ĐÁNH GIÁ đột BIẾN GEN CDH1 TRONG UNG THƯ dạ dày ở NGƯỜI TRẺ TUỔI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI HOÀNG MINH KHƯƠNG ĐÁNH GIÁ ĐỘT BIẾN GEN CDH1 TRONG UNG THƯ DẠ DÀY Ở NGƯỜI TRẺ TUỔI ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI HOÀNG MINH KHƯƠNG ĐÁNH GIÁ ĐỘT BIẾN GEN CDH1 TRONG UNG THƯ DẠ DÀY Ở NGƯỜI TRẺ TUỔI Chuyên ngành : Nội khoa Mã số ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.VŨ TRƯỜNG KHANH HÀ NỘI - 2019 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A BCL BCN C CT DNA dNTP G HDGC HP MRI PCR T UTDD WHO Adenin bờ cong lớn bờ cong nhỏ Cytosine Computer tomography Deoxyribo Nucleotid Acid Deoxyribonucleotid-5-triphosphate Guanine Hereditary diffuse gastric cancer (ung thư dày lan tỏa di truyền) helicopacter pylori Magnetic resonance imaging Polymerase chain reaction(phản ứng khuếch đại gen) thymine ung thư dày world health organization (tổ chức y tế giới MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư dày loại ung thư thường gặp toàn giới lại nguyên nhân tử vong đứng thứ ung thư với khoảng 723.000 chết hàng năm [1] Ung thư dày người trẻ tuổi ung thư dày bệnh nhân 40 tuổi chiếm khoảng 2-8% Ung thư dày người trẻ tuổi đa phần phát giai đoạn tiến triển kết điều trị hạn chế, tiên lượng xấu Nhiều nghiên cứu giới utdd người trẻ tuổi thường gặp thể lan tỏa phụ nữ [2], [3], [4], [5] [6] Ung thư dày người trẻ tuổi nhiều tác giả giới quan tâm nghiên cứu nhằm lý giải nguyên nhân việc xuất sớm UTDD người trẻ tuổi.Yếu tố môi trường nhiễm Hp nhiều tác giả giới nghiên cứu chưa có giải thích thỏa đáng.Hội chứng UTDD có tính chất gia đình khơng thường gặp nhóm BN trẻ tuổi, tỷ lệ khác nhóm nghiên cứu dao động tử 6-10% [7], [8] Hiện nay, giới tác giả sâu nghiên cứu ung thư dày người trẻ tuổi liên quan đến đột biến gen Các nghiên cứu giới CDH1 gen nằm cánh dài NST 16, mã hóa cho protein E-cadherin, đóng vai trò quan trọng kết dính tế bào – tế bào trì tính tồn vẹn biểu mơ Chính chức quan trọng mà đột biến gen CDH1 làm tăng nguy gây UTDD [9], [10] Đột biến gen CDH1 chứng minh làm tăng nguy phát triển UTDD thể lan tỏa, gặp UTDD thể khác theo phân loại Lauren Nhiều nghiên cứu đột biến CDH1 thị tiên lượng độc lập cho tiên lượng xấu UTDD thể lan tỏa UTDD lan tỏa liên quan đến đột biến gen CDH1, hội chứng di truyền gen trội NST thường, tồn dạng dị hợp tử Tuy nhiên, tất người thừa hưởng đột biến gen CDH1 phát triển ung thư Do vậy, cần có thêm chế phân tử thứ gọi “second hit” để bất hoạt hoàn toàn alen gen Đột biến soma gen CDH1 cho “second hit” gây UTDD thể lan tỏa [11], [12] Ở việt nam chưa có nghiên cứu đột biến gen CDH1 bệnh nhân ung thư dày nhóm đối tượng trẻ tuổi chúng tơi làm nghiên cứu: “Đánh giá đột biến gen CDH1 ung thư dày người trẻ tuổi” với mục tiêu Mô tả số đặc điểm lâm sàng, nội soi, giải phẫu bệnh ung thư dày người trẻ tuổi Đánh giá đột biến gen CDH1 ung thư dày người trẻ tuổi 10 