KHẢO SÁT VỀ ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA ESCHERICHIA COLI Ở BỆNH VIỆN NHÂN DÂN GIA ĐỊNH Văn Bích*, Dương Anh Dũng*, Bùi Ngọc An Pha*, Nguyễn Sữ Minh Tuyết*, Võ Thị Trà An* Nguyễn Thanh Tùng* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Sử dụng kháng sinh điều trị bệnh nhiễm trùng làm gia tăng chủng vi khuẩn đề kháng đa kháng với kháng sinh Integrons gene cassette chế lan truyền tính kháng thuốc từ vi khuẩn sang vi khuẩn khác, nghiên cứu để xác định tỉ lệ đề kháng kháng sinh tìm diện integrons, gene cassette E.coli Phương pháp nghiên cứu: E.coli xét nghiệm tính nhạy cảm với loại kháng sinh tìm diện integrons xét nghiệm PCR, tìm gene cassette với xét ngiệm CS-PCR Kết quả: 106 chủng E.coli nghiên cứu, tỉ lệ đề kháng với kháng sinh là: Nalidixic acid (47,18%), Augmentin (31,62%), Cotrimoxazole (50,94%), Ciprofloxacin (38,86%), Pefloxacine (25,47%), Cefotaxime (38,68%), Ceftriaxone (42,45%), Imipenem(5,66%) Tỉ lệ có integrons 45/65 (69,23%), 32/65 ( 49,23%) có gene cassette bao gồm 6/65 (9,23% ) chủng có đoạn gene cassette dài khoảng 700bp 26/65 (40%) chủng có đoạn gene cassette dài khoảng 1700 bp Kết luận: E.coli có tỉ lệ đề kháng cao với kháng sinh 69,23% chủng E.coli có diện integrons, 49,23% chủng E.coli có gene cassette, dễ làm lan truyền tính đề kháng, giảm điều tri kháng sinh có hữu ích làm giảm gene chuyển tính đề kháng kháng sinh Từ khóa: Khảo sát đề kháng kháng sinh Ecoli ABSTRACT ANTIBIOTIC RESISTANCE OF ESCHERICHIA COLI IN NHAN DAN GIA DINH HOSPITAL Van Bich, Duong Anh Dung, Bui Ngoc An Pha, Nguyen Su Minh Tuyet, Vo Thi Tra An, Nguyen Thanh Tung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 13 – Supplement of No - 2009: 253 - 257 Objectives: Antibitic drugs used in human infection treatment may select for drugs resistant bacterial pathogens Integrons and gene cassettes are major mechanism for the spread and mainternance of multidrug resistence This study on the susceptibility to antibiotics and for the presence of integrons and gene cassettes Method: E.coli are investigated for susceptibility to antibiotic The presence of integrons and gene cassettes are performed by PCR and CS-PCR Results: 106 strains of E.coli isolated in 2008, the resistence rates of E.coli are observed for Nalidixic acid (47.18%), Augmentin (31.62%), Cotrimoxazole (50.94%), Ciprofloxacin (38.86%), efloxacine (25.47%), Cefotaxime (38.68%), Ceftriaxone (42.45%), Imipenem (5.66%) The presence rates of integrons 45/65 (69.23%) and gena cassette 32/65, (49.23%), included 6/65 (9.23%) strains of E.coli has gene cassette with sizes ranging 700 bp and 32/65 (49.25%) has gen cassette with sizes range 1700bp Conclusion: High resistant antibiotic rates and high prevalence of E.coli present the integrons which are increased drug resistance Decreasing the use of antibiotics could be usefull to diminish the gene pread and * Khoa Nhi Tổng Hợp Bệnh viện Nhân Dân Gia Định Địa liên lạc: BS Văn Bích ĐT: 0903.978.507 Email: bs.vanbich@yahoo.com Hội nghị Khoa học Kỹ thuật BV Nhân dân Gia Định 2009 253 maintenance of multidrug resistornce Keywords: Antibiotic resistance, Escherichia coli ĐẶT VẤN ĐỀ E.Coli vi khuẩn gây bệnh thường gặp, xử dụng kháng sinh điều trị thành công bệnh nhiễm trùng, đồng thời tạo nên áp lực để tồn vi khuẩn, đưa đến chủng vi khuẩn kháng đa kháng thuốc(1,3) Hơn chủng vi khuẩn không gây bệnh E.Coli thừơng trú ruột có chứa gene đề kháng