Nhân giống in vitro cây hoa hồng cổ sapa từ đốt thân

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== HỒ THỊ HÀ NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HỒNG CỔ SAPA TỪ ĐỐT THÂN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật HÀ NỘI - 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ====== HỒ THỊ HÀ NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HỒNG CỔ SAPA TỪ ĐỐT THÂN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Người hướng dẫn khoa học TS LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS La Việt Hồng - Khoa Sinh KTNN Trường Đại học Sư phạm Hà Nội định hướng, quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn tới Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm môn Thực vật khoa Sinh - KTNN trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật, Phòng thí nghiệm Thực vật - trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, phương tiện để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý học thực vật giúp đỡ, quan tâm đóng góp ý kiến để tơi có hồn thành khóa luận tốt Cảm ơn gia đình, bạn bè em khóa 42, khóa 43 ln giúp đỡ động viên, góp ý cho tơi q trình học tập hồn thành đề tài Hà Nội, ngày 14 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Hồ Thị Hà LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: - Phòng Đào tạo trường Đại học Sư Phạm Hà Nội - Khoa Sinh - KTNN trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thực hướng dẫn TS La Việt Hồng Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố Hà Nội, ngày 14 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Hồ Thị Hà DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP: 6-Benzylaminopurine CT: Công thức Mg/l: miligam/ lit MS: Murashige & Skoog NAA: 1-naphthaleneacetic acid NXB: Nhà xuất LSD0,05: Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung hoa hồng 1.2 Đặc điểm sinh học hoa hồng 1.2.1 Đặc điểm hình thái hoa hồng 1.2.2 Điều kiện sinh thái 1.3 Giá trị sử dụng 1.4 Tình hình nghiên cứu hoa hồng cổ Sapa giới Việt Nam 10 1.4.1 Tình hình nghiên cứu hoa hồng cổ Sapa giới 10 1.4.2 Tình hình nghiên cứu hoa hồng cổ Sapa Việt Nam 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 14 2.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 14 2.3.1 Thiết bị 14 2.3.2 Dụng cụ 14 2.4 Môi trường nuôi cấy 14 2.5 Điều kiện nuôi cấy 15 2.6 Phương pháp nghiên cứu 15 2.6.1 Tạo vật liệu khởi đầu 16 2.6.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa 16 2.6.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh 17 2.7 Phân tích thống kê số liệu thực nghiệm 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu 19 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa 22 3.