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Dịch tễ học Trên toàn giới UTDD đứng thứ bệnh ung thư phổ biến nguyên nhân gây tử vong ung thư đứng thứ hai giới, với số người chết hàng năm ước tính 723000 [1] Ung thư dày gặp nhiều nam giới, tỷ lệ nam : nữ thay đổi nghiên cứu, từ 2:1 đến 4:1 [7] Phần lớn bệnh nhân nằm độ tuổi 50 –- 70 tuổi Tỷ lệ UTDD người trẻ tuổi (dưới 40 tuổi) khoảng 10% Các kết nghiên cứu tiến hành cho thấy tỷ lệ nữ nhóm bệnh nhân UTDD trẻ tuổi có xu hướng nhiều nhóm tuổi khác [2], [3], [4], [5] [6] Tỷ lệ mắc UTDD thay đổi theo khu vực giới, tỷ lệ mắc cao ghi nhận Đông Á, Đông Âu Nam Mỹ, đó, Bắc Mỹ châu Phi khu vực có tỷ lệ mắc thấp Tại khu vực Đơng Nam Á, Việt Nam có tỷ lệ mắc UTDD chuẩn theo tuổi năm 2012 cao nhất, 24/100.000 dân nam 10/100.000 nữ Các thống kê UTDD miền Bắc miền Nam cho thấy chênh lệch, tỷ lệ mắc UTDD Hà Nội gấp lần so với thành phố Hồ Chí Minh Sự khác biệt có ý nghĩa tỷ lệ mắc UTDD quan sát chủng tộc người khác sống khu vực địa lý Tuy nhiên, có khác biệt tỷ lệ mắc bệnh chủng tộc người sinh sống khu vực địa lý khác [7], [13], [14] 1.2 Các yếu tố nguy 1.2.1 Yếu tố môi trường chế độ ăn uống Đây yếu tố đóng vai trò quan trọng Một nghiên cứu cho thấy, tỉ lệ mắc UTDD người Nhật di cư sang Mỹ thấp so với người địa, 46 Typ I Typ II Typ III Typ IV 3.7 Kết mô bệnh học 3.8 Tỷ lệ đột biến gen CDH1 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ đột biến gen CDH1 47 Chương DỰ KIẾN BÀN LUẬN 48 DỰ KIẾN KẾT LUẬN Theo mục tiêu nghiên cứu DỰ KIẾN KHUYẾN NGHỊ Dự kết nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Humar B and Guilford P (2009) Hereditary diffuse gastric cancer: a manifestation of lost cell polarity Cancer Sci, 100(7), 1151–1157 Al-Refaie W.B., Hu C.-Y., Pisters P.W.T et al (2011) Gastric adenocarcinoma in young patients: a population-based appraisal Ann Surg Oncol, 18(10), 2800–2807 Lai J.F., Kim S., Li C et al (2008) Clinicopathologic characteristics and prognosis for young gastric adenocarcinoma patients after curative resection Ann Surg Oncol, 15(5), 1464–1469 Clinicopathological aspects and prognostic value with respect to age: an analysis of 3,362 consecutive gastric cancer patients - PubMed - NCBI , accessed: 12/06/2019 Nguyen D.K and Maggard-Gibbons M (2013) Age, poverty, acculturation, and gastric cancer Surgery, 154(3), 444–452 Anderson W.F., Camargo M.C., Fraumeni J.F et al (2010) Age-specific trends in incidence of noncardia gastric cancer in US adults JAMA, 303(17), 1723–1728 Carcinoma of the stomach: A review of epidemiology, pathogenesis, molecular genetics and chemoprevention - PubMed - NCBI , accessed: 12/06/2019 Clinicopathologic characteristics of gastric cancer in a young patient population - PubMed - NCBI , accessed: 13/06/2019 Hereditary Diffuse Gastric Cancer | Cancer.Net , accessed: 12/06/2019 10 Reference G.H CDH1 gene Genetics Home Reference, , accessed: 13/06/2019 11 Ma