KẾT QUẢ KHOA học CÔNG NGHỆ đề tài NGHIÊN cứu ỨNG DỤNG một số kỹ THUẬT CHẨN đoán xác ĐỊNH CHỦNG nấm MALASSEZIA gây BỆNH LANG BEN tại KHU vực hà nội

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ HÀ NỘI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP THÀNH PHỐ NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG VÀ PHÁT TRIỂN KHOA HỌC CÔNG NGHỆ Y TẾ - BẢO HỘ LAO ĐỘNG - VỆ SINH AN TOÀN THỰC PHẨM MÃ SỐ: BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG MỘT SỐ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN XÁC ĐỊNH CHỦNG NẤM MALASSEZIA GÂY BỆNH LANG BEN TẠI KHU VỰC HÀ NỘI Mã số: 011-08/04-2016-2 Cơ quan chủ trì đề tài: Bệnh viện Da liễu Trung Ương Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Nguyễn Hữu Sáu HÀ NỘI – 2017 SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ HÀ NỘI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG MỘT SỐ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN XÁC ĐỊNH CHỦNG NẤM MALASSEZIA GÂY BỆNH LANG BEN TẠI KHU VỰC HÀ NỘI Mã số: 011-08/04-2016-2 Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì đề tài (ký tên) (ký tên) Nguyễn Hữu Sáu Nguyễn Văn Thường Ban chủ nhiệm chương trình Sở khoa học công nghệ Hà Nội (ký tên) (ký tên đóng dấu gửi lưu trữ) HÀ NỘI – 2017 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Nấm Malassezia .3 1.1.1 Vài nét lịch sử 1.1.2 Đặc điểm nấm Malassezia 1.1.3 Cơ chế gây bệnh 1.1.4 Một số yếu tố thuận lợi 1.1.5 Lang ben số bệnh lý khác Malassezia 1.2 Bệnh lang ben 1.2.1 Dịch tễ .9 1.2.2 Căn nguyên 11 1.2.3 Đặc điểm lâm sàng 12 1.2.4 Cận lâm sàng 15 1.2.5 Chẩn đoán xác định 15 1.2.6 Chẩn đoán phân biệt 16 1.2.7 Điều trị .17 1.3 Các phương pháp chẩn đoán Malassezia bệnh lang ben .19 1.3.1 Phương pháp xét nghiệm trực tiếp 19 1.3.2 Nuôi cấy định danh 25 1.3.3 Sinh học phân tử 30 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Xác định chủng Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện địa bàn Hà Nội 33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .33 2.1.3 Phương pháp nghiên cứu 34 2.1.4 Quy trình nghiên cứu .36 2.2 Nghiên cứu xác định chủng Malassezia người khoẻ mạnh 36 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 36 2.2.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .36 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu 36 2.2.4 Quy trình nghiên cứu .38 2.3 Nghiên cứu đánh giá hiệu kỹ thuật lấy bệnh phẩm tìm Malassezia băng dính 38 2.3.1 Đối tượng nghiên cứu 38 2.3.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .38 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu 38 2.3.4 Quy trình nghiên cứu .40 2.4 Nghiên cứu đánh giá hiệu kỹ thuật soi trực tiếp tìm Malassezia NaOH kết hợp ParkerTM blue black ink 40 2.4.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.4.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .40 2.4.3 Phương pháp nghiên cứu 40 2.4.4 Quy trình nghiên cứu .42 2.5 Xây dựng tiêu chuẩn số quy trình xét nghiệm soi trực tiếp tìm Malassezia spp chẩn đoán bệnh lang ben 42 2.5.1 Đối tượng nghiên cứu 42 2.5.2 Địa điểm, thời gian nghiên cứu .42 2.5.3 Phương pháp nghiên cứu 43 2.6 Xây dựng quy trình tiêu chuẩn xét nghiệm chẩn đoán nguyên nhân bệnh lang ben 44 2.6.1 Quy trình soi trực tiếp phương pháp băng dính NaOH kết hợp ParkerTM blue black ink .44 2.6.2 Quy trình ni cấy định danh 45 2.6.3 Quy trình PCR sequencing 50 2.7 Quản lý phân tích số liệu 51 2.7.1 Quản lý số liệu 51 2.7.2 Phân tích số liệu .52 2.8 Đạo đức nghiên cứu 52 2.9 Hạn chế đề tài 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 53 3.1 Xác định chủng Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện địa bàn Hà Nội 53 3.1.1 Xác định Malassezia bệnh lang ben nuôi cấy PCR sequencing 53 3.1.2 Xác định Malassezia người khoẻ mạnh 67 3.1.3 Đánh giá hiệu kỹ thuật lấy bệnh phẩm băng dính 70 3.1.4 Đánh giá hiệu kỹ thuật soi trực tiếp tìm Malassezia NaOH kết hợp ParkerTM blue black ink 75 3.2 Xây dựng tiêu chuẩn xét nghiệm soi trực tiếp tìm Malassezia chẩn đoán bệnh lang ben 80 3.2.