từ protein Liên kết cộng hóa hóa trị nhóm chức amine bề mặt hạt từ Fe3 O4 @SiO2 -NH2 nhóm amine protein A/G tạo thử nghiệm Nhằm tiết kiệm protein A/G, thử nghiệm khảo sát nồng độ thời gian phản ứng, protein BSA (Himedia) sử dụng thay cho protein A/G Hạt từ ml dung dịch PBS-EDTA (20 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, mM EDTA, 0,02% sodium azide, pH 7,5) với nồng độ 0,25 mg/ml ml protein BSA với nồng độ 75 20 μg/ml; 40 μg/ml; 60 μg/ml; 80 μg/ml; 100 μg/ml xử lý với SPDP (3-(2-Pyridyldithio) propionic acid -hydroxysuccinimide ester, Sigma Aldrich) 20 mM Sau đó, hạt từ phản ứng với DTT (Biobasic) 50 mM để hình thành gốc –SH, hạt từ protein sau xử lý với SPDP ủ 4o C thời gian 18 Sự hình thành liên kết kiểm tra phương pháp điện di SDS-PAGE với 15 μl mẫu giếng, lượng protein BSA gắn hạt định lượng thông qua phương pháp Bradford Nguyên tắc gắn kết hạt nano từ tính với protein thơng qua SPDP mơ tả trongHình Cụ thể, hạt từ phản ứng với SPDP, sau cho phản ứng với DTT để tạo nhóm –SH bề mặt, nhóm –SH dễ dàng phản ứng với protein hoạt hóa pyridyldithiol tạo thành cầu nối cộng hóa trị, gắn kết hạt từ protein Việc tạo liên kết hạt từ protein A/G (Biobasic) tiến hành sau có thơng số tối ưu sau khảo sát với BSA Tạo liên kết hạt từ-A/G với kháng thể kháng tế bào Jurkat T (anti-pan T) Chuẩn bị 0,25 mg hạt từ-A/G rửa dung dịch TBS-T (Tris-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, Tween20 0,1%, pH 8,2) sau bổ sung mL kháng thể nồng độ 50 μg/ml, sau đảo eppendorf chứa hạt kháng thể 4o C thời gian giờ, thu nhận pha hạt tiến hành dung ly kháng thể glycine 0,1 M, pH 2,5, vortex 20 phút Tiến hành thu dịch dung ly trung hòa Tris-HCl 1,5 M, pH 9,0 Sự hình thành liên kết kiểm tra phương pháp điện di SDSPAGE, lượng kháng thể gắn hạt định lượng thông qua phương pháp Bradford Thử nghiệm khả phân tách tế bào Jurkat T Hạt từ nồng độ 0,5 mg/ml sau gắn với kháng thể ủ với ml tế bào Jurkat T với lượng 3x105 tế bào/ml Hỗn hợp tế bào hạt từ đảo điều kiện 4o C 40 phút Sau dùng nam châm để tách hỗn hợp thành hai pha: pha hạt pha dịch Tiến hành đếm tế bào pha dịch, pha hạt buồng đếm hồng cầu với hỗ trợ dung dịch Trypan blue 0,4% KẾT QUẢ - THẢO LUẬN Khảo sát nồng độ thời gian phản ứng tạo liên kết hạt từ protein Trước gắn hạt từ với protein A/G, nồng độ protein sử dụng thời gian phản ứng khảo sát Trong đó, protein A/G thay protein BSA, điều tương đồng với nghiên cứu Trịnh Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 Hình 1: Chiến lược gắn protein lên bề mặt hạt từ thông qua SPDP (Thermo Fisher) Minh Thượng cộng Nồng độ protein BSA sử dụng 20 μg/ml, 40 μg/ml, 60 μg/ml, 80 μg/ml, 100 μg/ml Việc đánh giá hình thành liên kết hạt từ protein thực phương pháp điện di SDS-PAGE Mẫu hạt từ gắn BSA sau rửa sạch, nồng độ xử lý đồng thời với dung dịch biến tính protein khơng bổ sung DTT có bổ sung DTT Đối với mẫu không xử lý với DTT, protein gắn kết bề mặt hạt từ không bị cắt nên bị giữ lại giếng kích thước phức hợp hạt từ-BSA lớn so với lỗ gel; mẫu xử lý với DTT protein bị cắt đứt khỏi hạt từ, xuất vạch protein gắn kết với hạt từ gel (Hình 2) Kết SDS-PAGE hạt từ sau ủ với BSA cho thấy giếng có mẫu hạt xử lý với chất khử (giếng 3, 5, 7, 10, 12, Hình 2) có xuất vạch protein BSA (xấp xỉ 67 kDa, giếng 1, Hình 2) Đối với giếng có mẫu hạt không xử lý với chất khử (giếng 2, 4, 6, 9, 11, Hình 2) khơng có xuất vạch protein Điều chứng tỏ liên kết hình thành BSA hạt từ liên kết bền, không bị đứt gãy điều kiện chất tẩy mạnh nhiệt độ cao Liên kết liên kết cộng hóa trị hình thành nhóm