15.27 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NHÔM Al+++ TRONG VẮCXIN VÀ SINH PHẨM Phương pháp Nguyên lý Phương pháp dựa phản ứng tạo thành phức chất lượng thừa dung dịch muối natri acid ethylen diamin tetra acetic (EDTA) với ion nhơm (Al+++) sau chuẩn độ lượng thừa EDTA dung dịch đồng sulfat 0,01 M Phương pháp tiến hành Lấy ml acid sulfuric đậm đặc, giọt acid nitric đậm đặc (TT) ml mẫu thử cho vào bình nón thấy khói trắng dày đặc Tiếp tục đun nóng cho thêm vài giọt acid nitric đậm đặc dung dịch bình màu Để nguội bình Thận trọng thêm 10 ml nước cất Nếu dung dịch đục, đun tiếp Thêm dung dịch natri hydroxyd 50% vào bình dung dịch có màu đỏ vàng [dùng dung dịch da cam methyl (TT) làm chất thị] Nếu dung dịch đục, hòa tan tủa cách thêm dung dịch acid sulfuric M, cho thêm xác vào bình 25 ml dinatri diethylen diamin tetraacetat 0,01 M (CĐ) 10 ml dung dịch đệm acetat pH 4,4 [có chứa 68 g natri acetat (TT); 38,5 g amoni acetat; 125 ml acid acetic nước vừa đủ 500 ml] Đun sôi nhẹ phút Thêm ml dung dịch thị màu pyridylazonaphtol 0,1% ethanol 95% (TT) Khi nóng chuẩn độ dung dịch dinatri diethylen diamin tetraacetat thừa dung dịch đồng sulfat 0,01 M (CĐ) xuất màu nâu tía, ta A ml dung dịch đồng sulfat 0,01 M Song song tiến hành làm mẫu trắng (thay mẫu thử nước cất) B ml dung dịch đồng sulfat 0,01 M 1,0 ml dung dịch dinatri diethylen diamin tetraacetat (CĐ) 0,01M tương đương với 0,2698 mg Al++ + Lượng nhơm X (Al+++ mg/ml) mẫu thử tính theo công thức sau: B -A X= x 0,2689 Thể tích mẫu thử Phương pháp Nguyên lý: Hàm lượng nhơm (Al+++) có mẫu thử xác định cách so màu phản ứng nhôm với stilbazo Hydroxide nhơm có mẫu thử tác dụng acid nitric nhiệt độ chuyển thành Al+++ Phương pháp tiến hành: Trước kiểm tra, mẫu thử lắc thành hỗn dịch đồng Thêm 0,2ml acid nitric đậm đặc vào 1ml mẫu thử Đun sôi hỗn dịch tan hồn tồn Pha lỗng nước cất mẫu thử đến nồng độ thích hợp (thường pha loãng 25 50 lần) Lấy 1ml mẫu thử vào bình nón, thêm nước cất vừa đủ ml Thêm 10ml dung dịch đệm acetat( pH = 5,55 -5,75), 5ml dung dịch stilbazo, 5ml nước cất Để nhiệt độ phòng 20 phút, đo quang bước sóng 510 nm Song song tiến hành dựng đường chuẩn với dung dịch nhôm chuẩn 2, 4, 6, 8, 10 mcg/ml, tương đương với 1, 2, 3, 4, ml nhôm chuẩn mcg/ml Dựa vào đường chuẩn tính hàm lượng nhơm có mẫu thử Song song tiến hành làm mẫu trắng: Thay mẫu thử 1ml nước cất Cách pha dung dịch nhơm chuẩn 0,1%: Cân xác 0,895 g nhơm clorid 6H 2O hòa tan vào 100ml nước cất lần Trước dùng pha loãng dung dịch nhôm chuẩn 0,1% 500 lần nước cất, thu dung dịch nhôm chuẩn mcg/ml Cách pha dung dịch stilbazo 0,035%: Hòa tan 0,035g stilbazo vừa đủ 100 ml nước cất Lọc qua giấy lọc Dung dịch bảo quản 2-8 OC sử dụng tuần Cách pha dung dịch đệm acetate (pH = 5,55 -5,75): Dung dịch A: Hòa tan 69,05g natri acetate 3H2O vào 500 ml nước cất Dung dịch B: Hoà 5,72 ml acid acetic vừa đủ 100ml nước cất Trộn dung dịch A vào dung dịch B theo tỷ lệ 9:1 Đo pH Tiêu chuẩn chấp thuận Hàm lượng Al+++ vắc xin không vượt 1,25 mg Al+++/1 liều tiêm cho người