Ảnh hưởng của nồng độ Sodium alginate, nồng độ môi trường và sucrose lên lưu trữ chồi in vitro của 2 giống lan dendrobium bằng kỹ thuật hạt nhân tạo

Để tạo hạt nhân tạo, chồi của 2 giống lan được bọc trong dung dịch sodium alginate (SA) nhờ quá trình trao đổi ion giữa SA và CaCl2. Kết quả nghiên cứu cho thấy, nồng độ SA 40 g/l bổ sung môi trường ½ MS và không bổ sung đường sucrose là thích hợp cho việc bảo quản chồi của giống lan Dendrobium lituiflorum Lindl. với tỷ lệ chồi sống và không nảy mầm bật ra khỏi hạt là 76,67% sau 42 ngày bảo quản.

AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ SODIUM ALGINATE, NỒNG ĐỘ MÔI TRƯỜNG VÀ SUCROSE LÊN LƯU TRỮ CHỒI IN VITRO CỦA GIỐNG LAN DENDROBIUM BẰNG KỸ THUẬT HẠT NHÂN TẠO Lê Thị Thúy1, Phạm Văn Lộc1, Trịnh Thị Hương1, Trần Thị Anh Thoa1, Trần Thị Cẩm Hường1, Trần Diễm Trinh1 Trường Đại học Công nghệ Thực Phẩm TP Hồ Chí Minh Thơng tin chung: Ngày nhận bài: 25/07/2018 Ngày nhận kết bình duyệt: 15/10/2018 Ngày chấp nhận đăng: 08/2019 Title: Effects of sodium alginate, medium and sucrose concentration on short term storage of In vitro shoot of two Dendrobium orchid species by artificial seed technique Keywords: Artificial seed, Dendrobium lituiflorum Lindl., Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl., in vitro, preservation Từ khóa: Dendrobium lituiflorum Lindl., Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl., in vitro, lan, hạt nhân tạo ABSTRACT Orchid flowers are favored in both spiritual and economic values Among them, there are Dendrobium lituiflorum Lindl and Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl that are beautiful and precious flowers At present, the preservation of in vitro orchids is concerned Artificial seed technique considered as an effective solution for short term storage of these valuable species In this study, artificial seeds were produced in vitro by encapsulation of shoot with different concentration of sodium alginate (SA) solution and 100 mM calcium chloride solution The result of this study indicated that the 40 g/l SA matrix, ½ Murashige and Skoog medium (MS) and no sugar were suitable for storage of in vitro shoot of Dendrobium lituiflorum Lindl While, artificial seed with 50 g/l SA matrix, ¼ MS and no sugar were suitable for preservation of in vitro shoot of Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl Shoots in artificial seeds were transplanted into the regenerating medium, indicating that the shoots were normal and the survival rate of shoots were 100% after 28 days TÓM TẮT Hiện nay, việc bảo quản giống lan in vitro vấn đề quan tâm Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật hạt nhân tạo để bảo quản chồi in vitro giống lan hoàng thảo Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl Dendrobium lituiflorum Lindl loại lan rừng quý hiếm, cho hoa bền đẹp Để tạo hạt nhân tạo, chồi giống lan bọc dung dịch sodium alginate (SA) nhờ trình trao đổi ion SA CaCl2 Kết nghiên cứu cho thấy, nồng độ SA 40 g/l bổ sung mơi trường ½ MS khơng bổ sung đường sucrose thích hợp cho việc bảo quản chồi giống lan Dendrobium lituiflorum