Kết quả cho thấy có 4 chủng L. plantarum, L. casei, L. acidophilus và B. subtilis đều có khả năng làm yếu cấu trúc và tăng phóng thích triterpenoid từ bào tử nấm sống sau 3 – 7 ngày lên men và hiệu quả đạt được cao hơn khi lên men với bào tử nấm đã hấp trong cùng điều kiện.
Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 41 Khảo sát khả phân giải bào tử nấm Linh Chi đỏ (Ganoderma lucidum) vi khuẩn phân lập từ chế phẩm men tiêu hóa Nguyễn Trung Hiếu1,*, Lê Thị Thùy Trang2 Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Nguyễn Tất Thành Chi cục Thủy Sản TP HCM * nthieu@ntt.edu.vn Tóm tắt Chúng tơi tiến hành phân lập sàng lọc chủng vi khuẩn từ sữa chua men vi sinh có khả làm yếu cấu trúc tăng phóng thích triterpenoid từ bào tử nấm Linh Chi đỏ (Ganoderma lucidum) Kết cho thấy có chủng L plantarum, L casei, L acidophilus B subtilis có khả làm yếu cấu trúc tăng phóng thích triterpenoid từ bào tử nấm sống sau – ngày lên men hiệu đạt cao lên men với bào tử nấm hấp điều kiện Đặc biệt, chủng L casei L acidophilus cho hiệu phóng thích triterpenoid cao lên men bào tử nấm sống Chủng B subtilis lại cho hiệu phóng thích cao lên men với bào tử nấm hấp Khi đánh giá ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy chiết xuất lên độ bền cấu trúc triterpenoid polysaccharide, kết cho thấy polysaccharide bền loại dung môi nước, acid (HCl 0,01M), base (NaOH 0,01M), dịch men sống B subtilis L plantarum nhiệt độ ủ 30 – 90oC 120oC (môi trường nước) – 60 phút; ổn định môi trường acid base nhiệt độ 120oC Triterpenoid ổn định nhiệt độ 30 – 90oC (thời gian ủ – 60 phút) dịch men sống vi B subilis L plantarum, nhiệt độ 30oC (thời gian ủ – 60 phút), 60oC (thời gian ủ – 40 phút) cồn 96o; ổn định cồn 96o nhiệt độ 60oC (thời gian ủ 60 phút) 90oC Nhận 09.11.2019 Được duyệt 18.04.2019 Cơng bố 26.06.2019 Từ khóa bào tử nấm Linh Chi, Ganoderma lucidum, L plantarum, L casei, L acidophilus, B subtilis, polysaccharide, triterpenoid ® 2019 Journal of Science and Technology - NTTU Mở đầu Nhiều nghiên cứu cho thấy nấm Linh Chi có nhiều cơng dụng q như: kiện não, bảo vệ gan, giải độc, giải cảm, hoạt hóa hệ thống miễn dịch, ức chế tế bào ung thư trẻ hóa da[1-4] nhờ diện nhiều chất có hoạt tính sinh học; đặc biệt polysaccharide (giàu - glucan), triterpenoid, tannin, steroid, saponin… Các hoạt chất chủ yếu có thể nấm, hình thành bào tử hoạt chất đóng gói tích lũy bào tử cao thể nấm[5] Các nghiên cứu cho thấy, bào tử có hầu hết chất có hoạt tính giống thể nấm hoạt tính chúng cao nhiều lần so với thể nấm[6] Để thu lượng hoạt chất tối đa bào tử nghiên cứu thường tập trung vào việc làm tăng hiệu chiết hoạt chất phương pháp nghiền học với máy nghiền li tâm tốc độ cao[6], chiết hoạt chất kết hợp dùng sóng siêu âm, phá bào tử CO2 siêu tới hạn[7] Tuy nhiên, phương pháp thường tốn nhiều dung môi, sử dụng thiết bị đặc biệt Nhiệt sinh từ phương pháp