15.21 XÁC ĐỊNH CÔNG HIỆU CỦA VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG Xác định công hiệu (hiệu giá) vắc xin bại liệt uống gồm nội dung: - Xác định hiệu giá virus vắc xin bán thành phẩm (đơn týp) - Xác định hiệu giá virus vắc xin thành phẩm (tam liên) Xác định hiệu giá virus vắcxin bán thành phẩm (đơn týp) Nguyên tắc Công hiệu vắc xin phòng bại liệt uống xác định liều gây huỷ hoại 50% tế bào cảm thụ Hep-2 Cincinnati (CCID50) phương pháp vi lượng Vật liệu Trypsin 0,25% Mơi trường ni cấy trì tế bào Vắc xin bán thành phẩm cần thử Vắc xin mẫu chuẩn đơn giá Phiến nhựa 96 giếng đáy loại dụng cụ vô trùng khác Tế bào Hep-2 (Cincinnati) Pipet loại Tiến hành Pha loãng bậc 10 mẫu chuẩn vắc xin cần thử từ 10-1 đến 10-8 mơi trường trì tế bào Cho 0,1ml đậm độ virus vào giếng phiến nhựa, đậm độ dùng từ đến 10 giếng Cho 0,1 ml hỗn dịch tế bào chứa 1.104 tế bào Hep-2 vào giếng Đậy nắp phiến nhựa cho phiến nhựa vào tủ CO2, nhiệt độ nuôi cấy 36 0C ngày Theo dõi Theo dõi huỷ hoại tế bào từ ngày thứ đến ngày thứ Tính kết Đọc kết cuối vào ngày thứ xử lý số liệu theo phương pháp thống kê Reed-Muench Karber Thí nghiệm có giá trị hiệu giá vắc xin mẫu chuẩn sai số vòng 0,5 log10 so với hiệu giá biết Xác định hiệu giá vắc xin bại liệt uống thành phẩm tam liên Nguyên tắc Vắc xin bại liệt uống tam liên bao gồm týp virus bại liệt sống giảm độc, cần xác định hiệu giá týp thành phần (týp 1, týp 2, týp 3) hiệu giá tổng týp (týp1+ týp2 + týp3) Muốn chuẩn độ hiệu giá týp phải dùng kháng huyết (KHT) đặc hiệu để trung hồ týp lại Hiệu giá vắc xin Sabin tính lượng virus Sabin gây huỷ hoại 50% tế bào cảm thụ liều dùng cho người CCID50/0,1ml (CCID50 Cell Culture Infective Dose) Vật lịệu Môi trường nuôi cấy trì tế bào Trypsin 0,25% Vắc xin mẫu chuẩn tam liên Vắc xin thành phẩm tam liên cần thử Phiến nhựa 96 giếng đáy dụng cụ vô khuẩn khác Tế bào Hep2 (Cincinnati) Kháng huyết polio týp 1, 2, pha theo hiệu giá Pipet loại Các bước tiến hành Pha loãng bậc 0,5 log10 vắc xin mẫu chuẩn vắc xin thử mơi trường trì Pha hỗn dịch kháng huyết số chứa kháng huyết týp týp Pha hỗn dịch kháng huyết số chứa kháng huyết týp týp Pha hỗn dịch kháng huyết số chứa kháng huyết týp týp Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết số vào phiến số (xác định hiệu giá týp 1) Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết số vào phiến số (xác định hiệu giá týp 2) Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết số vào phiến số (xác định hiệu giá týp 3) Cho 0,05 ml/ giếng mơi trường trì vào tất giếng phiến số (xác định hiệu giá tổng) Cho 0,05 ml độ pha loãng vắc xin vào dãy tương ứng phiến, độ pha loãng gây nhiễm giếng Bắt đầu gây nhiễm từ độ pha loãng cao Thêm 0,05 ml mơi trường trì vào giếng chứng huyết (SC - serum control) chứng tế bào (CC- cell control) Đậy nắp phiến cho vào tủ ấm CO2 Trong trường hợp để tủ ấm thường gói kín giấy bạc túi nilông Ủ nhiệt độ 36 0C vòng để virus kháng huyết đặc hiệu kết hợp với Chuẩn bị hỗn dịch tế bào Hep-2 nồng độ 1-2 x10 5/ ml cho 0,1 ml hỗn dịch vào toàn giếng phiến Nồng độ thường đảm bảo tế bào mọc thành lớp phiến vòng 2-3 ngày Đậy nắp phiến cho vào tủ ấm CO Trong trường hợp để tủ ấm thường dán kín màng dán phiến (microtest film) Ủ 36 OC ngày Theo dõi tính kết Theo dõi huỷ hoại tế bào tính kết trình bầy phần Tế bào giếng chứng huyết chứng tế bào phải phát triển tốt Vắc xin thành phẩm coi đạt yêu cầu nếu: Týp có 106,0 CCID50/0,1ml Týp có 105,0 CCID50/0,1ml Týp có 105,5 CCID50/0,1ml Tồn qui trình xác định cơng hiệu vắc xin bại liệt uống phải tiến hành điều kiện vô khuẩn