Báo cáo thí nghiệm môn Cơ sở sinh học

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KĨ THUẬT HÓA HỌC BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CƠ SỞ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : Nguyễn Minh Thiện Sinh viên thực : Vũ Thị Phương Thanh Lớp : L04 MSSV : 1813981 Mục lục Bài 1: Kính hiển vi Bài 2: Màng tế bào Bài 3: Thành phần hóa học tế bào 12 Bài 4: Enzyme 18 Bài 5: Hô hấp 23 Bài 6: Quang hợp 28 Bài 7: Nhiễm sắc thể 33 Bài 8: Cấu trúc tế bào thực vật 36 Bài KÍNH HIỂN VI QUAN SÁT TẾ BÀO THỰC VẬT, ĐỘNG VẬT, VI SINH VẬT I Tóm tắt lý thuyết Ngun tắc Kính hiển vi dụng cụ quang học dùng để quan sát vật nhỏ bé Độ phóng đại kính hiển vi tích số độ phóng đại vật kính thị kính Cấu tạo Kính hiển vi gồm có hệ thống: * Hệ thống giá đỡ gồm: Bệ, thân, mâm gắn vật kính, bàn để tiêu (hay gọi bàn sa trượt, giá đỡ mẫu), kẹp tiêu * Hệ thống phóng đại gồm: – Thị kính: phận kính hiển vi mà người ta để mắt để soi kính, có loại ống đơi ống đơn Trên thị kính có độ phóng đại x5, x6, x10 x15 (Bản chất thấu kính hội tụ có tiêu cự ngắn, dùng để tạo ảnh thật vật cần quan sát) – Vật kính: phận kính hiển vi quay phía có vật mà người ta muốn quan sát, có độ phóng đại vật kính: x4, x10, x40, x100 (thường dùng với dầu soi kính) (Bản chất thấu kính hội tụ có tiêu cự ngắn, đóng vai trò kính lúp để quan sát ảnh thật) * Hệ thống chiếu sáng gồm: – Nguồn sáng (đèn chiếu sáng) – Màn chắn, đặt vào tụ quang dùng để điều chỉnh lượng ánh sáng qua tụ quang – Tụ quang, dùng để tập trung tia ánh sáng hướng luồng ánh sáng vào tiêu cần quan sát Vị trí tụ quang nằm gương bàn để tiêu Di chuyển tụ quang lên xuống để điều chỉnh độ chiếu sáng * Hệ thống điều chỉnh: – Núm chỉnh tinh (ốc vi cấp) – Núm chỉnh thô (ốc thứ cấp) – Núm điều chỉnh tụ quang lên xuống – Núm điều chỉnh độ tập trung ánh sáng tụ quang – Núm chỉnh độ sáng – Núm dịch chuyển bàn sa trượt (trước, sau, trái, phải) Hình 1.1: Cấu tạo kính hiển vi Sử dụng Để bảo vệ kính hiển vi tiêu bản, dùng kính phải thận trọng, vặn ốc phải từ từ, nhẹ nhàng tiến hành theo thứ tự sau: • Cắm điện, bật cơng tắc Nhìn vào thị kính để điều chỉnh nguồn sáng điện chiếu để ánh sáng thị trường • Quan sát mẫu vật với thị kính có độ phóng đại nhỏ trước (x4 x10) • Đặt tiêu lên bàn nâng kẹp vào kẹp tiêu để cố định tiêu bản, điều chỉnh mẫu vật vào tâm nguồn sáng • Nhìn xuống tiêu (lame), vặn nhẹ ốc thứ cấp đến đầu vật kính gần chạm vào lame hay ngừng lại kính hiển vi có phận cản an tồn • Nhìn vào thị kính vặn nhẹ ốc thứ cấp lên đến thấy rõ hình ảnh mẫu vật (nếu chưa thấy rõ điều chỉnh ốc vi cấp nhẹ nhàng đến nhìn thấy rõ) • Muốn xem độ phóng đại lớn đưa phần muốn xem vào thị trường Nhìn vào lame, vặn đầu xoay chuyển đến vật kính lớn (x40) (nếu không đụng vào lame) Điều chỉnh ốc vi cấp đến nhìn rõ hình ảnh Lưu ý: • Khi quan sát cần nhấp nháy ốc vi cấp thường xuyên để thấy đầy đủ mặt phẳng khác tiêu • Ốc vi cấp chuyển động hai chiều Nếu vặn mà thấy kẹt dừng lại vặn