nghiền làm ảnh hưởng đến chất có hoạt tính, dùng sóng siêu âm áp suất cao lượng bào tử bị phá vỡ không nhiều, giá thành cao[7] Một nghiên cứu lên men bào tử nấm Linh Chi Lactobacillus plantarum cho thấy chủng có khả phân giải vỏ bào tử nấm hiệu quả, không tốn nhiều chi phí trang thiết bị Nghiên cứu cho thấy sau ngày có tượng vỡ bào tử kết hợp với phương pháp sấy, sau ngày lên men với L plantarum sấy hầu hết bào tử bị hủy quan sát kính hiển vi điện tử[8] Kết cho thấy nhiều triển vọng sử dụng chủng vi khuẩn có lợi để làm tăng hiệu phóng thích hoạt chất từ bào tử, sử dụng bào tử làm yếu cấu trúc mà không cần phải tách vi khuẩn sau lên men Vật liệu - phương pháp 2.1 Vật liệu nghiên cứu Bào tử nấm Linh Chi đỏ (Ganoderma lucidum) cung cấp từ trại nấm Đất Thép, sấy 50ºC 30 phút xác định độ ẩm trước dùng cho lên men Chủng mua Lactobacillus plantarum (ATCC10241), chủng Lactobacillus casei phân lập từ sữa chua Yakult chủng Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 42 phân lập từ men vi sinh Lactobacillus acidophilus (L – sóng 544nm Phương trình hồi qui tuyến tính có dạng Y = 0,098 Bio), Bacillus subtilis (Biosubtyl DL) X + 0,014 (R = 0,9947, n = 7), với X nồng độ oleanolic acid 2.2 Phân lập nhân sinh khối vi khuẩn (µg/ml) Y giá trị hấp thu bước sóng 544nm Các chủng phân lập môi trường MRS (DeMan – Hút 0,125ml dung dịch triterpenoid hòa tan Rogosa – Sharpe), ủ 37oC – ngày Chọn methanol vào effendoft 1,5ml đem cô cạn 80oC block khuẩn lạc nhất, nhân sinh khối lần môi nhiệt Thêm tiếp 0,15ml hỗn hợp vanillin – acid acetic glacial o trường Woo[9] điều kiện 37 C – ngày Các chủng 0,5ml HClO4 vào effendorf Ủ nóng 70oC 25 phút sau nhân sinh khối lần 2, xác định nồng độ trước ủ mát – 8oC phút Sau phút, chuyển toàn cho lên men bào tử nấm dịch ủ sang bình định mức 5ml, thêm tiếp acid acetic glacial 2.3 Lên men bào tử nấm cho đủ 5ml Đo độ hấp thụ bước sóng 544nm Ủ 0,4g bào tử nấm hấp vô trùng với 20ml hỗn hợp acid 2.6 Xử lí thống kê acetic 0,01M acid lactic 0,01M (hoặc NaOH 0,01M), đem Các kết xử lí phần mềm Excel SAS 9.1 để o ủ 37 C 3, ngày Sau 3, ngày, tiến hành lấy xây dựng đường chuẩn xác định giá trị trung bình mẫu định lượng triterpenoid phóng thích môi trường ủ khoảng tin cậy kết thí nghiệm lại bào tử nấm Kết - thảo luận Cấy 5.107 CFU dịch vi khuẩn (L plantarum, L casei, L acidophilus B subtilis) vào chai nuôi cấy chứa 20ml môi 3.1 Kết ủ bào tử nấm hấp hỗn hợp acid hữu trường Woo lỏng hấp vô trùng với 0,4g bào tử nấm base mạnh xử lí vô trùng (hoặc 0,4g bào tử nấm hấp vô trùng), đem ủ Khi lên men bào tử nấm với vi khuẩn thuộc chi 37oC 3, ngày Sau 3, ngày, tiến hành lấy Lactobacillus, môi trường sau lên men thường chuyển mẫu định lượng triterpenoid lại bào tử nấm dịch tính acid sinh acid acetic acid lactic 2.4 Chiết xuất triterpenoid từ bào tử nấm suốt trình lên men Tuy nhiên, lượng acid sinh Thu 0,4g bào tử sau