Nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt đan sâm tam thất

Cao chiết dược liệu hoặc các hoạt chất hóa dược được hòa tan/phân tán đều trong chất mang/hỗn hợp chất mang nóng chảy và nhỏ giọt xuống một pha lỏng làm lạnh để tạo viên hình cầu, trong

ĐAN SÂM - TAM THẤT

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ

HÀ NỘI - 2018

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN HÀ YÊN

MÃ SINH VIÊN: 1301487

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ

VIÊN HOÀN GIỌT ĐAN SÂM - TAM THẤTKHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

LỜI CẢM ƠN

Với tất cả sự kính trọng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến:

PGS TS Nguyễn Văn Hân người thầy trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình

cho tôi trong suốt thời gian thực hiện khóa luận

Tôi xin chân thành cảm ơn DS Trần Trọng Biên và TS Bùi Thị Thúy

Luyện đã luôn quan tâm, giúp đỡ tôi tháo gỡ những khó khăn trong quá trình

thực hiện khóa luận

Tiếp theo tôi xin chân thành cảm ơn em Nguyễn Thu Hà và em Hoàng Thị Quỳnh Dung lớp M1K69 đã trực tiếp giúp đỡ để tôi hoàn thành khóa luận

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, các thầy cô Trường Đại học Dược

Hà Nội đã dạy dỗ và chỉ bảo tận tình trong suốt năm năm học tập tại trường Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè- những người đã luôn ủng hộ và động viên tôi trong suốt thời gian qua

Do thời gian thực hiện đề tài có hạn nên khóa luận không thể tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong có được sự góp ý quý báu của các thầy cô và các bạn sinh viên

Hà Nội, tháng 5 năm 2018 Sinh viên

Nguyễn Hà Yên

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

DANH MỤC CÁC BẢNG

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Tổng quan về đan sâm 2

1.1.1 Cây đan sâm 2

1.1.2 Dược liệu đan sâm 3

1.1.3 Cao đan sâm 4

1.2 Tổng quan về tam thất 5

1.2.1 Cây tam thất 5

1.2.2 Dược liệu tam thất 6

1.4 Tổng quan về viên hoàn giọt 7

1.4.1 Khái niệm 7

1.4.2 Thành phần 8

1.4.3 Phương pháp bào chế 9

1.4.4 Ưu điểm 9

1.4.5 Một số nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt 10

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13

2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị 13

2.1.1 Nguyên liệu, dung môi, hóa chất 13

2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 14

2.2 Nội dung nghiên cứu 14

2.3 Phương pháp nghiên cứu 15

2.3.1 Phương pháp điều chế cao khô đan sâm - tam thất 15

2.3.2 Phương pháp bào chế viên hoàn giọt đan sâm - tam thất 16

2.3.3 Phương pháp đánh giá một số đặc tính của viên bào chế được 19

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24

3.1 Kết quả thẩm định phương pháp định lượng danshensu bằng TLC-scanning 24

3.1.1 Độ đặc hiệu 24

3.1.2 Độ thích hợp hệ thống 25

3.1.3 Khoảng tuyến tính 26

3.1.4 Độ lặp lại 27

3.1.5 Độ đúng 28

3.2 Điều chế cao đan sâm - tam thất 29

3.2.1 Kết quả lựa chọn số lần chiết đan sâm 29

3.2.2 Kết quả lựa chọn số lần chiết tam thất 30

3.3 Bào chế viên hoàn giọt 32

3.3.1 Kết quả khảo sát các thông số kỹ thuật 32

3.3.2 Kết quả khảo sát tỷ lệ chất mang trong công thức 35

3.4 Kiểm nghiệm viên 36

3.4.1 Các đặc tính lý hóa 36

3.4.2 Định tính 36

3.4.3 Định lượng 39

CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40

TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DC: Dịch chiết

DĐVN: Dƣợc điển Việt Nam

DĐTQ: Dƣợc điển Trung Quốc

EtOH: ethanol

EtOAc: ethyl acetat

FT - IR : quang phổ hồng ngoại (Fourier-transform infrared spectroscopy)

GACP: Thực hành tốt trồng trọt và thu hái dƣợc liệu (Good Agricultural and Collection Practices)

DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

2 Hình 1.2: Một số saponin chính đặc trưng cho rễ củ tam thất 6

3 Hình 2.1: Sơ đồ bào chế viên hoàn giọt đan sâm - tam thất 17

5 Hình 3.1 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu của phương pháp 24

7 Hình 3.3: Đường biểu diễn sự phụ thuộc của diện tích pic vào

8 Hình 3.4: Hình ảnh SKLM theo dõi quá trình chiết xuất đan sâm 30

9 Hình 3.5: Hình ảnh SKLM theo dõi quá trình chiết xuất tam thất 30

10 Hình 3.6: Sơ đồ quy trình điều chế cao khô đan sâm - tam thất 31

11 Hình 3.7: Viên hoàn giọt đan sâm - tam thất 36

12 Hình 3.8: Sắc ký đồ bản mỏng borneol chuẩn - mẫu thử 37

13 Hình 3.9: Sắc ký đồ bản mỏng notoginseng chuẩn - mẫu thử 37

14 Hình 3.10: Sắc ký đồ bản mỏng natri danshensu chuẩn - mẫu thử 38

DANH MỤC CÁC BẢNG

1 Bảng 2.1: Nguyên liệu, dung môi, hóa chất sử dụng trong đề tài 13

2 Bảng 2.2: Thành phần công thức sơ bộ của viên hoàn giọt đan sâm -

tam thất

16

4 Bảng 3.1: Kết quả đánh giá độ thích hợp hệ thống của phương pháp 25

6 Bảng 3.3: Kết quả đánh giá độ lặp lại của phương pháp với mẫu cao 27

7 Bảng 3.4: Kết quả đánh giá độ lặp lại của phương pháp với mẫu viên 27

8 Bảng 3.5: Kết quả đánh giá độ đúng của phương pháp với mẫu cao 28

9 Bảng 3.6: Kết quả đánh giá độ đúng của phương pháp với mẫu viên 29

11 Bảng 3.8: Kết quả khảo sát khoảng cách nhỏ giọt 32

12 Bảng 3.9: Kết quả khảo sát nhiệt độ pha làm lạnh 33

13 Bảng 3.10: Kết quả khảo sát chiều cao cột làm lạnh 33

14 Bảng 3.11: Kết quả khảo sát nhiệt độ pha đun chảy 34

15 Bảng 3.12: Kết quả đánh giá tỷ lệ PEG 6000 trong công thức 35

16 Bảng 3.13: Rf và màu sắc các vết chính trên sắc ký đồ borneol 37

17 Bảng 3.14: Rf và màu sắc các vết chính trên sắc ký đồ notoginseng 38

18 Bảng 3.15: Rf và màu sắc các vết chính trên sắc ký đồ danshensu 38

19 Bảng 3.16: Kết quả định lượng danshensu trong viên hoàn giọt 39

1

ĐẶT VẤN ĐỀ

Theo y học cổ truyền, đan sâm có tác dụng hoạt huyết, chống đông, giãn mạch, tam thất có tác dụng cầm máu, giãn mạch, bảo vệ tim Bài thuốc đan sâm, tam thất đã được sử dụng hơn 1000 năm qua, có tác dụng thông thoáng huyết quản động mạch, giảm cholesterol, chống tích tụ chất thải trong máu, làm chậm

sự tiến triển của quá trình xơ vữa động mạch vành, điều trị đau thắt ngực, loạn nhịp tim, thiếu máu cơ tim, sau nong vành hoặc phẫu thuật bắc cầu động mạch Viên hoàn giọt là một dạng bào chế đã được đưa vào Dược điển Trung Quốc Quá trình tạo viên nhỏ giọt tương tự quá trình bào chế hệ phân tán rắn theo phương pháp đun chảy Cao chiết dược liệu hoặc các hoạt chất hóa dược được hòa tan/phân tán đều trong chất mang/hỗn hợp chất mang nóng chảy và nhỏ giọt xuống một pha lỏng làm lạnh để tạo viên hình cầu, trong đó dược chất tồn tại ở trạng thái các phân tử độc lập, các tiểu phân vô định hình do đó độ hòa tan được cải thiện đáng kể Ngoài ra, viên hoàn giọt còn có các ưu điểm nổi bật như viên kích thước nhỏ nên tiện dùng, có thể đặt dưới lưỡi, đồng đều phân liều cao, thành phần công thức, phương pháp và thiết bị bào chế đơn giản, độ ổn định và sinh khả dụng cao

Nhằm tăng hiệu quả điều trị của các hoạt chất trong cao đan sâm - tam thất,

kỹ thuật bào chế viên hoàn giọt đã được triển khai, đề tài “Nghiên cứu bào chế

viên hoàn giọt đan sâm - tam thất” được thực hiện với các mục tiêu:

1 Điều chế được cao đan sâm - tam thất

2 Bước đầu bào chế và đánh giá được một số đặc tính của viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

2

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về đan sâm

1.1.1 Cây đan sâm

Tên khoa học là Salvia miltiorrhiza Bunge., thuộc Chi Salvia, Họ hoa môi Lamiaceae, Bộ Labiatae

Tên khác: huyết sâm, xích sâm, huyết căn [1], [11]