theo chiều ngược lại Tuyệt đối không dùng sức mạnh để vặn tiếp làm hỏng phận Có thể nâng hạ bàn nâng cho phù hợp tiếp tục chỉnh ốc vi cấp • Ảnh thấy kính hiển vi ln ln ngược chiều với vật quan sát Do muốn xem chiều cần đặt lame mang tiêu ngược lại với chiều muốn quan sát Tương tự thay đổi vị trí kẹp tiêu theo chiều ngược lại với chiều cần quan sát • Sử dụng hai mắt để quan sát Khi muốn vẽ hình mắt trái nhìn vào kính, mắt phải nhìn vào giấy vẽ đặt bên phải kính (có thể thực ngược lại thuận tay trái) để vừa quan sát vừa vẽ Khơng nhắm mắt quan sát • Nên chia vị trí thị trường giống đồng hồ để dễ theo dõi • Sử dụng độ phóng đại lớn, nguồn sáng cần nhiều Bảo quản kính hiển vi Kính hiển vi phải bảo quản nhiệt độ mát khô Cần đậy kỹ để tránh bụi bám vào vật kính thị kính II Cách chuẩn bị mẫu vật, vật liệu hóa chất Cách chuẩn bị mẫu vật - Đặt lên lame giọt nước giọt glycerine - Đặt mẫu vật cần quan sát vào giọt nước/glycerine - Đậy lamelle lên lame (hình vẽ) - Quan sát vật kính x4, x10 x40 Hình 1.2: Cách đậy lamelle lên mẫu vật để tránh bọt khí Vật liệu tươi - Lá lẻ bạn - Nấm men - Củ khoai tây Hóa chất Dung dịch Lugol III Thực hành Tế bào động vật: tế bào biểu mô miệng a) Thao tác Dùng tăm tre cạo nhẹ lên niêm mạc miệng nhúng đầu tăm vào giọt Lugol lame Đậy lamelle quan sát kính hiển vi vật kính x40 b) Kết Hình 1.3: Tế bào biểu mơ miệng Tế bào lẻ bạn a) Thao tác Dùng dao lam tách vài mảnh biểu bì lẻ bạn, ngâm nước Chọn vài mảnh mỏng đặt lame giọt nước, đậy lamelle quan sát kính hiển vi Quan sát vẽ hình b) Kết Hình 1.4: Tế bào lẻ bạn Tế bào vi sinh vật: nấm men a) Thao tác Nhỏ giọt canh trường nấm men lên lame Đậy lamelle quan sát kính hiển vi vật kính x40 b) Kết Hình 1.5: Tế bào nấm men Hạt tinh bột: hạt tinh bột khoai tây a) Thao tác Dùng kim mũi giáo cạo nhẹ lên lát khoai tây Lấy lượng bột đặt lên lame giọt nước Đậy lamelle quan sát kính hiển vi vật kính x10 x40 Điều chỉnh ốc vi cấp để thấy vòng tròn đồng tâm hạt tinh bột b) Kết Hình 1.6: Hạt tinh bột khoai tây BÀI MÀNG NGUYÊN SINH CHẤT I Tóm tắt lý thuyết Về thành phần cấu tạo nên màng ngun sinh chất gồm có lipid (lớp đơi phospholipid cholesteron), protein tỉ lệ nhỏ carbohydrat Lớp phospholipid bên màng tế bào cho phép phân tử nhỏ, hòa tan dầu mỡ qua Các phân tử lớn, chất điện ly muốn ra, vào tế bào cần phải qua kênh protein thích hợp,chính điều tạo lên tính thấm chọn lọc màng nguyên sinh chất- đặc tính quan trọng màng, giúp bảo vệ tế bào khỏi mơi trường xung quanh Hình 2.1: Cấu tạo màng nguyên sinh chất Mọi yếu tố ảnh hưởng đến tính tồn vẹn cấu trúc màng ảnh hưởng đến chức nêu tế bào II Vật liệu hóa chất sử dụng Vật liệu tươi - Củ dền đỏ - Lá lẻ bạn Hóa chất - Cồn tuyệt đối - NaCl 8% III Thực hành Hiện tượng co nguyên sinh  Tiến hành thí nghiệm: - Dùng dao lam tách vài mảnh biểu bì lẻ bạn, ngâm nước Chọn vài mảnh mỏng đặt lame giọt nước, đặt lamelle quan sát kính hiển vi - Dùng giấy thấm rút nước lamelle, nhỏ 1-2 giọt NaCl 8% vào cạnh