lên men (ủ với hỗn hợp acid base) điều kiện lên men thường thấp nên kết thí nghiệm đem phá bào tử với hạt thủy tinh (tỉ lệ 2:3) máy phá mini khảo sát Chaiyavat cộng tác viên (2010) ảnh – beadbeater 4800 vòng/phút phút Thu toàn hưởng hai loại acid khơng thấy có tác động lên dịch phá (hoặc 0,4g bào tử sau lên men không phá bào tử) cấu trúc bào tử nấm[8] Do đó, để đánh giá xác đem chiết với 10ml cồn 96o bể ủ nhiệt 80oC 30 vai trò hai acid lên cấu trúc bào tử nấm chúng tơi tiến phút Thu tồn dịch chiết đem cô cạn 80oC bể ủ hành ủ bào tử với hỗn hợp acid đậm đặc (acid acetic nhiệt Sau cạn, hòa tan cặn với 2ml methanol, dung dịch 0,01M acid lactic 0,01M) so với điều kiện nuôi cấy để dùng để định lượng triterpenoid tổng số đánh giá ảnh hưởng acid Đồng thời, vi khuẩn B 2.5 Định lượng triterpenoid subtilis lên men tạo NH3 làm kiềm hóa mơi Lượng triterpenoid tổng số từ bào tử nấm xác định dựa trường lên men nên làm ảnh hưởng lên cấu trúc vào phương pháp chuyển màu triterpenoid hỗn hợp bào tử Do đó, để đánh giá khách quan ảnh hưởng này, vanillin – acid acetic glacial – HClO4 Đường chuẩn định lượng thí nghiệm khảo sát mơi trường base mạnh (NaOH triterpenoid xây dựng cách pha chất chuẩn oleanolic 0,01M) để đánh giá mức độ tác động lên cấu trúc acid thành dãy nồng độ – 14µg/ml đo độ hấp thụ bước Hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) dịch xác bào tử nấm ủ với acid base 10 ĐC A ngày B ĐC A B ĐC ngày Bào tử + Phá + Chiết A B ngày Bào tử + Chiết Hình Đồ thị có khoảng tin cậy thể hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) bào tử nấm hấp sau 3, ngày ủ với hỗn hợp acid base ĐC: Nước cất; A: Acid acetic 0,01M acid lactic 0,01M; B: NaOH 0,01M Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 43 Kết cho thấy hàm lượng triterpenoid phóng thích mơi nghiệm thức A B thời điểm chiếm khoảng nửa trường ủ nghiệm thức có xu hướng tăng dần lượng triterpenoid lại xác bào tử, lượng tăng thời gian ủ Ủ lâu lượng hoạt chất phóng thích triterpenoid chiết cao nhiều so với nhiều (Hình 1) Trong tất thời điểm lượng nghiệm thức ĐC Điều chứng tỏ thành phần acid triterpenoid thu dịch mẫu A B cao base mơi trường ủ có tác động làm yếu cấu trúc bào tử, ĐC; đặc biêt, ủ mơi trường NaOH 0,01M nên làm tăng hiệu chiết Khi cấu trúc bào tử yếu lượng triterpenoid phóng thích mơi trường cao lượng triterpenoid rò rỉ ngồi mơi trường phụ thuộc Lượng triterpenoid lại bào tử có khác biệt nhiều vào tổng nồng độ chất tan loại dung mơi có có ý nghĩa mẫu thí nghiệm; lượng triterpenoid mơi trường ủ lại bào tử mẫu ĐC cao thấp ủ 3.2 Kết thí nghiệm lên men bào tử nấm sống với môi trường NaOH (mẫu B) Sự khác biệt vi khuẩn acid base ảnh hưởng lên liên kết cấu trúc bào Để đánh giá trình lên men ảnh hưởng lên cấu trúc bào tử nên làm yếu cấu trúc bào tử, tác động NaOH có xu tử nấm sống, chúng tơi tiến hành lên men bào tử xử lí vơ hướng mạnh so với