chức -NH2 bề mặt hạt từ gốc -NH2 protein thông qua chất xúc tác SPDP Để xác định nồng độ BSA phản ứng phù hợp, hạt từ ủ với protein BSA với nồng độ 20, 40, 60, 80, 100 μg/ml Phần dịch BSA sau ủ rửa với hạt từ định lượng phương pháp Bradford Lượng BSA hấp thụ tính hiệu số lượng BSA đầu vào lượng BSA sau ủ rửa với hạt từ Từ kết định lượng BSA thể ởHình cho thấy lượng BSA hấp thu cao với nồng độ BSA 100 μg/ml (58,35 ± 4,43 μg) giảm dần tới nồng độ BSA 20 μg/ml (23,82 ± 3,54 μg) Tuy nhiên, phân tích số liệu phương pháp thống kê t-test không bắt cặp lượng protein BSA gắn bề mặt hạt từ nghiệm thức 40 μg/ml, 60 μg/ml, 80 μg/ml, 100 μg/ml cho kết không khác biệt mang ý nghĩa thống kê, có nghĩa lượng BSA gắn bề mặt hạt từ bốn nồng độ mặt thống kê Với mục tiêu tiết kiệm protein, nồng độ 40 μg/ml chọn để tiến hành thử nghiệm khảo sát thời gian Sau nồng độ protein tối ưu gắn bề mặt hạt từ xác định, thời gian gắn hạt từ với protein khảo sát với hai mốc thời gian 18 Kết cho thấy lượng protein gắn lên bề mặt hạt từ hai thời điểm khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê Lượng protein BSA gắn nghiệm thức 48,21 ± 5,22 μg mg hạt từ, nghiệm thức 18 46,72 ± 4,21 μg mg hạt từ (Hình 4) Điều chứng tỏ sau phản ứng, lượng protein BSA gắn bề mặt hạt từ đạt ngưỡng tối đa, protein khơng thể bám thêm lên bề mặt thời gian phản ứng tăng lên Sau tiến hành khảo sát thông số gắn kết protein tối ưu, protein A/G gắn kết với hạt từ nồng độ 40 μg/ml thời gian phản ứng Kết 76 Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 Hình 2: Đánh giá gắn kết protein hạt từ phương pháp SDS-PAGE M, Thang; 1, 8, BSA; 2-3, Nghiệm thức 20 μg/ml BSA gắn lên 0,25 mg hạt từ; 4-5, Nghiệm thức 40 μg/ml BSA gắn lên 0,25 mg hạt từ; 6-7, Nghiệm thức 60 μg/ml BSA gắn lên 0,25 mg hạt từ; 9-10, Nghiệm thức 80 μg/ml BSA gắn lên 0,25 mg hạt từ; 11-12, Nghiệm thức 100 μg/ml BSA gắn lên 0,25 mg hạt từ; 2, 4, 6, 9, 11, Xử lý điều kiện không khử; 3, 5, 7, 10, 12, Xử lý điều kiện khử Hình 3: Lượng protein BSA gắn mg hạt (μg) SDS-PAGE nhằm đánh giá liên kết hạt từ protein A/G thể Hình Kết cho thấy, có xuất vạch protein A/G (xấp xỉ 50,5 kDa) giếng tương đương với vạch protein giếng chứa protein A/G Ở giếng 2, hạt không xử lý điều kiện khử, đó, khơng có vạch protein xuất Điều chứng tỏ protein A/G cố định bề mặt hạt từ thơng qua liên kết cộng hóa trị hình thành nhờ chất xúc tác SPDP Đồng thời, kết gắn kết protein cho thấy, hạt từ có khả gắn kết 85,72 ± 9,08 μg protein A/G mg 77 hạt Gắn kết kháng thể lên hạt từ- A/G Hạt từ-A/G tiến hành ủ với kháng thể kháng tế bào Jurkat T Sau ủ với kháng thể, hạt từ rửa tiến hành dung ly, mẫu hạt từ trước sau dung ly dịch dung ly xử lý điện di SDS-PAGE Kết điện di thể Hình Kết cho thấy xuất vạch protein tương ứng với vạch kháng thể IgG thỏ bao gồm chuỗi nặng (50 kDa) chuỗi nhẹ (25 kDa) giếng Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 Hình 6: Đánh giá khả bắt kháng thể hạt từ PTN A/G phương pháp SDS-PAGE M, thang; 1, Protein A/G; 2, Kháng thể IgG; 3, Hạt từ-A/G trước dung ly kháng thể; 4, Hạt từ-A/G sau dung ly kháng thể; 5, Dịch dung ly kháng thể Hình 4: Khảo sát thời gian phản ứng hạt từ protein BSA chứa mẫu IgG đối chứng, giếng chứa hạt từ trước dung ly giếng chứa dịch dung ly Đồng thời, giếng Hình 5: Đánh giá khả gắn kết hạt từ protein A/G phương pháp SDS-PAGE M, Thang; 1, Xử lý điều kiện khử; 2, Xử lý điều kiện không khử; 3, Protein A/G chứa hạt từ sau dung ly không thấy diện vạch protein tương ứng với chuỗi nặng chuỗi nhẹ kháng thể mà thấy vạch protein tương ứng