lamelle Qua kính hiển vi quan sát tượng xảy mảnh biểu bì - Dùng giấy thấm rút dung dịch NaCl lamelle, nhỏ 1-2 giọt nước cất vào cạnh lamelle Qua kính hiển vi quan sát tượng xảy mảnh biểu bì  Hiện tượng xảy ra- giải thích Hình 2.2: Tế bào lẻ bạn ban đầu Hình 2.3: Tế bào lẻ bạn sau nhỏ NaCl - Kết quả: ban đầu, màu tím chiếm hết tồn tế bào Sau nhỏ NaCl, tế bào chất (phần màu tím) bị thu nhỏ lại - Giải thích: Là tượng co nguyên sinh Khi nhỏ NaCl, môi trường bên ngồi có nồng độ chất hòa tan cao môi trường bên tế bào (môi trường ưu trương), nước tế bào có xu hướng ngồi thuận theo chiều gradient nồng độ để cân áp suất thẩm thấu làm cho tế bào chất bị co rút lại tách khỏi thành tế bào Hình 2.3: Tế bào lẻ bạn sau nhỏ NaCl Hình 2.4: Thấm NaCl, nhỏ nước cất - Kết quả: Tế bào dần trở lại trạng thái ban đầu - Giải thích: Là tượng phản co nguyên sinh Khi nhỏ nước vào, mơi trường bên ngồi có nồng độ chất tan thấp môi trường bên tế bào (môi trường nhược trương), nước thấm từ vào tế bào, tế bào dần trở lại trạng thái ban đầu Ảnh hưởng nhiệt độ dung môi hữu lên tính thấm màng  Tiến hành thí nghiệm: - Cắt củ dền thành miếng có kích thước cm x cm x 0,5 cm Cho miếng củ dền vào becher rửa dòng nước chảy vài phút để lơi tất sắc tố từ tế bào bị vỡ (dừng nước rửa khơng sắc tố), sau ngâm mẫu vào nước - Ghi ống nghiệm từ → 7: Ống - 6: 15 ml nước cất/ống Ống 7: 15 ml cồn tuyệt đối (đậy miệng ống nghiệm nylon) - Xử lý nhiệt: xử lý nhiệt miếng củ dền nhiệt độ 40℃, 50℃, 70℃, 100℃ - 10°C Cách xử lý nhiệt: cho miếng củ dền vào túi nylon nhỏ nhúng vào nước có nhiệt độ định 10 phút Lưu ý: đuổi hết khơng khí túi để miếng củ dền ép sát vào túi nylon - Cho mẫu vào ống nghiệm: ngâm miếng củ dền sau xử lý nhiệt vào ống nghiệm đánh số: Ống 1: cho miếng củ dền không qua xử lý nhiệt (ống chuẩn) Ống 2: cho vào miếng dền xử lý 40°C Ống 3: cho vào miếng dền xử lý 50°C Ống 4: cho vào miếng dền xử lý 70°C Ống 5: cho vào miếng dền xử lý 100°C Ống 6: cho vào miếng dền xử lý - 10oC Ống 7: cho miếng củ dền không qua xử lý nhiệt - Tất ống nghiệm đặt vào giá, để yên 15 phút Sau vớt bỏ miếng dền ra, lắc đều, so sánh màu dung dịch ống nghiệm so với ống chuẩn Lưu ý: + Kích thước mẫu phải GIỐNG + Thời gian xử lý nhiệt phải GIỐNG + Thời giang ngâm mẫu ống nghiệm phải GIỐNG Hiện tượng xảy ra:  Bảng đánh giá cường độ màu Ống + ++ +++ +++++ +++++ ++++ ++++++ nghiệm Cường độ màu 10 - Từ phân tử glucozơ qua phân giải hiếu khí giải phóng 38 ATP nhiệt lượng Hơ hấp sáng - Là trình hấp thụ oxi giải phóng CO2 ngồi sáng, xảy đồng thời với quang hợp - Hơ hấp sáng gây lãng phí sản phẩm quang hợp Quan hệ hô hấp quang hợp Là trình phụ thuộc lẫn nhau: - Sản phẩm quang hợp (C6H12O6 + O2) ngun liệu hơ hấp chất oxi hố hô hấp - Sản phẩm hô hấp (CO2 + H2O) nguyên liệu để tổng hợp nên C6H12O6 giải phóng oxi quang hợp II Vật liệu hóa chất sử dụng Vật liệu tươi Cà rốt Khoai tây Hạt đậu xanh nảy mầm Nấm men Hóa chất Xanh methylene 0.1% H2O2 1% Resin gaiac 2% Dầu