Lindl với tỷ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt 76,67% sau 42 ngày bảo quản Trong đó, nồng độ SA 50 g/l bổ sung ¼ MS khơng bổ sung đường sucrose thích hợp cho việc bảo quản chồi Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl với tỷ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt 80% sau 56 ngày bảo quản Chồi giống lan sau thời gian bảo quản cấy sang môi trường tái sinh cho thấy chồi phát triển bình thường, tỷ lệ chồi tái sinh 100% sau 28 ngày theo dõi 72 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 thuật hạt nhân tạo; từ tìm nồng độ thích hợp yếu tố làm chậm sinh trưởng chồi lan, tăng thời gian bảo quản làm tiền đề cho nghiên cứu GIỚI THIỆU Lan loài hoa u thích màu sắc kiểu dáng sang trọng, trang nhã Ở Việt Nam, Dendrobium có đến 100 loài, phân biệt thân, hoa Dendrobium lituiflorum Lindl (D.lituiflorum Lindl.) Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl (D.polyanthum Wall Ex Lindl.) loài lan rừng Việt Nam thuộc chi Dendrobium cho hoa đẹp, màu sắc hoa phong phú, hoa có hương thơm lâu tàn VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Mẫu chồi lan D.lituiflorum Lindl 45 ngày tuổi tái sinh từ PLBs in vitro nuôi cấy môi trường MS bổ sung 15% nước dừa, 0,5 mg/l BA, 0,5 g/l than hoạt tính, g/l agar 30 g/l đường sucrose Trên thực tế, vi nhân giống loài lan trở nên phổ biến việc bảo quản chồi in vitro lan gặp nhiều khó khăn chồi có thời gian bảo quản ngắn, chiếm nhiều diện tích dễ tổn thương trình vận chuyển (Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên, 2006) Chồi in vitro phải cấy chuyền nhiều lần q trình bảo quản dẫn đến thối hóa thất giống Trước tình hình đó, nỗ lực tìm kiếm phương pháp bảo quản giống khơng ngừng tăng lên phương pháp tạo hạt nhân tạo Mẫu chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl 30 ngày tuổi, tái sinh từ PLBs in vitro nuôi cấy môi trường MS bổ sung 15% nước dừa, mg/l BA, 30 g/1 đường, g/l agar 0,5 g/l than hoạt tính Điều kiện ni cấy chồi: Chiếu sáng 16 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 2500 lux ± 500 lux, nhiệt độ: 25 oC ± oC 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Chuẩn bị loại môi trường Hạt nhân tạo dạng hạt mô hạt tự nhiên, điều kiện tối ưu hạt nảy mầm khỏi lớp vỏ nhân tạo, chuyển sang trạng thái ngừng sinh trưởng gặp điều kiện thuận lợi (Dương Tấn Nhựt, 2011) Trên giới, nhiều nghiên cứu tạo hạt nhân tạo để bảo quản PLBs loài lan khác thực cho kết khả quan lan Dendrobium Shavin White (Bustam cs., 2012), Aranda x Vanda coerulea (Mohanty cs., 2013), Cymbidium bicolor Lindl (Mahendran, 2014) Tại Việt Nam, nghiên cứu bảo quản vật liệu thực vật in vitro kỹ thuật hạt nhân tạo hạn chế chưa có nghiên cứu cơng bố việc bảo quản chồi lan Dendrobium kỹ thuật hạt nhân tạo Dung dịch vỏ hạt: Pha 100 ml môi trường có bột sodium alginate (SA) với nồng độ 30 g/l, 40 g/l, 50 g/l, khống MS (khơng có ion Ca2+) có nồng độ khác gồm MS, ½ MS, ¼ MS nước cất, bổ sung đường sucrose với nồng độ từ g/l – 50 g/l Đun cách thủy hỗn hợp SA tan hoàn toàn Dung dịch CaCl2.2H2O 100 mM: Cân 1,47 g CaCl2.2H2O hòa tan 100 ml nước cất (Trần