hỗn hợp acid Ngoài ra, lượng trùng với vi khuẩn phân lập Kết cho thấy triterpenoid lại tất nghiệm thức tương ủ bào tử môi trường nuôi cấy (ĐC1), đem phá chiết quan với lượng triterpenoid phóng thích ngồi mơi trường lượng triterpenoid lại bào tử cao so với Lượng triterpenoid phóng thích mơi trường nhiều lên men với vi khuẩn (A1, B1, C1 D1) Khi lên men lượng triterpenoid lại bào tử Sự tác động bào tử với vi khuẩn, chất sinh suốt trình hỗn hợp acid base gần không ảnh hưởng đến cấu lên men tác động lên cấu trúc làm tăng phóng thích trúc triterpenoid (tổng lượng triterpenoid môi trường ủ hoạt chất khỏi bào tử nên lượng chất lại bào tử xác bào tử nghiệm thức gần tương đương nhau) thấp nhiều so với bào tử ủ môi trường nuôi Bào tử sau ủ môi trường đem chiết mà cấy Thời gian lên men dài tác động tăng khơng phá bào tử Lượng triterpenoid thu Hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) bào tử nấm sống sau lên men 12 10 ĐC1 A1 B1 C1 D1 ĐC1 A1 B1 C1 D1 ĐC1 A1 B1 C1 D1 Bào tử + Phá + Chiết ngày Bào tử + Chiết Hình Đồ thị có khoảng tin cậy thể hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) bào tử nấm sống sau lên men 3, ngày với vi khuẩn ĐC1: Môi trường nuôi cấy; A1: Lên men L plantarum; B1: Lên men L casei; C1: Lên men L acidophilus; D1: Lên men B subtilis Các chủng dùng thí nghiệm làm tăng phóng thích hoạt chất từ bào tử nấm sống sau ngày lên men mạnh sau ngày lên men Trong đó, chủng L plantarum B subtilis (A1 D1) cho hiệu phóng thích hoạt chất yếu L casei L acidophilus (B1 C1) nên lượng triterpenoid lại bào tử nghiệm thức A1 D1 cao so với hai nghiệm thức B1 C1 (Hình 2) Sau – ngày lên men có tăng phóng thích hoạt chất mạnh lượng dinh dưỡng cạn sau ngày lên men, để tồn vi khuẩn tăng cường sản sinh nhiều chất có khả làm yếu phân giải bào tử để tận dụng nguồn dinh dưỡng Khi cấu trúc bào tử bị yếu dần phóng thích hoạt chất ngồi mơi trường phụ thuộc nhiều vào tổng lượng chất hòa tan mơi trường khả hòa tan mơi trường triterpenoid Thực tế cho thấy triterpenoid tan môi trường nước nên cấu trúc bào tử yếu, lượng triterpenoid khuếch tán ngồi mơi trường ni cấy khơng nhiều Để đánh giá xác hơn, tiến hành chiết bào tử sau lên men với ethanol 96o không phá bào tử Lượng triterpenoid thu phương pháp cao gần phương pháp phá chiết bào tử Kết phần chứng minh suy yếu cấu trúc bào tử lên men, Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 44 đồng thời cho thấy cấu trúc bào tử rào cản ngăn chặn phóng thích triterpenoid ngồi mơi trường, để thu lượng triterpenoid hồn tồn từ bào tử nấm, việc phá vỏ bào tử cần kết hợp dung mơi chiết thích hợp để chiết kiệt hoạt chất từ bào tử Trong nghiệm thức đối chứng, lượng triterpenoid lại bào tử nấm sống ủ môi trường nuôi cấy (mẫu ĐC1) cao so với bào tử hấp ủ mơi trường nước (mẫu ĐC) (Hình 2) Ngun nhân dẫn đến khác biệt bào tử nấm sống hạn chế phóng thích hoạt chất ngồi môi trường