thực vật Ba(OH)2 bão hòa III Thực hành Phát enzyme a Dehydrogenase  Tiến hành thí nghiệm Cho vào ống nghiệm (φ 30 mm) thứ lát cà rốt dày – mm, tránh chồng lên Cho dung dịch xanh methylene vào ống nghiệm ngập lát cà rốt khoảng cm Đổ lớp dầu khoảng 0,5 cm lên bề mặt xanh methylene Ống nghiệm thứ làm tương tự cà rốt (ống đối chứng) đặt ống nghiệm nhiệt độ phòng 60 phút Ghi nhận tượng xảy So sánh khác biệt ống  Hiện tượng xảy ra: Vùng sát với miếng cà rốt Xanh methylene nhạt màu so với xung quanh, miếng cà rốt nhuộm màu 24 Hình 5.1: Hai ống nghiệm sau 60 phút  Giải thích tượng: - Acetyl- CoA dùng chu trình Krebs để thực hơ hấp tế bào Enzyme dehydrogenase enzyme xúc tác cho trình tạo acetyl- CoA Sản phẩm trình có H+, H+ tiếp xúc với xanh methylene khiến màu xanh nhạt dần, vùng gần cà rốt có màu xanh nhạt xung quanh b Oxydase  Tiến hành thí nghiệm: Cắt lát mỏng khoai tây (ngang qua chồi) Nhỏ lên lát khoai tây (ở vị trí chồi) giọt resin gaiac Quan sát tượng Làm tương tự với lát khoai tây thứ sau đặt nước sôi phút  Hiện tượng xảy ra: - Lát khoai tây khơng xử lý nhiệt nhỏ resin gaiac lên vị trí nhỏ nhuộm màu xanh - Lát khoai tây xử lý nhiệt, vị trí nhỏ resin gaiac có màu nâu resin gaiac Hình 5.2: Hai lát khoai tây sau nhỏ resin gaiac 25  Giải thích tượng: - Oxydase xúc tác cho phản ứng oxy hóa- khử liên quan đến phân tử oxy, oxy bị khử thành H2O2 , mà resin gaiac có thành phần Guaiaconic acid, có phản ứng xanh lam với tác nhân oxy hóa Khi chồi khoai tây thực hơ hấp, nhận O2 vào làm chất phản ứng, enzyme Oxydase khử O2 thành H2O2, H2O2 làm resin gaiac có màu xanh lam - Miếng thứ hai không đổi màu xử lý nhiệt, nhiệt làm hoạt tính oxydase nên khơng khử O2 thành H2O2 resin gaiac nhỏ lên khơng đổi màu c Catalase  Tiến hành thí nghiệm: Nghiền 10 g khoai tây cối (không cần gọt vỏ) Thêm 20 ml nước cất, dùng chày nghiền lọc qua vải lọc Chia chất chiết vào ống nghiệm (φ 18 mm) Ống để nhiệt độ phòng, ống đặt nước sơi 10 phút chuyển sang ly chứa nước lạnh để làm nguội nhanh Cho vào ống nghiệm ml H2O2 Quan sát tượng xảy  Hiện tượng xảy ra: - Ống 1: Khi nhỏ H2O2 có tượng sủi bọt - Ống 2: Khi nhỏ H2O2 bọt khí Hình 5.3: Kết sau nhỏ H2O2  Giải thích tượng: - Enzyme catalase khoai tây có khả xúc tác giúp phân hủy H2O2 thành O2 H2O, bọt khí sủi O2 giải phóng - Ống nghiệm khơng có tượng nhiệt độ thay đổi cấu trúc không gian enzyme khiến hoạt tính Hơ hấp hiếu khí  Tiến hành thí nghiệm: 26 Cho vào erlen 60 hạt đậu xanh nảy mầm Đậy nút cao su có mang ống thủy tinh phễu Bít kín đầu lại ống thủy tinh hình chữ U phễu bơng gòn thấm nước để CO2 khơng ngồi Để n hệ thống 120 phút Sau thời gian trên, bỏ bơng gòn nhanh chóng cho đầu ống thủy tinh vào ngập ống nghiệm có chứa Ba(OH)2 Để quan sát nhanh đổ nước vào erlen qua phễu thủy tinh để đẩy khí CO2 từ erlen sang ống nghiệm  Hiện tượng xảy ra: Ống nghiệm chứa Ba(OH)2 sau thí nghiệm xuất kết tủa trắng đóng đáy thành ống nghiệm Hình 5.4: Ống nghiệm sau nhỏ Ba(OH)2  Giải thích