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu .80 3.2.2 Kết soi trực tiếp nhóm bệnh .81 3.2.3 Kết soi trực tiếp nhóm chứng .84 3.2.4 So sánh kết soi trực tiếp nhóm bệnh nhóm chứng 86 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 87 4.1 Xác định chủng Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện địa bàn Hà Nội 87 4.1.1 Xác định Malassezia bệnh lang ben nuôi cấy PCR sequencing 87 4.1.2 Xác định Malassezia người khoẻ mạnh 102 4.1.3 Đánh giá hiệu kỹ thuật lấy bệnh phẩm băng dính 103 4.1.4 Đánh giá hiệu kỹ thuật soi trực tiếp tìm Malassezia NaOH kết hợp ParkerTM blue black ink 109 4.2 Xây dựng tiêu chuẩn xét nghiệm soi trực tiếp tìm Malassezia chẩn đoán bệnh lang ben 111 4.2.1 Kết soi trực tiếp nhóm bệnh .111 4.2.2 Kết soi trực tiếp nhóm chứng 113 4.2.3 So sánh kết soi trực tiếp nhóm bệnh nhóm chứng .114 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN 116 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢ Bảng 1.1 So sánh tính hiệu kỹ thuật lấy bệnh phẩm băng dính dao cùn xét nghiệm trực tiếp tìm nấm 22 Bảng 1.2 So sánh soi trực tiếp tìm Malassezia NaOH+BI KOH 24 Bảng 1.3 Đặc điểm môi trường thường dùng nuôi cấy Malassezia 26 Bảng 1.4 Đặc điểm kiểu hình 14 lồi Malassezia dựa đặc tính sinh lý sinh hóa .27 Bảng 1.5 Đặc tính lồi Malassezia CHROM agar Malassezia .29 Bảng 1.6 Các phương pháp định danh Malassezia sinh học phân tử PCR 31 YBảng 3.1 Phân bố đặc trưng cá nhân bệnh nhân 53 Bảng 3.2 Phân bố bệnh theo địa dư nghề nghiệp 54 Bảng 3.3 Kết nuôi cấy từ vảy da bệnh nhân lang ben 55 Bảng 3.4 Kết định danh lồi Malassezia ni cấy 55 Bảng 3.5 Kết PCR từ vảy da bệnh nhân lang ben 56 Bảng 3.6 Kết Malassezia định danh theo PCR sequencing 56 Bảng 3.7 Độ nhạy, độ đặc hiệu PCR theo nuôi cấy .57 Bảng 3.8 Độ nhạy, độ đặc hiệu loài M globosa với kỹ thuật PCR sequencing theo nuôi cấy 58 Bảng 3.9 Phân bố loài Malassezia gây bệnh lang ben theo nhóm tuổi 59 Bảng 3.10 Phân bố loài Malasssezia gây bệnh lang ben theo giới .60 Bảng 3.11 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo địa dư 61 Bảng 3.12 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo thời gian bị bệnh 62 Bảng 3.13 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo tính chất bệnh .63 Bảng 3.14 Phân bố đặc trưng cá nhân nhóm người khỏe mạnh tình nguyện 67 Bảng 3.15 Kết định danh lồi Malassezia ni cấy người khỏe mạnh tình nguyện .68 Bảng 3.16 Kết Malassezia định danh theo PCR sequencing người khỏe mạnh tình nguyện .69 Bảng 3.17 Phân bố bệnh theo tuổi 70 Bảng 3.18 Phân bố bệnh theo giới 71 Bảng 3.19 Phân bố bệnh theo địa dư 71 Bảng 3.20 Thời gian trả kết xét nghiệm phương pháp băng dính dao cùn 72 Bảng 3.21 Ảnh hưởng phương pháp băng dính dao cùn theo vị trí 72 Bảng 3.22 Ảnh hưởng phương pháp băng dính dao cùn theo đối tượng 73 Bảng 3.23 Kết soi trực tiếp phương pháp băng dính dao cùn 73 Bảng 3.24 Ảnh hưởng nhận định hình thái KHV phương pháp băng dính dao cùn 74 Bảng 3.25 Kết nhận định tế bào nấm men phương pháp băng dính dao cùn 74 Bảng 3.26 Ảnh hưởng phương pháp băng dính dao cùn theo thương tổn vảy da 75 Bảng 3.27 Phân bố bệnh theo tuổi 76 Bảng 3.28 Phân bố bệnh theo giới 76 Bảng 3.29 Phân bố bệnh theo địa dư 77 Bảng 3.30 Thời gian trả kết xét