BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - VŨ CƠNG THỌ GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA (Pseuderanthemum bracteatum Imlay., Acanthaceae) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội - 2008 Lời cảm ơn Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới GS.TS Phạm Xuân Sinh, người thầy trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi thực hồn thành tốt luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn giúp đỡ quí báu tập thể thầy cô Bộ môn Dược học cổ truyền Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy Bộ môn Thực vật, Bộ môn Dược liệu, Bộ môn Dược lực, Bộ môn Vi sinh Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành tốt cơng trình nghiên cứu khoa học Tơi xin cảm ơn giúp đỡ quí báu cán Viện Hoá học hợp chất thiên nhiên - Viện Khoa học Việt Nam giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu khoa học Nhân dịp này, cho phép gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu Trường Đại học Dược Hà Nội, Phòng Đào tạo sau Đại học, tồn thể thầy Trường Đại học Dược Hà Nội trang bị kiến thức, giúp đỡ suốt thời gian học tập tạo điều kiện thuận lợi để tơi có kết ngày hôm Cuối xin cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ động viên khích lệ tơi suốt thời gian học tập hoàn thành tốt luận văn Hà Nội, ngày 05 tháng 12 năm 2008 Học viên Vũ Công Thọ MỤC LỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CHI PSEUDERANTHEMUM .3 1.1.1 Vị trí phân loại chi Pseuderanthemum 1.1.2 Đặc điểm chung Họ Ô rô - Acanthaceae 1.1.3 Đặc điểm chung chi Pseuderanthemum 1.1.4 Các loài chi Pseuderanthemum 1.2 PHÂN BỐ, SINH THÁI MỘT SỐ LOÀI TRONG CHI PSEUDERANTHEMUM 1.3 THU HÁI VÀ CHẾ BIẾN MỘT SỐ LOÀI TRONG CHI PSEUDERANTHEMUM 1.4 THÀNH PHẦN HỐ HỌC CỦA MỘT SỐ LỒI TRONG CHI PSEUDERANTHEMUM 1.5 TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI TRONG CHI PSEUDERANTHEMUM 10 1.5.1 Tác dụng kháng khuẩn kháng nấm 10 1.5.2 Hoạt tính thuỷ phân protein (proteinase) 11 1.5.3 Tác dụng ức chế MAO 11 1.5.4 Tác dụng bảo vệ gan 11 1.5.5 Độc tính 12 1.6 CƠNG DỤNG MỘT SỐ LỒI TRONG CHI PSEUDERANTHEMUM 12 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 NGUYÊN LIỆU 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Súc vật thực nghiệm 14 2.1.3 Thiết bị hoá chất nghiên cứu 14 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.2.1 Đặc điểm thực vật 16 2.2.2 Thành phần hoá học 16 2.2.3 Thử tác dụng sinh học 16 2.2.3.1 Độc tính cấp 16 2.2.3.2 Đánh giá tác dụng XHLH hệ tiêu hoá 17 2.2.3.3 Đánh giá tác dụng cầm máu XHLH 19 2.2.3.4 Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn 21 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 23 3.1 NGHIÊN CỨU VỀ THỰC VẬT 23 3.1.1 Đặc điểm thực vật 23 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu 26 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 31 3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 34 3.2.1 Định tính sơ nhóm hoạt chất phần mặt đất XHLH 34 3.2.2 Định tính Flavonoid, Saponin, Sterol dược liệu XHLH SKLM 43 3.2.3 Xác định hàm lượng số phân đoạn chiết dược liệu XHLH 48 3.2.4 Định lượng Flavonoid toàn phần dịch chiết EtOAc phần mặt đất XHLH 50 3.2.5 Định lượng Saponin toàn phần dịch chiết n-Butanol phần mặt đất XHLH 53 3.2.6 Phân lập xác định cấu trúc phân tử số thành phần hoá học phần mặt đất XHLH 56 3.2.6.1 Quá trình phân lập 56 3.2.6.2 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập 59 3.2.6.3 Xác định cấu trúc hoá học hợp chất phân lập 60 3.3 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC 69 3.3.1 Đánh giá độc tính cấp 69 3.3.2 Đánh giá tác dụng dịch chiết XHLH lên đường tiêu hoá 70 3.3.3 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết XHLH lên trình cầm máu 76 3.3.4 Thăm dò tác dụng kháng khuẩn invitro 81 CHƯƠNG BÀN LUẬN 88 4.1 Về kết nghiên cứu thực vật 88 4.2 Về nghiên cứu thành phần hoá học 88 4.3 Về thử số tác dụng sinh học 89 4.3.1 Độc tính cấp 89 4.3.2 Tác dụng cầm máu vị thuốc XHLH 90 4.3.3 Về mối quan hệ công dụng điều trị bệnh VĐT tác dụng dược lý XHLH 90 4.3.4 Mối quan hệ tác dụng kháng khuẩn kinh nghiệm sử dụng XHLH dân gian 91 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 92 5.1 Kết luận 92 5.1.1 Về kết nghiên cứu thực vật 92 5.1.2 Về nghiên cứu thành phần hoá học 92 5.1.3 Về thử tác dụng sinh học 93 5.2 Đề xuất 94 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang Bảng 3.1: Kết định tính sơ nhóm chất phần mặt đất XHLH 42 Bảng 3.2: SKLM Flavonoid với hệ dm I 44 Bảng 3.3: SKLM Flavonoid với hệ dm III Bảng 3.4: SKLM Saponin với hệ dm III 44 Bảng 3.5: Kết SKLM Sterol với hệ dm IV 48 Bảng 3.6: Xác định hàm lượng phân đoạn chiết XHLH 49 Bảng 3.7: Định lượng Flavonoid toàn phần phần mặt đất XHLH 51 Bảng 3.8: Định lượng Flavonoid toàn phần phần XHLH 52 Bảng 3.9: Định lượng Saponin toàn phần phần mặt đất XHLH 54 Bảng 3.10: Kết phổ NMR chất XH 64 Bảng 3.11: Kết phổ NMR chất XH 68 Bảng 3.12: Kết thử độc tính cấp dịch chiết XHLH 69 Bảng 3.13: Kết thử dịch chiết XHLH nồng độ 0,2% lên ruột thỏ cô lập 71 Bảng 3.14: Kết thử dịch chiết XHLH nồng độ 0,5% lên ruột thỏ cô lập 72 Bảng 3.15: Sự ảnh hưởng PG 20% Loperamid lên di chuyển thức ăn 74 Bảng 3.16: Kết ảnh hưởng dịch chiết XHLH liều 15g/kg lên di chuyển thức ăn 75 Bảng 3.17: Ảnh hưởng XHLH lên thời gian Quick (invitro) 77 46 Bảng 3.18: Ảnh hưởng XHLH dùng qua đường uống lên thời gian chảy máu chuột (giây) 79 Bảng 3.19: ¶nh hưởng XHLH dùng chỗ lên thời gian chảy máu đuôi chuột (giây) 80 Bảng 3.20: Đường kính vòng vơ khuẩn chế phẩm thử XHLH 85 DANH MỤC HÌNH TT Tên hình Trang Hình 3.1: Ảnh hình thái thực vật XHLH 25 Hình 3.2: Cấu tạo chi tiết cuống XHLH 26 Hình 3.3: Cấu tạo chi tiết XHLH 28 Hình 3.4: Cấu tạo chi tiết thân XHLH 30 Hình 3.5: Cấu tạo chi tiết rễ XHLH 30 Hình 3.6: Đặc điểm bột phần mặt đất XHLH 32 Hình 3.7: Đặc điểm bột phần XHLH 33 Hình 3.8: SKĐ Flavonoid với hệ dm I 44 Hình 3.9: SKĐ Flavonoid với hệ dm III 44 Hình 3.10: SKĐ Saponin với hệ dm III 46 Hình 3.11: SKĐ cắn D d/c ether dầu hoả với hệ dm IV 47 Hình 3.12: Tách Sterol từ d/c ether dầu hoả SKLM 47 Hình 3.13: SKLM Sterol với hệ dm IV Hình 3.14: Sơ đồ chiết xuất số phân đoạn phần mặt đất XHLH Hình 3.15: Sơ đồ chiết xuất Flavonoid dược liệu XHLH 48 50 Hình 3.16: Sơ đồ chiết xuất Saponin phần mặt đất XHLH 55 Hình 3.17: Sơ đồ chiết phân đoạn thơ XHLH 57 Hình 3.18: Sơ đồ phân lập chất XH XH 58 Hình 3.19: Cấu trúc hố học chất XH 63 Hình 3.20: Cấu trúc hố học hợp chất XH2 68 Hình 3.21: Đồ thị ảnh hưởng XHLH 0,2% lên ruột thỏ lập 73 Hình 3.22: Đồ thị ảnh hưởng XHLH 0,5% lên ruột thỏ lập 73 Hình 3.23: Đồ thị ảnh hưởng XHLH 2% lên ruột thỏ lập 73 Hình 3.24: Hình ảnh vòng vơ khuẩn điển hình 87 53 GIẢI CHỮ VIẾT TẮT 13 : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Cacbon 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H