Đánh giá độc tính cấp và bán trường diễn của cốm bụp giấm trên chuột nhắt trắng

Bài viết trình bày việc đánh giá độc tính cấp (xác định LD50 hoặc Dmax) và độc tính bán trường diễn của cốm Bụp giấm trên chuột nhắt trắng.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CỐM BỤP GIẤM TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Lê Thị Lan Phương*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Mở đầu: Cốm Bụp giấm loại chế phẩm dạng hạt hòa tan, bào chế từ nguồn nguyên liệu bột sấy phun đài hoa Bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) phối hợp với số tá dược Trong nghiên cứu trước, cốm Bụp giấm xây dựng tiêu chuẩn sở chứng minh có hiệu điều trị rối loạn lipid máu thực nghiệm Đánh giá độc tính chế phẩm động vật thử nghiệm bước nghiên cứu quan trọng để tìm hiểu độc tính có chế phẩm, từ đưa khuyến cáo trước tiến hành thử nghiệm lâm sàng, góp phần đưa chế phẩm vào sử dụng cho bệnh nhân Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá độc tính cấp (xác định LD50 Dmax) độc tính bán trường diễn cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Chế phẩm cốm Bụp giấm (BSP Bụp giấm, manitol, aspartam, nước cất) đóng gói kín, tránh ẩm ánh sáng, khối lượng g (± 5%), chứa 0,123% delphinidin-3-Osambubiosid 0,034% cyanidin-3-O-sambubiosid Nghiên cứu thực chuột nhắt trắng, giống đực giống cái, chủng Swiss albino Trong nghiên cứu độc tính cấp, chuột thử nghiệm sử dụng chế phẩm với liều nhất, đường uống, tiến hành qua giai đoạn sơ khởi giai đoạn xác định Trong nghiên cứu độc tính bán trường diễn, chuột thử nghiệm sử dụng cốm Bụp giấm đường uống, liều 0,4 g/kg (liều tối ưu có tác dụng), 0,8 g/kg g/kg 12 tuần liên tục, lơ 20 chuột Đánh giá độc tính biểu hành vi, mức độ ăn, uống, cân nặng, số sinh hóa (AST, ALT, cholesterol tồn phần, triglycerid máu, creatinin huyết, acid uric, glucose), số huyết học (số lượng hồng cầu, hematocrit, hemoglobin, số lượng hemoglobin trung bình, nồng độ hemoglobin trung bình, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu), số trọng lượng gan, thận, lách vi thể gan, thận chuột Kết quả: Liều tối đa cốm Bụp giấm cho động vật thử nghiệm uống mà khơng có động vật chết (Dmax) 15 g/kg chuột Cốm Bụp giấm sử dụng 12 tuần liên tục mức liều 0,4 g/kg, 0,8 g/kg g/kg làm giảm cân nặng chuột tuần thứ từ tuần thứ đến tuần thứ 12 Lô chuột sử dụng cốm Bụp giấm liều 0,4 g/kg có số glucose giảm 14% (p < 0,05) sau tuần 13% (p < 0,01) sau 12 tuần, số MCH (số lượng hemoglobin trung bình) giảm có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) sau 12 tuần Lô chuột sử dụng cốm Bụp giấm liều g/kg có vi phẫu thận , 8/10 mẫu mức độ nhẹ, 2/10 mẫu mức độ trung bình so với lô chứng uống nước cất sau 12 tuần Các biểu số khác lô sử dụng cốm Bụp giấm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng uống nước cất Kết luận: Cốm Bụp giấm có độ an tồn cao Tuy nhiên, sử dụng cốm Bụp giấm thời gian dài làm ảnh hưởng đến số thông số giảm cân nặng, giảm glucose máu MCH Khi sử dụng cốm Bụp giấm liều cao (4 g/kg chuột) 12 tuần gây viêm mô kẽ thận mức độ nhẹ so với lô chứng uống nước cất Từ khóa: Cốm Bụp giấm, Hibiscus sabdariffa L Malvaceae, Dmax, LD50 * Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS.DS Lê Thị Lan Phương ĐT: 0907748591 Email: ltlphuong@ump.edu.vn 25 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 ABSTRACT STUDYING ACUTE TOXICITY AND SEMI-CHRONIC TOXICITY OF BUP GIAM GRANULES IN MICE Le Thi Lan Phương, Nguyen Phuong Dung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 