1.1.1.1 Mô tả thực vật

Đan sâm là loại cây cỏ sống lâu năm, cao 30-80 cm, đường kính 0,5-1,5 cm, màu đỏ nâu Lá kép mọc đối, gồm 3-5 lá chét, đặc biệt có thể có 7, mặt trên lá chét màu xanh, có các lông mềm màu trắng, mặt dưới màu xanh tro, cũng có lông nhưng dài hơn Cụm hoa mọc thành chùm ở đầu cành hay ở kẽ lá, chùm hoa dài 10-20 cm Hoa mọc vòng, mỗi vòng 3-10 hoa, thường là 5 hoa Hoa có tràng màu xanh tím nhạt, 2 môi, môi trên hình lưỡi liềm, môi dưới xé 3 thùy Hai nhị ở hai môi dưới, bầu có vòi dài lồi ra ở môi trên Quả nhỏ dài 3 mm, rộng 1,5 mm [1], [11]

- Diterpenoid tanshinon: 1 số chất được biết đến như tanshinon I, IIa, IIb, hydroxytanshinon IIa, methylen tanshinonat, tanshindiol-A…

- Tricyclic tanshinon quinon: 1 số hợp chất như miltiron, dehydromiltiron, 1R-hydroxymiltiron…

- Royleanon tanshinon: trong 9 hợp chất royleanon tanshinon, có 6 hợp chất isotanshinon và 1 số hợp chất khác như danshenxinkun A, danshenxikun B

3

- Các hợp chất liên quan đến sinh tổng hợp các tanshinon: là những chất liên quan đến sinh tổng hợp của các tashinon Nhóm này cũng bao gồm các chất nhân tạo Những hợp chất này thường là sản phẩm bị oxy hóa của nhóm quinon, chủ yếu là các lacton và anhydrit, những hợp chất không màu, cũng có thể phát huỳnh quang

 Thành phần tan trong nước:

Các thành phần tan trong nước của đan sâm chủ yếu là các acid phenolic Hơn 30 hợp chất acid phenolic đã được tách ra từ đan sâm bao gồm danshensu, acid salvianic A, B, C, acid protocatechuic, protocatechualdehyd, acid rosmarinic, carnosol và các dẫn xuất khác

 Các hợp chất khác: Là các hợp chất khó phân loại như β-sitosterol, balcalin, acid ursolic và daucosterol tìm thấy trong cao chiết ethanol, vitamin E

và tannin tìm thấy trong dịch chiết ethyl acetat [1], [18], [19], [25]

1.1.2 Dược liệu đan sâm

Dược liệu đan sâm (Radix Salviae miltiorrhiza) là rễ phơi khô hay sấy khô của cây đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge.) [8]

1.1.2.1 Đặc điểm dược liệu

Rễ ngắn, thô, đôi khi ở đầu rễ còn sót lại gốc của thân cây Rễ hình trụ dài, hơi cong, một số có nhánh, có rễ dạng tua nhỏ, dài 10-20 cm, đường kính 0,3-1

cm Bên ngoài màu nâu đỏ hoặc nâu nhạt, thô, có vân nhăn dọc Vỏ rễ già bong

ra, chủ yếu là màu tím thường bị vẩy Kết cấu cứng và dễ vỡ, giòn, không chắc,

có vết nứt, hơi phẳng hoặc đặc, có vỏ màu nâu sẫm và phần gỗ màu vàng xám hoặc nâu tía, cho thấy các bó mạch màu vàng nhạt, xuyên tâm Mùi nhẹ, vị đắng

và tương đối cay, đường kính 5-15 cm Mặt ngoài nâu nhạt, có nếp nhăn dọc, phần vỏ bám chặt vào gỗ không dễ bóc ra Chất chắc, mặt bẻ gãy tương đối phẳng, hơi có dạng chất sừng [8]

1.1.2.2 Tác dụng

Theo y học cổ truyền, đan sâm vị đắng, tính mát, quy kinh tâm, can; công năng hoạt huyết, thông kinh, giảm đau, thanh tâm lương huyết; chủ trị kinh

4

nguyệt không đều, kinh nguyệt bế tắc, hành kinh đau bụng, huyền tích hòn cục, tâm phiền mất ngủ, đau thắt ngực [8]

Theo y học hiện đại:

- Trên tim mạch, đan sâm làm giãn các động mạch và tĩnh mạch nhỏ, mao mạch, tăng cường tuần hoàn vi mạch, làm giảm mức độ nhồi máu cơ tim, có tác dụng bảo vệ trong chứng thiếu máu cơ tim cục bộ, bảo vệ tim, chống lại những rối loạn về chức năng và chuyển hóa gây ra bởi thiếu hụt oxy

- Ổn định màng hồng cầu, tăng sức đề kháng của hồng cầu, chống huyết khối

- Chống oxy hóa, loại các gốc tự do có hại cho cơ thể, ức chế sự oxy hóa LDL, ức chế tổng hợp cholesterol ở tế bào giúp hạ lipid máu, an thần, hỗ trợ điều trị chứng mất ngủ và hạ đường huyết

- Ngoài ra còn dùng chữa bệnh vàng da, rối loạn kinh nguyệt, chảy máu tử cung, vô kinh, đau kinh, có tác dụng an thai, chữa viêm đau khớp cấp, có tác

dụng an thần, giảm đau, ức chế sự phát triển của vi khuẩn: lao, E Coli, thương

hàn [1]

