Nghiên cứu thiết lập chất chuẩn geniposid từ quả dành dành (fructus gardenia) phục vụ công tác kiểm tra chất lượng thuốc

Ộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Ộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HỘI   ỄN VIỆT H NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN GENIPOSID TỪ QUẢ DÀNH DÀNH (Fructus Gardenia) PHỤC VỤ CÔNG TÁC KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG THUỐC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC ỘI   Ộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Ộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HỘI   ỄN VIỆT H NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN GENIPOSID TỪ QUẢ DÀNH DÀNH (Fructus Gardenia) PHỤC VỤ CÔNG TÁC KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG THUỐC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC  ểm nghiệm thuốc – độc chất ố  Người hướng dẫn khoa học: ễn Văn Tựu ễn Tuấn Anh ỘI –  – – – – – – ỤC LỤC  ỜI CẢM ƠN ỤC LỤC ỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ỤC CÁC BẢNG ỤC CÁC HẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ  CHƯƠNG I TỔNG QUAN          ề chất đối chiếu (chất chuẩn) ổng quan dược liệu D 1.2.1 Đặc điểm thực vật vố ộ phận d ụng ổng quan nhóm hoạt chất   1.4.1 Đặc điểm vất ụng dược lý Geniposid ổng quan chiết xuất, phân lập vế Geniposid ề chiết xuất dược liệu ề chiết xuất, phân lập ế Geniposid ổng quan số phương pháp hoá lử dụng nghi ứu đề t ắc ký lớp mỏng (SKLM) ắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.6.3 Đo nhiệt độ nóng chảy 1.6.4 Phương pháp đo phổ hồng nại (IR) 1.6.5 Phương pháp phân tích khối phổ (MS) ổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 1.6.7 Phương pháp sắc ký cột                   CHƯƠNG II: NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, NỘI DUNG  VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  ệu   Phương tiện nghiứu  ết bị, dụng cụ  ất, dung môi   ội dung nghiứu   Phương pháp nghiên cứu  CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VẾT QUẢ   ạo lập chất chuẩn Geniposid từ vị dược liệu D  ết xuất, phân lập v ế Geniposid từ vị dược liệu  ết xuất Iridoid glycosid từ dược liệu D  ập Geniposid từ hỗn hợp Iridoid glycosid  ế  3.1.2 Định tính Geniposid ế  3.1.2.1 Định tính Geniposid tinh chế SKLM  3.1.2.2 Xác định nhiệt độ nóng chảy Geniposid tinh chế 3.1.2.3 Đo phổ hồng ngoại Geniposid tinh chế  3.1.3 Xác định cấu trúc chất chiết  ết phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC  ết phương pháp cộng hưởng từ hạt nhân  ựng vẩm định quy trỹ thuật để định tính, định lượng Geniposid tinh chế xác định giới hạn tạp cất li ủa Geniposid tinh chế HPLC với detector UV ựa chọn phương pháp  ẩm định phương pháp HPLC đ ựa chọn để định lượng  ợp hệ thống sắc ký  3.2.2.2 Tính đặc hiệu phương pháp         3.2.2.3 Đường chuẩn vảng tuyến tính  3.2.2.4 Độ lặp lại  3.2.2.5 Độ  ới hạn phát (LOD) với hạn định lượng (LOQ)  3.2.3 Định tính Geniposid tinh chế phương pháp HPLC đựn 3.2.4 Định lượng Geniposid tinh chế phương pháp HPLC đựng 3.2.5 Xác định giới hạn tạp chất liủa Geniposid ế  ử dụng Geniposid tinh chế lất chuẩn ph ệm để định tính, định lượng Geniposid vị dược liệu  3.3.1 Định tính  3.3.1.1 Định tính Geniposid vị dược liệu Dằng phương pháp SKLM theo DĐVN III 3.3.1.2 Định tính Geniposid vị dược liệu Dằng phương pháp HPLC