XÁC ĐỊNH ĐA HÌNH ĐƠN NUCLEOTIDE A17893G CỦA GEN XRCC3 TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BUỒNG TRỨNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG I HC Y H NI NGUYN HI PHNG xác định đa hình đơn nucleotide a17893g gen xrcc3 bệnh nh©n ung th buång trøng LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Hµ Néi - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYN HI PHNG xác định đa hình đơn nucleotide a17893g gen xrcc3 bệnh nhân ung th buồng trứng CHUYÊN NGÀNH : Hóa sinh y học MÃ SỐ : 60720106 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS TRẦN HUY THỊNH Hµ Néi - 2017 LỜI CẢM ƠN Luận văn tơi hồn thành khơng kết sau trình cố gắng khơng ngừng thân mà nhờ giúp đỡ, động viên khích lệ thầy cơ, đồng nghiệp, bạn bè người thân Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy giáo hướng dẫn tôi: TS Trần Huy Thịnh Trong suốt trình thực đề tài, thầy tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ tơi để hồn thiện kiến thức kĩ khoa học Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Nguyễn Viết Tiến - Thứ trưởng Bộ Y Tế, chủ nhiệm đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình xác định đột biến đa hình thái đơn nucleotide số gen liên quan đến ung thư vú ung thư buồng trứng” cung cấp kinh phí tạo điều kiện để giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Tạ Thành Văn - Phó Hiệu trưởng Trường Đại học Y Hà Nội, Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen-Protein, PGS.TS Trần Vân Khánh - Phó Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen-Protein, Trường Đại học Y Hà Nội, người Thầy truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi để giúp hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Thầy, Cô Bộ môn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội dạy dỗ truyền đạt kiến thức quý báu q trình học tập nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Y Hà Nội Khoa Sinh Hóa, Khoa Huyết Học, Khoa Phụ - Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương giúp đỡ, động viên, khích lệ tơi q trình học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến CN Nguyễn Quý Hoài, CN Vũ Thị Hoài Thu, CN Tạ Thành Đạt CN Trần Quốc Đạt toàn thể anh, chị giúp đỡ tơi q trình học tập kỹ thuật, hồn thiện quy trình kỹ thuật nghiên cứu Trung tâm Cuối cùng, xin ghi nhớ công ơn sinh thành, ni dưỡng tình u thương Cha mẹ tơi, ủng hộ gia đình, bạn bè, đồng nghiệp, người bên cạnh động viên, ủng hộ, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi giúp đỡ tơi hồn thiện luận văn Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2017 Học viên Nguyễn Hải Phương LỜI CAM ĐOAN Kính gửi : - Phòng quản lý đào tạo Sau Đại học - Trường Đại học Y Hà Nội - Bộ mơn Hóa sinh - Trường Đại học Y Hà Nội - Hội đồng bảo vệ Luận văn Thạc sỹ Y học năm 2017 Tơi Nguyễn Hải Phương, học viên cao học khóa 24 trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa Sinh, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Trần Huy Thịnh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan Tơi xin chịu hoàn toàn trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2017 Học viên Nguyễn Hải Phương DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT FIGO International Federation of Gynecology and Obstetrics PCR Polymerase Chain Reaction RFLP Fragment Length Polymorphism SNP Single Nucleotide Polymorphism XRCC X-ray Repair Cross-Complementing MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ DANH MỤC CÁC BẢNG PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ DANH MỤC CÁC BẢNG 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư buồng trứng bảy loại ung thư thường gặp phụ nữ Năm 2012 toàn giới ghi nhận 239000 ca mắc ung thư buồng trứng, chiếm 4% tổng số ca mắc ung thư Căn bệnh tám nguyên nhân gây tử vong ung thư hàng đầu phụ nữ [1] Ở Việt Nam, vào năm 2000, tỷ lệ ung thư buồng trứng Hà Nội 4,4/100000 dân thành phố Hồ Chi Minh 3,7/100000 dân [2] Hiện nay, chẩn đoán xác định ung thư buồng trứng dựa vào thăm khám lâm sàng, chẩn đốn hình ảnh, định lượng dấu ấn ung thư CA-125, HE4, αFP giải phẫu bệnh Tuy nhiên đặc tính vị trí giải phẫu buồng trứng sinh bệnh học u nên triệu chứng thường xuất giai đoạn muộn, dẫn đến làm chậm trễ cho công tác điều trị giảm thời gian sống bệnh nhân Việc phân tích mối liên quan bệnh yếu tố nguy giúp cho nhà khoa học đưa phương pháp theo dõi can thiệp sớm với người có nguy cao mắc bệnh Ngồi yếu tố ngoại cảnh yếu tố gen mang vai trò vơ quan trọng Bên cạnh việc phân tích đột biến gen, nghiên cứu giới đa hình đơn nucleotide (SNP) cho thấy thân SNP không gây bệnh số SNP lại có liên quan đến bệnh lý định Điều cho phép nhà khoa học đánh giá khuynh hướng di truyền cá thể Có nghĩa đánh giá loại bệnh lý mà cá thể dễ mắc phải [3] XRCC3 protein gia đình RAD51 Các tác nhân gây ung thư tác động vào phân tử DNA làm đứt gẫy mạch phân tử Lúc họ gia đình protein RAD51 có vai trò bảo vệ hàn gắn lại phân tử DNA, đảm bảo ổn định phân tử [4] Một giả thuyết đặt vai trò SNP khác XRCC3 quy định khả Mẫu nghiên cứu: Ngày lấy Ngày tách chiết Lưu mẫu/vị trí Kết phân tích 4.1 Kết tách chiết DNA Nồng độ DNA: Độ tinh khiết: A260/A280 = 4.2 Kết điện di kiểm tra sản phẩm PCR: 4.3 Kết điện di sản phẩm sau dùng enzym cắt 4.4 Kết phân tích gen GHI CHÚ: Người xem xét Nghiên cứu viên PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN PHỤ LỤC KẾT QUẢ NỒNG ĐỘ VÀ ĐỘ TINH SẠCH MẪU DNA ĐÃ TÁCH CHIẾT Mã số mẫu đo BT01 BT02 BT03 BT04 BT05 BT06 BT07 BT08 BT09 BT10 BT11 BT12 BT13 BT14 BT15 BT16 BT17 BT18 BT19 BT20 BT21 BT23 BT24 BT25 BT26 BT27 BT28 BT29 BT30 BT31 BT32 BT33 BT34 BT35 BT36 BT37 Nồng độ (ng/µl) 30,1 56,8 123,3 90,5 100,3 45,6 76,7 88,5 34,6 56,6 57,3 65,7 78,5 125,6 98,7 113,4 87,7 66,5 103,8 99,5 75,5 87,7 89,6 73,3 135,7 103,8 90,3 95,6 87,5 76,7 114,5 103,8 94,4 76,6 85,1 113,3 Độ tinh 1,81 1,80 1,91 1,83 1,88 1,80 1,92 1,88 1,88 1,82 1,86 1,87 1,84 1,93 1,87 1,85 1,98 1,86 1,83 1,86 1,87 1,87 1,97 1,86 1,95 1,80 1,75 1,85 1,93 1,87 1,93 1,86 1,84 1,83 1,85 1,81 Mã số