25 – 33 Background: Bup giam granules are dissolving granules, made from dry powder of Bup giam (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) calyx and some adjuvants In previous studies, quality standard of Bup giam granules was formulated and the efficacy in the treatment dyslipidemia of Bup giam granules in mice was proved Evaluating the toxicity of drug in animals is one of the important stages to investigate the possible toxicity of drug, thereby recommending precautions prior to conducting further clinical studies as well as contributing to the preparation of a new drug utilized in patients Objectives: The study was undertaken to evaluate the acute toxicity (determine LD50 or Dmax) and semichronic toxicity of Bup giam granules in mice Methods: Bup giam granules are prepared from dry powder of Bup giam calyx, manitol, aspartame and distilled water The composition is sealed in a package in order to avoid moisture and light Each package weights g (± 5%) and contains 0.123% delphinidin-3-O-sambubiosid and 0.034% cyanidin-3-Osambubiosid This study was performed in white mice, both male and female, Swiss albino strain In the acute toxicity study, mice administered a single oral dose This research proceeded through the initial and definitive stages In the semi-chronic toxicity study, mice were given Bup giam granules at dose level of 0.4 g/kg (effective dose), 0.8 g/kg and g/kg during 12 weeks, 20 mice each group Toxicity was measured through activities, eating and drinking capacity of mice, weight, biochemical tests (AST, ALT, total cholesterol, triglyceride, creatinine, uric acid, glucose) and hematology tests (hematocrit, hemoglobin, mean hemoglobin, mean hemoglobin concentration, average red cell volume, white blood cell count, platelet count), weight of liver, weight of kidney, weight of spleen, liver and kidney microscope Results: The maximum recommended dose of Bup giam granules which were given to mice without any death (Dmax) was 15 g/kg Bup giam granules were used for 12 weeks at doses of 0.4 g/kg, 0.8 g/kg and g/kg all reduced the weight of mice after 5th weeks and from 8th weeks to 12th weeks The mice received 0.4 g/kg of Bup giam granules had lower glucose level by 14% (p < 0.05) after weeks and by 13% (p < 0.01) after 12 weeks MCH (mean number of hemoglobin) decreased significantly (p < 0.05) after 12 weeks The group used Bup giam granules at the dose of g/kg showed indication of mild kidney inflammation after 12 weeks Other results were not statistically different compared to the control group Conclusions: Bup giam granules are relatively safe However, using Bup giam granules in long-term may cause some abnormal affects such as weight loss, reduction blood glucose level and reduction the number of MCH There was mild kidney inflammation in mice using Bup giam granules with high dose (4 g/kg mouse weight) during 12 weeks Keywords: Bup giam granules, Hibiscus sabdariffa L Malvaceae, Dmax, LD50 điều trị số bệnh lý, có rối loạn lipid ĐẶT VẤN ĐỀ máu Dịch chiết đài hoa Bụp giấm khô liều 500 Bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L Malvaceae) 1,000 mg/kg cho với chế độ ăn loại dược thảo sử dụng rộng rãi giàu cholesterol chuột cống tuần cho không Việt Nam mà tồn giới kết giảm đáng kể mức cholesterol huyết dạng thực phẩm bổ sung hướng đến 26 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 thanh(5), dịch chiết nước từ đài hoa Bụp giấm cho tác dụng chống oxy hố q trình oxy