tượng: - Trong thí nghiệm đậu xanh tiến hành hơ hấp Trong q trình hơ hấp thực vật thải khí CO2 theo phương trình: C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O - CO2 tạo theo đường ống thủy tinh, tác dụng với Ba(OH)2 theo phương trình tạo BaCO3 Ba(OH)2 + CO2 BaCO3 + H2O Vậy hạt đậu hô hấp hiếu khí Hơ hấp kị khí  Tiến hành thí nghiệm: - Chuẩn bị ống nghiệm: + Ống 1: 20 ml dung dịch glucose 2% 20 ml nước cất + Ống 2: 20 ml dung dịch glucose 2% 20 ml nấm men + Ống 3: 20 ml nước cất 20 ml nấm men 27 - Dùng bóng cao su đậy kín ống nghiệm Chờ 120 phút, quan sát tượng  Hiện tượng xảy ra: bong bóng ống nghiệm phồng lên Hình 5.5: Ba ống nghiệm 1,2,3  Giải thích tượng: q trình hơ hấp kị khí nấm men gặp glucose tạo CO2 theo phương trình sau: C6H12O6 2CH3COCOOH 2C2H5OH + 2CO2 - CO2 khiến bong bóng căng lên BÀI QUANG HỢP I Tóm tắt lý thuyết Quang hợp tổng hợp vật chất nhờ ánh sáng, khử CO2 thành hợp chất hữu phóng thích oxygen từ nước Hoạt động thực thực vật vài loại vi khuẩn nhờ lượng mặt trời Nhóm sinh vật có khả thực hoạt động quang hợp gọi sinh vật quang tự dưỡng Ở thực vật quang hợp xảy diệp lạp Năng lượng mặt trời thu nhận sắc tố quang hợp dùng để oxid hóa nước, phóng thích oxygen khử CO2 thành hợp chất hữu cơ, chủ yếu glucid Phương trình tổng quát quang hợp sau: CO2 + H2O [CH2O] + H2O + O2 28 Sự tổng hợp chất hữu xảy qua chuỗi phản ứng, chuỗi phản ứng thực hai giai đoạn: - Giai đoạn sáng (giai đoạn cần lượng ánh sáng) xảy màng thylakoid, kết tạo hợp chất cao ATP NADH + H+ - Giai đoạn tối xảy stroma (không cần ánh sáng), dùng ATP NADH để tổng hợp glucid Trong stroma có chứa đầy đủ enzyme cần thiết để tổng hợp đường từ phân tử CO2 II Vật liệu hóa chất sử dụng Vật liệu tươi - Lá tươi - Lá che kín phần ngày - Cây thủy sinh Hóa chất Acetone Cồn 70% Ether dầu hỏa Dung dịch Lugol Benzene Dung dịch Ba(OH)2 bão hòa III Thực hành Phân tích thành phần sắc tố phương pháp sắc ký  Tiến hành thí nghiệm: - Ly trích sắc tố: Giã 3g xanh cối khô Thêm vào 20 ml acetone, cà Lọc qua giấy lọc, dịch lọc hứng vào ống nghiệm khơ, đậy nút kín Quan sát màu dung dịch ánh sáng truyền suốt ánh sáng phản xạ - Sắc ký: + Chuẩn bị giấy sắc ký, thực đường gốc: Cắt mẫu giấy sắc ký 10 x 10 cm Dùng bút chì kẻ nhẹ đường thẳng song song cạnh cách bìa khoảng cm Cuốn tờ giấy thành ống, giữ kim bấm hai đầu ống, mép giấy không chồng lên Đổ dung dịch sắc tố trích ly vào hộp petri Đặt đầu ống giấy có đường vạch bút chì vào dung dịch Do mao dẫn, dịch sắc tố thấm lên thành ống giấy Khi dịch sắc tố vừa chạm vạch bút chì, lấy ra, sấy khơ máy sắy tóc đặt trước quạt máy Khi vệt sắc tố thật khô, lại nhúng đầu ống giấy vào dung dịch sắc tố đĩa Petri, đợi đến mực sắc tố ngấm chạm vạch bút chì, lấy sấy khơ lại Cho đầu ống giấy tẩm sắc tố tổng cộng lần Sau lần tẩm cuối khơ hẳn, ta có “đường gốc (vạch gốc)” tờ sắc ký chứa hỗn hợp cần phân tích 29 + Triển khai sắc ký Dung môi di chuyển: chuẩn bị 30 ml dung môi di chuyển theo tỷ lệ: phần