Đánh giá độc tính của xi măng nhựa tự dán lưỡng trùng hợp (G Cem) qua rào cản ngà trên tế bào nguyên bào sợi 3T3, so sánh với xi măng Glass Ionomer tăng cường nhựa (Fuji Plus) và xi măng Glass Ionomer (Fuji I).
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học ĐỘC TÍNH CỦA XI MĂNG NHỰA TỰ DÁN QUA RÀO CẢN NGÀ TRÊN NGUYÊN BÀO SỢI CHUỘT 3T3 Đặng Thị Lan Anh*, Trần Xuân Vĩnh** TÓM TẮT Mục tiêu: Đánh giá độc tính xi măng nhựa tự dán lưỡng trùng hợp (G Cem) qua rào cản ngà tế bào nguyên bào sợi 3T3, so sánh với xi măng Glass Ionomer tăng cường nhựa (Fuji Plus) xi măng Glass Ionomer (Fuji I) Phương pháp nghiên cứu: Thu thập 48 khôn hàm Tiến hành tạo xoang I mặt nhai Sau tách rời thân răng, thu bề mặt ngà phẳng bề dày lớp ngà lại điều chỉnh 0,5mm Sau đó, chia xoang thành nhóm đặt vào ba loại xi măng: Nhóm I: Fuji I, Nhóm 2: Fuji Plus, Nhóm 3: G Cem Dùng sáp inay dán kín bề mặt xoang Các thân ngâm môi trường nuôi cấy 24 độc tính dung dịch thu nguyên bào bào sợi 3T3 đánh giá định lượng qua thử nghiệm MTS nồng độ Dữ liệu phân tích phép kiểm Kruskall Wallis phép kiểm MannWhitney độ tin cậy 95% Kết quả: Các loại xi măng gây giảm tỉ lệ tế bào sống nguyên bào sợi 3T3, theo thứ tự: Fuji I gây giảm tỉ lệ tế bào sống nhất, Fuji Plus gây giảm tỉ lệ tế bào sống trung bình, G Cem gây giảm tỉ lệ tế bào sống cao Tuy nhiên loại xi măng không gây độc cấp tính (ISO 10993-5:2009) (tỉ lệ tế bào sống >70%) Kết luận: Nghiên cứu sử dụng mơ hình rào cản ngà răng, điều mô thực tế lâm sàng, xi măng gắn không tiếp xúc trực tiếp mà ngăn cách với mơ tủy qua bề dày lớp ngà lại Khi bề dày lớp ngà >= 0,5mm xi măng gắn khơng gây độc (độc cấp tính) với tế bào (ISO 10993-5:2009) Từ khóa: Tương hợp sinh học, độc tính tế bào, thử nghiệm rào cản ngà, xi măng nhựa tự dán, nguyên bào sợi 3T3 ABSTRACT CYTOTOXICITY OF SELF ADHESIVE RESIN CEMENT BY DENTIN BARRIER TEST ON 3T3 MOUSE FIBROBLASTS Dang Thi Lan Anh, Tran Xuan Vinh * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: 5- 11 Objectives: The present study evaluated the cytotoxic effects of self adhesive resin cement (G Cem) by dentin barrier test on 3T3 fibroblasts, compared with Resin Modified Glass Ionomer cement (Fuji Plus) and Glass Ionomer cement (Fuji I) Method: Fourty-eight human upper wisdom teeth were included Class I cavity preparations were prepared on occlusal surfaces After crown separation, a flat dentinal surface was provided and RDT (remaining dentinal thickness) was adjusted at 0.5 mm Then, cavities were treated in three groups with experimental cements: Group 1: Fuji I, Group 2: Fuji Plus, Group 3: G Cem Blue inlay wax sealed the cavities Crowns were immersed in culture medium for 24 hours and the cytotoxicity of the resultant toxic medium on 3T3 mouse fibroblast was measured quantitatively with MTS assay in serial dilutions Data were analyzed with Kruskall Wallis test and Mann-Whitney test at 95% significance level Results: All experimental materials decreased the cell metabolic activity: Fuji I decreased the cell survival * Bệnh viện Răng Hàm Mặt Trung Ương, thành phố Hồ Chí Minh **Bộ mơn Nha khoa sở, Khoa Răng-Hàm-Mặt, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: : TS Trần Xuân Vĩnh ĐT: 0946920818 Email: vinhdentist@yahoo.com Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 rate the least, Fuji Plus came next, G Cem decreased the cell survival rate the most However, all cements did not cause acute cytotoxicity (ISO 10993-5:2009)( all cell survival rate >70%) Conclusion: The study used the dentin barrier model, which simulates clinical reality, cement that does not contact directly but separates from the pulp tissue through the remaining dentinal thickness When the thickness of dentin>= 0.5mm, cement is not toxic (acute toxic) to the cell (ISO 10993-5: 2009) Keywords: Biocompatibility, cytotoxicity, dentin barrier test, self ahesive resin cement, 3T3 mouse fibroblast MỞ ĐẦU 2009, Ulker HE Sengun A(14) kết luận trừ Từ thực tế gắn phục hình cố định tủy sống, có tiếp xúc trực tiếp xi măng gắn với phức hợp ngà tủy, cho nguyên nhân gây nhạy cảm ê buốt sau can thiệp Do đó, ngồi đặc điểm học đảm bảo khả gắn dính, đặc điểm tương hợp sinh học xi măng gắn yêu cầu