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 KẾT LUẬN 29 KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân hoa hồng cổ Sapa 19 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến trình tái sinh nhân nhanh chồi hoa hồng cổ Sapa sau tuần nuôi cấy 23 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ tạo in vitro hồn chỉnh (sau tuần ni cấy) 27 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây hoa hồng cổ Sapa Hình 3.1 Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân hoa hồng cổ Sapa 21 Hình 3.2 Chồi hoa hồng cổ Sapa sau tuần nuôi cấy 25 Hình 3.3 Rễ hoa hồng cổ Sapa môi trường MS + NAA 0,25mg/l sau tuần nuôi cấy 28 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Cây hồng cổ Sapa hoa đẹp giới Hồng cổ Sapa thuộc họ Rosaceae mười họ lớn Cây hoa hồng cổ Sapa thuộc bụi có gai, sinh trưởng phát triển tốt, màu xanh tươi, hoa có màu hồng sen nở quanh năm, hoa có hương thơm cổ điển quyến rũ Không vậy, hoa hồng cổ Sapa biểu tượng cho tình u, ngào lãng mạn [13] Hoa hồng cổ Sapa mang lại giá trị tinh thần, đồng thời có lợi nhuận kinh tế cao.Vì vậy, hoa hồng thường nhân giống vơ tính phương pháp giâm, chiết ghép Các phương pháp tốn công sức, thời gian hiệu thành công không cao, đặc biệt giống hồng ngoại Các phương pháp truyền thống có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, không yêu cầu kĩ thuật hay chuyên mơn cao, đồng thời khơng cần có thiết bị đại [15] Song, có hạn chế lớn chất lượng tạo không cao, số lượng Hiện tại, có phương pháp giải hạn chế phương pháp nhân giống nuôi cấy mô Ưu điểm vượt trội phương pháp nhân giống làm tăng chất lượng số lượng hoa thời gian ngắn tạo quanh năm Tuy nhiên, áp dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật lên hoa hồng thường gặp nhiều khó khăn Vấn đề đoạn thân chuyển từ mơi trường bên ngồi vào mơi trường MS vơ trùng để nuôi cấy dễ mang theo vi sinh vật bám bề mặt thân bị nhiễm nội sinh Ngồi ra, chuyển đổi mơi trường ảnh hưởng định đến khả sống sót điều tiết sinh trưởng chồi bật từ đoạn thân mang theo tính chất Bên cạnh đó, vi nhân giống loại thân bán gỗ có tinh dầu hoa hồng thường xuyên gặp phải tích lũy hợp chất phenol gây tượng ức chế sinh trưởng, khó ni cấy, chậm phát triển, vàng dễ bị chết môi trường in vitro [7] Năm 1945, Nobecourt Kofler nuôi cấy mô tạo mô sẹo rễ từ chồi Năm 2009, Kantamaht cộng nghiên cứu hồng thành công nhân nhanh điều khiển hoa in vitro Ở nước ta, có số nghiên cứu với nhiều loại hoa hồng khác đối tượng hoa hồng cơm Nguyễn Thị Phương Thảo CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu Đối với đối tượng khác có nồng độ chất xử lí, khử trùng thích hợp Kết bước phụ thuộc vào: trình lấy mẫu, thời điểm, nồng độ chất khử trùng, thời gian thực khử trùng đặc điểm sinh lí đối tượng Vì vậy, phải xác định phương thức khử trùng thích hợp đối tượng hoa hồng cổ Sapa Thí nghiệm sử dụng đốt thân hoa hồng cổ Sapa tạo vật liệu vô trùng, đốt thân khử trùng thực box, lắc o cồn 70 thời gian phút, sau sử dụng dung dịch javen nồng độ là: 5%, 7% 10% thời gian 10 phút Thí nghiệm cần đạt tỉ lệ mẫu sống cao ngược lại tỉ lệ mẫu nhiễm tỉ lệ mẫu chết thấp Đây giai đoạn quan trọng để tạo vật liệu khởi đầu để tiếp tục bước Bảng 