ether dầu hỏa + phần benzene Cho dung môi vào đĩa Petri Đặt ống giấy sắc ký (với đường gốc thật khô) vào đĩa Petri chứa dung môi di chuyển, mặt thống dung mơi phải thấp vạch bút chì (giới hạn đường gốc) vài mm Dùng ly thủy tinh úp kín tồn đĩa dung mơi ống sắc ký để tạo khí bên bão hòa dung mơi Do mao quản, dung mơi ngấm lên dần tờ sắc ký Đợi đến dung môi ngấm lên đến cách cạnh tờ giấy khoảng cm lấy tờ giấy ra, đánh dấu vị trí mức ngấm dung mơi sấy khơ Đánh số “vạch gốc” 0, vạch dung môi cao 10 Chia khoảng di chuyển dung môi thành 10 băng, đánh số băng từ đến 10 Xác định vị trí loại sắc tố tách rời tờ sắc ký Tính Rf  Hiện tượng xảy ra: - Ly trích sắc tố: Khi quan sát với ánh sáng truyền suốt dung dịch có màu xanh, quan sát với ánh sáng phản xạ dung dịch có màu đỏ Hình 6.1: Ánh sáng truyền suốt Hình 6.2: Ánh sáng phản xạ 30 - Sắc ký: Hình 6.3: Kết vị trí sắc tố  Giải thích tượng: - Ly trích sắc tố: kết tượng phát huỳnh quang (xảy pha sáng), chất tượng diệp lục (DL0) nhận lượng ánh sáng gián tiếp qua carotenoid rơi vào trạng thái kích thích (DL*), nhận photon, phân tử đạt mức lượng cao hơn, lúc này, nguyên tử đạt mức cao hơn, lúc điện tử di chuyển lên mức quỹ đạo cao DL* khơng bền nên điện tử kích hoạt trở lại trạng thái cân bằng cách: + Nhường điện tử cho phân tử cho chất nhận quang hệ thống ( khởi đầu pha sáng quang hợp) + Điện tử phóng thích lượng dạng nhiệt năng lượng ánh sáng nhiệt (hiện tượng phát huỳnh quang) Năng lượng ánh sáng phát yếu lượng ánh sáng thu vào , bước sóng ánh sáng thường rơi vào vùng đỏ + Ở ống nghiệm quan sát ánh sáng truyền suốt, vị trí nguồn sáng, dung dịch chứa diệp lục tố mắt thẳng hàng Có xuất ánh sáng huỳnh quang (màu đỏ) bị che Ánh sáng lúc qua ống nghiệm bị hấp thụ riêng ánh sáng xanh lục không bị diệp lục tố hấp thụ xuyên qua dung dịch truyền thẳng đến mắt ta, làm mắt ta quan sát thấy dung dịch có màu xanh 31 + Ở ống nghiệm quan sát ánh sáng khúc xạ, góc đặt mắt nhìn khơng thẳng hàng Ánh sáng huỳnh quang lúc không bị che trường hợp truyền suốt, nên cường độ ánh sáng đỏ lấn át ánh sáng xanh dẫn đến ta quan sát thấy dung dịch có màu đỏ - Sắc ký: kết có sắc tố sau:  Sắc tố Carotenoid Xantophyl Diệp lục a Diệp lục b Rf 0.45 0.2 0.1 Giải thích tượng sắc tố tách rời di chuyển đến vị trí khác giấy sắc ký: Ta có sắc tố khác có độ hòa tan khác dung mơi định (dung mơi thí nghiệm phần ether dầu hỏa + phần benzene) Do cho hỗn hợp dung dịch sắc tố lên bề mặt hấp thụ (giấy sắc ký) sắc tố hòa tan dung mơi di chuyển dung môi với vận tốc phụ thuộc vào khối lượng phân tử chúng độ hòa tan dung mơi Vì tạo tách rời di chuyển đến vị trí khác giấy sắc ký Chứng minh tinh bột sản phẩm quang hợp  Tiến hành thí nghiệm: - Dùng giấy đen che tối phần (đang cây) ngày (hình) Ngắt lá, dùng kẹp chuyển vào ống nghiệm có chứa cồn 70% cốc chứa nước sôi đun màu xanh - Rửa nước trải lên đĩa petri Cho dung dịch lugol lên lá, lắc để nhuộm màu Dùng giấy thấm hút hết dung dịch Lugol thừa  