nghiệm phương pháp NaOH+BI KOH 77 Bảng 3.31 Kết soi trực tiếp phương pháp NaOH+BI KOH .78 Bảng 3.32 Ảnh hưởng nhận định hình thái kính hiển vi phương pháp NaOH+BI KOH .78 Bảng 3.33 Kết nhận định tế bào nấm men phương pháp NaOH+BI KOH .79 Bảng 3.34 Độ nhạy, độ đặc hiệu phương pháp NaOH+BI theo nuôi cấy 79 Bảng 3.35 Độ nhạy, độ đặc hiệu phương pháp KOH theo nuôi cấy 80 Bảng 3.36 Đặc điểm nhóm nghiên cứu theo tuổi 80 Bảng 3.37 Đặc điểm nhóm nghiên cứu theo giới 81 Bảng 3.38 Kết nuôi cấy định danh từ vảy da 81 Bảng 3.39 Kết định lượng tế bào nấm men 82 Bảng 3.40 Độ nhạy, độ đặc hiệu kết định lượng tế bào nấm men theo ni cấy nhóm bệnh 83 Bảng 3.41 Kết nuôi cấy định danh từ vảy da 84 Bảng 3.42 Kết định lượng tế bào nấm men 84 Bảng 3.43 Độ nhạy, độ đặc hiệu kết định lượng tế bào nấm men theo ni cấy nhóm bệnh 85 Bảng 3.44 So sánh số lượng vi nấm 20TB/VT người bệnh người lành 86 Bảng 4.1 Xác định Malassezia theo nuôi cấy đinh danh nghiên cứu .92 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố loài Malassezia gây bệnh lang ben theo màu sắc dát 64 Biểu đồ 3.2 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo vị trí thương tổn 65 Biểu đồ 3.3 Phân bố Malassezia gây bệnh lang ben theo kết soi trực tiếp từ vảy da 66 Biểu đồ 3.4 Kết nuôi cấy từ vảy da người khỏe mạnh tình nguyện 68 Biểu đồ 3.5 Kết PCR từ vảy da người khỏe mạnh tình nguyện 69 123 CHƯƠNG KẾT LUẬN Xác định chủng Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện địa bàn Hà Nội  Trên bệnh nhân lang ben - Tỉ lệ nuôi cấy Malassezia bệnh lang ben cao, chiếm 87,5%, xác định lồi định danh có cải tiến tìm 11 lồi Malassezia với tỷ lệ 96,8% Trong đó, chủ yếu: M globosa (42,1%); M dermatis (17,1%); M furfur (13,9%) - M globosa gây bệnh chủ yếu nhóm 20-29 tuổi chiếm 48,2%, nam nhiều nữ (63,6% 36,4%); thành thị 50,8%; thời gian bị bệnh tháng 68,6%; lần đầu 85.6% - Tỉ lệ PCR sequencing Malassezia từ vảy da 60,3%, tỉ lệ định danh Malassezia 86,5% với loài sau: M globosa (70,5%), M restricta (10,9%), M sympodialis (4,6%), M cuniculi (0,5%) - PCR có ý nghĩa thấp chẩn đoán lang ben với AUC= 0,573 PCR sequencing có ý nghĩa cao chẩn đốn xác định loài M globosa với AUC = 0,703  Trên người khỏe mạnh - Tỉ lệ ni cấy có nấm mọc mẫu bệnh phẩm người khỏe mạnh 75,5%, tỉ lệ nuôi cấy không mọc 24,5% M globosa chiếm tỉ lệ cao với 47,0%; tiếp đến M furfur (21,2%), M dermatis (7,9%) Có 14 mẫu khuẩn lạc chưa xác định loài, chiếm tỉ lệ 9,3% - Kết PCR dương tính với 112 mẫu bệnh phẩm từ vảy da người khỏe mạnh tình nguyện với tỉ lệ 56,0% định danh 107 loài Malassezia 124 Trong đó, M globosa chiếm tỉ lệ cao với 39,1%, M restricta (30,4%), M furfur (11,3%) Có lồi chưa xác định chiếm 4,3% Xây dựng tiêu chuẩn quy trình xét nghiệm soi trực tiếp tìm Malassezia chẩn đốn bệnh lang ben  Đối với kỹ thuật băng dính - Thời gian trả kết nhóm băng dính 48,5 ± 15,1 (phút), nhanh so với dao cùn 62,7 ± 16,4 (phút) - Tỉ lệ lấy bệnh phẩm không đau mặt nhóm băng dính 11,9% cao nhóm dao cùn 6,2% - Tỉ lệ lấy bệnh phẩm dễ dàng trẻ em nhóm băng dính 7,5% cao nhóm dao cùn (3,8%) - Tỉ lệ dương tính nhóm băng dính 98,1% cao nhóm dao cùn 96,3% - Tỉ lệ nhận định dễ dàng hình ảnh sợi nấm + tế bào nấm men nhóm băng dính 77,7% cao nhóm dao cùn 76,6% - Tỉ lệ đánh giá số lượng tế bào nấm men 4+ (trên 40TB/VT) nhóm băng dính 66,7% cao nhóm dao cùn 25,0% - Tỉ lệ xét nghiệm dương tính thương tổn vảy nhóm băng dính 62,5% thấp nhóm dao cùn 65,0%  Đối với kỹ thuật soi trực tiếp NaOH kết hợp Parker blue black ink - Thời gian trả kết nhóm NaOH+BI 49,1 ± 15,0 (phút), nhanh so với KOH 62,0 ± 17,1 (phút) - Tỉ lệ dương tính nhóm NaOH+BI 