nhiều so với nấm chết Đồng thời, bào tử nấm chết ủ môi trường nước có chất hòa tan nên khả rò rỉ triterpenoid môi trường cao so với mơi trường ni cấy 3.3 Kết thí nghiệm lên men bào tử nấm hấp với vi khuẩn Kết thí nghiệm cho thấy lượng triterpenoid lại tất nghiệm thức thấp so với mẫu ĐC2 có xu hướng giảm dần tăng thời gian lên men Trong chủng thí nghiệm, B subtilis cho hiệu lên men phóng thích hoạt chất từ bào tử hấp cao (lượng triterpenoid lại thấp 4,44 mg/g) (mẫu D2), chủng L plantarum, L casei, L acidophilus cho hiệu phân giải gần tương đương (Hình 3) Hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) bào tử nấm hấp sau lên men 10 ĐC2 A2 B2 C2 D2 ĐC2 A2 B2 C2 D2 ĐC2 A2 B2 C2 D2 Bào tử + Phá + Chiết ngày Bào tử + Chiết Hình Đồ thị có khoảng tin cậy thể hàm lượng triterpenoid/khối lượng khô (mg/g) bào tử nấm hấp sau lên men 3, ngày với vi khuẩn ĐC2: Môi trường nuôi cấy; A2: Lên men L plantarum; B2: Lên men L casei; C2: Lên men L acidophilus; D2: Lên men B subtilis Sau thời gian ủ ngày, lượng triterpenoid chiết từ bào tử nấm không phá mẫu ĐC2 nửa so với lượng triterpenoid lại bào tử phá chiết, tăng thời gian ủ tỉ lệ tăng Trong khi, hiệu chiết lại cao nghiệm thức lên men với vi khuẩn, tăng thời gian lên men tỉ lệ chiết tăng Sau ngày lên men, lượng triterpenoid lại bào tử nghiệm thức lên men (A2, C2 D2) thấp nghiệm thức lên men bào tử nấm sống (A1, C1 D1) (Hình 2) Đặc biệt, lên men bào tử nấm hấp với B subtilis lượng triterpenoid lại bào tử thấp sau ngày lên men Điều cho thấy, bào tử nấm hấp thích hợp cho lên men với vi khuẩn so với bào tử nấm sống Các kết thí nghiệm lên men vi khuẩn với bào tử nấm sống (Hình 2) nấm hấp (Hình 3) nhận định, bước sang giai đoạn cạn dinh dưỡng vi khuẩn lên men làm tăng khả làm yếu phân hủy cấu trúc bào tử để tìm kiếm nguồn dinh dưỡng từ bào tử nên làm tăng phóng thích hoạt chất từ bào tử môi trường nuôi cấy, thời gian lên men tăng tổn thương bào tử nhiều Tuy nhiên, phá hủy khơng hồn tồn cấu trúc Đại học Nguyễn Tất Thành bào tử cấu tạo lớp vỏ kép phức tạp, thành phần vỏ đa dạng SiO2 (19.01%), Ca (19.01%) chitin (52.08 – 57.64%) [6] Đặc tính giúp bào tử có khả đề kháng cao với điều kiện khắc nghiệt tự nhiên; lên men bào tử với vi khuẩn phá hủy phần mà khơng thể phá hủy hoàn toàn cấu trúc bào tử Muốn thu tồn hoạt chất bào tử, phải phối hợp thêm tác nhân học khác dùng dung mơi chiết thích hợp sau giai đoạn lên men Ngoài ra, khả làm yếu nhẹ cấu trúc bào tử có tham gia ảnh hưởng phần thành phần acid (acid lactic acid acetic tạo lên men với L plantarum, L casei, L acidophilus) thành phần kiềm (B subtilis) tạo suốt trình lên men 3.4 Kết khảo sát độ ổn định polysaccharide môi trường nước, acid, base dịch men sống Để đánh giá ảnh hưởng số điều kiện lên men chiết xuất lên độ ổn định cấu trúc polysaccharide, thí nghiệm này, bào tử tiến hành phá vỡ thu polysaccharide Ủ polysaccharide môi