NMR : Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H COSY : C NMR H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy B Pe G : Benzathin Penicillin BT : Bình thường CC : Sắc ký cột Column Chromatography d/c : Dịch chiết DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EI-MS : Phổ khối lượng va chạm electron Electron Impact Mass Spectrometry EtOAc : Ethyl acetat Ge : Gentamicin HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence IR : Phổ hồng ngoại Infrared Spectroscopy m/z : Tỷ lệ Số khối/điện tích ion MIC : Minimum Inhibitory Concentration MNC : Mẫu nghiên cứu MS : Phổ khối lượng Mass Spectroscopy NXB : Nhà xuất Phổ 13C-NMR phổ DEPT chất XH Phổ khối lượng ESI-MS chất XH Phổ HSQC chất XH Phổ HMBC chất XH Phổ 1H-NMR chất XH Phổ 1H-NMR dãn rộng chất XH Phổ 13C-NMR chất XH Phổ 13C-NMR phổ DEPT chất XH [M+Na]+ Phổ khối lượng ESI-MS XH TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam, NXB Nông nghiệp, trang 87 - 159 Đỗ Huy Bích cộng (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 1129 - 1130 Bộ môn Dược học cổ truyền, Đại học Dược Hà Nội (2005), Dược học cổ truyền, NXB Y học Bộ môn Dược liệu, Đại học Dược Hà Nội (1998), Thực tập dược liệu (Phần hố học), Trung tâm thơng tin thư viện Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược liệu, Đại học Dược Hà Nội (2004), Thực tập dược liệu (Phần vi học), Trung tâm thông tin thư viện Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược lực, Đại học Dược Hà Nội (2005), Thực tập dược lý, Trung tâm thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 27, 46 Bộ môn Dược lực, Đại học Dược Hà Nội (2005), Thực tập sinh lý, Trung tâm thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 61 - 63 Bộ mơn Hố phân tích, Đại học Dược Hà Nội (2004), Kiểm nghiệm thuốc, Trung tâm thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 101 - 126 Bộ môn Thực vật, Đại học Dược Hà Nội (2004), Thực tập thực vật nhận biết thuốc, Trung tâm thư viện Đại học Dược Hà Nội 10 Bộ môn Thực vật, Đại học Dược Hà Nội (2004), Thực vật học, Trung tâm thư viện Đại học Dược Hà Nội 11 Bộ Y tế, Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược, NXB Khoa học kỹ thuật, trang 231 - 259 12 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, trang 765, 1453 - 1454 13 Võ Văn Chi (chủ biên), Trần Hợp (1999), Cây cỏ có ích Việt Nam tập 1, NXB Giáo dục, trang 228 - 229 14 Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học Kỹ thuật, Tập 2, trang 2052 15 Võ Văn Chi (2005), 250 thuốc thông dụng, NXB Hải Phòng, trang 369 - 370 16 Vũ Văn Chuyên (1991), Bài giảng thực vật học, NXB Y học 17 Nguyễn Duy Cương, Nguyễn Hữu Quỳnh (1999), Từ điển Bách khoa dược học, NXB Từ điển Bách khoa, trang 714 18 Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp nghiên cứu độc tính cấp thuốc, NXB Y học 19 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, tập 3, NXB Trẻ , trang 67 - 70 20 Phạm Hoàng Hộ (2004), Cây cỏ vị thuốc Nam, NXB Trẻ, trang 503 21 Lê Khả Kế cộng (1969), Cây cỏ thường thấy Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 22 Trần Công Khánh (1980), Kỹ thuật hiển vi dùng nghiên cứu thực vật dược liệu, NXB Y học 23 Trần Công Khánh (1987), Thực tập hình thái giải phẫu, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp Hà Nội 24 Trần Công Khánh cộng (1998), Góp phần nghiên cứu thực vật, thành phần hoá học tác dụng sinh học Xuân hoa, Tạp