với protein A/G Điều khẳng định gắn kết kháng thể thỏ IgG bề mặt hạt từ Lượng kháng thể gắn bề mặt hạt từ định lượng phương pháp Bradford Kết định lượng cho thấy mg hạt từ gắn 21,87 ± 1,69 μg kháng thể Đánh giá khả phân tách tế bào Jurkat T từ môi trường nuôi cấy Hạt từ miễn dịch sau gắn với kháng thể ủ với tế bào Jurkat T để kiểm tra khả phân tách tế bào Kết đếm tế bào pha dịch pha hạt thể Bảng Lượng tế bào thu pha hạt tương đương với 53,3% so với tổng số tế bào trước phân tách (1,33 so với 2,5x105 ) Lượng tế bào có pha hạt 78 Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 Bảng 1: Kết phân tách tế bào hạt từ miễn dịch quần thể tế bào Jurkat T Số lượng tế bào (x105 tế bào) Jurkat T Nghiệm thức Lần Lần Lần 3,00 2,25 2,25 Pha dịch 1,5 1,00 1,00 Pha hạt 1,5 1,25 1,25 Tổng tế bào trước phân tách Số tế bào sau phân tách Hình 7: Hiệu suất phân tách riêng lẻ tế bào Jurkat T hạt từ miễn dịch khả phân tách tế bào hạt từ với hiệu suất phân tách tế bào khỏi quần thể tế bào Jurkat T đạt 53,3% (Hình 7) Mặc dù hiệu suất chưa cao, thấp so với hiệu suất hạt từ thương mại gắn với kháng thể (95,2% tế bào/0,5 mg hạt), cải thiện so với đề tài trước gần 16% Nguyên nhân hạt từ nghiên cứu trước cho hiệu suất phân tách thấp hạt chức hóa bề mặt với gốc –CDI, không bền dung môi phân cực, làm cho việc gắn kết protein A/G không hiệu quả, dẫn đến việc phân tách tế bào T không đạt hiệu suất tốt Trong nghiên cứu này, hạt từ -NH2 thay thế, nhóm bền dung mơi phân cực dễ dàng phản ứng với protein thông qua SPDP Điều cho thấy tiềm việc cải tiến ứng dụng hạt từ chức hóa với nhóm -NH2 cho mục tiêu phân tách tế bào lympho T hỗn hợp tế bào gốc máu KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy tạo thành công hạt từ miễn dịch kháng tế bào Jurkat T hạt từ miễn dịch có khả nhận diện phân tách 53,3% tế bào Jurkat T Từ kết nghiên cứu trên, quy trình gắn protein lên hạt từ gắn kháng thể lên hạt từ yếu tố cần cải tiến nhằm nâng cao 79 hiệu suất phân tách tế bào Đồng thời cần tiến hành thí nghiệm đánh giá khả phân tách hạt từ hỗn hợp tế bào Jurkat T tế bào gốc tạo máu DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT GvHD: Graft vesus Host Disease MACS: Magnetic-Activated Cells Sort SPDP: 3-(2-pyridyldithio) propionic hydroxysuccinimide ester CDI: Carbonyldiimidazole BSA: Bovine serum albumin DTT: Dithiothreitol SDS-PAGE: sodium dodecyl polyacrylamide gel electrophoresis TNF: Tumor Necrosis Factor acid N- sulphate- XUNG ĐỘT LỢI ÍCH Các tác giả tun bố họ khơng có xung đột lợi ích ĐĨNG GĨP CỦA TÁC GIẢ Huỳnh Kiến Quang Trần Văn Hiếu tiến hành thiết kế thí nghiệm, thu thập số liệu, xử lý kết tham gia viết Trần Văn Thuận, Trần Nguyễn Thảo Sương, Tạ Thị Kiều Hạnh tiến hành thu thập số liệu xử lý kết Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ – Khoa học Tự nhiên, 3(2):74-81 TÀI LIỆU THAM KHẢO Passweg J, Baldomero H, Bader P, Bonini C, Cesaro S, Dreger P Hematopoietic stem cell transplantation in Europe 2014: more than 40 000 transplants annually Bone marrow transplantation Villa NY Rahman MM, McFadden G, Cogle CR Therapeutics for graft-versus-host disease: from conventional therapies to novel virotherapeutic strategies Viruses;2016(8) Plouffe BD, Murthy SK, Lewis LH Fundamentals and application of magnetic particles in cell isolation and enrichment: a review Physics;2014(78) Reports on Progress in Lee W, Tseng P, Di-Carlo D Microtechnology for cell manipulation and sorting Springer; 2017 Mai HTX, Thượng TM, Hiếu TV Tạo thu nhận chọn lọc kháng thể IgG kháng protein màng tế bào T