kháng sinh truyền gene cho vi khuẩn gây bệnh khác nguy hiểm(10) Trong chế đề kháng với kháng sinh ,có chế integrons : Integrons yếu tố di truyền có khả mang, bắt giữ chuyển đổi gene cassettes(3,6) nơi thể tính gene cassettes, Integrons có plasmid trasposone Có loại integrons phát hiện: Class integrons, Class integrons, Class integrons Trong họ vi khuẩn Enterobacteriaceae Class integrons phổ biến nhất, mang gene mã hóa integrase giữ vai trò việc chèn tháo gene cassettes Một intergrons mang 10 gene cassette, đặc biệt có integrons chứa 100 gene cassette gọi siêu integrons (Super integrons) Gene cassette yếu tố di truyền có khả di chuyển, gắn vào hay rời khỏi integrons(2), tính gene cassette thuờng mã hóa đề kháng với kháng sinh , tính thể gene cassette gắn vào integrons, trạng thái tự khơng Có khoảng 100 gene casstte tìm thấy Integrons gene cassette có vai trò quan trọng , sở làm lan truyền tính đề kháng kháng sinh nay(4,5), xác định diện integrons gene cassette E.coli cần thiết để quan tâm dùng kháng sinh điều trị Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu tổng quát Khảo sát xác định tỉ lệ đề kháng kháng sinh E.coli Mục tiêu chuyên biệt Khảo sát xác định diện integrons gene cassette E.coli PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tiền cứu, mơ tả, có phân tích.Xử lý số liệu: phần mềm SPSS 11.0 Cỡ mẫu: 100 Đối tượng nghiên cứu Tiêu chuẩn chọn mẫu Các chủng E.coli, nuôi cấy từ bệnh phẩm: Phân, nuớc tiểu dịch mật ,máu khoa vi sinh Bệnh Viện Nhân Dân Gia Định từ 01/09/200831/12/2008, làm kháng sing đồ, sau xác định lại tính nhạy cảm với kháng sinh Đại Học Nơng Lâm TP.Hồ Chí Minh Những chủng E.coli có đề kháng , tiến hành xét nghiệm PCR khuếch đại đoạn gene (IntI) để xác định có integrons Những chủng E.coli có integrons, tiếp tục xét nghiệm CS-PCR khuếch đại đoạn gene chèn vào integrons, cho phép xác định có gene cassette Được tiến hành Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Hội nghị Khoa học Kỹ thuật BV Nhân dân Gia Định 2009 254 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Tỉ lệ đề kháng kháng sinh Tổng cộng có 106 chủng E.coli nghiên cứu, bao gồm 75 chủng từ phân 31 chủng từ bệnh phẩm khác nước tiểu, dịch mật, máu Kết kháng sinh đồ sau: Bảng 1: Tỉ lệ đề kháng kháng sinh Negradixic Augmentin Cotrimoxazol Ciprofloxacine Ofloxacin Peflacine Cefotaxime Ceftriaxone Ceftazidime Gentamycine Amikacine Netilmycine Imipenem PiperaTazobactam 106 mẫu (phân, nước tiểu, máu, dịch mật) Số ca Tỉ lệ % 50 47,18 42 39,62 54 50,94 41 38,68 20 18,87 27 25,47 41 38,68 45 42,45 50 47,17 35 33,02 02,38 12 11,32 05,66 04,72 75 mẫu phân Số ca 28 33 32 21 19 23 27 31 29 23 Tỉ lệ% 37,33 44,00 42,67 28,00 25,33 30,67 36,00 41,33 38,67 30,67 01,33 04,00 05,33 04,00 Tỉ lệ đề kháng kháng sinh E.coli 106 mẫu bệnh phẩm chung 75 mẫu từ phân Như đa số có tỉ lệ đề kháng cao với kháng sinh thường dùng, nhạy với Amikacine, Neltimycine, Imipenem pipera-Tazobactam Tỉ lệ có integrons gene cassette 65 chủng E.coli có đề kháng tiến hành xét nghiệm PCR khuếch đại đoạn gene để xác định có integrons, kết quả: - Xét nghệm PCR (-), khơng có integrons: 20/65 tỉ lệ 30,77% - Xét nghệm PCR (+), có integrons: 45/65 tỉ lệ 69,23% Như tỉ lệ E.coli có integrons mang gene mã hóa tính đề kháng kháng sinh cao (69,23%) 45 chủng có integrons, tiếp tục tiến hành xét nghiệm CS-PCR khuếch đại đoạn gene chèn vào integrons để tìm gene cassette Kết quả: - Xét nghiệm CS-PCR (-), khơng có gene cassette: 13/65 tỉ lệ 20% - Xét nghiệm CS-PCR (+), có gene cassette: 32/65 tỉ lệ 49,23% 32 chủng E.coli có xét ngiệm CS-PCR (+),có gene cassette, chúng tơi phát 6/45 chủng (13,33%) khuếch đại có đoạn cassette dài khoảng 700bp 26/45 chủng (57,78%) có đoạn cassette dài khoảng 1700 bp Đoạn chèn dài vi khuẩn có nhiều khả mang nhiều gene kháng kháng sinh Đoạn cassette dài khoảng 700 bp mang gene mã hóa đề kháng với Trimethoprim, Streptomycin, Spectinomycine, đoạn Hội nghị Khoa học Kỹ thuật BV Nhân dân Gia Định 2009 255 cassette dài 1700bp co’ thể mang gene mã hóa đề kháng với Trimethoprim, Streptomycin, Spectinomycine, Amikacine, Tobramycine Erythromycine BÀN LUẬN Tỉ lệ đề kháng kháng sinh E.coli thay đổi theo thời gian: so sánh với ngiên cứu năm 2006(9), chúng tơi có: Bảng 2: Tỉ lệ đề kháng kháng sinh E.coli Tỉ lệ ñề Tỉ lệ ñề kháng% kháng% Kháng sinh 2006 2008 2006 2008 Nalidixic acid 68,18 37,13 Gentamycine 27,27 30,67 Cotrimoxazol 89,36 42,67 Amikacine 09,09 01,33 Cefotaxime 50,00 36 Ciprofloxacine 27,27 28 Ceftriaxone 40,91 41,33 Ofloxacine 23,73 25,33 Ceftazidime 27,27 38,67 Pefloxacine 36,36 30,67 Kháng sinh Như tỉ lệ đề kháng E.coli giảm rõ ràng giai đoạn 2006 2008 kháng sinh sau: Nalidixid (68,18/37,13), Cotrimoxazol (89,36/42,67) Cefotaxime (50/36), thời gian sau kháng sinh xử dụng để điều trị tiêu chảy so với trước Nhận xét: phù hợp với nghiên cứu Diaz-Mejia JJ cộng Mexico(3) giãm điều trị kháng sinh dẫn đến giảm tỉ lệ vi khuẩn đường ruột kháng thuốc , nghiên cứu cúa Chang LL cộng Đài Loan(2) sử dụng rộng rãi kháng sinh làm tăng tỉ lệ integrons mang gene cassette có tính mã hóa đề kháng kháng sinh E.coli Tỉ lệ E.coli có integrons Tỉ lệ E.coli integrons 69,23% -trong theo tác giả khác: Đài Loan (11) : 31,5 % chủng E.coli từ phân Tỉ lệ E.coli có integron nghiên cứu cao (69,23%), phải sử dụng kháng sinh rộng rãi Tỉ lệ thay đổi tùy theo địa phương, nhu thay đổi theo chủng E.coli nuôi cấy từ bệnh phẩm (Phân hay nước tiểu), nghiên cứu Diaz- Mejia JJ cộng Mexico(3) E.coli ruột người có tỉ lệ integrons cao hẳn so với E.coli ngồi mơi trường, điều giải thích ruột người, áp lực điều trị nhiều loại kháng sinh E.coli phải thích ứng, chọn lọc để tồn qua chế integrons Không gene cassette đựơc lan truyền từ chủng E.coli sang chủng E.coli khác, mà lan truyền từ E.coli sang Samonella (Nghiên cứu Ajiboye RM cộng California(3), nghiên cứu Mathew AG cộng Mỹ Thái Lan(7), Từ E.coli qua Klebsiella, nghiên cứu Ode T cs Nhật(8) –và vi khuẩn khác Staphylococcus aureus, Helicobacter Jujinum Với điều kiện thời gian, kỹ thuật thời điểm này, nghiên cứu chưa phát hết tất integrons E.coli, chưa xác định rõ tính gene cassette, vấn đề tiếp tục nghiên cứu thêm sau Hội nghị Khoa học Kỹ thuật BV Nhân dân Gia Định 2009 256 KẾT LUẬN Tỉ lệ đề kháng với kháng sinh E.coli ngày tăng có tính đa kháng với nhiều loại kháng sinh, đặc biệt với kháng sinh thường xử dụng thuộc họ Beta lactam, cephalosporin Quinolone hệ Tỉ lệ E.coli có integrons cao (69,23%), nơi tồn chứa dễ dàng làm lan truyền gene cassette mang tính mã hóa, thướng tính đề kháng với kháng sinh đến vi khuẩn khác mối quan tâm lớn nay, cần thận trọng việc xử dụng kháng sinh TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 AjiboyeRM, Solberg OD,Lee BM, Raphael E, Debroy C, Riley LW- Global spread of mobile antimicrobial drug resistance determinants in human and animal Escherichia coli and Salmonallas strans causing