98,1% cao nhóm KOH 96,3% - Tỉ lệ nhận định dễ dàng hình ảnh sợi nấm + tế bào nấm men nhóm NaOH+BI 80,9% cao nhóm KOH 79,0% - Tỉ lệ đánh giá số lượng tế bào nấm men 4+ (trên 40TB/VT) nhóm NaOH+BI 66,7% cao nhóm KOH 25,0% 125 - NaOH +BI có ý nghĩa cao chẩn đốn lang ben với AUC= 0,717 - KOH có ý nghĩa thấp chẩn đoán lang ben với AUC= 0,559  Đối với tiêu chuẩn soi trực tiếp tìm Malassezia - Nhóm bệnh: Tỉ lệ xét nghiệm dương tính với Malassezia nhóm bệnh 70,0% 100% bệnh nhân có xét nghiệm định lượng tế bào nấm men từ 15 TB/VT trở lên 92% từ 20TB/VT trở lên Mật độ vi nấm Malassezia nhóm bệnh 31,5 ± 14,4 Số lượng tế bào nấm men 15 TB/VT có độ nhạy cao (100%), 42,5 TB/VT cho độ đặc hiệu cao (100%) Điểm uốn đồ thị ROC 22,5 TB/VT 27,5 TB/VT Do đó, chọn số lượng tế bào nấm men từ 25,0 TB/VT cho độ nhạy độ đặc hiệu cao - Nhóm chứng: Tỉ lệ xét nghiệm dương tính với Malassezia nhóm chứng 66,0% 100% bệnh nhân có xét nghiệm định lượng tế bào nấm men 20 TB/VT 90% 15TB/VT Mật độ vi nấm Malassezia nhóm bệnh 6,7 ± 4,3 Số lượng tế bào nấm men 1,5 TB/VT có độ nhạy cao (100%), 6,5 TB/VT cho độ đặc hiệu cao (100%) Điểm uốn đồ thị ROC 3,5 TB/VT 4,5 TB/VT Do đó, chọn số lượng tế bào nấm men từ 4,0 TB/VT trở xuống cho độ nhạy độ đặc hiệu cao TÀI LIỆU THAM KHẢO Dounia Bitar, Olivier Lortholary, Yann Le Strat et al (2014), Population-Based Analysis of Invasive Fungal Infections, France, 2001–2010, Emerging Infectious Diseases, 20(7), 1149-1155 Sugita T et al (2004), A new yeast, Malassezia yamatoensis, isolated from a patient with seborrheic dermatitis, and its distribution in patients and healthy subjects, Microbiol Immunol, 4(8), 579-583 Hirai A, et al (2004), Malassezia nana sp nov., a novel lipid-dependent yeast species isolated from animals, Int J Syst Evol Microbiol, 5(4), 623-627 Cabanes FJ, Theelen B, Castella G et al (2007), Two new lipiddependent Malassezia species from domestic animals, FEMS Yeast Res, 71064-4076 Cabanes FJ, Vega S, Castella G (2011), Malassezia cuniculi sp nov., anovel yeast species isolated from rabbit skin, Med Mycol., 4940-48 Wu G, Zhao H, Li C et al (2015), Genus-Wide Comparative Genomics of Malassezia Delineates Its Phylogeny, Physiology, and Niche Adaptation on Human Skin, PLOS genetic, 11(11), 1-26 F Javier Cabanes (2014), Malassezia yeasts: How many species infect humans and animals, PLOS pathogens, 10(2), Aristea Velegraki, Claudia Cafarchia, Georgios Gaitanis et al (2015), Malassezia infections in humans and Animals: Pathophysiology, Detection, and Treatment, PLOS pathogens, 11(1), 1-6 Borda L J., Wikramanayake T C (2015), Seborrheic Dermatitis and Dandruff: A Comprehensive Review, J Clin Investig Dermatol, 3(2), 1-22 10 Georgios Gaitanis, Prokopios Magiatis, Markus Hantschke et al (2012), The Malassezia Genus in Skin and Systemic Diseases, Clinical Microbiology Reviews, 25106-141 11 Aditya K Gupta, Roma Batra, Robyn Bluhm et al (2003), Pityriasis versicolor, Dermatologic Clinics, 21413-429 12 A K Gupta, Y Khohli, J Faergenmann et al (2001), Epidemiology of Malassezia yeasts asscociated with pityriasis verrsicolor in Ontario, Canada, Medical Mycology, 39199-206 13 Elham Zeinali, Golnar Sadeghi, Fahimeh Yazdinia et al (2014), Clinical and epidermiological features of the genus Malassezia in Iran, Iranian Journal of Microbioloy, 6(5), 354-360 14 Trần Lan Anh (1996), Tình hình bệnh da số xã Thanh Trì, Hà Nội, Nội san Da liễu, 215 15 Phạm Văn Hiển (1996), Đặc điểm ngồi da khu cơng nghiệp Thượng Đình Hà Nội, ảnh hưởng môi trường sống đến mô hình bệnh tật., Nội san Da liễu, 36-11 16 Nguyễn Thị Tuyết Mai (1998), Tình hình