1.1.3 Cao đan sâm

Có 3 loại chính: cao chiết nước, cao chiết trong ethanol và cao chiết ethanol- nước Thành phần trong mỗi loại cao trên có sự khác nhau

Cao chiết trong nước: Thành phần chủ yếu là các thành phần tan trong nước như là danshensu, acid salvianolic A, acid salvianolic B, acid salvianolic C, acid rosmarinic, acid rosmarinic, acid protocatechuic, protocatechu aldehyde Theo nghiên cứu [13], phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được sử dụng

để xác định các hoạt chất có trong dịch chiết nước đan sâm Bốn hoạt chất có thể

là xác định là danshensu, acid protocatechuric, catechin và protocatechualdehyde, trong đó danshensu được tìm thấy chiếm ưu thế [13] Danshensu là một acid phenolic tự nhiên của dẫn xuất caffeic phân lập từ rễ đan sâm, có tác dụng chống oxy hóa [34], kích hoạt vi tuần hoàn máu, điều trị các bệnh về tim mạch [13], giãn mạch do ức chế dòng Ca2+ trong các tế bào cơ trơn mạch máu [21]

5

OH HO

HO

OH O

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của danshensu

- Cao chiết trong ethanol: Thành phần chủ yếu là các thành phần tan trong dầu như tanshinon I, IIa, IIb, methylen tanshinon, tanshindiol-A…

- Cao chiết ethanol- nước: Thành phần của cả 2 loại cao trên

Ngoài ra dựa vào thể chất của cao ta cũng có thể chia làm 2 loại:

- Cao khô: cao có hàm lượng nước rất nhỏ

- Cao đặc: dạng cao trong ethanol hoặc cao trong nước [18], [30]

1.2.1.2 Thành phần hóa học

Trong các bộ phận của cây như rễ, hoa, lá đều chứa các hợp chất như acid amin, hợp chất có nhân sterol, đường, flavonoid, polysaccharids, acid béo, các nguyên tố Fe, Ca và đặc biệt là 2 chất saponin: arasaponin A, arasaponin B Saponin trong tam thất ít độc Saponin dammaran chiếm khoảng 12,4% của củ

6

tam thất toàn phần và là thành phần có hoạt tính sinh học chính của củ tam thất [28] Tỷ lệ saponin toàn phần trong tam thất cao hơn nhiều loại saponin toàn phần trong nhân sâm và sâm Mỹ Các saponin gồm nhiều loại ginsenosid và notoginsenosid khác nhau Nhiều loại ginsenosid trong củ tam thất cũng thấy có

mặt trong các loại khác như nhân sâm (Panax ginseng), sâm Mỹ (Panax quinquefolium) [28], [31]

Hình 1.2: Một số saponin chính đặc trưng cho rễ củ tam thất

1.2.2 Dược liệu tam thất

Dược liệu tam thất là rễ củ đã phơi hay sấy khô của cây tam thất (Panax

notoginseng (Burk.) F H Chen) [8]

1.2.2.1 Đặc điểm dược liệu

Rễ củ có hình trụ hay hình chùy, dài 1,5 đến 4,0 cm, đường kính 1,2 đến 2,0

cm Mặt ngoài màu vàng xám nhạt, có khi được đánh bóng, trên mặt có những vết nhăn dọc rất nhỏ Trên một đầu có những bưới nhỏ là vết tích của rễ con, phần dưới có khi phân nhánh Trên đỉnh còn vết tích của thân cây Chất cứng rắn, khó bẻ, khó cắt Khi đập vỡ, phần gỗ và phần vỏ dễ tách rời nhau Mặt cắt ngang có lớp vỏ màu xám nhạt, mạch gỗ xếp thành tia tỏa tròn [8]

- Hóa ứ tiêu ung nhọt: Dùng khi huyết ứ hoặc ung nhọt sưng đau [7]

Theo y học hiện đại:

- Trên tim mạch, có tác dụng giảm cholesterol trong máu, giảm huyết áp, điều trị các bệnh tim mạch vành, nhồi máu cơ tim, đau thắt ngực [20], [33]

- Bảo vệ gan khỏi chấn thương [22]

- Phòng và hỗ trợ điều trị ung thư (máu, phổi, vòm họng, vú,…) [32]

1.4 Tổng quan về viên hoàn giọt

1.4.1 Khái niệm

Theo Dược điển Trung Quốc 2010, viên hoàn giọt là những chế phẩm được bào chế bằng cách nhỏ giọt hỗn hợp đun chảy đồng nhất của dược chất và tá dược thích hợp vào một chất lỏng làm lạnh không trộn lẫn, đông tụ lại tạo thành hoàn hình cầu hoặc gần cầu [29]