chí dược liệu, tập 2, số 3, trang 37 - 41, năm 1998 25 Chiêu Hồng Lam (2005), Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến thành phần hóa học tác dụng sinh học vị thuốc Chỉ thực, Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ năm 2005 26 Nguyễn Hải Nam cộng (2001), Monoamine oxydase, Inhibitory Activity of some herbal medicine, Tạp chí dược liệu, tập 6, số 1/2001, trang 22 - 23 27 Nguyễn Thị Thanh Nhài (1997), Góp phần nghiên cứu thực vật, thành phần hoá học tác dụng sinh học Xuân hoa, Khoá luận tốt nghiệp dược sỹ năm 1997 28 Lê Thị Lan Oanh cộng sự, Một số tiêu sinh hoá Xuân hoa, Tuyển tập báo cáo Khoa học toàn quốc lần thứ 3, tập 1, Hội Hoá học Việt Nam, 1998, trang 96 - 99 29 Lê Thị Lan Oanh cộng (1999), Khảo sát số tiêu sinh hoá tác dụng thuỷ phân protein Xuân hoa, Tạp chí dược liệu, tập 4, số năm 1999, trang 13 - 14 30 R.M Klein D.T Klein (1979), Phương pháp nghiên cứu thực vật, tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật, Nguyễn Tiến Bân, Nguyễn Như Khanh dịch, trang 56 - 65 31 Nguyễn Nghĩa Thìn (1999), Thực vật có hoa, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội, trang 135 - 164, 236 - 237 32 Nguyễn Thị Minh Thu (1999), Góp phần nghiên cứu thực vật, thành phần hoá học tác dụng sinh học Xuân hoa, Luận văn tốt nghiệp Thạc sỹ Dược học năm 1999 33 Nguyễn Công Tỷ (2004), Cẩm nang thuốc vị thuốc Phương Đông thuốc ứng dụng, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 282 - 283 34 Trung tâm nghiên cứu tài nguyên môi trường Đại học Quốc gia Hà Nội (2003), Danh mục loài thực vật Việt Nam, NXB Nông nghiệp, trang 268 - 270 35 Viện huyết học Truyền máu TW (2005), Kỹ thuật xét nghiệm huyết học Truyền máu ứng dụng lâm sàng, NXB Y học, trang 78 Tài liệu tiếng Anh 36 A.L Takhtajan (1999), Diversity and classification of flowering plants, Columbia University Press, New York, page 459 37 Chapman & Hall/CRC, Dictionary of Natural Products on CD-ROM, Version 15:1, Copyright © 1982 – 2007 38 R.C BAKHUIZEN VAN DEN BRINK Jr, PH.D (1965), Flora of Java Vol II, page 544 - 549, 577 39 R.K.BRUMMITT (1992), Vascular Plant Families and Genera, Royal Botanic Gardens, KEW, page 481 40 Rajib K Mukherjee, Yoshinori Fujimoto and Katsumi Kakinuma, 1-(ωhydroxyfatyacyl) glycerols and two flavanols from Cinnamomum camphora, Phytochemistry, Vol 37 (6), page 1641 - 1643 (1994) 41 Sung Ok Lee, Sang zin Choi, Sang Un Choi, Shi Yong Ryu, and Kang Ro Lee, Phytochemical constituents of the aerial parts from Aster hispidus, Natural Product Sciences, Vol 10(6), page 335 - 340 (2004) Tài liệu tiếng Pháp 42 Raymond Benoist, in M.H Lecote (1935), Flore générale de l’Indochine, Paris Masson et Cie, E’diteurs, page 714 - 722 PHỤ LỤC BIÊN BẢN ĐỊNH TÊN CÂY KHOA HỌC CÂY XHLH CHỨNG NHẬN MÃ SỐ TIÊU BẢN PHỔ NMR CỦA CHẤT XH PHỔ NMR CỦA CHẤT XH ... đây: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, đặc điểm giải phẫu Xuân hoa hoa Nghiên cứu thành phần hoá học phận mặt đất Xuân hoa hoa Nghiên cứu sơ độc tính cấp thăm dò số tác dụng sinh học Xuân hoa hoa... Vi sinh vật XHLH : Xuân hoa hoa BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - - VŨ CƠNG THỌ GĨP PHẦN NGHIÊN CỨU THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY XUÂN... Thăm dò tác dụng kháng khuẩn invitro 81 CHƯƠNG BÀN LUẬN 88 4.1 Về kết nghiên cứu thực vật 88 4.2 Về nghiên cứu thành phần hoá học 88 4.3 Về thử số tác dụng sinh học