trường nước, acid, base dịch lên men vi khuẩn nhiệt độ 30 – 120oC, thời gian ủ – 60 phút Kết Hình cho thấy Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 45 thời điểm từ – 60 phút nhiệt độ 30oC, 60oC, 90oC 120oC (môi trường nước) Trong môi trường nước, acid base lượng polysaccharide đo khơng thay đổi khơng có khác biệt đáng kể Tuy nhiên, thời điểm 120oC lại có khác biệt môi trường acid base Lượng polysaccharide đo giảm mạnh môi trường acid tăng nhẹ môi trường base Các kết cho thấy cấu trúc polysaccharide bị ảnh hưởng nên làm thay đổi độ hấp thu polysaccharide bước sóng 488nm Độ ổn định polysaccharide (mg/g) mơi trường nước, acid, base dịch men sống vi khuẩn 25 20 15 10 0' 20' 40' 30oC Nước B subtilis 60' 20' 40' 60' 20' 60oC 40' 90oC HCl 0,01M L plantarum 60' 20' 40' 60' 120oC NaOH 0,01M Hình Đồ thị có khoảng tin cậy thể độ ổn định hàm lượng polysaccharide (mg/g) ủ môi trường nước, acid, base, dịch men sống B subtilis L plantarum Lượng polysaccharide ổn định 30 – 60oC (thời gian ủ – 60 phút) môi trường dịch men sống B subtilis L plantarum Trong khi, nhiệt độ 90oC có tượng tăng nhẹ độ hấp thu polysaccharide môi trường dịch men sống B subtilis không thay đổi độ hấp thu môi trường dịch men sống L plantarum Thông thường, men hoạt động tốt nhiệt độ thấp 90oC, nhiệt độ cao men dễ bị biến tính tác dụng Nếu men B subtilis tiết có ảnh hưởng lên cấu trúc polysaccharide tác động mạnh thời điểm 30 – 60oC Tuy nhiên, nhiệt độ 90oC, độ hấp thu đo lại tăng nhẹ Sự khác biệt 90oC protein có dịch ni cấy bị biến tính nên làm thay đổi độ hấp thu dịch ủ môi trường dịch men sống B subtilis Ngồi ra, để đánh giá xác hình thành loại đường đơn, nghiên cứu có khảo sát hình thành đường khử sau thời điểm ủ thuốc thử Fehling Kết thu âm tính Điều chứng tỏ khơng có xuất loại đường khử dung dịch Để nhận định xác vấn đề cần phải có thêm nhiều chứng thực nghiệm khác để đánh giá Tuy nhiên, kết thu tạm thời khẳng định cấu trúc polysaccharide bền điều kiện ủ với dịch lên men 30 – 90oC (Hình 4) 3.5 Kết khảo sát độ ổn định triterpenoid môi trường cồn 96o dịch men sống Để đánh giá độ ổn định cấu trúc triterpenoid, nghiên cứu này, triterpenoid ủ cồn 96 o môi trường dịch men sống vi khuẩn Kết Hình cho thấy khoảng nhiệt độ 30 – 90oC (thời gian ủ – 60 phút) môi trường dịch men sống B subtilis L Plantarum, nhiệt độ 30oC 60oC (0 – 40 phút) mơi trường cồn 96o lượng triterpenoid đo khơng có khác biệt đáng kể Tuy nhiên, thời điểm 60 phút (60 oC) thời điểm khác 90oC lại có khác biệt đáng kể lượng triterpenoid đo có xu hướng giảm dần tăng thời gian ủ Điều cho thấy môi trường cồn 96o nhiệt độ 90oC cấu trúc triterpenoid bị ảnh hưởng nên làm giảm độ hấp thu triterpenoid bước sóng 544nm Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 46 Độ ổn định triterpenoid (mg/g) môi trường cồn 96o dịch men sống vi khuẩn 2,5 1,5 0,5 0' 20' 40' 60' 20' 30oC Cồn 