Có thể coi viên hoàn giọt là một dạng bào chế của thuốc dược liệu dưới dạng

hệ phân tán rắn Quá trình bào chế và bảo quản viên hoàn giọt phải đảm bảo các yêu cầu sau:

- Tùy theo thành phần dược chất, có thể sử dụng chất mang tan hoặc không tan trong nước

- Chất lỏng ngưng tụ phải không độc và không có tương tác với thuốc, hay dùng là dầu parafin, dầu thực vật, methyl silicon và nước

- Viên hoàn giọt phải có dạng hình cầu, nguyên vẹn, đồng nhất và không bị dính bết, không lẫn chất ngưng tụ trên bề mặt

- Tùy theo yêu cầu của dược chất, quá trình sử dụng hoặc bảo quản, viên hoàn giọt có thể được bao màng [29]

1.4.2.2 Tá dược

a Tá dược tạo cốt

Tá dược tạo cốt hay chất mang được dùng để bào chế viên hoàn nhỏ giọt phải có nhiệt độ nóng chảy không quá cao và cũng không thấp quá, ở trạng thái rắn ở nhiệt độ thường, dễ hòa tan hoặc phân tán cao dược liệu (hoạt chất) Tá dược tạo cốt phải chảy lỏng khi đun nóng, đông rắn khi làm lạnh

Có thể chia tá dược tạo cốt làm 2 loại là tá dược thân dầu và tá dược thân nước Tá dược thân dầu có thể sử dụng là acid béo, alcol béo, triglycerid bán tổng hợp Tuy nhiên các tá dược này khó giải phóng hoạt chất, khó trộn đều với dịch chiết dược liệu (thân nước) Hiện nay, các tá dược thân nước thường được

sử dụng để bào chế viên hoàn nhỏ giọt như: PEG 4000, PEG 6000 hoặc hỗn hợp; polyoxyethylen monosterat, poloxamer, polyether, các đường (erythritol, xylitol), gelatin, dẫn chất của ure Các tá dược thân nước dễ giải phóng hoạt chất, dễ tan trong dịch tiêu hóa, có thể bào chế viên đặt dưới lưỡi [4]

b Tá dược khác

Ngoài tá dược tạo cốt, có thể cần thêm các tá dược khác vào viên hoàn giọt:

- Tá dược hóa dẻo, điều chỉnh thể chất như dẫn xuất của cellulose (methyl cellulose, microcrystallin cellulose, sodium carboxylmethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose), gôm, tinh bột và dẫn xuất của nó (tinh bột biến tính, tinh bột hydroxypropyl, tinh bột carboxylmethyl)

- Tá dược làm tăng độ tan các thành phần hoạt chất như propylen glycol, glycerin, các chất diện hoạt (poloxamer 188, polyoxyl 35 castor oil, propylen glycol monocaprylat, cremophor EL, tween 80, )

- Tá dược tăng độ ổn định, chống oxy hóa, bảo quản đối với các hoạt chất không ổn định, nhạy cảm

9

- Tá dược điều hương, điều vị cần được sử dụng cho viên hoàn giọt để ngậm hoặc đặt dưới lưỡi như các loại đường natri saccarin, acid glycyrrhizic, acid citric

- Tá dược bao được sử dụng với nhiều mục đích khác nhau như bao bảo vệ, bao tan ở ruột, che giấu mùi vị [4]

1.4.3 Phương pháp bào chế

Dược chất được hòa tan hay phân tán vào một tá dược có thể chất rắn ở nhiệt độ đun chảy, sau đó nhỏ giọt và làm đông rắn thành viên hoàn Phương pháp nhỏ giọt chia làm ba giai đoạn chính:

- Chuẩn bị dịch thuốc trong chất mang nóng chảy: Đun chảy tá dược, sau

đó phối hợp với các thành phần trong công thức ở nhiệt độ thích hợp phụ thuộc vào nhiệt độ nóng chảy của tá dược Nghiền trộn để hòa tan hoặc phân tán các thành phần cho đồng nhất, thu được hỗn hợp chảy lỏng

- Nhỏ giọt: hỗn hợp lỏng được nhỏ qua đầu thiết bị hoặc dụng cụ có đường kính thích hợp (0,5 - 5 mm) vào dung môi đón viên có độ nhớt cao không trộn lẫn với hỗn hợp thuốc Nhiệt độ của dung môi đón viên thường dưới 10°C để đông rắn và vo tròn viên Với tá dược thân dầu, có thể dùng dung môi đón viên

là propylen glycol hoặc PEG; với tá dược thân nước, nên đón viên bằng dầu parafin, dầu methyl silicon, dầu thực vật

- Làm khô: Chọn viên (có thể dùng sàng), thấm bớt hoặc rửa loại dung môi,

để khô trong không khí

Hiện nay có các thiết bị tự động kết hợp cả 3 giai đoạn trên Quá trình nhào trộn được gia nhiệt, hút chân không để loại bọt khí Quá trình nhỏ giọt thường

sử dụng áp suất khí với nhiều đầu nhỏ giọt có thể đạt công suất 3000 - 5000 viên/giờ [4]

