Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ streptomyces 15 29

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ LAN NHI Mã sinh viên: 1301299 GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 15.29 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ LAN NHI Mã sinh viên: 1301299 GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 15.29 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Cao Văn Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh – Sinh học HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin trân trọng gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Cao Văn Thu người thầy trực tiếp hướng dẫn từ ngày đầu bước vào nghiên cứu khoa học hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Xin chân thành gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên giảng dạy công tác môn Vi sinh - Sinh học, môn Công nghiệp Dược trường Đại Học Dược Hà Nội; Khoa Hóa trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội; PGS.TS Phan Văn Kiệm – Phó chủ tịch Viện Hàn Lâm khoa học công nghệ Việt Nam; Thư viện trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện, hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Đồng thời, tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu toàn thể thầy, cô giáo, cán bộ, viên chức trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ suốt năm năm học trường để tơi có kiến thức kỹ cần thiết Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình nơi sinh ra, nuôi dưỡng dạy dỗ để tơi có thành ngày hơm Cảm ơn người bạn, người em hỗ trợ đồng hành suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Do thời gian, phương tiện, kinh phí, kiến thức thân hạn chế, chắn khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận ý kiến đóng góp thầy cơ, bạn bè để khóa luận hồn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng năm2017 Sinh viên TRẦN THỊ LAN NHI MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương kháng sinh 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu kháng sinh 1.1.2 Định nghĩa kháng sinh 1.1.3 Phân loại kháng sinh 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng sinh: 1.1.5 Ứng dụng kháng sinh: 1.1.6 Sơ đồ tổng quát sinh tổng hợp kháng sinh 1.2 Đặc điểm xạ khuẩn 1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn chi Streptomyces 1.2.2 Đặc điểm cấu tạo tế bào xạ khuẩn 1.2.3 Đặc điểm sinh lý dinh dưỡng 1.2.4 Phân loại xạ khuẩn 1.2.5 Khả sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 1.3 Phương pháp phân lập vi sinh vật sinh tổng hợp kháng sinh 1.4 Phương pháp cải tạo giống xạ khuẩn 1.4.1 Chọn chủng có hoạt tính cao phép chọn lọc ngẫu nhiên 1.4.2 Đột biến cải tạo giống 1.5 Bảo quản giống xạ khuẩn 1.6 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 1.6.1 Khái niệm lên men 1.6.2 Các phương pháp lên men 1.6.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 1.7 Chiết tách, tinh chế kháng sinh 1.7.1 Vai trò chiết tách tinh chế kháng sinh 1.7.2 Phương pháp chiết xuất 1.7.3 Phương pháp tinh chế 1.8 Sơ xác định cấu trúc kháng sinh 10 1.8.1 Phổ hồng ngoại (IR) 10 1.8.2 Phổ tử ngoại - khả (UV - VIS) 10 1.8.3 Phổ khối (MS) 11 1.8.