bệnh Lang ben đánh giá tác dụng điều trị uống ketoconazole viện Da liễu từ năm 19971998, Luận án thạc sỹ y học Đại học Y Hà Nội 17 Asja Prohic, Dubravka Simic, Tamara Jovovic Sadikovic et al (2014), Distribution of Malassezia species on healthy human skin in Bosnia and Herzegovina: correlation with body part, age, and gender, Iranian Journal of Microbioloy, 6(4), 253-262 18 Bộ môn Da liễu (2009) Bệnh Lang ben Bệnh Da liễu, Nhà xuất y học, Hà Nội, 92-95 19 Juliano Oliveira Santana, Pedro Costa Campos Filho, Fernanda Luiza Andrade de Azevedo (2013), Pityriasis versicolor: Clinical- epidemiological characterization of patients in the urban area of Buerarama- BA, Brazil, Anais Brasileiros de Dermatological, 88(2), 216-221 20 Abdul- Razak Sh Hasan, Abass A Alduliami, Khidier M Al-Kialy (2009), Clinical and fungal study of pityriasis versicolor infection among patients with skin mycoses in Baquba, Iraqi Journal of Community Medicine, 130-33 21 Bita Tarazooie, Parivash Kordbacheh, Farideh Zaini et al (2004), Study of the distribution of Malassezia species in patients with pityriasis versicolor and healthy individuals in Tehran, Iran, BMC Dermatology, 46 22 F Sanchez Fajardo (2000), Malassezia globosa as the causative agent of pityriasis versicolor, British Journal of Dermatology 143799 23 Xu H., Lan D., Yang B et al (2015), Biochemical Properties and Structure Analysis of a DAG-Like Lipase from Malassezia globosa, Int J Mol Sci, 16(3), 4865-4879 24 Sommer B., Overy D P., Haltli B et al (2016), Secreted lipases from Malassezia globosa: recombinant expression and determination of their substrate specificities, Microbiology, 162(7), 1069-1079 25 Vullo D., Del Prete S., Capasso C et al (2016), Carbonic anhydrase activators: Activation of the beta-carbonic anhydrase from Malassezia globosa with amines and amino acids, Bioorg Med Chem Lett, 26(5), 1381-1385 26 Del Prete S., Vullo D., Osman S M et al (2015), Anion inhibition studies of the dandruff-producing fungus Malassezia globosa betacarbonic anhydrase MgCA, Bioorg Med Chem Lett, 25(22), 5194-5198 27 Entezari Heravi Yeganeh, Bua Silvia, Nocentini Alessio et al (2017), Inhibition of Malassezia globosa carbonic anhydrase with phenols, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 25(9), 2577-2582 28 Preuss J., Hort W., Lang S et al (2013), Characterization of tryptophan aminotransferase of Malassezia furfur, the key enzyme in the production of indolic compounds by M furfur, Exp Dermatol, 22(11), 736-741 29 Youngchim S., Nosanchuk J D., Pornsuwan S et al (2013), The role of L-DOPA on melanization and mycelial production in Malassezia furfur, PLoS One, 8(6), 1-12 30 Kruppa M D., Lowman D W., Chen Y H et al (2009), Identification of (1 >6)-beta-D-glucan as the major carbohydrate component of the Malassezia sympodialis cell wall, Carbohydr Res, 344(18), 2474-2479 31 Selander C., Engblom C., Nilsson G et al (2009), TLR2/MyD88dependent and -independent activation of mast cell IgE responses by the skin commensal yeast Malassezia sympodialis, J Immunol, 182(7), 4208-4216 32 Hata T R., Gallo R L (2008), Antimicrobial Peptides, Skin Infections and Atopic Dermatitis, Semin Cutan Med Surg, 27(2), 144-150 33 Aditya K Gupta, Danielle Lane, M Paquet (2014), Systematic Review of Systemic Treatments for Tinea Versicolor and Evidence-Based Dosing Regimen Recommendations, Canadian Dermatology Association, Journal of Cutaneous Medicine and Surgery, 18(2), 79-90 34 Aditya K Gupta, Kelly A Foley (2015), Antifungal Treatment for Pityriasis Versicolor, Journal of Fungi, 113-29 35 Nguyễn Văn Hoàn (2015), Đánh giá hiệu điều trị bệnh Lang ben uống itraconazole liều xung, Luận văn Thạc sỹ y học Đại học Y Hà Nội 36 Health Canada (2013), Ketoconazole-Risk of potential fatal liver toxicity for health professionals 37 Hassab-El-Naby Hussein MM, Abdo Hamed Mohammed, Hassan Hassan Mohammed (2010), Comparative study for the reliability of cellophane tape and standard KOH mount in diagnosis of pityriasis versicolor 38 Navya B, Golia Saroj (2017), Comparison of KOH Mount Using Standard Technique and Cellophane Tape Method for Diagnosis of Superficial Fungal Infections, Int J Curr Microbiol App Sci, 6(10), 494-499 39 Nikita Lodha, Shital Amin Poojary (2015), A novel contrast stain for the rapid diagnosis of pityriasis versicolor: A comparison of Chicago Sky Blue 6B stain, potassium hydroxide mount and culture, Indian Journal of Dermatology, 60(4), 340-344 40 Anggraeni Noviandini, Sunarso Suyoso, Linda Astari (2017), Parker ink-KOH stain, Chicago Sky Blue (CSB) stain, and Fungi Culture, for The Diagnosis of Superficial Dermatomycoses Berkala Ilmu Kesehatan Kulit dan Kelamin – Periodical of Dermatology and Venereology, 29(1), 21-29 41 Rathnapriya N, UshaKrishnan K, Janaki C et al (2016), Isolation of Malassezia yeast using Modified Dixon’s Agar from Pityriasis versicolor lesions, Indian Journal of Basic and Applied Medical Research, 5(3), 123-129 42 Gordon Morris A (1951), The Lipophilic Mycoflora of the Skin I In Vitro Culture of Pityrosporum orbiculare n sp, Mycologia, 43(5), 524-535 43 Gueho E., Midgley G., Guillot J (1996), The genus Malassezia with description of four new species, Antonie Van Leeuwenhoek, 69(4), 337-355 44 Cafarchia C., Gasser R B., Figueredo L A et al (2011), Advances in the identification of Malassezia, Mol Cell Probes, 25(1), 1-7 45 Kaneko T., Makimura K., Onozaki M et al (2005), Vital growth factors of Malassezia species on modified CHROMagar Candida, Med Mycol, 43(8), 699-704 46 Kaneko T., Makimura K., Abe M et al (2007), Revised culture-based system for identification of Malassezia species, J Clin Microbiol, 45(11), 3737-3742 47 Kaneko T (2011), A study of culture-based easy identification system for Malassezia, Med Mycol J, 52(4), 297-303 48 Kaneko T., Makimura K., Sugita T et al (2006), Tween 40-based precipitate production observed on modified chromogenic agar and development of biological identification kit for Malassezia species, Med Mycol, 44(3), 227-231 49 Shuster S (1984), The aetiology of dandruff and the mode of action of therapeutic agents, Br J Dermatol, 111(2), 235-242 50 Shparago N I., Bruno P P., Bennett J (1995), Systemic Malassezia furfur infection in an adult receiving total parenteral nutrition, J Am Osteopath Assoc, 95(6), 375-377 51 Hellgren L., Vincent J (1983), The incidence of tinea versicolor in central Sweden, J Med Microbiol, 16(4), 501-502 52 Sugita Takashi, Tajima Mami, Takashima Masako et al (2004), A New Yeast, Malassezia yamatoensis, Isolated from a Patient with Seborrheic Dermatitis, and Its Distribution in Patients and Healthy Subjects, Microbiology and Immunology, 48(8), 579-583 53 Cabanes F J., Theelen B., Castella G et al (2007), Two new lipiddependent Malassezia species from domestic animals, FEMS Yeast Res, 7(6), 1064-1076 54 CabaÑes F J., Vega S., Castellá G (2011), Malassezia cuniculi sp nov., a novel yeast species isolated from rabbit skin, Medical Mycology, 49(1), 40-48 55 Shibata N., Okanuma N., Hirai K et al (2006), Isolation, characterization and molecular cloning of a lipolytic enzyme secreted from Malassezia pachydermatis, FEMS Microbiol Lett, 256(1), 137-144 