Nghiên cứu nuôi trồng thử nghiệm đông trùng hạ thảo tại 3 tỉnh sơn la, điện biên, lai châu

LỜI CẢM ƠN T ự ỡ ệ ề ủ T ế T - ọ ự ỡ ủ Y k ọ ợ T Tù ợ , ( ủ Y ợ , ọ ộ ); ộ,Vệ ẩ ứ , khoa DK Pharma, TS V ỡ ề ọ ọ Vệ ệ ủ ộ,Vệ T ự S ự ộ ự ệ – TS ù T ể ợ ể ọ ọ , ệ - ộ Y ế, , Biotrade - T ổ V ợ ầ T ể ợ , ợ ( , , U ỡ ề ), ù ệ ể ợ ự ệ ề X ợ ủ ọ ể ự ó ọ T, T SV , ề ệ ự ể ề ự ệ ề T ; Sự , ù ệ ỡ T T, Y ế ệ , ọ ứ ề ệ T ủ ụ , ỉ ợ ựủ ộ, ỡ ể , ệ ọ ộ S ộ ự q ý ệ ệ ị , ỡ ủ ề ệ ỡ ợ ủ S , ể ị ủ ị , ỉ X ỉ ệ , - ề ệ ề ợ ọ ể ệ ề ó! S La, ăm 2017 C TS P i Vă N ã MỤC LỤC MỞ ẦU ụ ứu 3 Nộ ứu PHẦN 1: TỔNG QUAN 1 Tổ ề 1.1.1 ù ệ 112 ặ ể 113 ị ợ 1.1 ọ ệ ể ệ Cordyceps militaris Cordyceps militaris ự 1.2.1 Tỉ ủ ủ ứ 1.2 ặ ế C militaris , ế, ộ ủ ệ , Vệ 12 ,S 18 18 2 Tỉ 20 S 1.2.3 Tỉ 23 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 21 V ệ 211 V 212 ứ , ó , ế ị 29 ệ 29 ó ết bị 29 22 ứ 29 221 ề 222 , ó ực nghiệm 30 23 T í 231 T 232 X 29 ệ 47 ệ 47 í ệ 48 PHẦN 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 49 31 Ặ IỂM CỦA NẤM C militaris NBRC 100741 49 3.1.1 ế ứ ặ ể ể ủ C militaris NBRC 100741 49 3.1.2 Kết qu t ếu t ù c 313 ó ĩ ến t o nguồn gi ng n m C militaris cung ữ gi ng 52 th 57 ii 32 ẾT UẢ IÊ C militaris Ở UI Ô ỨU XÂY Õ T Í ứ 3.2.1 Kết qu Ự UI TRÌ UÔI TRỒ Ấ IỆ 59 , ển n m C militaris ể bột nhộng tằm 59 ếu t 3.2.2 Kết qu t ể tự C militaris ến ( ằm/nhộng tằ ịnh th 3.2.3 Kết qu ở ển n m ) 82 ểm thu ho ù th o C militaris 98 324 ùng h th o C militaris IÊ 3.3 KẾT QUẢ ỨU XÂY Cordyceps militaris NBRC 100741 Ở UI 331 Ự Ơ I ng n m NBRC 100741 í UI TRÌ ệm 104 I TRỒNG NẤM T 108 ể C militaris NBRC 100741 108 3.3.2 Sự í ển NBRC 100741 pilot sau xu t thể qu t i ệm 108 3.3.3 Sự ển NBRC 100741 í sợi t ệm 113 3.3.4 Sự ểt ển NBRC 100741 í ù IÊ 341 th o Cordyceps militaris ỨU XÂY Ự Ơ Ộ I Ì ễ UI TRÌ I TRỒ 121 Ấ C militaris Ở UI 125 ế 342 y gi ệm 117 3.3.5 3.4 ện hệ ế 10/2015 - 9/2016 ng n m Cordyceps militaris ị ể R 100741 ứ 125 ể y NBRC 100741 bột nhộng tằm 128 3.4.3 Sự ển củ ù th o NBRC 100741 t ộ ể qu t i PTN 128 ởng củ 3.4.4 Sự thiện hệ sợi th o NBRC 100741 t ộ ệm 134 ởng 3.4.5 Sự ển củ ù th o NBRC 100741 t i hộ ể PTN 137 c y gi 346 T í ù ể ù ợ ù 143 iii 347 3.5 IÊ I ƯỠ TRÙ ù ỨU XÁ Ị ộ th o Cordyceps militaris T À VÀ ỢP CHẤT Ó Ầ , ẠT TÍ À SI 143 ƯỢNG MỘT SỐ CHỈ TIÊU ỌC CỦA SẢN PHẨ Ô Ạ THẢO C militaris NBRC 100741 147 351 ợ C militaris NBRC 100741 147 352 ợ C militaris NBRC 100741 149 353 ợ 354 ợ ộ , é C militaris NBRC 100741 151 , β C militaris NBRC 100741 152 355 ợ ộ 356 ợ C militaris