với detector UV 3.3.2 Định lượng Geniposid vị dược liệu Dằng phương pháp HPLC với detector UV       CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN      ề qui trết xuất, phân lập vế đựng v ấu trúc Geniposid tinh chế ề định tính, định lượng Geniposid tinh chế được, xác định giới ạn tạp chất liủa Geniposid tinh chế HPLC ề việc sử dụng Geniposid tinh chế lất chuẩn ph ệm để định tính, định lượng Geniposid vị dược liệu  ẾT LUẬN VẾN NGHỊ    ẾT LUẬN  ẾN NGHỊ  ỆU THAM KHẢO  Ụ LỤC ỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT        DĐVN III  ĐT                PĐ       ẩn ẩn + Thử :Điện di mao quả ết hợp khối phổ  :Dược điển Việt Nam III  sát tính thích hợp hệ thống sắc ký định lượng ế  ờ lưu (phút) ệ  ệ ố ố đĩa ất đố ế                                       ận xét: ết khảo sát tính ợp hệ thống sắc ký cho thấy độ lệch chuẩn tương đối (RSD) thời gian lưu  ện tích pic phép thử l  nhỏ 1%, giá trị hệ số bất đối gần (dao động ừ 1,104 đến 1,1,17) thể pic cân đối, số đĩa lý thuyết trung b   ấy khả tách tốt cột sắc ký Như hệ thống HPLC mử ụng lợp để định tính, định lượng Geniposid tinh chế  3.2.2.2 Tính đặc hiệu phương pháp Để xác định tính đặc hiệu phương pháp, tiến hắc ký mẫu ắng (MeOH  ẫu), mẫu chuẩn Geniposid có nồng độ khoảng 100 ẫu thử với điều ện sắc ký đả mục 3.2.1 ết thể h     ắc ký đồ xác định độ đặệủa phương pháp ẫẩ ẫử ẫắ  ết phân tích cho thấy: Trắc ký đồ mẫu thử cho pic có thời gian lưu (t t) tương tự thời gian lưu pic Geniposid sắc ký đồ mẫu ẩn (t     ắc ký đồ mẫu trắng thời gian lưu pic ất Như phương pháp đ  ựng có độ đặc hiệu đáp ứng y  ầu dùng để định tính định lượng Geniposid 3 Đường chuẩn vảng tuyến tính Chúng tơi đến hảo sát ựng khoảng ến tính ữa ện tích ắc ký v ồng độ chất phân tích, cụ thể sau:   ịch chuẩn gốc:  ẩn     methanol để ịch chuẩn gốc có nồng độ ảng   ịch chuẩn lệc: ừ dung dịch chuẩn gốc, chuẩn bị d ẩn pha ới nồng độ: 25     ến h ắc ký theo điều kiện mục  ần lượt với  ịch ẩn khoảng nồng độ trại giá trị diện tích pic tương ứng ết khảo sát khoảng tuyến tính tr bảng 3.1  ảng 3.1 ết khảo sát khoảng tuyến tính Geniposid ịch ồng độ (  ện tích pic                    Phương trồi qui    ệ số tương quan   Đường chuẩn Geniposid Diện tích (mAu.s) 5000000 y = 20031x - 44386 4000000 R2 = 0.9993 3000000 2000000 1000000 0 50 100 150 200 250 Nồng độ (mcg/ml)  Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ  ện tích  ủa pic Geniposid ận xét ết khảo sát khoảng tuyến tính cho thấy khoảng nồng độ từ 25 đến  ự liến tính chặt chẽ nồng độ  ện tích pic (phương trồi quy: y = 20031x  ệ số tương quan r = 0,9996) 3.2.2.4 Độ lặp lại Độ lặp lại phương pháp đánh giá qua định lượng mẫu thử riệt theo điều kiện sắc ký đựa chọn Kết tr bảng 3.1 ... H NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN GENIPOSID TỪ QUẢ DÀNH DÀNH (Fructus Gardenia) PHỤC VỤ CÔNG TÁC KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG THUỐC LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC  ểm nghiệm thuốc – độc chất. .. Phương pháp nghiên cứu  CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VẾT QUẢ   ạo lập chất chuẩn Geniposid từ vị dược liệu D  ết xuất, phân lập v ế Geniposid từ vị dược liệu... định lượng Geniposid tinh chế Chúng đ định hàm lượng Geniposid tinh chế l đạt yầu cột chất chuẩn đối ếu dược liệu Sản phẩm nể dất đối chiếu để kiểm tra