mẫu đo BTC01 BTC02 BTC03 BTC04 BTC05 BTC06 BTC07 BTC08 BTC09 BTC10 BTC11 BTC12 BTC13 BTC14 BTC15 BTC16 BTC17 BTC18 BTC19 BTC20 BTC21 BTC23 BTC24 BTC25 BTC26 BTC27 BTC28 BTC29 BTC30 BTC31 BTC32 BTC33 BTC34 BTC35 BTC36 BTC37 Nồng độ (ng/µl) 132,2 156,5 60,5 66,3 45,6 77,6 54,5 56,6 87,9 99,5 57,7 87,3 92,3 105,5 112,3 108,4 98,5 76,7 105,7 87,7 106,3 98,5 101,2 76,7 127,3 106,5 95,6 86,6 65,6 85,9 112,2 109,9 67,3 90,5 81,7 124,5 Độ tinh 1,87 1,98 1,95 1,90 1,80 1,82 1,82 1,81 1,81 1,94 1,84 1,88 1,93 1,87 1,91 1,86 1,82 1,87 1,87 1,82 1,85 1,85 1,87 1,82 1,90 1,85 1,85 1,87 1,86 1,88 1,85 1,93 1,82 1,87 1,81 1,90 BT38 BT39 BT40 BT41 BT42 BT43 BT44 BT45 BT46 BT47 BT48 BT49 BT50 BT51 BT52 BT53 BT54 BT55 BT56 BT57 BT58 BT59 BT60 BT61 BT62 BT63 BT64 BT65 BT66 BT77 BT78 BT79 BT80 BT81 BT82 BT83 BT84 BT85 BT86 BT87 BT88 BT89 99,3 103,4 117,7 99,3 105,3 131,9 89,3 88,2 143,4 93,2 127,7 65,3 87,7 55,3 104,7 89,3 75,8 138,6 89,4 107,3 104,3 90,2 134,3 73,3 104,2 112,6 85,4 77,3 118,4 94,3 83,3 104,2 23,3 98,2 91,2 132,2 87,4 114,3 76,2 90,5 102,4 66,4 1,80 1,87 1,86 1,81 1,82 1,89 1,81 1,80 1,89 1,83 1,89 1,81 1,87 1,80 1,85 1,82 1,88 1,92 1,89 1,91 1,90 1,86 1,92 1,90 1,84 1,88 1,90 1,84 1,89 1,87 1,88 1,97 1,82 1,83 1,86 1,89 1,88 1,90 1,81 1,89 1,83 1,91 BTC38 BTC39 BTC40 BTC41 BTC42 BTC43 BTC44 BTC45 BTC46 BTC47 BTC48 BTC49 BTC50 BTC51 BTC52 BTC53 BTC54 BTC55 BTC56 BTC57 BTC58 BTC59 BTC60 BTC61 BTC62 BTC63 BTC64 BTC65 BTC66 BTC77 BTC78 BTC79 BTC80 BTC81 BTC82 BTC83 BTC84 BTC85 BTC86 BTC87 BTC88 BTC89 119,1 121,2 114,4 76,6 133,2 135,5 94,2 112,1 123,8 136,4 99,1 75,3 106,6 98.3 115,0 102,2 128,1 65,7 76,8 88,3 98,3 65,3 123,2 84,3 145,3 123,8 93,3 97,2 82,3 83,2 104,3 125,3 87,2 104,4 65,6 123,5 98,1 118,3 67,9 91,2 83,2 63,3 1,85 1,87 1,84 1,82 1,93 1,90 1,82 1,85 1,91 1,88 1,83 1,82 1,86 1,85 1,90 1,89 1,93 1,80 1,83 1,83 1,89 1,98 1,89 1,82 1,94 1,87 1,92 1,83 1,90 1,91 1,89 1,95 1,89 1,88 1,81 1,83 1,87 1,91 1,82 1,82 1,86 1,90 BT90 BT91 BT92 BT93 BT94 BT95 BT96 BT97 BT98 BT99 BT100 BT101 BT102 98,2 89,2 113,5 87,3 76,2 67,9 103,4 89,2 98,2 89,2 90,1 58,3 99,1 1,85 1,81 1,89 1,82 1,89 1,81 1,81 1,89 1,84 1,81 1,82 1,84 1,82 BTC90 BTC91 BTC92 BTC93 BTC94 BTC95 BTC96 BTC97 BTC98 BTC99 BTC100 BTC101 BTC102 65,3 81,2 129,2 89,2 25,3 120,5 107,8 101,1 135,3 146,3 76,2 87,3 92,1 1,82 1,90 1,81 1,93 1,81 1,87 1,87 1,82 1,95 1,96 1,81 1,86 1,90 ... ung thư buồng trứng vấn đề bỏ ngỏ, nhóm nghiên cứu thực đề tài: Xác định đa hình đơn nucleotide A17893G gen XRCC3 bệnh nhân ung thư buồng trứng với hai mục tiêu: Xác định tỷ lệ đa hình đơn A17893G. .. A17893G gen XRCC3 bệnh nhân ung thư buồng trứng nhóm người bình thư ng Việt Nam Mối liên quan đa hình đơn A17893G gen XRCC3 với số yếu tố nguy đến bệnh lý ung thư buồng trứng: độ tuổi phát bệnh, ... gen SNP A17893G với bệnh số yếu tố nguy bệnh, kết cho thấy liên quan SNP với bệnh lý ung thư buồng trứng có ý nghĩa thống kê [5], [7] Hiện Việt Nam, đa hình đơn nucleotide gen XRCC3 bệnh lý ung