NBRC 100741 154 357 ợ C militaris NBRC 100741 155 C militaris NBRC 100741 153 3.6 HIỆU QUẢ KINH TẾ, KHẢ Ă TRỒNG NẤM C militaris TRÊ IÊ , I TRIỂN KHAI ỨNG DỤ IÁ T Ể TỪ NHỘNG TẰ UI TRÌ ÂU TẠI SƠ UÔI , IỆN ÂU 155 361 ầ 155 362 ề kh ụn 363 ề thị 364 ệu qu kinh tế 159 157 ng 158 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 163 Kết lu n 163 Kiến nghị 164 TÀI LIỆU THAM KHẢO 165 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ả ởng củ ế ởng, ển n m C militaris 52 Bảng 3.2 Ả ởng củ Bảng 3.3 Ản ởng nhiệ ộ ế ởng n m C militaris 56 Bảng 3.4 ợ ể bột nhộng tằm 69 Bảng 3.5 T Bảng 3.6 ặ ến t bổ ầ ể y n m C militaris 70 ểm hệ sợi n ể Bảng 3.7 ển n m C militaris 54 ể y 70 ủ ể 45 72 Bảng 3.8 Ả ởng củ ộ ẩm tới kh ể qu n m C militaris ể bột nhộng tằm 74 Bảng 3.9 Ả ởng nhiệ ộ tớ , ển của n m C militaris ể bột nhộng tằm 76 Bảng 3.10 Ả ởng củ è è ển thể qu n m C militaris Bảng 3.11 Ả ởng củ ể bột nhộng tằm 78 ộ ự , Bảng 3.12 Ả ởng củ triển nhộng/tằ Bảng 3.13 Ả ứ ễm n m C militaris ế ởng nhiệ ến việ ể qu n m C militaris 88 ộ tới kh , ợng adenosin, cordycepin n m C militaris Bảngng 3.16 Ả ởng củ ộng tằ 100741 Bảng 3.19 Ả ộng tằ 90 ể qu n m NBRC 92 ởng củ è ởng củ ộng tằ ển thể qu ộ ẩm tới kh ể qu n m NBRC 100741 Bảng 3.18 Ả , 83 ởng tuổi nhộng tằ Bảng 3.14 Ả Bảng 3.17 Ả ển thể qu n m ể bột nhộng tằm 81 C militaris 100741 ởng, è ộng tằ ộ ng93 ự 93 ự ể qu n m NBRC 95 ởng gi ng tằ ến kh ể qu n m NBRC 100741 96 v ợ Bảng 3.20 é in thể qu NBRC 100741 ộng tằ é 97 ng thể qu C militaris Bảng 3.21 Chiề Bảng 3.22 nhộng tằm ợ ể ể ởng 98 ể 99 ổi kh Bảng 3.23 Sự ợ , í ớ, ( s y tủ s c thể qu NBRC 100741 sau ) 100 ợ Bảng 3.24 ể qu n m C militaris theo y tủ s Bảng 3.25 102 ợ ể R 100741 103 Bảng 3.26 Sự ề ệ ổ ợ ể ế Bảng 3.27 ù 103 ặ ể , ển n m C militaris NBRC 100741 pilot sau xu t thể qu t í Bảng 3.28 ặ ển n m NBRC 100741 ể , ện hệ sợi t Bảng 3.29 ặ í ể , ển n m NBRC 100741 í ệm 117 10/2015-9/2016 t Bảng 3.30 Diễn biến th i tiết từ Bảng 3.31 ặ ể ặ ị ởng thể qu 100741131 t i hộ Bảng 3.32 lot sau ệm 113 ểt c y gi ệm 109 ù ể í ệm 126 th o C militaris NBRC t thể qu t i PTN 131 ể ởng củ ù R 100741 th thiện hệ sợi PTN 135 Bảng 3.33 ặ ể , hộ y gi Bảng 3.34 T ầ , , Bảng 3.35 ệ ù th o NBRC 100741 t ể PTN 140 ợ t ch ó ể qu ể ộ tự Nhiệ o 142 ợ ệ ợ ề NBRC 100741 Bảng 3.36 ển củ ợ ệ í ệ ể C militaris 147 ệ ợ ể C militaris ề ệ í 150 vi ợ Bảng 3.37 ệ é ể C militaris ề ệ í 151 Bảng 3.38 ợ R 100741 Bảng 3.39 , ề ợ ệ í ệ ệ í ủ ể C militaris 153 ể ệ ợ C militaris NBRC 100741 ể C militaris