15.20 XÁC ĐỊNH ĐỘC TỐ THẦN KINH TỒN DƯ TRONG VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG Khỉ dùng để thử nghiệm có trọng lượng khơng 1,5 kg Dùng khỉ lồi Macaca Cercopithecus Hỗn dịch bán thành phẩm lọc phải thử song song với chế phẩm chuẩn cách tiêm vào vùng thắt lưng tuỷ sống khỉ Trước tiêm phải lấy máu khỉ kiểm tra để chứng tỏ huyết chúng không chứa kháng thể trung hoà týp virus bại liệt Những tiêu tổ chức học đọc xong cần phải lưu lại thời gian 10 năm để làm chứng Số lượng khỉ Vắc xin thử mẫu chuẩn đồng týp cần thử nghiệm song song với số lượng khỉ Phân chia ngẫu nhiên nhóm khỉ tiêm vắc xin thử mẫu chuẩn Phải đạt 11 khỉ dương tính cho vắc xin thử 11 khỉ dương tính cho mẫu chuẩn týp týp (khỉ dương tính khỉ có tổn thương thần kinh đặc hiệu cho virus bại liệt hệ thần kinh trung ương) Đối với týp phải có 18 khỉ dương tính cho vắc xin thử 18 khỉ dương tính cho mẫu chuẩn Có thể tiêm lúc nhiều loạt vắc xin bán thành phẩm mà cần mẫu chuẩn đồng týp Để có 11 18 khỉ dương tính thường tiêm 12 20 khỉ tương ứng Gây mê khỉ ketamin hydrochlorid thuốc gây mê phù hợp khác Hàm lượng virus vắc xin thử mẫu chuẩn liều tiêm Hàm lượng virus vắc xin thử mẫu chuẩn đồng týp tiêm cho khỉ phải giống tốt nằm khoảng 105,5 - 106,5 CCID50/0,1ml Chỉ tiêm đậm độ Theo dõi khỉ sau tiêm Theo dõi khỉ sau tiêm từ 17 đến 22 ngày để phát triệu chứng nghi virus bại liệt virus khác Những khỉ sống qua 24 chết trước 11 ngày sau tiêm cần phải giải phẫu để xác định xem có phải chết virus bại liệt hay không? Tất khỉ chết nguyên nhân virus bại liệt khơng tính vào kết phải ghi vào phiếu theo dõi Những khỉ liệt nặng hấp hối tất khỉ sống qua giai đoạn theo dõi phải giải phẫu đại thể vi thể Số lượng tiêu phải đánh giá *Phải làm tiêu khỉ để kiểm tra tổ chức học vùng sau: Tuỷ sống: Vùng phình lưng, vùng phình cổ Phần phần hành tuỷ Não (mesocephalon) Cầu não, tiểu não Đồi thị Vùng vận động vỏ não Tiêu cắt mỏng 8-15 µm nhuộm gallocyanin nhuộm Nissl *Số tiêu tối thiểu phải kiểm tra sau: 12 tiêu đại diện cho vùng phình lưng 10 tiêu đại diện cho vùng phình cổ tiêu vùng hành tuỷ tiêu vùng cầu não tiểu não tiêu não Đồi thị phải trái bên tiêu Vỏ não bán cầu phải trái bên tiêu Cho điểm hoạt tính virus tiêu Dùng phương pháp cho điểm theo mức độ tổn thương để đánh giá hoạt tính virus nửa tiêu Kiểu tổn thương thâm nhiễm tế bào phá huỷ tế bào thần kinh quan trọng, tổn thương cho điểm sau: Điểm – Chỉ có thâm nhiễm tế bào (điểm khơng đủ để tính khỉ dương tính) Điểm – Thâm nhiễm tế bào có huỷ hoại nơron tối thiểu Điểm – Thâm nhiễm tế bào với huỷ hoại nhiều nơron Điểm – Hủy hoại nhiều nơron có khơng có thâm nhiễm tế bào Ghi điểm báo cáo theo biểu mẫu chuẩn Khỉ có tổn thương nơron khơng có vết tiêm coi khỉ (+) Khỉ có vết tiêm tiêu khơng có tổn thương nơron khỉ (-) Tiêu có tổn thương tiêm khơng có tổn thương virus đặc hiệu khơng tính điểm Đọc cho điểm nửa tiêu (NTB) vùng thắt lưng (L); cổ (C); não (B) Điểm tổn thương khỉ dương tính tính sau: Tổng số điểm L _ + Tổng số NTB LS = Tổng số điểm C Tổng số NTB + Tổng số điểm B _ Tổng số NTB Đánh giá thử nghiệm độc tính thần kinh Dựa hoạt tính vùng phình lưng mức độ lan truyền lên vùng phình cổ não, so sánh hoạt tính vắc xin thử mẫu chuẩn Việc xuất xưởng huỷ bỏ vắc xin dựa điểm tổng thể toàn súc vật thử nghiệm Những khỉ có hoạt tính cao khác thường vùng thắt lưng mức độ lan truyền phải tính đến đánh giá cuối Bán thành phẩm lọc đạt tiêu chuẩn số khỉ dương tính đạt u cầu khơng có khác biệt đáng kể lâm sàng tổ chức học vắc xin thử mẫu chuẩn ... độc tính thần kinh Dựa hoạt tính vùng phình lưng mức độ lan truyền lên vùng phình cổ não, so sánh hoạt tính vắc xin thử mẫu chuẩn Việc xuất xưởng huỷ bỏ vắc xin dựa điểm tổng thể to n súc vật