15.25 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FORMALDEHYD TỒN DƯ TRONG VACXIN VÀ SINH PHẨM Nguyên lý Có hai phương pháp xác định hàm lượng formaldehyd tồn dư vacxin sinh phẩm: - Phương pháp dựa vào phản ứng tạo chất màu chinol tác dụng thuốc thử fuchsin aldehyd hòa tan nước - Định lượng formaldehyd cách so màu 3,5-diacetyl-1,4-dihydrolutidine bước sóng 415 nm Phức hợp tạo thành có màu vàng chanh phản ứng formaldehyd tự mẫu thử với acetylaceton amoni môi trường acid nhẹ Phương pháp tiến hành *Phương pháp 1: Lấy ml mẫu thử, cho nước cất vừa đủ ml, thêm vào 1ml thuốc thử fuchsin acid, trộn đều; đậy ống nghiệm nút cao su đợi Đo mật độ quang học dung dịch kính lọc màu tím than (bước sóng 400 ± nm) Tiến hành làm song song mẫu trắng (blank) theo trình tự thay ml mẫu thử ml nước cất Kết xác định cách so màu mẫu vacxin thử với dung dịch chuẩn có mật độ quang học gần Dựng đường chuẩn Lấy ml formaldehyd chuẩn 0,4% cho nước cất vừa đủ 100 ml vào (dung dịch 0,004%) Lấy 0,5 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 3,0 ml, 4,0 ml, 5,0 ml dung dịch chuẩn formaldehyd 0,004% cho vào ống nghiệm cho nước cất vừa đủ 5,0 ml, thêm 1,0 ml dung dịch thuốc thử Đợi sau tiến hành phân tích mơ tả Cách pha dung dịch formaldehyd chuẩn 0,4%: Trước pha tiến hành xác định sơ hàm lượng formaldehyd có dung dịch formaldehyd (dung dịch phải chứa khơng 37% formaldehyd) Cân 1g dung dịch formaldehyd 40% (cân xác, trường hợp dung dịch chứa 40% phải tính tốn lại cho thích hợp) cho vào bình định mức 100ml, cho nước cất vừa đủ tới vạch (dung dịch 0,4%) Trước dùng pha loãng 100 lần Cách pha thuốc thử fuchsin: Hoà tan 2g fuchsin kiềm vào 120ml nước cất đun sôi, để nguội Hòa 2g natri sulfit (TT) vào 20ml nước cất trộn vào dung dịch trên, thêm 2ml acid hydrocloric (TT) Cho nước cất vừa đủ 200ml chờ it đem sử dụng Dung dịch phải luôn *Phương pháp 2: Lấy khoảng 3-4 ml mẫu thử ly tâm 4000 vòng/ phút 10 phút, lấy nước (nếu mẫu thử khơng cần ly tâm) Pha loãng mẫu thử cần thiết Lấy xác ml mẫu thử cho vào ống nghiệm Dựng đường chuẩn: Pha loãng 10 lần dung dịch formaldehyd chuẩn 0,04%, từ pha dung dịch formaldehyd chuẩn 0,0002%; 0,0004%; 0,0008%; 0,0012% Lấy xác ml dung dịch chuẩn pha loãng vào ống nghiệm Mẫu trắng dùng ml nước cất Thêm ml dung dịch acetylaceton vào ống nghiệm đựng mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thử Lắc đều, đun cách thuỷ 100oC 15 phút Để nguội nhiệt độ phòng Tiến hành đo quang bước sóng 415 nm Cách tính kết quả: X = na Trong đó: X : Hàm lượng formaldehyd có mẫu thử (g %) a : Hàm lượng formaldehyd có mẫu thử tìm đường chuẩn (g%) n : Độ pha loãng mẫu Cách pha dung dịch formaldehyd chuẩn 0,04%: Cân 311 mg hexamethylenetetramin hoà tan vừa đủ 1000 ml nước cất, dung dịch có chứa 0,04% formaldehyd, bảo quản dung dịch nhiệt độ phòng dùng tháng Cách pha dung dịch acetylaceton: Cân 150 g amoni acetate, hòa tan khoảng 500 ml nước cất Thêm ml acid acetic đậm đặc, ml acetylaceton vào, khuấy đều, thêm nước cất vừa đủ 1000 ml Bảo quản dung dịch – 8oC, dùng tháng Tiêu chuẩn chấp thuận Mỗi loại vacxin, sinh phẩm có tiêu chuẩn khác Các tiêu chuẩn dựa theo quy định WHO cho loại vacxin sinh phẩm Tuy nhiên, lượng formaldehyd tồn dư vacxin, sinh phẩm không vượt 0,02% ( ≤ 0,02 g/l) ... tiêu chuẩn khác Các tiêu chuẩn dựa theo quy định WHO cho loại vacxin sinh phẩm Tuy nhiên, lượng formaldehyd tồn dư vacxin, sinh phẩm không vượt 0,02% ( ≤ 0,02 g/l)