J., Shen H., Kapesa L et al (2016) Lauren classification and individualized chemotherapy in gastric cancer Oncol Lett, 11(5), 2959– 2964 12 Graziano F., Humar B., and Guilford P (2003) The role of the E-cadherin gene (CDH1) in diffuse gastric cancer susceptibility: from the laboratory to clinical practice Ann Oncol Off J Eur Soc Med Oncol, 14(12), 1705–1713 13 Alberts S.R., Cervantes A., van de Velde C.J.H (2003) Gastric cancer: epidemiology, pathology and treatment Ann Oncol Off J Eur Soc Med Oncol, 14 Suppl 2, ii31-36 14 Parkin D.M (2004) International variation Oncogene, 23(38), 6329– 6340 15 D’Elia L., Rossi G., Ippolito R et al (2012) Habitual salt intake and risk of gastric cancer: a meta-analysis of prospective studies Clin Nutr Edinb Scotl, 31(4), 489–498 16 Park B., Shin A., Park S.K et al (2011) Ecological study for refrigerator use, salt, vegetable, and fruit intakes, and gastric cancer Cancer Causes Control CCC, 22(11), 1497–1502 17 Kikuchi S., Crabtree J.E., Forman D et al (1999) Association between infections with CagA-positive or -negative strains of Helicobacter pylori and risk for gastric cancer in young adults Research Group on Prevention of Gastric Carcinoma Among Young Adults Am J Gastroenterol, 94(12), 3455–3459 18 Murphy G., Pfeiffer R., Camargo M.C et al (2009) Meta-analysis shows that prevalence of Epstein-Barr virus-positive gastric cancer differs based on sex and anatomic location Gastroenterology, 137(3), 824–833 19 Balfour D.C (1922) Factors influencing the life expectancy of patients operated on for gastric ulcer Ann Surg, 76(3), 405–408 20 Hu B., El Hajj N., Sittler S et al (2012) Gastric cancer: Classification, histology and application of molecular pathology J Gastrointest Oncol, 3(3), 251–261 21 Nguyễn Đức H (2006), Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, mơ bệnh học hóa mơ miễn dịch ung thư dày bệnh viện K, luận văn tốt nghiệp bác sỹ nội trú bệnh viện, Đại học y Hà Nội, Hà Nội 22 Japanese Gastric Cancer Association (2011) Japanese classification of gastric carcinoma: 3rd English edition Gastric Cancer Off J Int Gastric Cancer Assoc Jpn Gastric Cancer Assoc, 14(2), 101–112 23 Kim D.Y., Park Y.K., Joo J.K et al (2004) Clinicopathological characteristics of signet ring cell carcinoma of the stomach ANZ J Surg, 74(12), 1060–1064 24 Li C., Kim S., Lai J.F et al (2007) Advanced gastric carcinoma with signet ring cell histology Oncology, 72(1–2), 64–68 25 Hyung W.J., Noh S.H., Lee J.H et al (2002) Early gastric carcinoma with signet ring cell histology Cancer, 94(1), 78–83 26 Cơng Đ.