96o 40' 60oC B subtilis 60' 20' 40' 60' 90oC L plantarum Hình 5: Đồ thị có khoảng tin cậy thể độ ổn định hàm lượng triterpenoid (mg/g) ủ môi trường cồn 96o, dịch men sống B subtilis L plantarum Kết luận Hỗn hợp acid (acid acetic 0,01M acid lactic 0,01M) NaOH 0,01M có ảnh hưởng làm tăng phóng thích nhẹ hoạt chất triterpenoid mơi trường thời gian ủ – ngày, môi trường NaOH 0,01M làm tăng phóng thích hoạt chất mạnh Thời gian ủ lâu lượng hoạt chất phóng thích mơi trường nhiều Các chủng L plantarum, L casei, L acidophilus B subtilis có khả làm yếu cấu trúc bào tử nấm sống hấp – ngày lên men, nấm hấp cho hiệu lên men cao nấm sống Đặc biệt, chủng L casei L acidophilus cho hiệu phóng thích hoạt chất nhiều lên men với bào tử nấm sống, chủng B subtilis cho hiệu phóng thích hoạt chất mạnh lên men với bào tử Đại học Nguyễn Tất Thành hấp Thời gian lên men lâu hiệu làm yếu tăng phóng thích hoạt chất môi trường hiệu Cấu trúc polysaccharide ổn định nhiệt độ 30 – 90oC 120oC (môi trường nước) thời gian ủ – 60 phút môi trường nước, acid (HCl 0,01M), base (NaOH 0,01M) dịch men sống B subtilis L plantarum, ổn định nhiệt độ 120oC môi trường acid base Triterpenoid ổn định nhiệt độ 30 – 90oC (thời gian ủ – 60 phút) dịch men sống B subilis L plantarum, nhiệt độ 30oC (thời gian ủ – 60 phút), 60oC (thời gian ủ – 40 phút) cồn 96o; ổn định cồn 96o nhiệt độ 60oC (thời gian ủ 60 phút) 90oC Lời cảm ơn: Nghiên cứu tài trợ Quĩ phát triển khoa học công nghệ NTTU đề tài mã số 2017.01.52 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 47 Tài liệu tham khảo Sakai T and Chihara G 1995 “Health foods and medicinal usages of mushrooms” Food Reviews International, 11, pp 69-81 Xie YZ, Li SZ, Yee A, La Pierre DP, Deng Z, Lee DY, Wu QP, Chen Q, Li C, Zhang Z, Guo J, Jiang Z, Yang BB (2006) “Ganoderma lucidum inhibits tumor cell proliferation and induces tumour cell death” Enzyme Microb Technol 40: 177-185 Mohammed A, Adelaiye AB, Abubakar MS, Abdurahman EM, 2007 “Effects of aqueous extract of Ganoderma lucidum on blood glucose levels of normoglycemic and alloxan-induced diabetic wistar rats” Med Plant Res 1(2): 34-37 Sheng-Quan Huang, Jin-Wei Li, Zhou Wang, Hua-Xin Pan, Jiang-Xu Chen and Zheng-Xiang Ning, 2010 “Optimization of Alkaline Extraction of Polysaccharides from Ganoderma lucidum and Their Effect on Immune Function in Mice” Molecules, 15, 3694-3708 Min BS, Nakamura N, Miyashiro H, Bae KW, Hattori M, 1998 “Triterpenes from the spores of Ganoderma lucidum and their inhibitory activity against HIV-1 protease”, Chem Pharm Bull 46 (1998) 1607–1612 Jungjing MA, Zhengyi FU, Peiyan MA, Yanli SU, Qingjie Z, 2007 “Breaking and characteristics of Ganoderma lucidum spores by high speed centrifugal shearing pulverizer” J Wuhan Univ Tech-Mater Sci Ed 22: 617-621 Yu-Jie Fu, Wei Liu, Yuan-Gang Zu, Xiao-Guang Shi, Zhi-Guo Liu, Günter Schwarz, Thomas Efferth, 