1.4.4 Ưu điểm

- Với bản chất hệ phân tán rắn, dược chất trong viên hoàn giọt phân bố trong tá dược ở mức độ phân tử, do đó cải thiện được độ tan và tốc độ hòa tan, giúp tăng sinh khả dụng [17] Trong khi các hệ phân tán rắn khác chỉ tạo ra dạng sản phẩm trung gian, cần đi dập viên hay đóng nang thì viên hoàn giọt bào chế

- Phương pháp bào chế đơn giản, nhanh chóng, hoạt động của thiết bị nhỏ giọt dễ dàng, đồng đều khối lượng, hàm lượng viên cao [12]

- Dễ bao phim cho mục đích khác, dễ đưa vào sản xuất công nghiệp

1.4.5 Một số nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt

Đến này đã có nhiều nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt để tăng sinh khả dụng, cải thiện độ tan của dược chất Một số dược chất đã được tiến hành nghiên cứu và bào chế dưới dạng viên hoàn giọt như: curcumin, berberin, lycopen cà chua, silymarin, cao đan sâm - tam thất

- Ming-feng Qiu và cộng sự (2005) đã nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt

silymarin để cải thiện độ hòa tan Viên hoàn giọt silymarin được bào chế với tỷ

lệ dược chất - chất mang PEG 6000 là 1:4, có dạng hình cầu, đường kính từ 3-4

mm, khối lượng trung bình 30 mg/viên và mỗi viên chứa 5 mg silymarin Tốc độ hòa tan của viên hoàn giọt silymarin được chứng minh là cao hơn đáng kể các chế phẩm viên nén bao phim Yiganling, viên nén đường và viên nang Yiganling [26]

- Chen San-bao và cộng sự (2008) đã nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến

việc hình thành viên hoàn giọt berberin clorid và thiết lập quy trình nhỏ giọt tối

ưu Hỗn hợp chất mang PEG 1000 và PEG 4000 với tỷ lệ 1:1, tỷ lệ dược chất - chất mang là 1:4, nhiệt độ pha đun chảy 95°C, chất lỏng làm lạnh là dimethyl silicon, nhiệt độ pha làm lạnh 5°C, đường kính đầu nhỏ giọt là 3 mm, tốc độ nhỏ giọt là 50 giọt/phút, khoảng cách nhỏ giọt 6 cm là điều kiện tối ưu [16]

11

- Năm 2011, Luo Yan-na và cộng sự đã xây dựng quy trình bào chế viên

hoàn giọt berberin clorid Sử dụng chất mang là PEG 6000, dầu parafin lỏng là

chất làm lạnh Nhiệt độ pha đun chảy 70°C, tốc độ nhỏ giọt 40 giọt/phút, khoảng cách nhỏ giọt 7 cm, nhiệt độ pha làm lạnh 2°C là điều kiện tối ưu Kết quả, nghiên cứu đã giảm thời gian nhỏ giọt, chất lượng chế phẩm tốt, phù hợp với các tiêu chuẩn chất lượng [24]

- Liandong Hu và cộng sự (2015) đã nghiên cứu cải thiện khả năng hòa tan

và sinh khả dụng của curcumin trong viên hoàn giọt, sử dụng tá dược tạo cốt là

PEG 4000, chất diện hoạt cremophor RH40 và poloxamer 188 Các thông số kỹ thuật ảnh hưởng tới đặc tính viên như nhiệt độ pha đun chảy, nhiệt độ pha làm lạnh, tốc độ nhỏ giọt, khoảng cách nhỏ giọt được tối ưu hóa Tương tác giữa curcumin và tá dược được đánh giá bằng các công cụ phổ nhiễu xạ tia X, phân tích nhiệt vi sai (DSC), quang phổ hồng ngoại (FT-IR) Kết quả tốc độ hòa tan

và sinh khả dụng trên chuột của viên hoàn giọt curcumin được cải thiện so với curcumin nguyên liệu và hỗn hợp vật lý Viên hoàn giọt ổn định trong vòng 3 tháng bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp [17]

- Chih-Wei Chang và cộng sự (2016) đã nghiên cứu bào chế viên hoàn giọt

để cải thiện sinh khả dụng của resveratrol ở chuột nhắt Dịch chiết vỏ nho đã

được đưa vào hệ thống phân tán rắn để cải thiện khả năng hòa tan, giải phóng và hấp thu đường uống của resveratrol Viên nhỏ giọt được bào chế qua phương pháp nóng chảy, công thức tối ưu bao gồm propylen glycol monocaprylat, poloxamer 188, dầu thầu dầu polyoxyl 35 và PEG 6000 Kết quả là các viên hoàn giọt đã tăng cường giải phóng resveratrol từ 23,3% ± 1,0% lên đến 67,8%