3.1 Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân hoa hồng cổ Sapa Dung dịch javen Nồng độ (%) Thời gian Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu chết (%) Tỷ lệ mẫu sống (%) (phút) a 7,89 b 6.89 a 16,67 10 71,85 10 36,03 10 10 58,88 LSD 0,05 17,05 b 12,25 b b 49,67 a 24,44 5,72 15,10 a b Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 Dựa vào kết phân tích thống kê (bảng 3.1) ta thấy: kết sau tuần cho thấy javen có tác dụng việc làm đốt thân chồi hoa hồng cổ Sapa (bảng 3.1), với nồng độ javen khác thực khoảng thời gian 10 phút kết tỉ lệ mẫu nhiễm mẫu sống chênh đáng kể Tỉ lệ nhiễm sử dụng javen nồng độ 5%, 7% 10% khoảng thời gian 10 phút là: 71,85%, 36,03%, 58,88% Tỉ lệ mẫu sống tăng dần từ 12,25% lên 49,67% tăng nồng độ javen từ 5% lên 7% thời gian 10 phút Và tăng nồng độ javen lên 10% tỉ lệ mẫu sống giảm xuống 24,44% Tỉ lệ mẫu nhiễm cao 71,85% sử dụng javen 5% tỉ lệ mẫu nhiễm thấp 36,03% sử dụng javen 7% với khoảng thời gian 10 phút Tỉ lệ mẫu thí nghiệm tiêu để đánh giá hiệu khử trùng mẫu, tỉ lệ mẫu sống cao ứng với công thức sử dụng javen 7% thời gian 10 phút tỉ lệ mẫu sống thấp 12,25% ứng với công thức sử dụng javen 5%, tỉ lệ mẫu sống cao 24,44% sử dụng jven 10% khoảng thời gian 10 phút Nồng độ javen ảnh hưởng rõ rệt việc làm mẫu Trong đó, chồi khử trùng javen 7% cho tỷ lệ mẫu sống cao 49,67% tỉ lệ mẫu nhiễm thấp 36,03%, tỉ lệ mẫu chết 6,89% Khi khử trùng mẫu nồng độ javen cao tỉ lệ mẫu sống thấp (24,44%) nồng độ tẩy rửa cao mà mẫu khơng thích nghi Và ngược lại, sử dụng nồng độ thấp tỉ lệ mẫu bị nhiễm cao (71,85%) chưa đủ nồng độ để làm mẫu a b c d Hình 3.1: Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đốt thân hoa hồng cổ Sapa a Cành hoa hồng cổ Sapa b Mẫu lắc javen 7% sau ngày c Mẫu xuất chồi sau tuần d Mẫu sau tuần Mẫu khử trùng với javen nồng độ 7% 10 phút xuất chồi sau tuần (hình 3.1c) Chồi tiếp tục sinh trưởng phát triển (hình 3.1.d) kích thước chồi kích thước lớn Màu sắc xanh đậm 21 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Các kỹ thuật nhân giống trồng công nghệ cao nuôi cấy mô tế bào thực vật, sử dụng hợp lí chất dinh dưỡng ánh sáng nhân tạo điều khiển sinh trưởng phát triển thực vật ngồi tự nhiên [2] Thí nghiệm bổ sung BAP NAA để tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Chất BAP hoocmon điều hòa sinh trưởng an tồn với trồng thuộc nhóm Cytokinin Cytokinin có vai trò sinh lý điều hòa phân chia tế bào đỉnh chồi rễ, thay đổi ưu đỉnh thúc đẩy sinh trưởng chồi, thúc đẩy vận chuyển dinh dưỡng vào mô [2] Chất NAA hoocmon thuộc nhóm Auxin có vài trò kích thích kéo dài thân (chỉ với nồng độ thấp), tăng cường ưu đỉnh, chức phản ứng hướng quang hướng trọng lực, thúc đẩy phân hóa mơ mạch [2] Thí nghiệm sử dụng BAP NAA để tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa: mẫu sau khử trùng đưa vào môi trường nuôi cấy MS bổ sung 3,5 g/l agar 30 g/l saccharose kết hợp với BAP NAA theo tỉ lệ khác Sau tuần ni