Thị Ngọc Lan cộng sự, 2011) Tất dung dịch hấp khử trùng 121oC 15 phút Quy trình tạo hạt: Cụm chồi in vitro giống lan Dendrobium tách thành chồi riêng lẻ, cho chồi vào dung dịch vỏ hạt Sử dụng ống nhỏ giọt để hút hỗn hợp gồm chồi dung dịch vỏ hạt, nhỏ thành giọt vào dung dịch CaCl2.2H2O 100 mM Sau 30 phút hạt nhân Trong nghiên cứu này, trình bày kết ảnh hưởng nồng độ sodium alginate, thành phần môi trường nồng độ đường sucrose lên lưu trữ chồi in vitro giống lan Dendrobium kỹ 73 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 tạo có kích thước 0,5 cm – 0,6 cm tạo thành rửa lại lần nước cất vô trùng Môi trường sinh trưởng chồi lan: Mơi trường khống MS bổ sung 30 g/l đường g/l agar Môi trường tạo vỏ hạt mơi trường gồm có SA nồng độ tốt thí nghiệm 1, mơi trường khống tốt thí nghiệm bổ sung đường sucrose với nồng độ thay đổi từ g/l đến 50 g/l Sau tạo hạt nhân tạo theo quy trình mơ tả, hạt bảo quản chai thủy tinh trắng, khơng chứa dung dịch bảo quản Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên gồm nghiệm thức với lần lặp lại, lần 10 hạt nhân tạo Sau 14 ngày bảo quản, quan sát tỉ lệ chồi sống khơng nảy mầm bật khỏi hạt (%) Thí nghiệm kết thúc tỷ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt gần 50%, cấy hạt sang môi trường tái sinh quan sát tỷ lệ chồi tái sinh phát triển bình thường (%) sau 28 ngày 2.2.2 Các thí nghiệm Ảnh hưởng nồng độ sodium alginate đến bảo quản chồi lan: Môi trường tạo vỏ hạt với thay đổi nồng độ SA 30 g/l, 40 g/l 50 g/l, bổ sung mơi trường MS khơng có ion Ca2+ 30 g/l đường sucrose Sau tạo hạt nhân tạo theo quy trình mơ tả, hạt bảo quản chai thủy tinh trắng, không chứa dung dịch bảo quản Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên gồm nghiệm thức với lần lặp lại, lần 10 hạt nhân tạo Sau 14 ngày bảo quản, quan sát tỉ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt (%) Thí nghiệm kết thúc tỷ lệ hạt sống không nảy mầm bật khỏi hạt gần 50%, cấy hạt sang môi trường tái sinh quan sát tỷ lệ chồi tái sinh, phát triển bình thường (%) sau 28 ngày 2.2.3 Điều kiện thí nghiệm Thí nghiệm thực phòng Thí nghiệm công nghệ sinh học thực vật trường Đại học cơng nghiệp Thực phẩm TP Hồ Chí Minh với điều kiện: Chiếu sáng 16 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 2500 lux ± 500 lux, nhiệt độ: 25 oC ± oC 2.2.4 Xử lý số liệu Ảnh hưởng môi trường khoáng vỏ hạt nhân tạo đến bảo quản chồi lan Tất thí nghiệm lặp lại lần, ghi nhận số liệu xử lý thống kê phần mềm Statgraphics Centurion XV Sự sai biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05 Mơi trường tạo vỏ hạt có nồng độ SA tốt thí nghiệm 1, mơi trường khống có nồng độ thay i gm MS, ẵ MS, ẳ MS, nc ct (khơng bổ sung mơi trường khống) 30 g/l đường sucrose Sau tạo hạt nhân tạo theo quy trình mô tả, hạt bảo quản chai thủy tinh trắng, khơng chứa dung dịch bảo quản Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên gồm nghiệm thức với lần lặp lại, lần 10 hạt nhân tạo Sau 14 ngày bảo quản, quan sát tỉ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt (%) Thí nghiệm kết thúc tỷ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt gần 50%, cấy hạt sang môi trường tái sinh quan sát tỷ lệ chồi tái sinh phát triển bình thường (%) sau 28 ngày KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng nồng độ SA lên bảo quản chồi giống lan Dendrobium lituiflorum Lindl., Dendrobium polyanthum Wall Ex Lindl Đã có nhiều nghiên cứu hạt nhân tạo nhiều đối tượng khác chứng minh nồng độ SA có ảnh hưởng đến hình thành hạt, khả nảy mầm thời gian bảo quản hạt nhân tạo Khi tiến hành khảo sát ảnh hưởng nồng độ SA đến hình thành hạt bảo quản chồi lan D.lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl., thu kết bảng hình Ảnh hưởng nồng độ đường vỏ hạt nhân tạo đến bảo quản chồi 74 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 Bảng Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt tỷ lệ chồi tái sinh lan D lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl Nồng độ SA (g/l) Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt lan D lituiflorum Lindl (%) Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt lan D.polyanthum Wall Ex Lindl (%) 14 ngày 28 ngày 35 ngày 14 ngày 28 ngày 30 83,33a 50,00a 36,67a 33,33a 0,00 40 100,00b 63,33b 50,00b 73,33b 50 96,67 b 46,67a 33,33a 76,67b a Tỷ lệ chồi tái sinh (%) 35 ngày - 100 53,33ab 43,33a 100 60,00b 56,67b 100 Các chữ a,b,c, thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy p ≤ 0,05 phép thử Duncan Hình thái hạt nồng độ SA 30 g/l, 40 g/l, 50 g/l cho hạt tròn đều, bao bọc chồi, nồng độ 30 g/l, 40 g/l có độ cứng vừa phải, có nồng độ 50 g/l có vỏ hạt cứng Trên giống lan, nồng độ SA 30 g/l cho thấy chồi hạt nhân tạo phát triển mạnh bật khỏi hạt nhiều so với nghiệm thức khác Điều cho thấy nồng độ SA khơng có ý nghĩa bảo quản chồi giống lan nêu Khi nồng độ SA tăng lên 40 g/l 50 g/l, thời gian bảo quản chồi hạt tăng lên Đối với lan D.lituiflorum Lindl., nồng độ SA 40 g/l cho thời gian bảo quản cao 35 ngày với tỷ lệ hạt sống chồi không nảy mầm bật khỏi hạt 50% Khi nồng độ SA tăng lên 50 g/l chồi hạt chết dần, tỷ lệ hạt sống nghiệm thức giảm xuống Đối với lan D.polyanthum Wall Ex Lindl nồng độ SA vỏ hạt 50 g/l cho tỷ lệ chồi sống chồi không nảy mầm bật khỏi hạt cao Kết phù hợp với số nghiên cứu đối tượng như: loài Agave vera-cruz Mill Tejavathi cộng (2006), Địa lan (Cymbidium Madrit “Foest King”) Trần Thị Ngọc Lan cs (2011), lan Hồ điệp (Phalaenopsis amabilis) Dương Tấn Nhựt cs (2007), nghiên cứu kết cho thấy với nồng độ SA cao ngăn cản phát triển làm giảm nảy mầm hạt Sau thời gian bảo quản hạt, chồi giống lan cấy sang môi trường tái sinh, kết cho thấy tỷ lệ chồi sống, tái sinh 100% sinh trưởng bình thường sau 28 ngày theo dõi, điều chứng tỏ nồng SA 40 g/l 50 g/l không ảnh hưởng lên sức sống chồi sau thời gian bảo quản 75 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 A1 A5 A2 A3 A4 A6 A7 A8 Hình Hạt nhân tạo lan D polyanthum Wall Ex Lindl D.lituiflorum Lindl.; A1, A2, A3 hình hạt nhân tạo bảo quản chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl nồng độ SA 50 g/l lúc tạo, sau thời gian bảo quản 35 ngày chồi nảy mầm bật khỏi hạt; A4: chồi lan D polyanthum Wall Ex Lindl môi trường tái sinh sau 28 