NBRC 100741 155 í ầ ự T T t i tỉnh S , 156 ề kh Bảng 3.43 Tổng hợ S ể c 154 ệ , ệ ệ ợ ệ ệ ợ 152 í ợ Bảng 3.42 ệ ệ ợ Bảng 3.41 ề í β ệ ợ ề Bảng 3.40 ề ệ , ộ R 100741 tỉ ệ ợ , ệ , ụ 157 Bảng 3.44 Hiệu qu kinh tế củ T T Bảng 3.45 Hiệu qu kinh tế củ T T ự Bảng 3.46 Tổng hợ T T i3 ệu qu kinh tế trồng n m Cordyceps militaris t i tỉ S , vii ( VT: V ( VT: V ứng dụ ệ , ồng) 160 ồng) 161 161 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 ặ m Cordyceps militaris Hình 1.2 ủ Hình 2.1 S ồb Hình 2.2 S í í ọ ể ứ Cordyceps militaris ệm 43 ớc tiế í í ệ ồng C militaris ộ gia 44 Hình 3.1 ( ) nh cu Hình 3.2 Kết qu n m C militaris (B) 49 ện di s n phẩm PCR rDNA C militaris NBRC 100741 50 Hình 3.3 ế ự 5,8S ủ R 100741 51 Hình 3.4 Vị í chủng n m C militaris Hình 3.5 Biể í c t hệ sợi n m C militaris (B) ng (Tỉ lệ: 60mm) 53 í ẩn l c n m C militaris d i pH 4-9 54 Hình 3.8 S c t hệ sợi n m C militaris ế í ộ ẩn l c n m C militaris Hình 3.10 í nhiệ ộ ng 52 ẩn l c n m C militaris (A) ế Hình 3.9 i 51 ớc khuẩn l c n m C militaris Hình 3.6 Hình 3.7 Biể R 100741 ớc khuẩn l ( ) 55 ệ ộ 56 c t hệ sợi n m C militaris tiết (B) (Tỉ lệ: 50mm) 57 Hình 3.11 ĩ C militaris ( ) ệ Hình 3.13 í ớc khuẩn l c n m C militaris Hình 3.14 Kí ớc khuẩn l c n m C militaris ( ) 58 ợ 60 ợng cao n 62 Hình 3.15 Ả ởng củ ợng cao n ến ởng hệ sợi n m C militaris (tỉ lệ: 50mm) 62 Hình 3.16 Kí ớc khuẩn l c n m C militaris Hình 3.17 Ả ủ ợ ế ự ợ 63 ủ ệ ợ C militaris (tỉ lệ: 50mm) 64 Hình 3.18 Ả ởng củ ợng MgSO4.7H2 ến ởng hệ sợi n m C militaris 65 Hình 3.19 Ả ợng KH2PO4 ến viii ởng hệ sợi n m C militaris 66 Hình 3.20 Ả ợ Hình 3.21 Ả ợng nhộng tằ Hình 3.22 ẩ ủ ến ởng hệ sợi n m 67 ến C militaris ởng hệ sợi n m 68 ợ ộ 68 Hình 3.23 Hệ sợi n tở ể bổ sung thể í Hình 3.24 Hệ sợi n tở ể bổ sung 60-80 ng 72 Hình 3.25 Hệ sợi n tở ể bổ sung 90-100 ng 72 Hình 3.26 ể qu Hình 3.27 ể Hình 3.28 S 30-50 45 ể qu ng 71 ồng 73 45 ồng 73 ởng thể qu n m C militaris ộ ẩm ể bột nhộng tằm 74 Hình 3.29 ớc t Hình 3.30 S ộẩ ồng t o thể qu C militaris 75 ởng thể qu n m C militaris nhiệ ộ ể bột nhộng tằm 77 Hình 3.31 S ợ í ể ới ởng củ ộ ó 79 Hình 3.32 S ởng thể qu n m C militaris ng ộ ể bột nhộng tằm 80 Hình 3.33 Tằ ù Hình 3.34 ĩ ị nhiễm vi khuẩn, n m m ộng tằ y n m C militaris Hình 3.35 S ởng n m C militaris Hình 3.36 S 85 ằ ợng thể qu C militaris ( ) 84 ù ộng tằ ợ 86 ễ ức ( ) 87 Hình 3.37 Thể qu n m C militaris ộng tằ Hình 3.38 Thể qu n m C militaris ộng tằ Hình 3.39 Thể qu n m NBRC 100741 Hình 3.40 S ổ d i nhiệ ộ - 30oC 90 ộng tằ ởng