hố LDL tác dụng giảm lipid máu(7,4) Hiện nay, rối loạn lipid máu xác định yếu tố nguy hàng đầu bệnh mạch vành, có tỷ lệ gây tử vong cao nam nữ(2) Chính lý trên, chúng tơi tiến hành nghiên cứu bào chế cốm Bụp giấm, có thành phần bột sấy phun từ đài hoa Bụp giấm xây dựng tiêu chuẩn chế phẩm này(6) Liều tối ưu có tác dụng điều trị rối loạn lipid máu chế phẩm xác định mức 0,4 g/kg chuột, tương đương g (1 gói cốm) người trưởng thành (nghiên cứu báo cáo giám định năm 2017 - Sở khoa học cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh) Nhằm tạo sở tiếp tục phát triển nghiên cứu chế phẩm cốm Bụp giấm lâm sàng, đồng thời đưa khuyến cáo độc tính chế phẩm, nghiên cứu này, tiến hành nghiên cứu đánh giá độc tính cấp bán trường diễn cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Nghiên cứu Y học phần bột gạo, bột bắp, carbohydrat vitamin suốt thử nghiệm Hóa chất, trang thiết bị Thuốc thử định lượng sinh hóa, huyết học máu: Chema Diagnostica - Ý Hóa chất formol, ethanol, loại tinh khiết cơng ty Xilong Chemicals, Trung Quốc sản xuất Trang thiết bị: Máy sinh hóa DIRUI DR- 7000 - Trung Quốc, lồng chuyển hóa, cân phân tích Sartorius, kính hiển vi soi nổi, dụng cụ phẫu thuật số dụng cụ thí nghiệm khác Phương pháp nghiên cứu Thiết kế thực nghiệm Đánh giá độc tính cấp cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng(4,10) Nghiên cứu độc tính cấp động vật thí nghiệm, chủ yếu xác định liều chết trung bình có (liều làm chết 50% số vật thí nghiệm, gọi LD50: lethal dose 50%) điều kiện định Chuột nhắt chia thành lô tương tự, chuột lô nhận PHƯƠNGTIỆN-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU liều chất khảo sát Sự đánh giá dựa vào Nguyên vật liệu, trang thiết bị phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) Cốm Bụp giấm Chế phẩm cốm Bụp giấm (cốm BG) có thành phần gồm cao khơ Bụp giấm, manitol, aspartam, nước cất Chế phẩm đóng gói kín, tránh ẩm ánh sáng, gói g ± 5% Mỗi gói cốm chứa 0,123% delphinidin-3-O-sambubiosid 0,034% cyanidin-3-O-sambubiosid, đạt tiêu chuẩn độ ẩm, độ hòa tan, độ đồng khối lượng thuốc cốm theo Dược điển Việt Nam IV nhận thấy chuột nhóm sau 72 Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng giống đực cái, trưởng thành (5 – tuần tuổi), chủng Swiss abino, nặng 18 – 22 g cung cấp viện Pasteur, Tp Hồ Chí Minh Chuột ni nhiệt độ phòng với chu kỳ 12 sáng/tối, lồng – 10 chuột, sử dụng thức ăn cám viên với thành Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống để ghi nhận triệu chứng bất thường (nếu có) Trong trường hợp sau cho chuột uống mẫu thử, số chuột lơ thử nghiệm bảo tồn, ta xác định liều cao bơm qua kim mà không làm chết chuột (Dmax) liều tương đối an tồn dùng thực nghiệm dược lý 1/5 Dmax lớn Thử nghiệm tiến hành qua giai đoạn: Giai đoạn (sơ khởi), sử dụng chuột (50% đực, 50% liều), giai đoạn (xác định), trường hợp tìm LD50, số lượng chuột lô 10 chuột 12 – 20 chuột liều gần LD50, trường hợp xác định Dmax, số lượng chuột 20 (50% đực, 50% cái) 27 Nghiên cứu Y học Đánh giá độc tính bán trường diễn cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng(9,10) Chuột thử nghiệm nuôi ổn định tuần, cân trọng lượng, xét nghiệm thông số sinh hóa huyết học ban đầu, chia ngẫu nhiên thành lô, lô 20 (10 đực, 10 cái): Lô chứng: Uống nước cất Lô thử 1: Uống cốm Bụp giấm (BG) 0,4 g/kg (liều tối ưu có tác dụng điều trị) Lơ thử 2: Uống cốm Bụp giấm (BG) 0,8 g/kg (liều gấp lần liều có tác dụng điều trị) Lơ thử 3: Uống cốm Bụp giấm (BG) 4,0 g/kg (liều gấp 10 lần liều có tác dụng điều