quan trọng cần thiết MaxCem, loại xi măng nhựa tự dán gây độc So sánh với xi măng gắn truyền thống xi măng Glass Ionomer (GIC) Glass Ionomer tăng cường nhựa (RMGIC), xi măng nhựa có ưu điểm thẩm mỹ khả gắn dính Tuy nhiên xi măng cho gây độc chứa monomer nhựa qui trình xử lí ngà acid trước gắn làm tăng tính thấm ngà Xi măng nhựa tự dán đời năm 2002, với đặc điểm: lưỡng trùng hợp đảm bảo chất lượng polymer hóa xi măng, kết hợp tác nhân dán xi măng sản phẩm, rút gọn qui trình gắn gồm bước, giảm thời gian lâm sàng Do không cần bước xử lí bề mặt trước gắn, lớp mùn tế bào Trong đó, năm 2016, Fonseca(3) kết luận xi măng nhựa tự dán không gây độc cho tế bào Từ kết luận khác vậy, cho thấy vấn đề cần nghiên cứu thêm Nhiều nghiên cứu độc tính tế bào in vitro dựa đánh giá mức độ sống tế bào tiếp xúc với dịch chiết trực tiếp vật liệu Tuy nhiên, thực tế, khả gây độc vật liệu nha khoa, phụ thuộc vào khả vật liệu khuếch tán qua ngà tích lũy tủy nồng độ đủ cao để gây vấn đề tủy Vì vậy, mơ hình sử dụng rào cản ngà phương pháp tốt để đánh giá độc tính tủy vật liệu nha khoa Vì vậy, nghiên cứu in vitro thực nhằm đánh giá độc tính xi măng nhựa tự dán lưỡng trùng hợp (G-Cem) qua rào cản ngà tế bào nguyên bào sợi 3T3, so sánh với hai loại xi măng thông dụng xi măng Glass Ionomer tăng cường nhựa (Fuji Plus) xi măng Glass Ionomer (Fuji I) ngà không bị loại bỏ, nên cho không gây ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU nhạy cảm sau gắn Sự dán dính vào cấu trúc Đối tượng nghiên cứu mơ khơng có hình thành Dòng tế bào ngun bào sợi chuột 3T3 cung cấp từ phòng thí nghiệm trung tâm sinh học phân tử trường Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh nhựa ống ngà(2), từ ngăn chặn làm giảm tác động gây hại cho tủy(6,14) Với tính thuận tiện đa năng, xi măng nhựa tự dán nhiều nhà lâm sàng lựa chọn Tuy nhiên, nghiên cứu đánh giá độc tính tế bào xi Các loại xi măng sử dụng nghiên cứu (Bảng 1) măng chưa thực nhiều Năm Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Bảng Các loại xi măng sử dụng nghiên cứu Vật liệu Loại Fuji I GIC Số lô Cơ chế đơng 1607111 Hóa học Fuji Plus RMGIC 1605261 Hóa học Xi măng nhựa 1511261 tự dán Lưỡng trùng hợp G cem Thành phần Bột: fluoroaluminosilicate glass Lỏng: polyacrylic acid, nước, Bột: fluoroaluminosilicate glass; Lỏng: copolymer of acrylic and maleic acids, HEMA, UDMA, tartaric acid, nước, chất khơi mào hóa trùng hợp Bột: fluoro-aluminio-silicate glass Lỏng: thành phần nhựa có tính axit, nước, UDMA, Dimethacrylates, 4-META, phosphoric ester monomer, camphorquinone Quy trình nghiên cứu Bốn mươi tám thân khôn hàm cắt rời khỏi chân Sau đó, bề mặt phía thân mài bề mặt ngà phẳng ngang mức trần tủy (khơng thấy sừng tủy) Sau đó, từ phía mặt nhai thân răng, sửa soạn xoang hình trụ tròn với độ sâu xoang điều chỉnh bề dày ngà phía buồng tủy dày 0,5 mm Bề mặt ngà phía tủy xoi mòn với axit citric 50% 30 giây để loại bỏ lớp mùn ngà tác động mài Sau đó, hệ thống thân hấp tiệt trùng môi trường tất giếng, rửa nhẹ nhàng tế bào dung dịch muối đệm phosphate PBS Cho 100 µl dịch chiết xi măng vào giếng tương ứng (02 giếng/từng nồng độ dịch chiết loại xi măng) tiếp tục ủ 24 Sau 24 giờ, hút bỏ dịch chiết Rửa với 100 µl BPS Thêm vơ giếng 100 µl mơi trường DMEM 20 µl MTS, trộn đều, ủ trong tủ ủ 370C, 5% CO2 Tiến hành đo mật độ quang (OD) bước sóng 492 nm máy đo OD Mơ hình nghiên cứu sử dụng chứng âm môi trường DMEM/F12 chứng dương dịch chiết latex theo tiêu chuẩn ISO 10993-5:2009(12) Số đo OD chuyển thành tỷ lệ phần trăm tế bào sống theo cơng thức: Hình Hệ thống thân nghiên cứu Trộn loại xi măng theo hướng dẫn nhà sản xuất, cho vào xoang sửa soạn thân răng, chờ đến xi măng đông Sử dụng sáp cứng inlay (Kerr, USA) che kín bề mặt xoang phía mặt nhai thân Ngâm thân chứa xi măng vào môi trường DMEM/F12 theo tiêu chuẩn ISO 1099312:2012(13) Sau 24 giờ, thu dịch chiết xi măng nồng độ 100% (nồng độ 1) Pha loãng dịch chiết thành nồng độ 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 Chuyển tế bào 3T3 lên đĩa 96 giếng với mật độ 1x104 tế bào/ml ủ 24 Sau đó, hút bỏ Chuyên Đề Răng Hàm Mặt % Tế bào sống = 100 x OD492e OD492b OD492e: mật độ quang dịch chiết vật liệu OD492b: mật độ quang chứng âm Nếu tỉ lệ sống