cấy nhận thấy mơi trường có tái sinh nhân nhanh chồi Dựa vào kết bảng 3.2 kết hợp với hình 3.2 nhận định BAA NAA có ảnh hưởng định tới việc tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Khi mơi trường bổ sung thêm BAP số chồi tăng dần theo nồng độ đến nồng độ định (2 mg/l) số chồi giảm Với mơi trường bổ sung thêm BAP 0,5 mg/l số chồi trung bình 1,8 chồi, số chồi tăng lên chồi bổ sung thêm BAP 2,0 mg/l Tuy nhiên kết hợp BAP với NAA số chồi giảm dần Với môi trường bổ sung BAP 1,0 mg/l NAA 0,05 mg/l số chồi trung bình 2,8 chồi giảm Các tiêu thể bảng sau: 22 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến trình tái sinh nhân nhanh chồi hoa hồng cổ Sapa sau tuần nuôi cấy MS + 30g đường + 3,5g agar Số chồi/mẫu BAP (mg/l) NAA (mg/l) 0,5 1,80 1,0 2,40 1,5 3,20 2,0 4,00 1,0 0,05 2,80 1,0 0,1 2,40 1,5 0,05 1,80 1,5 0,1 2,20 LSD 0,05 c Số lá/chồi abc 2,00 c 2,05 abc 1,75 ab 2,50 a 1,80 abc 2,15 ab abc 2,15 ab bc 1,90 3,20 bc 2,60 ab 3,40 a 4,00 bc 4,40 bc 2,80 c 3,60 bc 3,00 0,77 Kích thước chồi (cm) 0,84 b b b a b b 0,39 Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 Các chất điều hòa sinh trưởng BAP NAA có ảnh hưởng định tới việc tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Môi trường có bổ sung BAP mg/l kích thích tái sinh tạo chồi cho chất lượng số lượng chồi tốt (số lượng chồi/mẫu chiều cao chồi 2,5cm) môi trường bổ sung BAP 0,5 mg/l cho số chồi trung bình 1,8 chồi, kích thước chồi trung bình 2,0 cm Kết môi trường bổ sung BAP 1,5 mg/l NAA 0,05 mg/l cho số chồi trung 23 bình 1,8 chồi, số trung bình chồi 3,60 lá, chiều cao trung bình 2,15 cm Xét tiêu chí số lượng chồi: cơng thức có bổ sung BAP 1,0 mg/l kết hợp NAA 0,05 mg/l (4,4 lá) cho số lượng cao môi trường BAP 2mg/l (4 lá) Công thức cho số chồi thấp môi trường bổ sung BAP 1,0 mg/l kết hợp NAA 0,1 mg/l cho 2,80 Xét tiêu chí kích thước chồi: mơi trường phù hợp hoa hồng cổ Sapa môi trường có bổ sung BAP 2,0 mg/l cho kích thước chồi trung bình 2,5 cm, sau mơi trường có bổ sung thêm BAP 1,0 mg/l kết hợp NAA 0,1 mg/l BAP 1,5 mg/l kết hợp NAA 0,05 mg/l có kích thước chồi trung bình 2,15 cm Mơi trường có kết thấp kích thước chồi mơi trường có bổ sung BAP 1,5 mg/l cho kích thước chồi 1,75 cm Mơi trường có bổ sung thêm BAP mg/l phù hợp để tạo chồi nhân nhanh in vitro hoa hồng cổ Sapa Kết đạt tỉ lệ cao kết Bùi Thị Thu Hương đồng tác giả nghiên cứu tạo chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ hồng cổ Sapa: Kết phân tích thống kê cho thấy, bổ sung BAP Kinitin làm cho mẫu có khả có tỷ lệ bật chồi chiều cao chồi hẳn so với công thức đối chứng Tỷ lệ mẫu bật chồi cao (91,67%) CT5 (1,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l Kinetin), khác biệt có ý nghĩa thống kê với cơng thức lại, chồi thu mập, xanh đậm chiều cao đạt 2,109 cm Ở CT6 (1,5 mg/l BAP + mg/l Kinetin), mẫu có tỷ lệ bật chồi cao (86,67%), nhiên, chồi bị biến dạng (khơng rõ hình lá), màu xanh khơng bình thường, có màu đen tím gân mép lá.