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 11 1.9 Một số nghiên cứu liên quan đến Streptomyces 11 1.9.1 Nghiên cứu sinh hoá sản xuất kháng sinh từ chi xạ khuẩn Streptomyces: phân lập, lên men, tách chiết tính chất sinh học 11 1.9.2 Streptomyces vietnamensis sp Nov, Streptomycete có sắc tố khuyếch tán màu xanh tím phân lập từ đất Việt Nam 12 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 13 2.1.1 Nguyên vật liệu 13 2.1.2 Máy móc, thiết bị, dụng cụ 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.2.1 Chọn lọc, cải tạo giống 15 2.2.2 Lên men, chiết tách, tinh chế kháng sinh 15 2.2.3 Sơ xác định số tính chất cấu trúc kháng sinh thu 15 2.3 Phương pháp thực nghiệm 16 2.3.1 Nuôi cấy giữ giống xạ khuẩn 16 2.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng sinh phương pháp khuyếch tán 16 2.3.3 Phương pháp cải tạo chọn giống 17 2.3.4 Lên men chìm sinh tổng hợp kháng sinh 18 2.3.5 Các phương pháp chiết tách, tinh chế kháng sinh 19 2.3.6 Sơ xác định tính chất cấu trúc kháng sinh thu 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM, NHẬN XÉT VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 Nâng cao khả sinh tổng hợp kháng sinh 22 3.1.1 Kết sàng lọc ngẫu nhiên chủng Streptomyces 15.29 22 3.1.2 Kết đột biến UV cải tạo giống lần 22 3.1.3 Kết đột biến UV cải tạo giống lần 23 3.1.4 Kết đột biến hoá học cải tạo giống 24 3.2 Kết lên men chọn môi trường nuôi cấy tốt 25 3.3 Kết chọn chủng lên men tốt 26 3.4 Kết sắc ký 26 3.4.1 Kết chạy sắc ký lần 26 3.4.2 Kết chạy sắc ký lần 28 3.4.3 Kết chạy sắc ký lần 28 3.5 Kết tinh thu kháng sinh tinh khiết 29 3.6 Kết sơ xác định cấu trúc kháng sinh 30 3.6.1 Kháng sinh 15.29.KS1 30 3.6.2 Kháng sinh 15.29.KS2 31 3.6.3 Kháng sinh 15.29.KS3 36 3.7 Bàn luận 37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT 13 C- NMR 13 H - NMR C Nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hưởng từ 13 carbon) H Nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hưởng từ hydro) A549 Tế bào ung thư phổi ADN Acid 2’- deoxyribonucleic ATCC BGC823 CDC American Type Culture Collection (Chủng vi sinh vật chuẩn Hoa Kỳ) Tế bào ung thư dày Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm sốt phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ) COSY Correlation Spectroscopy (Phổ tương quan) CW I Cell wall type (Thành tế bào loại 1) Đường kính trung bình vòng vơ khuẩn dd Dung dịch DEPT Distortionless Enhancementby Polarization Transfer DM Dung mơi dmhc Dung mơi hữu ĐBHH Đột biến hố học ĐBUV1 Đột biến UV lần ĐBUV2 Đột biến UV lần Gr(-)/ Gr(+) Gram âm / Gram dương HMBC HSQC HTKS Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Phổ tương quan đa liên kết dị nhân) Heteronuclear Single Quantum Coherence (Phổ kết hợp lượng tử đơn dị nhân) Hoạt tính kháng sinh IMI Innovative Medicine Initiative IR Ifrared (Phổ hồng ngoại) ISP International Streptomyces Project (Chương trình Streptomyces quốc tế) KS Kháng sinh L-DAP L-diaminopimelic acid MC Mẫu chứng MS Mass Spectrometry (Phổ khối) MT Môi trường MTdt Môi trường dịch thể NCIMB NCTC The National Collection of Industrial, Food and Marine Bacteria (Bộ sưu tập quốc gia công nghiệp, thực phẩm vi khuẩn biển) The North Centre Texas College (Trường Đại học North Centre Texas) NMR Nuclear magnetic resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) P mirabilis Proteus mirabilis BV 108 S aureus Staphylococcus aureus ATCC 1228 SKLM Sắc ký lớp mỏng SLNN Sàng lọc ngẫu nhiên t0nc Nhiệt độ nóng chảy UV Utra Violet (Phổ tử ngoại) UV - VIS Ultra Violet - Visible (Phổ tử ngoại - khả hiếm) V Thể tích v/v Thể tích/ thể tích VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các chủng VK kiểm định 13 Bảng 2.2 Các môi trường nuôi cấy VK kiểm định 13 Bảng 2.3 Các môi trường nuôi cấy xạ khuẩn 14 Bảng 3.1 Kết thử HTKS sau sàng lọc ngẫu nhiên 22 Bảng 3.2 Kết thử HTKS sau đột biến UV lần 23 Bảng 3.3 Kết thử HTKS sau đột biến UV lần 24 Bảng 3.4 Kết thử HTKS sau đột biến hoá học 25 Bảng 3.5 Kết thử HTKS chọn mơi trường lên men tối thích 25 Bảng 3.6 Kết thử HTKS chọn chủng lên men tốt 26 Bảng 3.7 Kết thử HTKS SKLM sau chạy sắc ký cột lần 27 Bảng 3.8 Kết SKLM phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần 28 Bảng 3.9 Kết SKLM phân đoạn sau chạy sắc ký cột lần 29 Bảng 3.10 Màu sắc, khối lượng kháng sinh tinh khiết hiệu suất tinh chế 29 Bảng 3.11 Kết phổ IR 15.29.KS1 30 Bảng 3.12 So sánh nhiệt độ nóng chảy, phổ UV 15.29.KS1 actinomycin X2 31 Bảng 3.13 Kết phổ IR 15.29.KS2 32 Bảng 3.14 So sánh nhiệt độ nóng chảy, phổ UV 15.29.KS2 actinomycin D 32 Bảng 3.15 Các nhóm nguyên tố carbon công thức 15.29.KS2 33 Bảng 3.16 So sánh phổ NMR 15.29.KS2 actinomycin D 34 Bảng 3.17 Kết phổ IR 15.29.KS3 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình PH.1 Sơ đồ tổng qt sinh tổng hợp kháng sinh Hình PH.2 Xạ khuẩn cấy zigzac đĩa Petri khuẩn lạc sau đột biến UV Hình PH.3 Thử HTKS phương pháp khối thạch, giếng thạch, khoanh giấy lọc Hình PH.4 Bình chứa dịch lên men: MT1dt, MT2dt, MT5dt Hình PH.5 Sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng dãy phân đoạn kháng sinh Hình PH.6 Hiện hình S aureus Hình PH.7 Đo t0nc hai KS Hình PH.8 Kháng sinh thơ tinh khiết Hình PH.9 Phổ tử ngoại kháng sinh 15.29.KS1 Hình PH.10 Phổ tử ngoại kháng sinh 15.29.KS2 Hình PH.11 Phổ tử ngoại kháng sinh 15.29.KS3 Hình PH.12 Phổ khối kháng sinh 15.29.KS1 Hình PH.13 Phổ khối kháng sinh 15.29.KS2 Hình PH.14 Phổ hồng ngoại kháng sinh 15.29.KS1 Hình PH.15 Phổ hồng ngoại kháng sinh 15.29.KS2 Hình PH.16 Phổ hồng ngoại kháng sinh 15.29.KS3 Hình PH.17 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân kháng sinh 15.29.KS2 Hình PH.17: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân kháng sinh 15.29.KS2 Bảng PB.1.Một số kháng sinh chủng Streptomyces tạo Kháng sinh Nguồn gốc Phổ tác dụng Oxytetracyclin S.rimosus Gr(+), Gr(-) Tretracyclin S.aureofaciens Gr(+), Gr(-) Streptomycin S.griseus Gr(+) Acid clavulanic S.clavuligerus Gr(+) Chloramphenicol S.venezuelae Gr(+) Spiramycin S.ambofaciens Gr(+) Vancomycin S.orientalis Gr(+) Amphotericin S.nodosus Nấm Nystatin S.noursei Nấm Actinomycin S.antibioticus Ung thư Daunomycin S.peuceticus Ung thư Mitomycin C Streptomycessp Ung thư Bảng PB.2 Các dung môi sử dụng Khối lượng riêng (g/ml) Nhiệt độ sôi (0C) 0,79 56 0,880 - 0,885 117 - 118 Ethanol, Xilong - Trung Quốc 0,789-0,791 78,3 Ethylacetat, Merck - Đức 0,889 - 0,901 70,4 Methanol, Xilong - Trung Quốc 0,791 - 0,793 64,5 Dung môi Aceton, Xilong - Trung Quốc Butylacetat, Xilong - Trung Quốc n-hexan, Merck - Đức 0,655 69 Triethylamin, Xilong-Trung Quốc 0,726 - 0,728 90 Bảng PB.3 Các hố chất sử dụng Hãng sản xuất Đóng lọ Tinh bột Thủ công - Việt Nam 1kg KNO3 Xilong - Trung Quốc 0,5 kg KCl Xilong - Trung Quốc 0,5 kg NaNO3 Xilong - Trung Quốc 0,5 kg NaNO2 Xilong - Trung Quốc 0,5 kg CaCO3 Xilong - Trung Quốc 0,5 kg (NH4)2SO4 Xilong - Trung Quốc 0,5 kg K2HPO4 Xilong - Trung Quốc 0,5 lít MgSO4.7H2O Xilong - Trung Quốc 0,5 kg NaCl Xilong - Trung Quốc 0,5 kg Cao nấm men Merck - Đức 0,5 kg Cao thịt Merck - Đức 0,5 kg Thạch Hải Long - Việt Nam 10 g Pepton Xilong - Trung Quốc 0,5 kg NaOH Xilong - Trung Quốc 500 g HCl 35,5% Xilong - Trung Quốc 500 ml Các hoá chất sử dụng Bảng PB.4 Kết thử HTKS sau SLNN Kết Biến S aureus ̅ (mm) 𝑫 P mirabilis s ̅ (mm) 𝑫 s chủng 18,72 0,60 20,81 0,13 18,65 0,55 14,91 0,08 18,27 0,38 19,91 0,22 18,32 0,44 20,68 0,47 18,95 0,58 17,42 0,93 18,91 0,28 17,45 0,65 18,78 0,37 19,61 0,86 19,29 0,51 20,47 0,47 18,96 1,02 20,04 0,12 10 19,02 0,92 17,62 0,53 11 18,11 0,13 19,75 0,69 12 18,44 0,22 15,29 4,00 13 11,26 2,33 10,73 0,37 14 19,19 1,01 17,15 2,05 15 18,24 0,61 17,07 2,15 16 19,17 0,67 18,15 2,29 17 18,98 0,97 18,09 1,54 18 20,24 0,58 21,02 0,10 19 19,27 0,83 16,06 1,02 20 18,21 0,81 15,83 1,55 21 17,62 0,27 16,35 1,34 22 16,93 0,40 13,99 1,12 23 18,07 1,19 14,72 2,44 24 19,03 0,85 16,23 1,28 25 19,10 0,52 17,73 0,67 26 18,43 0,82 18,07 1,17 27 17,94 1,26 18,53 1,17 28 17,73 1,06 16,53 0,72 29 18,25 0,42 18,86 0,31 30 18,38 0,53 17,49 0,76 32 18,15 1,45 18,18 1,00 33 16,97 1,50 15,15 0,82 Bảng PB.5 Kết thử HTKS sau đột biến UV1 S aureus Kết ̅ (mm) 𝑫 Biến s P mirabilis % Biến đổi HTKS ̅ (mm) 𝑫 s % Biến đổi HTKS chủng 22,63 0,25 109,38 23,01 0,43 96,87 22,55 0,07 108,99 23,55 1,12 99,17 23,01 0,39 111,20 24,23 0,69 102,01 20,99 0,47 101,43 22,81 0,88 96,03 22,56 0,67 109,04 23,29 0,78 98,05 22,73 0,16 109,84 23,59 0,32 99,31 20,20 2,16 97,63 23,26 0,06 97,94 22,32 0,55 107,88 24,19 1,01 101,84 22,13 0,17 106,98 22,65 0,26 95,38 10 21,37 1,88 103,27 21,73 0,90 91,48 11 23,41 0,31 113,16 22,69 0,44 95,52 12 22,50 0,44 108,75 23,39 1,02 98,47 13 22,32 2,56 107,88 23,37 0,98 98,39 14 22,11 0,55 106,88 23,66 0,81 99,62 15 21,49 0,76 103,85 23,53 0,98 99,06 21,87 0,22 105,69 23,92 1,13 100,72 22,38 0,50 108,17 23,20 1,08 97,68 16 17 18 21,70 0,16 104,88 23,99 1,18 101,02 19 21,84 0,46 105,56 23,97 1,30 100,91 20 21,74 0,66 105,07 24,15 0,64 101,67 21 21,23 0,44 102,59 23,81 1,04 100,24 22 21,29 0,69 102,88 23,31 1,08 98,13 23 21,14 0,41 102,17 23,63 1,13 99,51 24 20,28 1,75 98,02 23,67 1,25 99,68 25 21,60 0,45 104,40 24,45 0,50 102,96 26 21,67 0,24 104,72 23,42 0,82 98,61 27 21,29 1,11 102,92 24,34 0,60 102,48 28 21,51 1,10 103,95 23,51 0,60 99,00 29 20,94 1,59 101,21 22,72 1,02 95,66 30 22,67 0,53 109,59 25,06 1,24 105,52 31 20,27 0,04 97,99 23,62 0,94 99,45 32 19,79 0,29 95.67 23,36 0,54 98,36 33 19,95 0,98 96.41 23,54 0,32 99,12 MC 20,69 1,17 100,00 23,75 0,44 100,00 Bảng PB.6 Kết thử HTKS sau đột biến UV2 Kết S aureus P mirabilis % Biến đổi s 21,49 0,76 97,01 25,01 1,29 109,66 21,50 1,16 97,07 23,95 0,58 104,98 22,50 0,54 101,58 23,11 1,48 101,30 23,89 0,44 107,87 26,19 0,41 114,80 21,16 0,72 95,53 24,09 0,40 105,63 22,93 0,95 