ngày; A5, A6, A7 hình hạt nhân tạo bảo quản chồi lan D.lituiflorum Lindl nồng độ SA 40 g/l lúc tạo, sau thời gian bảo quản 35 ngày chồi nảy mầm bật khỏi hạt; A8: chồi lan D.lituiflorum Lindl môi trường tái sinh sau 28 ngày 3.2 Ảnh hưởng môi trường vỏ hạt lên bảo quản chồi lan D.lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl Môi trường sử dụng để tạo vỏ hạt nhân tạo mơi trường MS MS giảm dần khống đa lng v vi lng nh ẵ MS, ẳ MS v nước cất Kết thể bảng hình 2: Bảng Tỷ lệ chồi sống – khơng bật khỏi hạt tỷ lệ chồi tái sinh lan D lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt chồi lan D lituiflorum Lindl (%) Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl.(%) 14 ngày 28 ngày 42 ngày 14 ngày 28 ngày 42 ngày MS 100a 53,33a 40,00bc 93,33a 60a 43,33a 100 ½ MS 100a 76,67b 46,67c 100b 76,67b 50,00ab 100 ¼ MS 100a 73,33b 36,67b 100b 83,33b 63,33c 100 Nước cất 100a 46,67a 0,00a 90a 76,67b 60bc 100 Môi trường Tỷ lệ chồi tái sinh (%) Các chữ a,b,c, thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy p ≤ 0,05 phép thử Duncan 76 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 B1 B2 B3 B4 B5 B6 Hình Hạt nhân tạo lan; B1, B2, B3 hình chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl hạt nhân tạo bổ sung khoáng ¼ MS sau thời gian bảo quản 42 ngày, chồi nảy mầm bật khỏi hạt chồi môi trường tái sinh sau 28 ngày; B4, B5, B6 là hình chồi lan D lituiflorum Lindl hạt nhân tạo bổ sung khống ½ MS sau thời gian bảo quản 42 ngày, chồi nảy mầm bật khỏi hạt chồi môi trường tái sinh sau 28 ngày Đối với lan D.lituiflorum Lindl., vỏ hạt nhân tạo với mơi trường MS ½ MS cho kết tốt so với mơi trường ¼ MS mơi trường khơng bổ sung khống (nước cất) với tỷ lệ hạt sống sót khơng có chồi nảy mầm bật khỏi hạt 40% 46,67% Mơi trường ¼ MS nước cất mơi trường chất dinh dưỡng, khơng có khả cung cấp đủ dinh dưỡng để trì sống cho chồi lan Aranda Wan Chark Kuan ‘Blue’ x Vanda coerulea Grifft Ex Lindl., cho thấy môi trường vỏ hạt bổ sung nồng độ khống giảm ½ MS làm giảm khả nảy mầm hạt nhân tạo Schnapp Preece (1986) chứng minh việc giảm hàm lượng khoáng MS làm giảm sinh trưởng cà chua cẩm chướng Bonnier Van Tuyl (1997) bảo quản bốn lồi lily cách giảm hàm lượng khống môi trường nuôi cấy Đối với lan D.polyanthum Wall Ex Lindl có tăng dần thời gian bảo quản nồng độ khống mơi trường vỏ hạt giảm dần Sau 42 ngày, chồi bảo quản môi trường khống ¼ MS có tỷ lệ chồi sống khơng nảy mầm khỏi hạt cao 63,33% Môi trường khơng bổ sung khống sau 35 ngày bảo quản nhiều chồi hạt dần chuyển màu, đến ngày 42 chồi bắt đầu chết Điều cho thấy giảm nồng độ khống mơi trường vỏ hạt có ý nghĩa bảo quản Tuy nhiên, giảm tới nồng độ định khống yếu tố khơng thể thiếu cho sống sót chồi vỏ hạt nhân tạo Gantait cộng (2012), nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng lên bảo quản lan 3.3 Ảnh hưởng nồng độ đường vỏ hạt lên bảo quản chồi lan D.lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl Đã có nhiều tác giả hướng đến việc kích thích trạng thái ngủ vật liệu hạt cách xử lý với nồng độ đường sucrose cao môi trường không bổ sung đường để ức chế tăng trưởng vật liệu Trong