Đì Vũ Duy Long (2011), Kết điều trị carcinoma dày tế bào nhẫn, Y học TP Hồ CHí Minh, Tập 15, phụ số 27 Nguyễn Ngọc Hùng, Nguyễn Văn Tuyên, Nguyễn Văn Bình (2007) Phân loại mơ bệnh học ung thư dày Học TPHồ Chí Minh, 11, số 28 Luu C., Thapa R., Woo K et al (2017) Does histology really influence gastric cancer prognosis? J Gastrointest Oncol, 8(6), 1026–1036 29 Lee J.Y., Gong E.J., Chung E.J et al (2017) The Characteristics and Prognosis of Diffuse-Type Early Gastric Cancer Diagnosed during Health Check-Ups Gut Liver, 11(6), 807–812 30 Cho S.Y., Park J.W., Liu Y et al (2017) Sporadic Early-Onset Diffuse Gastric Cancers Have High Frequency of Somatic CDH1 Alterations, but Low Frequency of Somatic RHOA Mutations Compared With LateOnset Cancers Gastroenterology, 153(2), 536-549.e26 31 Choi J.-H., Kim Y.-B., Ahn J.M et al (2018) Identification of genomic aberrations associated with lymph node metastasis in diffuse-type gastric cancer Exp Mol Med, 50(4), 32 Piessen G., Messager M., Leteurtre E et al (2009) Signet ring cell histology is an independent predictor of poor prognosis in gastric adenocarcinoma regardless of tumoral clinical presentation Ann Surg, 250(6), 878–887 33 Postlewait L.M., Squires M.H., Kooby D.A et al (2015) The Prognostic Value of Signet-Ring Cell Histology in Resected Gastric Adenocarcinoma Ann Surg Oncol, 22 Suppl 3, S832-839 34 Kunisaki C., Shimada H., Nomura M et al (2004) Therapeutic strategy for signet ring cell carcinoma of the stomach Br J Surg, 91(10), 1319– 1324 35 Li X., Wu W.K.K., Xing R et al (2016) Distinct Subtypes of Gastric Cancer Defined by Molecular Characterization Include Novel Mutational Signatures with Prognostic Capability Cancer Res, 76(7), 1724–1732 36 Guilford P., Hopkins J., Harraway J et al (1998) E-cadherin germline mutations in familial gastric cancer Nature, 392(6674), 402–405 37 Pharoah P.D., Guilford P., Caldas C et al (2001) Incidence of gastric cancer and breast cancer in CDH1 (E-cadherin) mutation carriers from hereditary diffuse gastric cancer families Gastroenterology, 121(6), 1348–1353 38 Liu Y.-C., Shen C.-Y., Wu H.-S et al (2006) Mechanisms inactivating the gene for E-cadherin in sporadic gastric carcinomas World J Gastroenterol, 12(14), 2168–2173 39 Corso G., Marrelli D., Pascale V et al (2012) Frequency of CDH1 germline mutations in gastric carcinoma coming from high- and low-risk areas: metanalysis and systematic review of the literature BMC Cancer, 12, 40 Kaurah P Huntsman D.G (1993) Hereditary Diffuse Gastric Cancer GeneReviews® University of Washington, Seattle, Seattle (WA) 41 Đồn Hữu Nghị (2012), Ung thư dày, Cập nhật bệnh thường gặp lâm sàng bệnh viện, Nhà xuất y học 42 Wang K., Yuen S.T., Xu J et al (2014) Whole-genome sequencing and comprehensive molecular profiling identify new driver mutations in gastric cancer Nat Genet, 46(6), 573–582 43 Paplomata E Wilfong L (2011) Signet ring cell carcinoma of the ampulla of Vater with leptomeningeal metastases: a case report J Clin Oncol Off J Am Soc Clin Oncol, 29(21), e627-629 44 Jerraya H., Saidani A., Khalfallah M et al (2013) Management of liver metastases from gastric carcinoma: where is the evidence? Tunis Med, 91(1), 1–5 45 Wu X.-J., Yuan P., Li Z.