Jurkat Tạp chí Phát triển Khoa học Cơng nghệ ĐHQG-HCM;2016(19) Ta TKH, Trinh M-T, Long NV, Nguyen TTM, Nguyen TLT, Thuoc TL, et al Synthesis and surface functionalization of Fe3O4-SiO2 core-shell nanoparticles with 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane and 1,1′ carbonyldiimidazole for bio-applications Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects;2016(504) 80 Science & Technology Development Journal – Natural Sciences, 3(2):74- 81 Research Article Genaration and assessment of immunomagnetic nanoparticles capable of T- cell removal Kien-Quang Huynh1 , Thuan Van Tran1 , Thao-Suong Tran-Nguyen1 , Kieu-Hanh Thi Ta2 , Hieu Tran-Van1,* ABSTRACT Hematopoietic stem cells (HSCs) transplantation has been the potential treatment for hematopoietic disorder patients However, once they were prescribed HSCs transplantation as the therapy, especially allogeneic transplantation, they would face Graft versus Host disease (GvHD), which causes by the presence of T cells in donor tissue To deal with the risk of GvHD, removal T cells in donor tissue prior to transplant to recipient is extremely indispensable Nowadays, MACS technique using immuno-magnetic nanoparticles in order to deplete T cells shows potential solution in the transplantation In this study, we prepared immuno-magnetic nanoparticles for separation of Jurkat T cells from cell culture Anti-Jurkat T antibodies were conjugated onto magnetic nanoparticles via recombinant protein A/G, an antibody's Fc-specific binding protein The bonds between protein A/G and immuno-magnetic nanoparticles were covalently linked by amine groups on the surface of magnetic nanoparticles and the protein through 3-(2-pyridyldithio) propionic acid Nhydroxysuccinimide ester (SPDP) Approximately 85 µ g of protein A/G and 21 µ g of antibody were bound to one mg of magnetic beads The immuno-magnetic nanoparticles were capable of isolating up to 53.3% of Jurkat T cells from culture medium Key words: Allogeneic hematopoietic stem cell transplant, GvHD, immunomagnetic nanoparticles, MACS Department of Molecular and Environmental Biotechnology, Faculty of Biology and Biotechnology, University of Science, VNU-HCM Department of Magnetic and Biomedical Materials, Faculty of Materials Science and Technology, VNU-HCM Correspondence Hieu Tran-Van, Department of Molecular and Environmental Biotechnology, Faculty of Biology and Biotechnology, University of Science, VNU-HCM Email: tvhieu@hcmus.edu.vn History • Received: 03-12-2018 • Accepted: 24-4-2019 • Published: 24-6-2019 DOI : https://doi.org/10.32508/stdjns.v3i2.802 Copyright © VNU-HCM Press This is an openaccess article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution 4.0 International license Cite this article : Huynh K, Tran T V, Tran-Nguyen T, Ta K T, Tran-Van H Genaration and assessment of immunomagnetic nanoparticles capable of T- cell removal Sci Tech Dev J - Nat Sci.; 3(2):74-81 81 ... phù t bào sau đánh dấu đ t từ trường mạnh, t bào đánh dấu t trường di chuyển t p trung nơi có lượng t trường, t dễ dàng thu t bào mục tiêu Trong nghiên cứu này, tiến hành t o h t từ miễn dịch. .. k t h t từ protein Việc t o liên k t h t từ protein A/G (Biobasic) tiến hành sau có thơng số t i ưu sau khảo s t với BSA T o liên k t h t từ- A/G với kháng thể kháng t bào Jurkat T (anti-pan T) ... Pha dịch 1,5 1,00 1,00 Pha h t 1,5 1,25 1,25 T ng t bào trước phân t ch Số t bào sau phân t ch Hình 7: Hiệu su t phân t ch riêng lẻ t bào Jurkat T h t từ miễn dịch khả phân t ch t bào h t từ