103,54 25,19 0,88 110,45 22,96 1,23 103,66 24,32 1,04 106,62 22,64 0,34 102,21 24,19 0,64 106,04 21,97 0,78 99,20 23,73 0,78 104,02 10 22,05 0,39 99,53 24,10 2,02 105,66 11 21,25 1,04 95,95 24,61 0,97 107,88 12 23,13 0,50 104,44 25,15 0,49 110,27 13 22,36 0,83 100,95 22,75 0,96 99,75 14 22,32 0,78 100,77 23,59 0,39 103,43 15 22,34 1,10 100,86 25,33 1,20 111,03 16 20,43 0,65 92,25 23,54 0,78 103,20 17 22,62 0,27 102,12 23,69 1,39 103,87 18 23,41 1,16 105,67 24,17 1,11 105,95 19 21,90 0,29 98,87 22,77 1,89 99,84 20 22,33 1,93 100,83 23,03 1,75 100,98 HTKS ̅ (mm) 𝑫 % Biến đổi ̅ (mm) 𝑫 Biến s HTKS chủng 21 21,98 0,74 99,23 23,16 1,85 101,53 22 21,87 1,01 98,75 22,33 1,44 97,88 23 22,65 1,20 102,27 22,80 2,30 99,96 24 22,20 0,83 100,23 23,87 2,16 104,63 25 21,59 0,36 97,46 21,93 1,06 96,16 26 21,53 0,29 97,19 22,19 1,28 97,27 27 20,65 1,97 93,24 21,70 0,33 95,13 28 22,45 0,37 101,34 23,18 0,52 101,62 29 22,23 0,32 100,35 22,03 0,63 96,57 30 22,40 0,43 101,13 21,31 0,96 93,44 31 21,43 0,18 96,73 23,01 0,51 100,89 32 22,22 0,64 100,32 22,98 0,63 100,75 33 22,09 1,89 99,71 22,52 2,16 98,73 MC 22,15 0,13 100,00 22,81 0,35 100,00 Bảng PB.7 Kết thử HTKS sau đột biến hoá học S aureus Kết Biến chủng ̅ (mm) 𝑫 s P mirabilis % Biến đổi HTKS ̅ (mm) 𝑫 s % Biến đổi HTKS 23,88 0,47 103,87 24,13 0,62 100,70 24,85 0,49 108,10 24,73 0,95 103,23 24,37 0,25 105,99 25,64 0,31 107,01 23,98 0,40 104,31 24,99 0,19 104,31 24,07 0,51 104,71 24,29 0,43 101,36 23,18 0,66 100,83 24,03 0,22 100,28 24,17 0,47 105,15 23,92 0,35 99,83 23,59 0,63 102,60 24,29 0,31 101,36 24,18 0,55 105,18 25,77 0,45 107,54 10 23,63 0,18 102,80 25,27 0,16 105,48 11 23,72 0,56 103,18 24,51 0,52 102,31 12 21,73 1,19 94,53 23,27 0,68 97,11 13 23,49 1,09 102,19 25,37 0,54 105,87 14 24,63 0,48 107,12 25,74 0,69 107,43 15 23,22 0,59 101,00 25,43 0,76 106,15 16 23,11 0,45 100,51 24,43 0,55 101,98 17 22,73 0,93 98.,5 24,55 0,85 102,45 18 24,59 0,75 106.95 25,93 1,09 108,24 19 23,43 0,54 101,93 25,01 0,53 104,37 20 23,97 0,47 104,25 25,49 0,68 106,40 21 23,60 0,37 102,65 24,48 0,95 102,17 22 23,34 0,57 101,52 24,73 0,47 103,23 23 23,39 0,37 101,73 24,30 0,45 101,42 24 24,13 0,62 104,97 24,01 1,26 100,19 25 21,90 0,59 95,26 23,27 1,45 97,11 26 22,80 0,36 99,17 24,44 0,49 102,00 27 23,64 0,25 102,83 24,51 0,49 102,31 28 22,87 0,43 99,46 23,73 0,56 99,05 29 23,07 0,48 100,36 24,93 0,79 104,06 30 23,83 0,26 103,67 24,28 1,14 101,34 31 22,75 0,86 98,97 23,37 0,58 97,52 32 21,89 0,19 95,20 23,58 1,23 98,41 33 23,27 0,69 101,23 24,57 0,99 102,56 MC 22,9 0,23 100,00 23,96 0,41 100,00 ... ngoại kháng sinh 15. 29. KS1 Hình PH.10 Phổ tử ngoại kháng sinh 15. 29. KS2 Hình PH.11 Phổ tử ngoại kháng sinh 15. 29. KS3 Hình PH.12 Phổ khối kháng sinh 15. 29. KS1 Hình PH.13 Phổ khối kháng sinh 15. 29. KS2... Mã sinh viên: 130 1299 GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU LÊN MEN TỔNG HỢP KHÁNG SINH NHỜ STREPTOMYCES 15. 29 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Cao Văn Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh – Sinh. .. thu kháng sinh tinh khiết 29 3.6 Kết sơ xác định cấu trúc kháng sinh 30 3.6.1 Kháng sinh 15. 29. KS1 30 3.6.2 Kháng sinh 15. 29. KS2 31 3.6.3 Kháng sinh 15. 29. KS3