15 12 XD chat gay sot trong vx, sp HT

15 12 XÁC ĐỊNH CHẤT GÂY SỐT TRONG VẮC XIN VÀ SINH PHẨM Thử nghiệm chất gây sốt phương pháp sinh học dùng để đánh giá tính chất gây sốt vắc xin, sinh phẩm dựa tăng thân nhiệt thỏ trước sau tiêm vào tĩnh mạch dung dịch mẫu thử Lựa chọn động vật thí nghiệm: Thỏ khoẻ mạnh, trưởng thành, đực (nhưng khơng mang thai), cân nặng khơng 1,5 kg, nuôi dưỡng thức ăn không chứa chất kháng sinh không bị tụt cân suốt tuần trước thử nghiệm Trong thời gian ngày trước thí nghiệm, khơng sử dụng thỏ cho thí nghiệm tương tự khác Cũng sử dụng thỏ trước tuần làm thử nghiệm chất gây sốt kết lần thử trước âm tính Phòng thí nghiệm Thử nghiệm tiến hành phòng yên tĩnh, tránh tiếng động ánh sáng làm ảnh hưởng đến kết thí nghiệm nhiệt độ phòng khơng chênh lệch OC so với nơi cũ Thỏ ni riêng phòng yên tĩnh có nhiệt độ 20 - 25 OC, cho ăn thức ăn tổng hợp khơng có chất kháng sinh Trước ngày tiêm, để thỏ nhịn ăn qua đêm (nhưng uống nước) thí nghiệm kết thúc Khơng cho uống nước thời gian làm thí nghiệm Thiết bị, dụng cụ: Nhiệt kế: Để đo nhiệt độ thỏ dùng nhiệt kế thiết bị điện có độ xác 0,1 OC Khi đo nhiệt độ, nhiệt kế phải đặt sâu trực tràng thỏ cm, phải để tối thiểu phút Nếu dùng thiết bị điện, phải đặt yên trực tràng 90 phút trước tiêm giữ ngun vị trí suốt thời gian thí nghiệm Dụng cụ thuỷ tinh, bơm tiêm, kim tiêm: Tất phải rửa nước để pha thuốc tiêm (WFI) sấy khô 250 OC/30 phút 200 OC/ 60 phút, dùng đồ nhựa phải không chứa chất gây sốt phải vô trùng Lồng thỏ chuyên dụng: Trước bắt đầu, đặt thỏ lồng chuyên dụng tư thỏa mái khơng trì suốt thời gian làm thí nghiệm Thử nghiệm thăm dò (preliminary test): 1- ngày trước tiến hành tiêm vắc xin, sinh phẩm cần kiểm tra sơ tính nhậy cảm cho thỏ thí nghiệm cách tiêm vào tĩnh mạch 10 ml/kg trọng lượng dung dịch nước muối sinh lý 0,9% w/v không chứa chất gây sốt làm ấm lên khoảng 38,5 OC Ghi nhiệt độ trước tiêm tiếp tục vòng sau tiêm dung dịch nước muối sinh lý Nếu thỏ có nhiệt độ giao động so với nhiệt độ ban đầu > 0,6 OC bị loại, không dùng đưa vào thử nghiệm Thử nghiệm (main test): Đối với mẫu vắc xin, sinh phẩm Thỏ thí nghiệm thỏ đạt tiêu chuẩn trên, để lồng chuyên dụng 60 phút để ổn định Sau tiến hành đo nhiệt độ thỏ lần lần cách 30 phút (nếu đo tay) theo chương trình cài đặt (nếu đo thiết bị) Nhiệt độ ban đầu thỏ giá trị trung bình lần đo Tiêu chuẩn đưa vào thí nghiệm thỏ có nhiệt độ chênh lệch lần đo không 0,2 OC nhiệt độ ban đầu nằm khoảng 38 -39,8 OC Mỗi mẫu thử tiêm cho nhóm thỏ con, nhiệt độ chênh lệch nhóm khơng q OC Dung dịch dùng để tiêm thỏ vắc xin, sinh phẩm dạng nước hoàn nguyên dung dịch nước hồi chỉnh kèm dạng đông khô Trừ số vắc xin sinh phẩm đặc biệt theo chun luận riêng (có thể pha lỗng dung dịch nước muối sinh lý không chứa chất gây sốt) Tiêm chậm dung dịch vào tĩnh mạch vành tai thỏ khoảng thời gian không kéo dài phút Thể tích tiêm cho thỏ tương ứng với ml/kg cân nặng Nên làm ấm dung dịch đến 38,5OC trước tiêm Đo nhiệt độ thỏ khoảng thời gian tuỳ thuộc vào thiết bị sử dụng (nếu đo tay đo lần; trường hợp dùng thiết bị, nhiệt độ đo tự động theo chương trình cài đặt) khoảng thời gian sau tiêm Nhiệt độ tối đa nhiệt độ cao đo khoảng thời gian Đánh giá kết • Đáp ứng thỏ hiệu số nhiệt độ tối đa sau tiêm mẫu thử nhiệt độ ban đầu • Đáp ứng thỏ nhiệt độ tối đa sau tiêm thấp nhiệt độ ban đầu • Mẫu thử coi đạt yêu cầu tiêu chuẩn chất gây sốt nhiệt độ chênh lệch thỏ ≤ 0,6 OC tổng nhiệt độ chênh lệch thỏ ≤ 1,3 OC Nếu > 2,4 OC coi không đạt yêu cầu • Nếu tổng nhiệt độ chênh lệch thỏ nằm khoảng >1,3 OC đến 2,4 OC thử nghiệm cần phải tiến hành thêm thỏ khác Mẫu thử đạt yêu cầu tiêu chuẩn chất gây sốt tổng nhiệt độ chênh lệch (cộng dồn) thỏ ≤ OC Nếu > 4,1OC coi khơng đạt u cầu • Nếu tổng nhiệt độ chênh lệch (cộng dồn) thỏ nằm khoảng >3 OC đến 4,1 OC cần phải làm thêm lần cuối thỏ khác.Mẫu thử coi đạt yêu cầu tiêu chuẩn chất gây sốt tổng nhiệt độ chênh lệch thỏ (cộng dồn) phải ≤ 4,9 OC Nếu >4,9 OC coi không đạt yêu cầu phải huỷ vắc xin hay sinh phẩm thử nghiệm