56 Del Rosso J Q (2011), Adult Seborrheic Dermatitis: A Status Report on Practical Topical Management, J Clin Aesthet Dermatol, 4(5), 32-38 57 Phạm Văn Hiển (2009) Bệnh Lang ben Bệnh Da liễu, Nhà xuất y học, Hà Nội, 92-95 58 Dutta S, Bajaj AK, Basu S et al (2002), Pityriasis versicolor: socioeconomic and clinico-mycologic study in India, Int J Dermatol., 41823-824 59 Kindo AJ, Sophia SK, Kalyani J et al (2004), Identification of Malassezia species, Indian J Med Microbiol, 22179-181 60 Gaitanis G, et al (2006), Distribution of Malassezia species in pityriasis versicolor and seborrhoeic dermatitis in Greece Typing of the major pityriasis versicolor isolate M globosa, Rev Iberoam Micol., 2771-74 61 Karakas M, Turaỗ-Biỗer A, Ilkit M et al (2009), Epidemiology of pityriasis versicolor in Adana, Turkey, J Dermatol, 36377-382 62 Chaudhary R, Singh S, Banerjee T et al (2010), Prevalence of different Malassezia species in pityriasis versicolor in central India, Indian J Dermatol Venereol Leprol., 76159-164 63 Rasi A, et al (2010), Malassezia yeast species isolated from Iranian patients with pityriasis versicolor in a prospective study, Mycoses, 53350-355 64 Nguyễn Đinh Nga, Lê Thị Ngọc Huệ, Phạm Ngọc Hiền Vy (2007), Ly trích định danh Malassezia spp từ vẩy da số người Việt Nam tình nguyện, Tạp chí Y dược học Thành phố Hồ Chí Minh, 11(2), 186-191 65 Rasi Abbas, Naderi Reza, Behzadi Ashkan Heshmatzade et al (2010), Malassezia yeast species isolated from Iranian patients with pityriasis versicolor in a prospective study, Mycoses, 53(4), 350-355 66 Talaee R., Katiraee F., Ghaderi M et al (2014), Molecular Identification and Prevalence of Malassezia Species in Pityriasis Versicolor Patients From Kashan, Iran, Jundishapur J Microbiol, 7(8) 67 Tarazooie B., Kordbacheh P., Zaini F et al (2004), Study of the distribution of Malassezia species in patients with pityriasis versicolor and healthy individuals in Tehran, Iran, BMC Dermatol, 45 68 Ben Salah S., Makni F., Marrakchi S et al (2005), Identification of Malassezia species from Tunisian patients with pityriasis versicolor and normal subjects, Mycoses, 48(4), 242-245 69 Prohic A., Ozegovic L (2007), Malassezia species isolated from lesional and non-lesional skin in patients with pityriasis versicolor, Mycoses, 50(1), 58-63 70 Karakas M., Turac-Bicer A., Ilkit M et al (2009), Epidemiology of pityriasis versicolor in Adana, Turkey, J Dermatol, 36(7), 377-382 71 Crespo Erchiga V., Ojeda Martos A., Vera Casano A et al (2000), Malassezia globosa as the causative agent of pityriasis versicolor, Br J Dermatol, 143(4), 799-803 72 Gaitanis G., Velegraki A., Frangoulis E et al (2002), Identification of Malassezia species from patient skin scales by PCR-RFLP, Clin Microbiol Infect, 8(3), 162-173 73 Abbas Rasi, Reza Naderi, Ashkan Heshmatzade Behzadi et al (2009), Malassezia yeast species isolated from Iranian patients with pityriasis versicolor in a prospective study, Mycoses, 53350-355 74 Rezvan Talaee, Farzad Katiraee, Maryam Ghaderi et al (2014), Molecular Identification and Prevalence of MalasseziaSpecies in Pityriasis Versicolor Patients From Kashan, Iran, Jundishapur J Microbiol, 7(7), 1-6 75 Roro Inge Ade Krisanty, Kusmarinah Bramono, I Made Wisnu (2009), Identification of Malassezia species from pityriasis versicolor in Indonesia and its relationship with clinical characteristics, Mycoses, 52257-262 76 Talaee R., Katiraee F., Ghaderi M et al (2014), Molecular Identification and Prevalence of Malassezia Species in Pityriasis Versicolor Patients From Kashan, Iran, Jundishapur J Microbiol, 