15.22 XÁC ĐỊNH CÔNG HIỆU CỦA GIẢI ĐỘC TỐ UỐN VÁN HOẶC THÀNH PHẦN UỐN VÁN TRONG VẮC XIN DTwP HẤP PHỤ Công hiệu giải độc tố uốn ván thành phần uốn ván vắc xin DTwP xác định phương pháp so sánh liều hữu hiệu 50% (ED50) vắc xin chuẩn vắc xin thử Kết tính theo phương pháp Probit analysis (phần mềm WHO program) MIỄN DỊCH Sử dụng độ pha lỗng bậc khơng q độ pha cho vắc xin mẫu chuẩn vắc xin mẫu thử Pha vắc xin Vắc xin pha thành độ pha loãng khác nước muối sinh lý vô khuẩn cho giá trị ED50 không nằm độ pha vắc xin Pha vắc xin chuẩn Hồn ngun pha lỗng nước muối sinh lý ống vắc xin mẫu chuẩn quốc gia cho độ pha loãng bậc 2; tuỳ theo số đơn vị ghi nhãn pha cho ED50 vắc xin mẫu chuẩn nằm khoảng độ pha lỗng (Ví dụ: độ pha lỗng bậc tương ứng với 10 I.U/ 0,5 ml; I.U/0,5 ml; 2,5 I.U/0,5 ml; 1,25 I.U/0,5 ml) Ví dụ cách pha sau: Vắc xin chuẩn quốc gia chứa 360 IU/ ống hoàn nguyên ml nước muối sinh lý để có dung dịch (*) chứa 40 IU/ml A = 1/2 = ml (*) + ml NMSL B = 1/4 = ml (A) + ml NMSL C = 1/8 = ml (B) + ml NMSL D = 1/16 = ml (C) + ml NMSL Pha vắc xin thử Ví dụ giải độc tố uốn ván : A = 1/15 = ml (*) + 28 ml NMSL B = 1/30 = 10 ml (A) + 10 ml NMSL C = 1/60 = 10 ml (B) + 10 ml NMSL D = 1/120 = 10 ml (C) + 10 ml NMSL Ví dụ thành phần uốn ván vắc xin DTwP : A = 1/ 25 = ml (*) + 24 ml NMSL B = 1/ 50 = 10 ml (A) + 10 ml NMSL C = 1/ 100 = 10 ml (B) + 10 ml NMSL D = 1/200 = 10 ml (C) + 10 ml NMSL Tiêm miễn dịch Mỗi độ pha vắc xin mẫu chuẩn vắc xin mẫu thử tiêm da cho 16 chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, 4-5 tuần tuổi, có trọng lượng 14g –16 g, 0,5 ml Dùng chuột giống; không giống phải chia số chuột đực, vào nhóm nhốt riêng Sau tiêm miễn dịch, chăm sóc theo dõi chuột 28 ngày tiến hành tiêm thử thách TIÊM THỬ THÁCH Xác định liều độc tố thử thách Chỉ sử dụng độc tố có 10.000 LD 50/Lf Độc tố pha loãng để có độ pha ví dụ như: 0,0004 Lf/ ml; 0,0002 Lf/ ml; 0,0001 Lf/ ml 0,00005 Lf/ ml Mỗi độ pha tiêm cho nhóm gồm chuột nhắt trắng, có trọng lượng 16 g ± 0,3g Theo dõi chuột hàng ngày 96 giờ, ghi lại số chuột sống độ pha Độ pha loãng độc tố gây chết 50% số chuột vào ngày thứ (sau 96 giờ) tính 1LD 50 Tiêm thử thách Dựa vào kết LD50 xác định để độ pha dung dịch độc tố thử thách tương ứng với 50 LD50/ml dung dịch Jensen vơ khuẩn có 1% pepton Sau 28 ngày toàn chuột miễn dịch vắc xin mẫu chuẩn mẫu thử tiêm da 0,5 ml với liều độc tố thử thách chứa 50 LD50 Nhóm chuột chứng: Từ dung dịch độc tố thử thách pha thành độ pha LD 50, LD50, 0,5 LD50 Mỗi độ pha tiêm cho chuột nhắt trắng có trọng lượng 16 g ± 0,3g Theo dõi chuột Theo dõi chuột thử thách hàng ngày ngày Ghi lại số chuột sống, chết, liệt độ pha miễn dịch vắc xin mẫu thử mẫu chuẩn Triệu chứng liệt uốn ván: Liệt cứng co giật kích động( sau thử thách ngày) Chuột nhón cao chân chân sau liệt co cứng tiếp đến chân trước Khi nắm vào chuột cảm thấy cứng bị co cứng, cổ cong vẹo phía lưng Khi kích thích tiếng động quẹt bút nắp lồng chuột, chuột phản ứng cách co cứng Chuột chết co cứng hô hấp, triệu chứng liệt đau TÍNH KẾT QUẢ Dựa vào số chuột sống sót độ pha, công hiệu xác định phương pháp Probit analysis Phần mềm WHO program) Thử nghiệm có giá trị nếu: -Liều thử thách: Khi tiêm cho nhóm chuột đối chứng LD50 : chuột chết hết thời gian 96 theo dõi 0,5 LD50: khơng có chuột chết thời gian 96 theo dõi LD50: Chuột chết không thời gian 96 theo dõi - ED50 loạt vắc xin phải nằm liều miễn dịch nhỏ lớn - Đường dốc đáp ứng miễn dịch vắc xin thử vắc xin chuẩn khơng có chênh lệch có ý nghĩa từ đường thẳng đường song song nghĩa kết thử nghiệm phải đạt yêu cầu đặt chương trình Probit Analysis đường thẳng đường song song tương quan đáp ứng liều Tiêu chuẩn chấp thuận Tiêu chuẩn công hiệu thành phần uốn ván vắc xin DTwP kiểm tra chuột lang phải khơng 40 I.U 1liều đơn vắc xin cho người với điều kiện khoảng tin cậy 95% cơng hiệu tìm nằm giới hạn 50% - 200%, giới hạn khoảng tin cậy 95% công hiệu tính phải lớn 40 I.U liều đơn vắc xin cho người Tiêu chuẩn công hiệu thành phần uốn ván vắc xin DTwP kiểm tra chuột nhắt phải đạt 60 IU liều đơn cho người Khoảng tin cậy 95% công hiệu phải nằm khoảng 50% - 200% Nếu khoảng tin cậy 95% vượt ngồi khoảng 50% - 200%, giới hạn khoảng tin cậy công hiệu phải lớn 60 IU liều đơn vắc xin cho người Nếu thử nghiệm không đạt tiêu chuẩn phải nhắc lại thử nghiệm với số lượng mẫu thử gấp đơi (thử nghiệm lần có giá trị - valid test) số lượng mẫu lần (thử nghiệm lần khơng có giá trị - invalid test) Loạt vắc xin DTwP hấp phụ đạt yêu cầu công hiệu thành phần uốn ván lần thử nghiệm nhắc lại cho kết công hiệu đạt yêu cầu Nếu kết thử nghiệm nhắc lại khơng đạt u cầu loạt vắc xin DTwP hấp phụ bị coi khơng đạt cơng hiệu thành phần uốn ván phải huỷ bỏ ... cao chân chân sau liệt co cứng tiếp đến chân trước Khi nắm vào chuột cảm thấy cứng bị co cứng, cổ cong vẹo phía lưng Khi kích thích tiếng động quẹt bút nắp lồng chuột, chuột phản ứng cách co cứng