-Y et al (2013) Cytoreductive surgery and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy improves the survival of gastric cancer patients with ovarian metastasis and peritoneal dissemination Tumour Biol J Int Soc Oncodevelopmental Biol Med, 34(1), 463–469 46 Trịnh Hồng Sơn (2001), Nghiên cứu nạo vét hạch điều trị phẫu thuật ung thư dày, Luận án tiến sỹ Y học, Đại học y Hà Nội, Hà Nội 47 Li C., Oh S.J., Kim S et al (2009) Macroscopic Borrmann type as a simple prognostic indicator in patients with advanced gastric cancer Oncology, 77(3–4), 197–204 48 Oliveira C., Sousa S., Pinheiro H et al (2009) Quantification of epigenetic and genetic 2nd hits in CDH1 during hereditary diffuse gastric cancer syndrome progression Gastroenterology, 136(7), 2137–2148 49 Berx G., Becker K.F., Höfler H et al (1998) Mutations of the human Ecadherin (CDH1) gene Hum Mutat, 12(4), 226–237 50 Becker K.F., Reich U., Schott C et al (1999) Identification of eleven novel tumor-associated E-cadherin mutations Mutations in brief no 215 Online Hum Mutat, 13(2), 171 51 Oliveira C., Bordin M.C., Grehan N et al (2002) Screening E-cadherin in gastric cancer families reveals germline mutations only in hereditary diffuse gastric cancer kindred Hum Mutat, 19(5), 510–517 52 Corso G., Carvalho J., Marrelli D et al (2013) Somatic mutations and deletions of the E-cadherin gene predict poor survival of patients with gastric cancer J Clin Oncol Off J Am Soc Clin Oncol, 31(7), 868–875 53 Kim S., Ki C.S., Kim K.-M et al (2011) Novel mechanism of a CDH1 splicing mutation in a Korean patient with signet ring cell carcinoma BMB Rep, 44(11), 725–729 54 Lee Y.-S., Cho Y.S., Lee G.K et al (2014) Genomic profile analysis of diffuse-type gastric cancers Genome Biol, 15(4), R55 55 Chen K., Yang D., Li X et al (2015) Mutational landscape of gastric adenocarcinoma in Chinese: implications for prognosis and therapy Proc Natl Acad Sci U S A, 112(4), 1107–1112 56 Tạ Thành Văn (2010), PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử, Nhà xuất y học, Hà Nội 57 Hồ Huỳnh Thùy Dương (2005), Sinh học phân tử, Nhà xuất giáo dục, Hà Nội PHỤ LỤC QUY TRÌNH TÁCH DNA TỪ MÔ ĐÚC PARAFFIN - Cắt mảnh mẫu dày µm Chuyển mẫu vào ống microcentrifuge ml Thêm 1000 µl buffer DP trộn Ủ 560C phút ly tâm cho giọt dính nắp - ống Loại bỏ cẩn thận buffer DP, tốt pipet, tránh làm - mảnh mơ Thêm 180 µl buffer FPL trộn hồn tồn vortex mạnh Thêm 20 µl dung dịch Proteinase K trộn đều, ủ 560C Ủ 900C ly tâm cho khơng có giọt nắp ống Thêm 200 µl buffer FPB tube trộn hồn tồn, ly tâm cho - khơng có giọt nắp ống Thêm 200 µl ethanol tuyệt đối vào mẫu, trộn đều, ly tâm cho không - có giọt nắp ống Chuyển tất dung dịch vào cột SV cẩn thận, ly tâm phút - (>8000 vòng/phút), thay vào ống Thêm 600 µl buffer BW, ly tâm phút (>8000 vòng/phút), thay - vào ống Thêm 700 µl buffer TW, ly tâm phút (>8000 vòng/phút), thay - vào ống