thí nghiệm này, nồng độ đường khác bổ sung vào môi trường vỏ hạt nhằm khảo sát ảnh hưởng đường đến trình bảo quản hạt thu kết bảng hình 77 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 Bảng Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt tỷ lệ chồi tái sinh lan D.lituiflorum Lindl D.polyanthum Wall Ex Lindl Nồng độ đường (g/l) Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt chồi lan D lituiflorum Lindl (%) Tỷ lệ chồi sống – không bật khỏi hạt chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl (%) 14 ngày 28 ngày 42 14 ngày Ngày 100a 90,00b 76,67b 100b 10 100a 86,67b 53,33a 20 100a 86,67b 30 100a 40 50 Tỷ lệ chồi tái sinh (%) 42 56 100c 93,33e 83,33c 100 96,67b 90,00bc 73,33cd 50,00ab 100 50,00a 83,33a 56,67a 43,33a - 100 76,67a 46,67a 100b 83,33b 60,00b - 100 100a 93,33b 70,00b 100b 90,00bc 63,33bc 40,00a 100 100a 93,33b 73,33b 100b 93,33bc 76,67d 53,33b 100 28 ngày Các chữ a,b,c, thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy p ≤ 0,05 phép thử Duncan Theo Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên (2006) cho giảm nồng độ đường xuống tốc độ tăng trưởng mẫu thực vật giảm Khi nồng độ đường tăng gây áp lực thẩm thấu kích thích chồi chuyển sang trạng thái ngủ Chính vậy, thời gian bảo quản hạt kéo dài cho kết tương tự Trong thí nghiệm giống lan, mơi trường không bổ sung đường cho thời gian bảo quản dài với tỷ lệ chồi sống không bật khỏi hạt cao Chồi môi trường tái sinh sau thời gian bảo quản có khả phục hồi phát triển bình thường Janeiro cs (1997) rằng, hạt nhân tạo không chứa sucrose lớp vỏ hạt cho tỷ lệ nảy mầm thấp so với phôi bọc vỏ hạt có bổ sung thêm đường Điều có ý nghĩa việc bảo quản hạt nhân tạo Đối với lan D.lituiflorum Lindl., nồng độ đường g/l, 40 g/l 50 g/l cho kết tốt nồng độ đường lại Tuy nhiên, chồi nồng độ đường 50 g/l có dấu hiệu vàng yếu Đối với lan D.polyanthum Wall Ex Lindl 78 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 C2 C1 C4 C3 C5 Hình Hạt nhân tạo lan; C1, C2, C3 hình chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl hạt nhân tạo không bổ sung đường sau thời gian bảo quản 56 ngày, chồi nảy mầm bật khỏi hạt chồi môi trường tái sinh sau 28 ngày; C4, C5 là hình chồi lan D.lituiflorum Lindl hạt nhân tạo không bổ sung đường sau thời gian bảo quản 42 ngày chồi nảy mầm bật khỏi hạt KẾT LUẬN Bustam, S., Sinniah, U.R., Kadir, M.A., Zaman, F.Q, Subramaniam, S (2013) Selection of optimal stage for protocorm like bodys and production of artificial seeds for direct regeneration on different media and short term storage of Dendrobium Shavin White Plant Growth Regul, 69: 215-24 Duong T.N., Tran T N T., M T N.H, N T T H, P.X.H, Vo Q.L, and Teixeira da Silva, J A (2005) Artificial seeds for propagation and preservation of Cymbidium spp Propagation of Ornamental Plants, 5(2), 67-73 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2006) Công nghệ tế bào, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Trần Thị Ngọc Lan, Hoàng Văn Cường, Hoàng Xuân Chiến, Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Du Sanh Dương Tấn Nhựt (2011) Nghiên cứu tạo hạt nhân