community-acquired infection- School of public health, School of public health, university of California, Berkeley,CA 94720, USA- PMID: 19538087[Pubmed-in process] ChangLL,Chang TM, Chang CY- Variable patterns of class integron-associated drug-resistant Escherichia coli in TaiwanDepartment of Microbiology, Faculty of Medicine,Graduate Institute of Medicine, College of Medicine, Kaohsiung Medical University, Kaosiung, Taiwan.m725006@kmu.edu.tw- PMID: 17525011[pubmed-indexed for Medline] Diaz-Mejia JJ,Amábile- Cuevas CF, Rosas I, Souza V- An analysis of the evoluationary relationships of integron integrases, with emphasis on the prevalence of class1integrons in Escherichia coli isolates from clinical and environmental originsFundación Lusara, Apartado Postal 102-006,Mexico City, Mexico.- PMID: 18174129[Pubmed- indexed for medline] Farshad S, Japoni A, Hosseini M.- Low distribution of integrons among multidrug resistant E.coli strains isolated from children with community-acquired urinary tract infections in Shiaz,Iran.- Prof.Alborzi Clinical Microbiology Research Center,shiaz University of medidical Sciences, Nemazee Hospital, Shiaz,Iran Farshads @ sums.ac.ir- PMID:19004239[ Pubmd- indexed for MEDLINE] Guerin E, Cambray G, Sanchez-Alberola N, Campoy S, ErillI, Da Re S, Gonzalez- Zorn B, Barbé J, Ploy MC, Mazel D-The SOS response controls integron recombination –Université de Limoges, Faculté de Médicine, EA 3175, INSERM, Equipe avenir, 8700 Limoges,France -PMCID:18794381[Pubmed- indexed for MEDLINE]Jacquier H ,Zaoui C, Sanson-le Pors MJ, Mazel D, Bercot B- Tranlation regulation of integrons gene cassette expression by the attC sites- Assistance Publique Hôpital de Paris,Hôpital Lariboisière, Service de Bateriologie-Virologie, Université Paris VII, rue Ambroise Paré,7500 Paris, France.-PMIDl19486293[Pubmed for MEDLINE] Mathew AG, Liamthong S , Lin J, hong Y- Evidence class integron transfer Between Escherichia coli and Salmonella spp.on Livestock Farm.-Department of Animal Science, The University of Tennessee, knoxville, Tennessee.-PMID: 19630513[PunMed- assupplid by publisher] Ode T, Saito R, Kumita W, Sato K, Okugawa S, Motrya K, Koike K, Okamura N- Analysis of plasmid-mediated multidrug resistence in Escherichia coli and Klebsiella oxytoca isolates from clinical specimens in Japan.- Department of Microbiology and immunology ,Graduate school of Health Sciences, Tokyo Medical and Dental University, 1-5-45 yushima, Bunkyoku,Tokyo 113-8510,Japan.takashi.od.mt@gmail.com- PIMD: 195609.3 [PubMed- in process] Văn Bích, Vũ thị Châu Hải, Diệp Thế Tài cs -2007 - Tiêu chảy Escherichia coli khoa nhi bệnh viện Nhân Dân Gia Định - Y học thành phố Hồ Chí Minh – Tập 11, phụ số 4, 2007 – Trang 174 – 177 10.Vinué L,Sáenz Y, Somalo S, Escudero E, Moreno MA, Ruiz- Larrea F, Torres C- Prevalence and diversity of integrons and associated resistence genes in faecal Escherichia coli isolates of healthy humans in Spain.- area de bioquímica y Biología Moleclar , Universidad de La Rioja, Logrono, Spain - PIMD:18708645[ Pubmed-indexed for MEDLINE] ang CM, Lin MF, Lin CH , Huang YT, Hsu CT, Liou ML - Characterization of antimicrobial resistence patterns and integrons in humanfecal Escherichia coli- Hsin-Chu General Hospital , Department of Health, Hsinchu City, Taiwan, Republic of China - PIMD: 19468175 [PubMed - in process] Hội nghị Khoa học Kỹ thuật BV Nhân dân Gia Định 2009 257