trị) Các thơng số đánh giá hàng tuần: Hành vi (tăng lại, giảm lại, nằm im, run rẩy, co giật), lông (mượt, rụng ), biểu quan; cân nặng, tính chất phân, nước tiểu Mức độ ăn, uống đánh giá thời điểm ban đầu, sau tuần sau 12 tuần cách nhốt riêng chuột vào lồng chuyển hóa, cho chuột làm quen lồng ngày thứ nhất, cân lượng cám lượng nước uống sử dụng 24 Sau tuần thử nghiệm, tiến hành lấy máu đuôi chuột xét nghiệm thơng số: Sinh hóa (AST, ALT, cholesterol tồn phần, triglycerid máu, creatinin huyết, acid uric, glucose), huyết học (số lượng hồng cầu - RBC, hematocrit - HCT, hemoglobin - HGB, số lượng hemoglobin trung bình - MCH, nồng độ hemoglobin trung bình MCHC, thể tích trung bình hồng cầu - MCV, số lượng bạch cầu - WBC, số lượng tiểu cầu PLT) Sau 12 tuần thử nghiệm, tiến hành lấy máu đuôi chuột xét nghiệm thông số: Sinh hóa (AST, ALT, cholesterol tồn phần, triglycerid máu, creatinin huyết, acid uric, glucose), huyết học (số lượng hồng cầu - RBC, hematocrit - HCT, hemoglobin - HGB, số lượng hemoglobin trung bình - MCH, nồng độ hemoglobin trung bình MCHC, thể tích trung bình hồng cầu - MCV, số lượng bạch cầu - WBC, số lượng tiểu cầu - 28 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 PLT) Gây mê, mổ quan sát đại thể gan, thận, tim, lách, phổi, dày, ruột Xét nghiệm vi thể gan, thận (lấy ngẫu nhiên 50% số động vật) Cân trọng lượng gan, thận, lách chuột xác định: Chỉ số trọng lượng gan = (trọng lượng gan / trọng lượng thể chuột) x 100% Chỉ số trọng lượng thận = (trọng lượng thận / trọng lượng thể chuột) x 100% Chỉ số trọng lượng lách = (trọng lượng lách / trọng lượng thể chuột) x 100% Phương pháp thống kê, xử lý số liệu Tất liệu biểu diễn dạng trung bình ± sai số chuẩn (M ± SD) Dùng phép kiểm ttest Anova chiều, yếu tố với phần mềm Minitab 16.0 Microsoft Excel 2017 để thống kê liệu vẽ đồ thị KẾT QUẢ Độc tính cấp cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Bảng Kết thử nghiệm độc tính cấp cốm Bụp giấm Liều dùng Số Thử Số chuột Phân suất tử nghiệm (g/kg chuột) chuột chết lô vong Sơ khởi 15 0 Xác định 15 14 0 Trong suốt thời gian 72 tuần quan sát tiếp theo, không ghi nhận dấu hiệu bất thường xảy chuột thử nghiệm Tất chuột ăn uống hoạt động bình thường, khơng có chuột chết, cân nặng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê lơ Do đó, khơng tìm LD50 lơ chuột uống 15 g/kg liều tối đa thuốc phân tán vào nước qua đầu kim uống mà chuột chết Quan sát đại thể: Sau tuần theo dõi, mổ chuột tất lô để quan sát đại thể phủ tạng chuột Kết quả: Tất chuột thực nghiệm không thấy thay đổi bệnh lý Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 hình thái đại thể tim, gan, thận, bàng quang hệ thống tiêu hóa Độc tính bán trường diễn cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Trong suốt thời gian cho uống thuốc (12 tuần), động vật lô uống thuốc thử nghiệm liều (0,4 g/kg) liều (0,8 g/kg) có mức ăn uống, Nghiên cứu Y học lại bình thường, tình trạng phân, lơng biểu bên ngồi bình thường so với lô chứng uống nước cất Động vật lô uống thuốc thử nghiệm liều (4 g/kg) có biểu phân mềm (phân ướt so với phân lô chứng khơng định hình) từ tuần thứ trở Bảng Kết theo dõi cân nặng lơ thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lô (n=20) Lô (nước cất) Lô (BG 0,4 g/kg) Lô (BG 0,8 g/kg) Lô (BG g/kg) Trọng lượng Lô (nước cất) Lô (BG 0,4 g/kg) Lô (BG 0,8 g/kg) Lô (BG g/kg) T0 (g) 18,95 ± 1,28 18,90 ± 0,85 18,70 ± 0,92 18,90 ± 1,07 T1 (g) 21,75 ± 1,59 21,70 ± 1,63 20,90 ± 2,00 21,80 ± 1,88 T7 (g) 27,15 ± 2,72 26,00 ± 4,03 25,35 ± 3,22 26,30 ± 2,20 T2 (g) 23,05 ± 2,16 22,65 ± 1,95 22,90 ± 1,92 22,85 ± 2,23 T8 (g) 30,20 ± 3,07 ** 27,10 ± 3,77 *** 26,15 ± 3,05 *** 26,30 ± 3,15 T3 (g) 23,30 ± 2,72 23,60 ± 2,48 22,80 ± 1,88 22,60 ± 1,90 T9 (g) 30,30 ± 3,10 * 27,75 ± 4,25 *** 26,15 ± 3,22 *** 26,30 ± 3,25 T4 (g) 25,70 ± 2,87 25,10 ± 2,49 24,85 ± 2,25 24,95 ± 1,50 T10 (g) 31,05 ± 2,61 ** 27,85 ± 3,56 *** 26,65 ± 2,98 *** 25,50 ± 3,49 T5 (g) 27,30 ± 3,05 ** 24,45 ± 2,74 ** 24,40 ± 2,30 *** 24,30 ± 1,84 T11 (g) 31,35 ± 2,35 ** 28,45 ± 3,89 *** 27,05 ± 2,80 *** 25,00 ± 3,21 T6 (g) 26,50 ± 2,54 26,10 ± 3,13 25,85 ± 3,05 26,60 ±2,30 T12 (g) 31,40 ± 2,35 ** 28,55 ± 3,17 *** 26,95 ± 2,93 *** 24,30 ± 3,11 Cân nặng chuột lô thử nghiệm uống cốm BG 0,4 g/kg giảm tuần thứ (p < 0,01), tuần thứ (p < 0,01), tuần thứ (p < 0,05), tuần thứ 10 (p < 0,01), tuần thứ 11 (p < 0,01) tuần thứ 12 (p < 0,01) so với lô chứng uống nước cất Cân nặng chuột lô thử nghiệm uống cốm BG 0,8 g/kg giảm tuần thứ (p < 0,01), tuần thứ (p < 0,001), tuần thứ (p < 0,001), tuần thứ 10 (p < 0,001), tuần thứ 11 (p < 0,001) tuần thứ 12 (p < 0,001) so với lô chứng uống nước cất Cân nặng chuột lô thử nghiệm uống cốm BG g/kg giảm tuần thứ (p < 0,001), tuần thứ (p < 0,001), tuần thứ (p < 0,001), tuần thứ 10 (p < 0,001), tuần thứ 11 (p < 0,001) tuần thứ 12 (p < 0,001) so với lơ chứng uống nước cất Hình Lượng nước uống lơ chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn (ml) Lượng nước lượng thức ăn tiêu thụ chuột lô khác biệt ý nghĩa thống kê thời điểm: Ban đầu, sau tuần sau 12 tuần thử nghiệm 29 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học triglycerid khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, glucose giảm 14% (p < 0,05) Lô uống cốm BG 0,8 g/kg g/kg có số acid uric, creatinin, glucose, AST, ALT, cholesterol tồn phần, triglycerid khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (Bảng 3) Sau 12 tuần thử nghiệm, so với lô chứng uống nước cất: Lô uống cốm BG 0,4 g/kg có số acid uric, creatinin, AST, ALT, cholesterol tồn phần, triglycerid khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, glucose giảm 13% (p < 0,01) Lơ uống cốm BG 0,8 g/kg g/kg có số acid uric, creatinin, glucose, AST, ALT, cholesterol toàn phần, triglycerid khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (Bảng 4) Hình Lượng thức ăn lơ chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn (g) Chỉ số xét nghiệm sinh hóa Chỉ số sinh hóa chuột lô thử nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm ban đầu Sau tuần thử nghiệm, so với lô chứng uống nước cất: Lô uống cốm BG 0,4 g/kg có số acid uric, creatinin, AST, ALT, cholesterol tồn phần, Bảng Chỉ số xét nghiệm sinh hóa sau tuần lô chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lơ (n = 20) Lơ (nước cất) Lô (BG 0,4 g/kg) Lô (BG 0,8 g/kg) Lô (BG g/kg) Uric (mg/d) 7,69 ± 1,32 7,59 ± 1,92 7,36 ±1,66 6,85 ± 1,49 Creatinin (mg/dL) 0,43 ± 0,05 0,39 ± 0,07 0,40 ± 0,12 0,40 ± 0,07 Glucose (mg/dL) 88,28 ± 12,25 76,17 ± 16,21 86,28 ± 14,37 92,76 ± 23,42 ALT (U/I) 44,10 ± 10,93 45,30 ± 8,90 43,55 ± 11,69 56,35 ± 24,81 AST (U/I) 74,55 ± 15,34 73,35 ± 13,12 70,80 ± 20,27 83,15 ± 20,66 Cholesterol TP (mg/dl) 80,54 ± 14,22 80,98 ± 10,84 79,76 ± 13,30 86,60 ± 16,14 Triglycerid (mg/dl) 112,09 ± 22,20 108,72 ± 19,30 110,47 ± 18,50 114,94 ± 16,63 Bảng Chỉ số xét nghiệm sinh hóa sau 12 tuần lơ chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lơ (n = 20) Uric (mg/d) Creatinin (mg/dL) Glucose (mg/dL) Lô (nước cất) 7,37 ± 0,97 0,39 ± 0,08 86,65 ± 11,55 45,65 ± 12,09 78,25 ± 18,71 82,97 ± 17,53 115,34 ± 21,10 Lô (BG 0,4 g/kg) 7,19 ± 1,46 0,37 ± 0,07 75,17 ± 10,67 42,00 ± 14,84 75,75 ± 16,97 80,88 ± 15,87 114,80 ± 28,71 Lô (BG 0,8 g/kg) 7,39 ± 1,29 0,39 ± 0,11 85,64 ± 13,24 45,80 ± 12,65 78,20 ± 25,22 74,79 ± 13,18 120,56 ± 20,27 Lô (BG g/kg) 7,24 ± 1,33 0,35 ± 0,08 89,76 ± 20,47 48,70 ± 15,18 83,40 ± 24,65 86,08 ± 21,45 126,28 ± 19,04 Chỉ số xét nghiệm huyết học Chỉ số huyết học chuột lô thử nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê thời điểm ban đầu Chỉ số huyết học chuột lơ thử nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa ALT (U/I) AST (U/I) Cholesterol TP (mg/dl) Triglycerid (mg/dl) thống kê sau tuần Sau 12 tuần thử nghiệm, lơ uống cốm Bụp giấm liều 0,4 g/kg có số MCH giảm có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với lô chứng uống nước cất Các số khác khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với lô chứng uống nước cất (Bảng 5, Bảng 6) Bảng Chỉ số xét nghiệm huyết học sau tuần lô chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lơ (n = 20) Lơ (nước cất) 30 WBC 10^9/L RBC 10^12/L HGB g/L 6,24 5,56 12,41 ± 1,85 ± 0,57 ± 1,21 HCT % 32,90 ± 6,21 MCV fL 59,67 ± 3,95 MCH pg 23,05 ± 3,85 MCHC g/L 37,08 ± 1,17 PLT 10^9/L 903,45 ± 191,10 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Lô (n = 20) Lô (BG 0,4 g/kg) Lô (BG 0,8 g/kg) Lô (BG g/kg) WBC 10^9/L RBC 10^12/L HGB g/L 6,53 6,03 13,42 ± 1,57 ± 1,00 ± 1,93 6,55 5,42 12,85 ± 1,67 ± 1,07 ± 1,82 6,75 5,82 13,14 ± 2,75 ± 0,88 ± 2,06 Nghiên cứu Y học HCT % 34,65 ± 6,10 31,55 ± 6,92 33,93 ± 6,19 MCV fL 58,42 ± 3,74 58,05 ± 3,25 58,70 ± 4,17 MCH pg 21,50 ± 2,24 22,17 ± 1,90 22,36 ± 3,11 MCHC g/L 36,74 ± 2,89 37,69 ± 1,19 37,17 ± 1,47 PLT 10^9/L 993,95 ± 230,26 946,50 ± 323,83 1007,95 ± 226,90 Bảng Chỉ số xét nghiệm huyết học sau 12 tuần lơ chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lô (n = 20) Lô (nước cất) Lô (BG 0,4 g/kg) Lô (BG 0,8 g/kg) Lô (BG g/kg) WBC 10^9/L 6,43 ± 1,85 6,70 ± 1,85 6,44 ± 2,02 6,64 ± 2,12 RBC 10^12/L 6,38 ± 0,87 6,63 ± 0,68 6,48 ± 0,55 6,41 ±0,82 HGB g/L 13,66 ± 1,87 14,64 ± 1,49 13,94 ± 1,70 14,16 ± 1,64 HCT % 39,27 ± 5,42 38,52 ± 6,00 38,84 ± 3,87 39,37 ± 4,98 MCV fL 62,30 ± 3,17 61,26 ± 3,37 60,06 ± 7,33 60,03 ± 9,23 MCH pg 24,14 ± 3,14 * 22,08 ± 1,12 22,63 ± 1,26 22,68 ± 3,62 MCHC g/L 36,42 ± 3,59 36,09 ± 1,14 36,54 ± 0,86 36,24 ± 1,15 PLT 10^9/L 991,25 ± 155,48 965,85 ± 224,26 982,35 ± 275,78 941,90 ± 243,62 Kết giải phẫu quan sát đại thể vi thể Sau 12 tuần uống thuốc, chuột gây mê, giải phẫu, quan sát tim, phổi, gan, thận, lách, ruột, bàng quang Kết bình thường, khơng khác biệt so với lơ uống nước cất (Hình 3) Chỉ số trọng lượng gan, thận, lách chuột lô thử nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê sau 12 tuần Kết giải phẫu bệnh gan, thận gửi xét nghiệm bệnh viện Chợ Rẫy, Thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam Sau 12 tuần thử nghiệm, so với lô chứng uống nước cất: Lô uống cốm Bụp giấm 0,4 g/kg 0,8 g/kg 10/10 mẫu có hình ảnh vi phẫu gan, thận không khác biệt Lô uống cốm Bụp giấm g/kg có hình ảnh vi phẫu gan khơng khác biệt, vi phẫu thận có viêm mô kẽ thận, 8/10 mẫu mức độ nhẹ, 2/10 mẫu mức độ trung bình (Hình 4, Hình 5) Hình Chỉ số trọng lượng gan, thận, lách lô chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn (%) n=20 cho lơ Hình 4: Hình ảnh vi thể gan lơ thử nghiệm độc tính bán trường diễn 31 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Hình 