tạo địa lan (Cymbidium madrit “Forest king” phục vụ công tác nhân giống bảo quản Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 9(4): 465 - 474 Gantait, S., Bustam, S., and Sinniah, U R (2012) Alginate-encapsulation, short-term storage and plant regeneration from PLBs of Aranda Wan Chark Kuan ‘Blue’× Vanda coerulea Grifft Hạt nhân tạo với lớp vỏ tạo từ 40 g/l sodium alginate bổ sung ½ MS khơng bổ sung đường sucrose thích hợp cho bảo quản chồi lan D.lituiflorum Lindl với tỷ lệ chồi sống không nảy mầm bật khỏi hạt cao Hạt nhân tạo với lớp vỏ tạo từ 50 g/l sodium alginate bổ sung ¼ MS khơng bổ sung đường sucrose lại thích hợp cho bảo quản chồi lan D.polyanthum Wall Ex Lindl với tỷ lệ sống không nảy mầm bật khỏi hạt 80% sau 56 ngày bảo quản LỜI CẢM TẠ Các tác giả xin chân thành cảm ơn Trường ĐH Công nghiệp Thực phẩm TP Hồ Chí Minh hỗ trợ kinh phí Phòng Thí nghiệm Công nghệ sinh học Thực vật tạo điều kiện để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bonnier, F J M and Van Tuyl, J M (1997) Long term in vitro storage lily: effects of temperature and concentration of nutrients and sucrose Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 49: 81-87 79 AGU International Journal of Sciences – 2019, Vol 23 (2), 72 - 80 Ex Lindl.(Orchidaceae) Plant Growth Regulation, 68(2): 303-311 Janeiro, L V., Ballester, A and Vieitez, A M (1997) In vitro response of encapsulated somatic embryos of camellia Plant cell, tissue and organ culture, 51(2): 119-125 Mahendran, G (2014) Encapsulation of Protocorm of Cymbidium bicolor Lindl for Short-Term Storage and Germplasm Exchange Journal of Ornamental Plants, (4): 17-27 Mohanty, P., Nongkling, P., Das, M C., Kumaria, S and Tandon, P (2013) Short-term storage of alginate-encapsulated protocorm-like bodies of Dendrobium nobile Lindl.: an endangered medicinal orchid from North-east India, Biotech, 3(3): 235-239 Murashige, T and Skoog, F (1962) A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures Physiologia plantarum, 15(3): 473-497 Dương Tấn Nhựt (2011) Công nghệ sinh học thực vật tập 1, NXB Nông Nghiệp Schapp, S R and Preece, J E (1986) In vitro growth reduction of tomato and carnation microplants Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 6: 3-8 Tejavathi, D H., Gayathramma, K., and Sowmya, R (2006) Production of plantlets from encapsulated in vitro shoot buds and somatic embryos of Agave vera-cruz Mill Plant Cell Biotechnology and Molecular Biology, 7(3-4): 183-186 80 ... sinh quan sát tỷ lệ chồi tái sinh phát triển bình thường (%) sau 28 ngày 2. 2 .2 Các thí nghiệm Ảnh hưởng nồng độ sodium alginate đến bảo quản chồi lan: Môi trường tạo vỏ hạt với thay đổi nồng độ. .. tới nồng độ định khống yếu tố thiếu cho sống sót chồi vỏ hạt nhân tạo Gantait cộng (20 12) , nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khoáng lên bảo quản lan 3.3 Ảnh hưởng nồng độ đường vỏ hạt lên bảo quản chồi. .. kỹ thuật hạt nhân tạo hạn chế chưa có nghiên cứu cơng bố việc bảo quản chồi lan Dendrobium kỹ thuật hạt nhân tạo Dung dịch vỏ hạt: Pha 100 ml mơi trường có bột sodium alginate (SA) với nồng độ