Hiện tượng xảy ra: có phần khơng bị bịt kín chuyển màu xanh tím Hình 6.4: Lá sau nhỏ Lugol 32  Giải thích tượng: - Phản ứng quang hợp CO2 + H2O C6H12O6 + O2 - Đầu tiên ta đun acetone để tách chất không cần thiết phục vụ cho thí nghiệm đạt hiệu suất cao, acetone dung mơi hữu nên hòa tan số chất hữu có - Sau đun nhỏ Lugol, ta dễ dàng quan sát rút sau: + Đối với phần không che tối, phần có thay đổi màu, thể phản ứng đặc trưng tinh bột + Lugol + Đối với phần che tối, phần khơng có thay đổi màu nhỏ Lugol - Sở dĩ có tượng phần không che tối xảy phản ứng quang hợp để sinh C6H12O6 chuyển thành dạng dự trữ tinh bột, tinh bột phản ứng với Lugol tạo thành phức màu đặc trưng - Còn riêng phần che tối, khơng có ánh sáng nên quang hợp khơng xảy mà thay vào hơ hấp – trình phân giải tinh bột Các tinh bột có chuyển lên phần lân cận không che tối để dự trữ cho Dẫn đến phần không bắt màu với Lugol BÀI SỰ PHÂN CHIA TẾ BÀO I Tóm tắt lý thuyết Mitosis Mitosis (phân chia tế bào đẳng nhiễm, phân chia tế bào nguyên nhiễm) kiểu phân chia tế bào xảy tất tế bào sinh dưỡng Trong chế phân chia này, nhiễm sắc thể ổn định từ hệ sang hệ khác Kết mitosis tạo thành tế bào giống số lượng chất lượng phân tử DNA nhân Mitosis tiến trình liên tục gồm giai đoạn sau: 33 [1] Interphase [2] Prophase [3] Metaphase [4] Anaphase [5] telophase Hình 7.1: Các giai đoạn phân chia tế bào đẳng nhiễm - Interphase: + Pha G1: tổng hợp protein nguyên liệu cần thiết cho tăng trưởng + Pha S: chép DNA + Pha G2: tổng hợp protein nhiễm sắc thể, tạo thêm bào quan - Prophase: nhiễm sắc thể kép dần co xoắn, màng nhân nhân dần tiêu biến, thoi phân bào dần xuất - Metaphase: nhiễm sắc thể kép co xoắn cực đại xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo thoi phân bào Mỗi nhiễm sắc thể kép đính với thoi phân bào tâm động - Anaphase: nhiễm sắc thể tách di chuyển thoi phân bào hai cực tế bào - Telophase: nhiễm sắc thể dần giãn xoắn,thoi phân bào dần tiêu biến, màng nhân nhân dần xuất Meiose (giảm phân) Meiose hay giảm phân hình thức phân bào diễn tế bào sinh dục, gồm lần phân bào liên tiếp nhiễm sắc thể nhân đơi lần kì trung gian trước lần phân bào I (giảm phân I) Lần phân bào II (giảm phân II) diễn sau kì trung gian ngắn khơng có kỳ trung gian Nét đặc trưng prophase meiose tượng bắt chéo trao đổi đoạn tạo nên tính đa dạng sinh học a Giảm phân - Prophase 1: NST trạng thái kép dần co xoắn đồng thời xảy tượng tiếp hợp trao đổi chéo sợi cromatit cặp NST kép tương đồng Hai trung thể di chuyển cực tế bào Màng nhân, nhân tiêu biến 34 - Metaphase 1: NST trạng thái kép co ngắn cực đại có hình dạng đặc trưng NST kép xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo Thoi vơ sắc hồn chỉnh NST kép dính với thoi vơ sắc tâm động - Anaphase 1: NST kép cặp tương đồng giữ nguyên trạng thái (không tách tâm động) phân li cực tế bào nhờ co rút thoi vơ sắc (Mỗi cực có n NST kép) - Telophase 1: NST trạng thái kép Màng nhân, nhân dần xuất trở lại bao lấy NST cực