± 0,4% trong môi trường acid clohydric pH 1,2 Các thông số dược động học ở chuột cho thấy viên hoàn giọt làm tăng sinh khả dụng đường uống của resveratrol từ 0,9% ± 0,1% lên đến 10,5% ± 0,9%, tăng gấp 12 lần [15]

- Chih-Wei Chang và cộng sự (2016) tiếp tục nghiên cứu tăng độ tan, độ

hòa tan, sự hấp thu lycopen bằng viên hoàn giọt Viên hoàn giọt được bào chế

bằng phương pháp nhỏ giọt sử dụng chất mang PEG 6000, cremophor EL và tween 80 Các đặc tính hóa lý của viên và tương tác giữa các thành phần trong

12

công thức được kiểm tra bằng phương pháp thử nghiệm độ rã, kính hiển vi điện

tử quét, máy quét hồng ngoại vi sai và quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier

Thí nghiệm in vivo được tiến hành để xác minh tính hữu ích của các công thức

đã được phát triển Công thức viên nhỏ giọt tối ưu làm tăng độ hòa tan và sự giải phóng của lycopen, đồng thời lycopen trong viên tồn tại trong trạng thái vô định hình và sinh khả dụng tăng 6 lần [14]

Viên hoàn giọt “Thiên sứ hộ tâm đan”, với thành phần cao tam thất, cao đan sâm, borneol là một sản phẩm được bán rộng rãi trên thị trường, do tập đoàn dược phẩm Tasly (Trung Quốc) sản xuất Thuốc có tác dụng điều trị và ngăn ngừa các chứng rối loạn nhịp tim, đau thắt ngực, thừa cholesterol, giúp thông thoáng huyết quản, làm chậm sự tiến triển của quá trình xơ vữa động mạch vành Sản phẩm này rất được quan tâm và ưa dùng Vài năm gần đây, dạng bào chế hoàn giọt nói chung và viên hoàn giọt chứa đan sâm - tam tất nói riêng rất được các doanh nghiệp quan tâm, nhưng chưa có nghiên cứu nào được thực hiện một cách đầy đủ Năm 2017, nhóm nghiên cứu của PGS.TS Nguyễn Thanh Hải, khoa y dược - Đại học Quốc gia Hà Nội đã thực hiện đề tài “Nghiên cứu phát triển (theo hướng GACP) và bào chế một số sản phẩm từ cây Ô đầu, Ý dĩ, Tam Thất, Đan sâm ở vùng Tây Bắc” thuộc Chương trình Khoa học và công nghệ phục vụ phát triển bền vững vùng Tây Bắc, có đề cập đến chế phẩm hoàn giọt chứa đan sâm - tam thất

Mục đích của nghiên cứu này là điều chế cao đan sâm - tam thất, bào chế viên hoàn giọt từ cao đan sâm - tam thất và đánh giá một số đặc tính cơ bản của viên

13

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu, dung môi, hóa chất

Bảng 2.1: Nguyên liệu, dung môi, hóa chất sử dụng trong nghiên cứu

TT Tên nguyên liệu Nguồn gốc

Tiêu chuẩn chất lượng

Chất chuẩn

1 Natri danshensu

Hãng Botanic - Trung Quốc

16 Acid sulfuric đặc Trung Quốc Tinh khiết hóa học

17 Dung dịch amoniac Trung Quốc Tinh khiết hóa học

14

Dung môi

2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu

- Máy nhỏ giọt tự chế với các thông số: đường kính trong của đầu nhỏ giọt 2,0 mm, đường kính ngoài của đầu nhỏ giọt là 3,0 mm, dung tích bình chứa dịch thuốc 20 mL, điều chỉnh tốc độ nhỏ giọt bằng kim, điều nhiệt bằng thiết bị điều nhiệt WiseTherm (Hàn Quốc)

- Bộ dụng cụ chiết xuất có gia nhiệt

- Cân kỹ thuật điện tử Sartorius BO 2015 (Đức)

- Cân phân tích Sartorius TE214S (Đức)

- Hệ thống cô quay chân không Buchi (Thụy Sĩ)

- Hệ thống phun sấy Buchi B191 (Thụy Sĩ)

- Hệ thống siêu âm Wisexclean, daihan Labtech Co Ltd (Hàn Quốc)

- Hệ thống sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao gồm: Camag TLC Scanner 4, Camag Linomat 5, Camag ADC 2 Automatic developing chamber (Thụy Sĩ)

- Bản mỏng Silica gel 60 GF254 (MERCK)

- Bình thủy tinh chạy sắc ký lớp mỏng

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Điều chế cao đan sâm - tam thất

Chiết xuất đan sâm, tam thất bằng phương pháp ngâm nóng, phối hợp dịch chiết, xử lý sơ bộ dịch chiết, rồi tiến hành phun sấy để thu được cao khô