5: Hình ảnh vi thể thận lơ thử nghiệm độc tính bán trường diễn aspartam nên khơng làm ảnh hưởng đến BÀN LUẬN số Độc tính cấp cốm Bụp giấm chuột nhắt Kết nghiên cứu cho thấy có giảm trắng trọng lượng chuột lô uống cốm Bụp giấm so Cốm Bụp giấm khơng thể độc tính cấp với lô chuột uống nước cất tuần thứ 5, 8, 9, 10, đường uống với liều tối đa bơm qua đầu 11 12 lượng thức ăn nước uống kim chuột uống 15 g/kg, tương đương sử dụng không khác biệt Những nghiên cứu với 75 g/người 60 kg (bảng quy đổi liều(9)), gấp tổng hợp đến năm 2014 không cho 32,5 lần liều dự kiến sử dụng hàng ngày g thấy giảm trọng lượng đáng kể gây cốm Như vậy, cốm Bụp giấm sử dụng thử Bụp giấm động vật bình thường(3) Do đó, nghiệm có độ an tồn cao có Dmax = 15 tác động trọng lượng cần đánh giá g/kg Kết nghiên cứu công bố thêm nghiên cứu để làm giới độc tính cấp Bụp giấm cho rõ lợi ích nguy thấy độ an toàn cao Bụp giấm sử dụng Nồng độ glusose máu lô uống cốm đường uống Liều LD50 chuột nhắt (trọng Bụp giấm (0,4 g/kg) giảm có ý nghĩa thống kê so lượng 30 g) báo cáo khoảng 0,4 - 0,6 ml với lô chứng uống nước cất sau tuần sau 12 (tiêm phúc mô, i.p.) nước sắc Bụp giấm 30% tuần thử nghiệm Tuy nhiên, ảnh hưởng lại (Bụp giấm ngâm nước cất 30 phút, không xuất lô sử dụng liều cao (0,8 lấy dịch chiết)(7) g/kg g/kg) Như vậy, tác động glucose Độc tính bán trường diễn cốm Bụp giấm máu cốm Bụp giấm phụ thuộc liều sử dụng chuột nhắt trắng Về tác động đường huyết, Bụp giấm cho Cốm Bụp giấm sử dụng nghiên cứu hiệu ức chế α-amylase tụy(1); liều 200 không làm ảnh hưởng đến lượng thức ăn, nước mg/kg, Bụp giấm chống đề kháng insulin, làm uống tiêu thụ chuột biểu hành vi giảm tăng đường huyết tăng insulin sử dụng dài ngày Tuy nhiên, theo công bố máu chuột cống(8) Do đó, Iyare năm 2008 2010, dịch chiết nước Bụp nghiên cứu tiếp theo, cần đánh giá thêm khả giấm làm giảm lượng thức ăn, nước uống tiêu gây giảm đường huyết đối tượng bình thường thụ chuột cống tác dụng phụ thuộc Lô uống cốm Bụp giấm liều 0,4 g/kg có liều Tác giả giải thích giảm lượng thức ăn số MCH giảm so với lô chứng uống nước cất nước uống tiêu thụ chuột chúng sau 12 tuần thử nghiệm Tuy nhiên, tác động khơng thích mùi vị Bụp giấm(3) Như vậy, có lại khơng xảy sử dụng cốm Bụp thể cốm Bụp giấm cải thiện mùi, vị giấm liều cao (0,8 g/kg g/kg) Chỉ số dược liệu nhờ bổ sung thêm mannitol MCH thấp lượng sắt thấp 32 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 máu Cơ thể sử dụng sắt để tạo huyết sắc tố, thể hết chất sắt, thiếu máu thiếu sắt gây làm giảm MCH Trong nghiên cứu sơ việc sử dụng nước sắc Bụp giấm nguồn thay sắt điều trị thiếu máu số bệnh khác thiếu hụt chất khoáng, kết cho thấy đài hoa khô Bụp giấm thúc đẩy khả sử dụng chất khống(3) Như vậy, khả tăng cường sử dụng chất khoáng thời gian dài dẫn đến thiếu hụt sắt chuột thí nghiệm với phần ăn tiêu chuẩn Sự giảm MCH không gặp phải sử dụng Bụp giấm liều cao bù đắp từ Bụp giấm thành phần có chứa khống chất Lơ uống cốm Bụp giấm g/kg có dấu hiệu phân mềm từ tuần thứ trở ảnh hưởng lượng acid ascorbic số acid hữu cao Bụp giấm Hiện tượng viêm mô kẽ thận lô sau 12 tuần thử nghiệm cần đánh giá thêm nguyên nhân mức độ liên quan đến liều sử dụng nghiên cứu để làm sáng tỏ Từ kết thu nghiên cứu này, đưa khuyến cáo cho nghiên cứu sau cần ý theo dõi cân nặng, đánh giá lợi ích nguy cơ; thơng số đường huyết (tình trạng giảm đường huyết đối tượng bình thường), MCH (tình trạng thiếu máu liên quan đến liều) nên đánh giá chức thận sử dụng chế phẩm dài ngày với liều cao KẾT