Lấy phần qua cột SV cho vào ống đựng Ly tâm tốc độ tối đa (>13000 vòng/phút) để loại bỏ buffer thừa Sau - chuyển cột SV vào ống microcentifuge Thêm 50 µl buffer AE, ủ phút nhiệt độ thường Ly tâm tốc độ tối đa (>13000 vòng/phút) phút PHỤ LỤC QUY TRÌNH TÁCH DNA TỪ MÁU TỒN PHẦN - Hút 20 µl dịch proteinase K vào ống ependoff 1,5ml Hút 200 µl máu tồn phần vào ống có proteinase K Thêm 200 µl buffer BL vortex để trộn hoàn toàn, ủ 56 0C 10 - phút Thêm 200 µl ethanol tuyệt đối trộn nhẹ nhàng Chuyển hỗn hợp vào cột SV li tâm 8000 vòng/phút loại bỏ dịch - lọc Thêm 600 µl buffer BW, li tâm 8000 vòng/phút loại bỏ dịch lọc Thêm 700 µl buffer TW, li tâm 8000 vòng/phút loại bỏ dịch lọc Li tâm phút tốc độ tối đa 14500 vòng/phút chuyển cột SV vào - tube 1,5ml Thêm 100 µl buffer AE, ủ nhiệt độ phòng phút, li tâm 13000 vòng/phút PHỤ LỤC ĐIỆN DI SẢN PHẨM PCR Chuẩn bị gel agarose 1,5% - Cân 0,6 agarose hòa tan 40ml dung dịch boric acid EDTA 1X (gel - 1,5%) Để nguội 60 0C Đổ gel từ từ vào khuôn Chờ gel khô (sau 40 phút), rút lược đặt gel vào máy điện di Kỹ thuật điện di - Đổ dung dịch TBE 1X vào bể điện di ngập gel Tra mẫu vào giếng (5µl/giếng) Máy điện di Mupid (Nhật Bản), điện di 30 phút, 110V Sau điện di đưa vào máy chụp gel, chụp ảnh PHỤ LỤC BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Hành - Số hồ sơ: - Họ tên: - Tuổi: - Giới: nam nữ Dân tộc: - Nghề nghiệp: - Địa chỉ: - Điện thoại: - Ngày vào viện Ngày viện Bệnh sử: * Tiền sử thân: - Tiền sử viêm, lt dày: có khơng .thời gian - Tiền sử phẫu thuật cắt dày: có khơng thời gian - Tiền sử điều trị hóa chất, xạ trị: có khơng thời gian * Tiền sử gia đình - Gia đình có người bị viêm, lt dày: có khơng thời gian mắc số người mắc tuổi mắc điều trị bệnh viện .thời gian - Gia đình có người bị mắc K dày: có khơng thời gian mắc số người mắc tuổi mắc điều trị bệnh viện .thời gian Triệu chứng lâm sàng Đau thượng vị Gầy sút cân Buồn nôn/nôn Chán ăn Nơn máu/đi ngồi phân đen Khó nuốt Triệu chứng cận lâm sàng Thiếu máu Vàng da, vàng mắt Gan to, báng Ấn thượng vị đau Hạch nách Hạch thượng đòn * Kết nội soi: - Ngày nội soi: - Bình thường: Có tổn thương: - Vị trí khối u: - Kích thước khối u: - Khác: * Kết mô bệnh học: - Mã tiêu bản: .Ngày đọc: - Nơi đọc: .Bác sỹ: - Kết mô bệnh học: Chẩn đoán Hà Nội, ngày tháng năm Người làm bệnh án ... cứu: Đánh giá đột biến gen CDH1 ung thư dày người trẻ tuổi với mục tiêu Mô tả số đặc điểm lâm sàng, nội soi, giải phẫu bệnh ung thư dày người trẻ tuổi Đánh giá đột biến gen CDH1 ung thư dày người. .. VẤN ĐỀ Ung thư dày loại ung thư thường gặp toàn giới lại nguyên nhân tử vong đứng thứ ung thư với khoảng 723.000 chết hàng năm [1] Ung thư dày người trẻ tuổi ung thư dày bệnh nhân 40 tuổi chiếm... có đột biến gen CDH1 Bên cạnh đó, nghiên cứu khơng phải tất người thừa hưởng đột biến gen CDH1 họ UTDD lan tỏa di truyền phát triển ung thư Các đột biến thừa hưởng di truyền gọi đột biến mầm, thư ng