7(8), 1-6 77 Valéria Maria de Souza Framil, Márcia S C Melhem, Maria Walderez Szeszs et al (2011), New aspects in the clinical course of pityriasis versicolor, An Bras Dermatol, 86(6), 1135-1140 78 Roro Inge Ade Krisanty, Kusmarinah Bramono, I Made Wisnu (2008), Identification of Malasseziaspecies from pityriasis versicolor in Indonesia and its relationship with clinical characteristics, Journal Compilation 79 Christine Selander , Camilla Engblom, Gunnar Nilsson et al (2009), TLR2/MyD88-Dependent and -Independent Activation of Mast Cell IgE Responses by the Skin Commensal Yeast Malassezia sympodialis, The Journal of Immunology, 182(7), 4208-4216 80 Michael D Kruppa, Douglas W Lowman, Yu-Han Chen et al (2010), Dentification of (1→6)-β-D-glucan as the major carbohydrate component of the Malassezia sympodialiscell wall, Carbohydrat Research, 344(18), 2474-2479 81 Perpetua Ibekwe (2014), Correlation of Malassezia species with clinical characteristics of pityriasis versicolor the Medical Faculty of Ludwig-Maximilians-Universität, Munich Germany 82 Asja Prohic, Ladislav Ozegovic (2006), Malassezia species isolated from lesional and non-lesional skin in patients with pityriasis versicolor, Journal Compilation, 5058-63 83 V Crespo Erchiga, A Ojeda Martos, A Vera Casan A O (2000), Malassezia globosa as the causative agent of pityriasis versicolor, British Journal of Dermatology, 143799-803 84 Salah SB, et al (2005), Identification of Malassezia species from Tunisian patients with pityriasis versicolor and normal subjects, Mycoses, 48242-245 85 Gupta A K., Kohli Y (2004), Prevalence of Malassezia species on various body sites in clinically healthy subjects representing different age groups, Med Mycol, 42(1), 35-42 86 Payle B., Serrano L., Bieley H C et al (1994), Albert's solution versus potassium hydroxide solution in the diagnosis of tinea versicolor, Int J Dermatol, 33(3), 182-183 87 Remya V S, Arun B, Usha Karunakaran et al (2017), Cellophane Tape Pugh’s Staining a Novel Contrast Staining Method for Rapid Detection of Fungal Elements of Malassezia in Pityriasis Versicolor, Int J Health Sci Res, 7(11), 42-46 88 Hussein M M Hassab-El-Naby, Ahmad Sadek Mohamed Salem, Hamed Mohammed Abdo et al (2010), Comparative study for the reliability of cellophane tape and standard KOH mount in diagnosis of pityriasis versicolor, The Gulf Journal of Dermatology and Venereology, 17(2), 29-34 89 Silva V., Fischman O., Zaror L (1996), Importancia Del examen microscopio directo semi- quanitativo em el diagnostico de Malassezia furfur, Rev Iberoamerica de Micologia, 1390-92 90 Phạm Thu Hiền (2014), Đặc điểm Lâm sàng, cận lâm sàng, độ pH da hiệu điều trị bệnh Lang ben fluconazole 400mg liều nhất, Luận văn Thạc sỹ Y học, Đại học Y Hà Nội 91 Trần Cẩm Vân, Trần Hậu Khang, Nguyễn Thị Xuân et al (2017), Khảo sát tình hình nhiễm Malassezia spp số bệnh da thường gặp Bệnh viện Da liễu Trung Ương từ tháng đến tháng 12 năm 2012, Y học Việt Nam, 466(1), 176-179 ...SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ HÀ NỘI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG MỘT SỐ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN XÁC ĐỊNH CHỦNG NẤM MALASSEZIA GÂY BỆNH... nghiên cứu phát triển ứng dụng số kỹ thuật xác định chủng Malassezia gây bệnh Lang ben nhằm mục tiêu: Đánh giá đặc điểm phân bố chủng vi nấm Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện khu vực Hà Nội. .. 87 4.1 Xác định chủng Malassezia gây bệnh lang ben số bệnh viện địa bàn Hà Nội 87 4.1.1 Xác định Malassezia bệnh lang ben nuôi cấy PCR sequencing 87 4.1.2 Xác định Malassezia