- Bào chế viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

Nghiên cứu ảnh hưởng của một số thông số kỹ thuật như khoảng cách nhỏ giọt, chiều cao cột làm lạnh, nhiệt độ pha làm lạnh, nhiệt độ pha đun chảy đến đặc tính của viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

Nghiên cứu ảnh hưởng của chất mang đến đặc tính của viên hoàn giọt, lựa chọn công thức tối ưu

- Đánh giá 1 số đặc tính của viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

15

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp điều chế cao khô đan sâm - tam thất

2.3.1.1 Chiết xuất

Chiết xuất đan sâm, tam thất bằng phương pháp ngâm nóng với những ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, tiết kiệm thời gian chiết xuất (2 giờ) Thông qua khảo sát các nghiên cứu về bài thuốc đan sâm, tam thất, lựa chọn tỷ lệ nguyên liệu đan sâm - tam thất ban đầu là 5:1 Quá trình chiết xuất được tiến hành như sau: Cân 1 kg đan sâm, rửa sạch, xay nhỏ tiến hành chiết xuất dược liệu bằng phương pháp ngâm nóng, lần 1 chiết với 10 L dung môi, mỗi lần sau chiết với 5

L dung môi Cân 200 g củ tam thất, rửa sạch, xay nhỏ tiến hành chiết xuất dược liệu bằng phương pháp ngâm nóng, lần 1 chiết với 1,2 L dung môi, mỗi lần sau chiết với 600 mL dung môi Điều kiện chiết xuất cố định như sau:

- Dung môi: nước cất

- Thời gian chiết: 2 giờ/lần

- Nhiệt độ chiết xuất: 60ºC

Số lần chiết là thông số quan trọng trong quá trình chiết xuất vì ảnh hưởng

đến hiệu suất chiết, thời gian và năng lượng sử dụng trong quá trình chiết xuất Nhằm xác định số lần chiết thích hợp cho đan sâm, tam thất, tiến hành chiết xuất mỗi dược liệu theo điều kiện mô tả trên, kiểm tra các phân đoạn dịch chiết bằng sắc ký lớp mỏng

Sau khi lựa chọn được số lần chiết cho mỗi dược liệu, tiến hành chiết xuất thu lấy dịch chiết, gộp dịch chiết đan sâm và tam thất, rồi lọc trên phễu lọc Buchner, cô dưới áp suất giảm đến khi còn 2 L dịch

2.3.1.2 Xử lý dịch chiết

Viên hoàn giọt có kích thước, khối lượng nhỏ nên yêu cầu cao về hàm lượng hoạt chất trong cao dược liệu sử dụng, đòi hỏi phải có phương pháp tinh chế hiệu quả để làm giàu hoạt chất Có nhiều phương pháp tinh chế dịch chiết, trong

đó loại tạp chất trong cao chiết nước bằng ethanol là một phương pháp đơn giản, hiệu quả và được áp dụng rộng rãi đối với nhiều chuyên luận cao dược liệu trong Dược điển Trung Quốc, cũng như trong nhiều nghiên cứu như chiết xuất và tinh

2.3.2 Phương pháp bào chế viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

Bào chế viên hoàn giọt bằng phương pháp đun chảy nhỏ giọt Viên hoàn giọt được bào chế trên cơ sở nghiên cứu ảnh hưởng của tá dược tạo cốt và một số thông số trong quá trình bào chế

2.3.2.1 Quy trình bào chế viên hoàn giọt đan sâm - tam thất

Thông qua khảo sát một số nghiên cứu về viên hoàn giọt, công thức sơ bộ mỗi viên gồm: cao đan sâm - tam thất, borneol và chất mang PEG 6000

Bảng 2.2: Thành phần công thức sơ bộ của viên hoàn giọt đan sâm – tam thất

TT Thành phần Tỷ lệ Vai trò

tăng hấp thu thuốc

tìm tỷ lệ thích hợp Chất mang

17

 Mô tả quy trình bào chế:

- Đun chảy: chất mang PEG 6000 được đun chảy hoàn toàn bằng bếp cách thủy ở nhiệt độ 70°C Cao dược liệu, borneol (đã nghiền nhỏ) được thêm vào hỗn hợp chảy lỏng, khuấy trộn trong 5 phút thu được hỗn hợp đồng nhất

- Nhỏ giọt: hỗn hợp đồng nhất này được nhỏ giọt qua đầu nhỏ giọt (đường kính trong 2,0 mm, đường kính ngoài 3,0 mm) xuống dầu parafin lạnh (làm lạnh bằng nước đá) và hóa rắn dần tạo thành viên hoàn giọt

- Làm khô: viên được thấm dầu và để khô tự nhiên Viên được bảo quản trong bình hút ẩm, tránh ánh sáng

Nhiệt độ pha đun chảy

Nguyên liệu Các bước tiến hành Thông số kiểm soát