[6] 24 b a b d c Hình 3.2 Chồi hoa hồng cổ Sapa sau tuần nuôi cấy a: tương ứng với môi trường MS + 30g đường + 3,5g agar + BAP 0,5 mg/l b: tương ứng với môi trường MS + 30g đường + 3,5g agar + BAP 1,5 mg/l c: tương ứng với môi trường MS + 30g đường + 3,5g agar + BAP 2,0 mg/l d: tương ứng với môi trường MS + 30g đường + 3,5g agar + BAP 1,0 mg/l + NAA 0,1 mg/l Đều nhận thấy có tái sinh chồi nhân nhanh chồi in vitro tất môi trường Tuy nhiên, hệ số chồi chất lượng chồi môi trường khác Đối với công thức có bổ sung thêm BAP 1,5 mg/l có số chồi trung 25 bình 3,2 chồi (hình 3.2b), nhiên chiều cao chồi dao động khoảng 1,75 cm Đối với mơi trường có bổ sung thêm BAP 1,0 mg/l + NAA 0,1 mg/l hệ số chồi giảm, trung bình số chồi 2,4 chồi (hình 3.2d) Môi trường phù hợp hoa hồng cổ Sapa thí nghiệm mơi trường MS + 30g đường + 3,5g agar + BAP 2,0 mg/l (hình 3.2b) có số chồi trung bình chồi, số chồi có màu xanh tươi kích thước chồi trung bình 2,5 cm 3.3 Ra rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh Nhóm hoocmon Auxin tổng hợp chủ yếu mơ phân sinh đỉnh chồi non Mô phân sinh đỉnh rễ sản xuất auxin, rễ phụ thuộc vào lượng auxin đỉnh chồi cung cấp cho Vai trò sinh lý auxin thúc đẩy rễ bên rễ bất định, kích thích kéo dài thân…[2] NAA thuộc nhóm hoocmon Auxin hay sử dụng giâm chiết ghép có độ bền hóa học cao tác dụng sinh trường phát triển mạnh kích thích hình thành rễ giúp trồng sinh trưởng phát triển theo ý muốn người Những mẫu đưa vào môi trường nuôi cấy MS bổ sung 3,5 g/l agar 30 g/l saccharose kết hợp NAA theo tỉ lệ khác Sau tuần ni cấy nhận thấy mơi trường có khác tỉ lệ rễ, số rễ chồi chiều cao rễ thể bảng sau: 26 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ - tạo in vitro hồn chỉnh (sau tuần ni cấy) Công thức NAA (mg/l) Tỷ lệ rễ (%) Số rễ/chồi Chiều cao rễ (cm) CT1 N0,25 13,33c 3,00b 1,58b CT2 N0,5 60,00a 5,00a 2,75a CT3 N0,75 46,67ab 4,25ab 2,00ab CT4 N1,00 33,33b 3,75b 2,08ab 0,13 0,17 0,50 LSD0,05 Các chữ khác cột thể khác biệt với mức ý nghĩa α = 0,05 Kết cho thấy rễ chồi hoa hồng in vitro cảm ứng chất điều hòa NAA Quá trình rễ chồi hoa hồng cổ Sapa in vitro phụ thuộc vào NAA Tỉ lệ rễ, số rễ chiều cao rễ khác với nồng độ NAA tương ứng công thức Tỉ lệ rễ cao 60,00% tương ứng với CT2 có NAA 0,5 (mg/l) giảm dần nồng độ NAA tăng Tỉ lệ rễ thấp 13,33% ứng với môi trường bổ sung NAA 0,25 (mg/l) Số rễ trung bình dao động từ – rễ Cao 5,00 rễ ứng với NAA 0,5 (mg/l) thấp 3,00 rễ ứng với môi trường chứa NAA 0,25 (mg/l) Ở môi trường NAA 0,75 NAA 1,00 (mg/l) số rễ là: 4,25 3,25 (rễ) Mơi trường thích hợp NAA 0,5 (mg/l) cho chiều dài rễ tốt 2,75 cm (CT2), sau mơi trường có bổ sung thêm NAA 1,0 mg/l cho chiều dài rễ trung bình 2,08 cm Chiều dài rễ thấp 1,58 cm ứng với môi trường bổ sung NAA 0,25 mg/l Công thức có mơi trường bổ sung thêm NAA 0,5 (mg/l) thích hợp 27 để rễ - tạo hoa hồng cổ Sapa in vitro hoàn chỉnh Tại môi trường cho số lượng chất lượng rễ tốt