thể qu n m NBRC 100741 ều kiệ è Hình 3.41 Thể qu n c 89 ( ) ộẩ 92 ộng tằ ồng è compact (B) 93 R 100741 ộng tằ ồng ộ 94 Hình 3.42 ộ ằ é ( ) ộ ằ é ( ) 96 Hình 3.43 Thể qu NBRC 100741 thu ho ch 99 Hình 3.44 ù th o NBRC 100741 xế ix y 100 Hình 3.45 ù th y truyền th ng (A) ( ) 101 Hình 3.46 S ẩ ù Hình 3.47 ù ế Hình 3.48 Hệ sợi C militaris Hình 3.49 Sự xu t hiệ ợng củ Hình 3.51 Kh ợng thể qu Hình 3.53 S ổ ó 30 R 100741 ề ệ ế 103 ể bột nhộng tằm pilot 120 ể qu NBRC 100741 (lớn nh t – nh nh t) pilot 120 R 100741/ pilot 120 ợ í ớc thể qu R 100741/ pilot 121 ể qu NBRC 100741 pilot 121 Hình 3.56 Sự xu t thể qu từ hệ sợ ( ộ tự 102 ớc thể qu NBRC 100741 pilot thu ho ch 121 Hình 3.54 nhiệ ó ể qu NBRC 100741 từ hệ sợi pilot 120 Hình 3.50 Kh Hình 3.52 í ợ , o/tự Hình 3.57 Sự xu t hệ sợ Hình 3.58 c thể qu Hình 3.59 ng thể qu ỉnh t th ể ều kiệ ều kiệ ều kiệ x X í í ệ ệ í T ) ều kiện 134 138 139 ệ 139 β glucan TB1 read at 510nm alpha glucan 0.146 0.142 0.151 0.146333333 0.372 0.376 0.365 0.371 mean read at 510 totalglucan mean TB2 TB3 0.155 0.159 0.149 0.152 0.147 0.157 0.150333333 0.156 0.368 0.37 0.374 0.373 0.375 0.368 0.372333333 0.370333333 TB1 TB2 TB3 32.27126289 32.38724227 32.2132732 1.311059923 1.346897552 1.397667526 total glucan = alpha glucan= beta glucan content (mg/100mg sample) 30.96020296 31.04034472 30.81560567 beta glucan sample) 309.6020296 310.4034472 308.1560567 content (mg/1 g d gluco std 1.034 1.035 1.035 1.034666667 F= 96.64948454 Phân tí h kim oại nặng giá thể nuôi ông trùng hạ thảo Cá hoạt động thăm quan, học tập Gá L Q ( Sinh học Boshiyuan Lishui, t nh Chi t Giang (Trung Qu c)) tr Đ th o Quận Jinming, kinh nghi m Công tá kiểm tra, đặt mẫu Nghiệm thu nhà xƣởng ặt mẫu địa phƣơng 10 Hội thảo Lần 1: Tại Trƣờng ại họ Tây Bắc Lần 2: Tại ại học Quố gia Hà Nội Lần 3: Tại Trƣờng ại họ Tây Bắc 11 Cá hoạt động Kiểm tra tiế ộ ề Họp vớ T BIG Việ h th ội i học Qu n s n xu huẩn GACP-WHO ù n phẩm t ở, i diệ S ề ị ù Triể ợc khoa DK Pharma, i Sinh học Họp vớ th o , ỉnh ể ... 221 ề 222 , ó ực nghiệm 30 23 T í 231 T 232 X 29 ệ 47 ệ 47 í ệ 48 PHẦN 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 49 31 Ặ IỂM CỦA NẤM... 108 3. 3.2 Sự í ển NBRC 100741 pilot sau xu t thể qu t i ệm 108 3. 3 .3 Sự ển NBRC 100741 í sợi t ệm 1 13 3 .3. 4 Sự ểt ển NBRC 100741 í ù IÊ 34 1 th o Cordyceps... ộ ể bột nhộng tằm 80 Hình 3. 33 Tằ ù Hình 3. 34 ĩ ị nhiễm vi khuẩn, n m m ộng tằ y n m C militaris Hình 3. 35 S ởng n m C militaris Hình 3. 36 S 85 ằ ợng thể qu C militaris ( )