2009 “Breaking the spores of the fungus Ganoderma lucidum by supercritical CO 2” Food Chemistry 112, 71–76 Chaiyavat Chaiyasut*, Chakkrapong Kruatama and Sasithorn Sirilun, 2010 “Breaking the spores of Ganoderma lucidum by fermentation with Lactobacillus plantarum” African Journal of Biotechnology Vol 9(43), pp 7379-7382 Woo, Cheol Joo, Un-Jung Yun, Heui-Dong Park, 1996 “Isolation of Chitin-utilizing Bacterium and Production of Its Extracellular Chitinase” Journal of Mricrobiology and Biotechnology, 6(6): 439 - 444 Evaluating the capability to break the spores of Ganoderma lucidum by some bacteria isolated from probiotics Nguyễn Trung Hiếu1,*, Lê Thị Thùy Trang2 Nguyen Tat Thanh University Department of Fisheries TP HCM * nthieu@ntt.edu.vn Abstract We screened bacteria isolated from yogurt and probiotics They can weaken the structure of spores and increase the release of triterpenoids from Ganoderma lucidum The results showed that four strains of L plantarum, L casei, L acidophilus and B subtilis are able to weaken the structure of spores and increase the release of triterpenoid from live fungal spores after 3-7 days of fermentation Higher yields are obtained when fermented with steamed fungal spores under the same conditions In particular, strains of L casei and L acidophilus give higher triterpenoid release when fermented with live fungus spores, while B subtilis give the highest release efficiency when fermented with steamed fungus spores When evaluating the effect of some culturing and extraction conditions on triterpenoid and polysaccharide stability, the results showed that polysaccharide is stable in solvents, water, acid (HCl 0.01M), base (NaOH 0.01 M), and live enzymes of B subtilis and L plantarum at incubation temperatures of 30-90°C and 120oC (water) for 0-60 minutes; while unstable in acid and base environment at 120oC Triterpenoid is stable at 30-90oC (incubation time 0-60 minutes) in B subtilis and L plantarum, and 30 oC (incubation time 060 minutes), 60oC (incubation time - 40 minutes) in 96o alcohol; unstable in 96o alcohol at 60oC (incubation time 60 minutes) and 90oC Keywords Ganoderma lucidum, L plantarum, L casei, L acidophilus, B subtilis, polysaccharide, triterpenoid Đại học Nguyễn Tất Thành ... với vi khuẩn so với bào tử nấm sống Các kết thí nghiệm lên men vi khuẩn với bào tử nấm sống (Hình 2) nấm hấp (Hình 3) nhận định, bước sang giai đoạn cạn dinh dưỡng vi khuẩn lên men làm tăng khả. .. triterpenoid hoàn toàn từ bào tử nấm, vi c phá vỏ bào tử cần kết hợp dung môi chi t thích hợp để chi t kiệt hoạt chất từ bào tử Trong nghiệm thức đối chứng, lượng triterpenoid lại bào tử nấm sống ủ môi... men bào tử nấm sống (A1, C1 D1) (Hình 2) Đặc biệt, lên men bào tử nấm hấp với B subtilis lượng triterpenoid lại bào tử thấp sau ngày lên men Điều cho thấy, bào tử nấm hấp thích hợp cho lên men