LUẬN Cốm Bụp giấm có Dmax = 15 g/kg, thể độ an toàn cao sử dụng Tuy nhiên, cốm Bụp giấm sử dụng ba mức liều 0,4 g/kg, 0,8 g/kg g/kg làm giảm trọng lượng chuột tuần thứ từ tuần thứ đến tuần thứ 12 Chuột nhắt cho uống cốm Bụp giấm liều tối ưu có tác dụng điều trị (0,4 g/kg), không bị thay đổi hầu hết số sinh học, có giảm glucose 14% sau tuần 13% sau 12 tuần, giảm MCH 8,5% sau 12 tuần Chuột nhắt uống cốm Nghiên cứu Y học Bụp giấm liều gấp đôi liều tối ưu có tác dụng điều trị (0,8 g/kg), khơng bị thay đổi số sinh học Chuột nhắt sử dụng cốm Bụp giấm liều gấp 10 lần liều tối ưu có tác dụng điều trị (4 g/kg) khơng bị thay đổi hầu hết số sinh học có biểu phân mềm từ tuần thứ trở có biểu viêm mơ kẽ thận mức độ nhẹ vi phẫu Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu xin cảm ơn hỗ trợ Sở Khoa học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Adisakwattana S et al (2012) “In vitro inhibitory effects of plantbased foods and their combinations on intestinal inverted question mark-glucosidase and pancreatic inveerted question mark amylase” BMC Complementary and Alternative Medicine; 12(1): 110 Benjamin EJ et al (2017) "Heart Disease and Stroke Statistics 2017 Update: A Report from the American Heart Association" Circulation; 135(10): e146-e603 Da-costa-Rocha I et al (2014) “Hibiscus sabdariffa L - A phytochemical and pharmacological review” Food Chemistry; 165: 424 - 443 Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác định độc tính thuốc Nhà xuất Y học, tr - 24, 50 - 57 Hainida E et al (2008) “Effects of defatted dried roselle (Hibiscus sabdariffa L.) seed powder on lipid profiles of hypercholesterolemia rats” Journal of the Science of Food and Agriculture; 88:1043-1050 Lê Thị Lan Phương, Huỳnh Trần Quốc Dũng, Nguyễn Minh Đức, Nguyễn Phương Dung (2017) “Xây dựng quy trình định lượng đồng thời delphinidin-3-O-sambubiosid cyanidin-3-Osambubiosid cốm Bụp giấm phương pháp HPLC” Tạp chí Y học TP.Hồ Chí Minh; 21(6): 81 - 86 Ochani PC and D’Mello P (2009) “Antioxidant and antihyperlipidemic activity of Hibiscus sabdariffa Linn leaves and calyces extracts in rats” Indian Journal of Experimental Biology; 47: 276 - 282 Peng CH et al (2011) “Hibiscus sabdariffa polyphenolic extract inhibits hyperglycemia, hyperlipidemia, and glycation-oxidative stress while improving insulin resistance” Journal of Agricultural and Food Chemistry; 59(18): 9901 - 9909 Sharaf A (1962) “The pharmacological characteristics of Hibiscus sabdariffa L.” Planta Medica; 10: 48 - 52 10 Viện Dược liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 311 - 313 11 Yang MY et al (2010) “The Hypolipidemic Effect of Hibiscus sabdariffa Polyphenols via Inhibiting Lipogenesis and Promoting Hepatic Lipid Clearance” Journal of Agricultural and Food Chemistry; 58: 850 - 859 Ngày nhận báo: 25/04/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 33 ... cứu chế phẩm cốm Bụp giấm lâm sàng, đồng thời đưa khuyến cáo độc tính chế phẩm, nghiên cứu này, tiến hành nghiên cứu đánh giá độc tính cấp bán trường diễn cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Nghiên cứu... liệu vẽ đồ thị KẾT QUẢ Độc tính cấp cốm Bụp giấm chuột nhắt trắng Bảng Kết thử nghiệm độc tính cấp cốm Bụp giấm Liều dùng Số Thử Số chuột Phân suất tử nghiệm (g/kg chuột) chuột chết lô vong Sơ... nghiệm độc tính bán trường diễn aspartam nên khơng làm ảnh hưởng đến BÀN LUẬN số Độc tính cấp cốm Bụp giấm chuột nhắt Kết nghiên cứu cho thấy có giảm trắng trọng lượng chuột lô uống cốm Bụp giấm