tế bào Thoi vô sắc mờ dần biến Xảy phân chia tế bào chất để hình thành tế bào con, tế bào chứa n NST trạng thái kép b Giảm phân - Prophase 2: nhiễm sắc thể kép đơn bội co xoắn lại - Metaphase 2: nhiễm sắc thể kép đơn bội xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo - Anaphase 2: nhiễm sắc thể đơn nhiễm sắc thể kép đơn bội phân ly hai cực tế bào - Telophase 2: nhiễm sắc thể đơn nằm gọn nhân tạo thành Hình 7.2: Các giai đoạn trình giảm phân II Vật liệu hóa chất sử dụng Vật liệu - Chóp rễ củ hành đỏ (quan sát giai đoạn mitosis) - Túi phấn hẹ (quan sát giai đoạn meiose) Hóa chất - HCl N - KCl - Phẩm nhuộm hematoxyline III Thực hành Tiến hành thí nghiệm - Rửa nước mẫu vật 35 - Làm mềm rễ HCl N 15 phút, hơ nhẹ qua lửa đến có khói (1 lần) - Rửa nước kỹ - Nhuộm mẫu với hematoxyline 10 phút - Rửa với nước cất đến hết màu nhuộm đĩa đựng mẫu - Đặt mẫu giọt KCl 10% lame đậy lên lamelle Đè bẹp mẫu cục gôm đến mẫu trải mỏng - Quan sát chi tiết kính hiển vi vật kính x 10 x 40 Kết Tế bào chóp rễ củ hành anaphase (kì sau) nguyên phân nhiễm sắc thể đơn di chuyển hai cực tế bào Hình 7.3: Kết quan sát tế bào chóp rễ củ hành BÀI CẤU TRÚC THỰC VẬT I Tóm tắt lý thuyết Cơ thể thực vật gồm rễ, thân, lá, hoa, hình thành từ loại mô khác nhau, loại mô đảm nhận vai trò chuyên biệt giúp thực vật tồn phát triển Các loại mô thể thực vật kể: mơ che chở (biểu bì), mơ nâng đỡ (cương mô, hậu mô), mô dẫn truyền (mộc, libe), mô (nhu mô) Các loại mô dễ dàng nhận biết qua vị trí, hình dạng, cách nhuộm màu quan sát tiêu thực vật kính hiển vi quang học  Phân biệt rễ thân: dựa vào tỉ lệ miền vỏ miền lõi: + Miền vỏ > miền lõi: rễ + Miền vỏ < miền lõi: thân - Dựa vào bó gỗ: + Bó gỗ hướng tâm: rễ + Bó gỗ phân hóa ly tâm: thân 36  Phân biệt rễ mầm rễ mầm: - Rễ mầm: số lượng bó gỗ thường - Rễ mầm: số lượng bó gỗ nhiều, lớn Ngoài rễ mầm có vòng tế bào nội bì với đai Caspary hình chữ U (hay gọi hình móng ngựa)  Phân biệt thân mầm với thân mầm: - Thân mầm: thường gồm nhiều bó gỗ hình chữ V xếp nhiều vòng tròn đồng tâm - Thân mầm: có vòng bó gỗ  Phân biệt lá mầm lá mầm: - Lá mầm: có bó mạch xếp song song - Lá mầm: bó mạch xếp thành hình xương cá II Vật liệu hóa chất sử dụng Vật liệu - Mơ thực vật tươi Hóa chất - Acid acetic 45%, Javel, phẩm nhuộm màu III Thực hành Tiến hành thí nghiệm - Dùng gơm làm thớt, lưỡi lam làm dao để cắt mẫu vật - Cắt mẫu thật mỏng theo hướng vng góc với trục dọc mẫu ngâm nước cất mặt kính đồng hồ - Loại bỏ mẫu dày - Hút mặt kính đồng hồ cho Javel vào ngâm mẫu 15 phút - Rửa Javel với nước cất 4-5 lần, hút mặt kính đồng hồ - Ngâm mẫu thuốc nhuộm màu 15 phút - Rửa phẩm nhuộm ngâm mẫu nước cất - Quan sát chi tiết tiêu kính hiển vi vật kính x10 x40 Kết thí nghiệm- giải thích Là lá mầm có bó mạch xếp song song Hình 8.1: Lá mầm 37 Là thân mầm vì: + Miền vỏ < miền lõi + Số vòng bao bó mạch > Hình 8.2: Thân mầm Là rễ mầm vì: + Miền vỏ > miền lõi + Có đai Caspary có màu xanh hình chữ U Hình 8.3: Rễ mầm 38