Tinh nong do d NA bang ky thuat quang pho hap thu

Đề tài Sinh học phân tử Nguyễn Thị Xuân Thảo Nguyễn Thị Thúy Hằng Nguyễn Thị Mỹ Thuận Lê Thị Diệu Anh Phan Hoàng Yến Mai Văn Điểu Trần Văn Thảo Võ Hiệp ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DNA Định lượng axit nucleic thường thực để xác định nồng độ trung bình DNA RNA có mặt hỗn hợp  Ứng dụng phương pháp định tính, định lượng DNA dùng nhiều lĩnh vực y học để chẩn đoán bệnh học di truyền  PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ Mục đích Nguyên tắc hoạt động Các yếu tố ảnh hưởng Mục đích Xác định hàm lượng kiểm tra độ tinh khiết phân tử DNA, ARN có dung dịch Nguyên tắc  Phương pháp đo quang phổ dựa vào hấp thu mạnh ánh sáng tử ngoại bước sóng 260nm base Purine Pyrimidine, độ hấp thụ tỷ lệ với nồng độ DNA Dựa vào tính chất mà người ta có thể xác định được hàm lượng nucleic acid phương pháp đo quang phổ hấp thụ ở bước sóng 260nm (OD260nm – Optical Density260nm).   Một đơn vị OD bước sóng 260nm ký hiệu OD260nm OD260nm = 50g/ml cho dung dịch DNA mạch kép OD260nm = 40g/ml cho dung dịch DNA mạch đơn RNA Độ hấp thụ ánh sáng Công thức xác định hàm lượng DNA dung dịch  DNA mạch đơi Hàm lượng ADN (µg/ml)= 50 x OD260nm x n Trong : OD260nm : độ hấp thụ dung dịch DNA 260 nm 50: hệ số chuyển đổi dung dịch có nồng độ DNA sợi đơi n: hệ số pha loãng  DNA mạch đơn hay ARN Hàm lượng DNA (µg/ml)= 40 x OD260nm x n Trong : 40: hệ số chuyển đổi dung dịch có nồng độ DNA sợi đơn Các yếu tố ảnh hưởng đến độ hấp thụ quang phổ Nồng độ ion Nhiệt độ PH Tạp chất protein Để đánh giá độ tinh của dung dịch DNA, người ta đo dung dịch bước sóng 280nm mức hấp thụ cực đại protein, protein hấp thụ ánh sáng bước sóng 260nm nucleic acid làm sai lệch giá trị thật nồng độ acid nucleic - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm = 1,8 – xem dịch chiết DNA tinh - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm > dung dịch chiết RNA tinh sạch, dung dịch DNA bị biến tính phân hủy - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm < 1,8 dung dịch DNA,ARN có lẫn tạp chất Ưu điểm: Cho kết nhanh, độ xác tương đối cao Nhược điểm: Chỉ kiểm tra hàm lượng DNA mẫu tinh khiết ... OD260nm OD260nm = 50g/ml cho dung d ch DNA mạch kép OD260nm = 40g/ml cho dung d ch DNA mạch đơn RNA Độ hấp thụ ánh sáng Công thức xác định hàm lượng DNA dung d ch  DNA mạch đơi Hàm lượng ADN... nucleic acid làm sai lệch giá trị thật nồng độ acid nucleic - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm = 1,8 – xem d ch chiết DNA tinh - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm > dung d ch chiết RNA tinh sạch, dung d ch DNA bị... x OD260nm x n Trong : OD260nm : độ hấp thụ dung d ch DNA 260 nm 50: hệ số chuyển đổi dung d ch có nồng độ DNA sợi đơi n: hệ số pha lỗng  DNA mạch đơn hay ARN Hàm lượng DNA (µg/ml)= 40 x OD260nm