Sau tuần nuôi cấy cho số lượng rễ 5,00 chiều dài rễ 2,75 cm với tỉ lệ rễ 60% Kết tương đồng với số nghiên cứu ví dụ: Rashida cộng nghiên cứu chồi Rosa indica ni cấy mơi trường có 0,6 mg/l IBA 0,1 mg/l NAA sau khoảng thời gian 12 tuần tỷ lệ chồi rễ đạt 50% Sự hình thành rễ chồi hoa hồng thử nghiệm với mg/l IBA kết hợp với mg/l α- NAA nghiên cứu Nguyễn Thị Kim Thanh (2005) cho hiệu 60% [6] Hình 3.3 Rễ hoa hồng cổ Sapa môi trường MS + NAA 0,25mg/l sau tuần nuôi cấy Kết cho thấy mơi trường có xuất rễ, từ nhân định NAA thúc đẩy trình hình thành phát triển rễ hoa hồng cổ Sapa Tuy nhiên, mơi trường có nồng độ khác khả tạo rễ in vitro khác Rễ hoa hồng cổ Sapa môi trường MS + NAA 0,25mg/l sau tuần nuôi cấy mập, trắng có chiều dài 2,75 cm Kết phù hợp với nghiên cứu La Việt Hồng đối tượng hoa hồng Mê Linh (Hà Nội) công thức môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l NAA thích hợp cho tạo rễ in vitro với tỷ lệ hình thành rễ cao đạt 67,50% [4] 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Tạo vật liệu invitro cho nuôi cấy mô: Đốt thân hoa hồng cổ Sapa o khử trùng bề mặt cồn 70 phút, xử lý tiếp dung dịch javel 7% 10 phút cho tỷ lệ mẫu sống đạt 71,85(%) Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro: Mơi trường MS, 30g/l saccarozơ, 3,5g/l agar, có bổ sung BAP 2,0 (mg/l) mơi trường thích hợp cho nhân nhanh chồi in vitro, cho số chồi/mẫu đạt 4,00; chiều cao chồi (cm) 2,50 (cm) sau tuần ni cấy Ra rễ - tạo in vitro hồn chỉnh: Môi trường MS, 30 g/l saccarozơ, 3,5 g/l agar, bổ sung NAA (0,5 mg/l) thích hợp cho tạo rễ in vitro, tỷ lệ hình thành rễ cao đạt 60% KIẾN NGHỊ Tìm hiểu nghiên cứu để tìm giá thể phù hợp cho tỷ lệ sống cao Tiếp tục nghiên cứu, đánh giá ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng khác đến q trình nhân giống in vitro hồng cổ Sapa để hoàn thiện quy trình nghiên cứu nhân giống in vitro đạt hiệu cao 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Việt Chương, Lâm Thị Mỹ Hương, 2006, Kỹ thuật giâm, chiết, ghép hoa Hồng, NXB Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Văn Đính, La Việt Hồng, (2015), Sinh trưởng phát triển thực vật, Nxb Đại học quốc gia Hà Nội Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc, Nguyễn Quang Thạch, 2002 Cây hoa Hồng Kĩ thuật trồng Nxb Lao động xã hội La Việt Hồng, Chu Đức Hà, Ngô Thị Quỳnh (2019), “Nhân giống hoa Hồng Mê Linh – Hà Nội phương pháp ni cấy mơ”, Tạp chí Khoa học Công nghệ - Đại học Thái Nguyên, 194 Phạm Hoàng Hộ, 2003, Cây cỏ Việt Nam, Nxb Trẻ HCM.Tp Bùi Thị Thu Hương, Đồng Huy Giới, Nguyễn Thị Trang, Hồ Thị Quyên, (2017), “Nhân nuôi hoa hồng cổ Sapa (Rosa gallica L.) kỹ thuật cấy mô in vitro”, Hội nghị Khoa học toàn quốc Sinh thái Tài nguyên sinh vật lần thứ 7, 1229 - 1235 Trịnh Thị Hương, Nguyễn Ngọc Quỳnh Thơ, Trần Trọng Tuấn, Dương Tấn Nhựt (2018), “Nghiên cứu nhân giống vơ tính hoa in vitro hoa hồng tỉ muội (Rosa chinensis Jacq var Minima Redh)”, Kỷ yếu Hội thảo Khoa học Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 1392-1397 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, Nxb Đại học quốc gia Hà Nội Trần Văn Minh, (2015), Cơng nghệ sinh học thực vật, Giáo trình cao học nghiên cứu sinh, Trường Đại học Nông Lâm TPHCM, 751 10 Nguyễn Thị Kim Thanh, (2005), “Nhân giống hoa hồng kỹ thuật nuôi cấy in vitro”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, 1: 39-41 11 Nguyễn Thị Phương Thảo, Đặng Quang Bích, Nguyễn Thị Thủy, Nguyễn Thị Thùy Linh, Phạm Thị Thu Hằng, Đặng Thị Thanh Tâm, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Lâm Hải, Nguyễn Thanh Hải (2015), “Nhân nhanh cảm ứng hoa in vitro hoa hồng cơm (Rosa sericea Lindl)”, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 13 (số 4): 606 - 613 12 Nguyễn Bảo Toàn, (2004), Nuôi cấy mô tế bào thực vật, Nxb Đại học Cần Thơ Tiếng nước 13 Ali J, Chaudry NY, Aftab 2005 In vitro development and improvement of chromium affected adventitious root of Solaum of tuberosum L with GA3 and application Pak J Bot 46(2): 687-692 14 Kantamaht K., Nonlapan P., Kamnoon K., 2009 In vitro flowering from cultured nodal explants of rose Not Bot Hort Agrobot Cluj, 37(2): 261 - 263 15 Norton ME, Boe AA (1982), In vitro propagation of ornamental Rosaceous plants, Hort Sci, 17:190-191 16 Omidi M, Yadollahi A, Eftekhari M, (2016), “Comparative study of Rosa damascenes Mill and R Gallica micro-propagation”, Biological Forum - An International Journal, 8(1): 135-145 17 Pati PK, Rath SP, Sharma M, Sood A, Ahuja PS (2006), In vitro propagation of rose - a review, Biotechnology Advances, 24: 94-114 18 Rajeshbabu PM, Gopalakrishnan Janarthanan B, Sekar T (2014), An efficient and rapid generation protocol for micropagation of rose bourboniana from nodal explants, Int J of Current Biotechnology, 2(1):24-29 19 Vijaya N, Satyanarayana G, Prakash J, Pierik RLM (1991), Effect of culture media and Growth Regulators on in vitro Propagation of rose, Curr Plant Sci Biotechnol Agric, 12: 209-214 Tài liệu internet 21 https://www.vietnamplus.vn/ha-noi-phat-trien-thuong-hieu-hoa-hong-ganvoi-vung-dat-me-linh/291529.vnp 22 https://www.vuonvayhoabinh.vn PHỤ LỤC Một số hình ảnh q trình ni cấy Rễ hoa hồng cổ Sapa môi trường bổ sung NAA 0,75 mg/l Chồi hoa hồng cổ Sapa môi trường bổ sung BAA 1,0 mg/l ... tạo vật liệu khởi đầu in vitro từ đốt thân hoa hồng cổ Sapa Thí nghiệm 2: Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Thí nghiệm 3: Ra rễ - tạo hoa hồng cổ Sapa in vitro hoàn chỉnh 2.6.1... tài: “NHÂN NHANH IN VITRO CÂY HỒNG CỔ SAPA TỪ ĐỐT THÂN” Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu 2.1 Mục đích nghiên cứu Nhân giống in vitro hoa hồng cổ Sapa phương pháp nuôi cấy từ đốt thân giúp tăng số lượng... vào) × 100 2.6.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa Ảnh hưởng BAP đến tái sinh nhân nhanh chồi in vitro hoa hồng cổ Sapa - Sử dụng chồi in vitro sau tái sinh nuôi cấy môi trường