NGHIÊN cứu môi TRƯỜNG NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN THỦY TIÊN TRẮNG (dendrobium farmeri) và THỜI GIAN HUẤN LUYỆN ở GIAI đoạn vườn ươm

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG -o0o - KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU MƠI TRƯỜNG NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN THỦY TIÊN TRẮNG (Dendrobium farmeri) VÀ THỜI GIAN HUẤN LUYỆN Ở GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM Người hướng dẫn: TS PHAN TƯỜNG LỘC Người thực hiện: NGUYỄN THỊ THU TRINH Lớp: 1406030 Khoá: 18 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2018 LỜI CẢM ƠN Lời nói đầu tiên, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Phan Tường Lộc tận tình hướng dẫn bảo, giải đáp thắc mắc hỗ trợ cho tơi suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin phép tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc Công ty TNHH Nông Vinh tạo điều kiện cho tơi thực khóa luận Đồng thời xin gửi lời cám ơn đến quý cô chú, anh chị công tác công ty giúp đỡ thời gian thực khóa luận Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu nhà trường, quý thầy cô môn Công nghệ sinh học truyền đạt kiến thức bổ ích lý thuyết lẫn thực tiễn, tạo tảng cho kiến thức suốt thời gian học tập trường Đại học Tôn Đức Thắng Xin cảm ơn tập thể lớp 14060301 bạn bè, anh chị động viên, giúp đỡ q trình học tập thực khóa luận Cuối cùng, xin cảm ơn ba mẹ cho sắc vóc này, ni dưỡng dạy dỗ thành người, cho niềm tin nghị lực để cố gắng trước thử thách, khó khăn TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2019 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thu Trinh LỜI CAM ĐOAN CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học TS PHAN TƯỜNG LỘC Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngoài ra, khóa luận sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung khóa luận Trường đại học Tôn Đức Thắng không liên quan đến vi phạm tác quyền, quyền gây q trình thực (nếu có) TP Hồ Chí Minh, ngày 23 tháng 01 năm 2019 Nguyễn Thị Thu Trinh TĨM TẮT NGUYỄN THỊ THU TRINH, Đại học Tơn Đức Thắng, tháng 01/2019 “ NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN THỦY TIÊN TRẮNG (Dendrobium farmeri) VÀ THỜI GIAN HUẤN LUYỆN Ở GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM“ Giảng viên hướng dẫn TS PHAN TƯỜNG LỘC Đề tài thực công ty Trách Nhiệm Hữu Hạn Nông Vinh TP HCM Nội dung nghiên cứu gồm thí nghiệm ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng (BA kết hợp Kinetine môi trường MS NAA kết hợp than hoạt tính mơi trường MS); ảnh hưởng môi trường Hyponex liquid 6-10-5 đến sinh trưởng phát triển lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) nuôi cấy in vitro; ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến sinh trưởng phát triển lan Thủy tiên trắng giai đoạn vườn ươm Các kết đạt được: Môi trường MS kết hợp với BA nồng độ 0,5 mg/L Kinetine nồng độ 0,5 mg/L tốt đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng in vitro với kết quả: số chồi 28,72; số 26,89 chiều cao 2,03 cm Mơi trường Hyponex có nồng độ 0,6 ml/L thích hợp cho sinh trưởng phát triển chồi lan Thủy tiên trắng in vitro với kết quả: chiều cao chồi 3,63 cm, số 5,69, số rễ 5,69, chiều dài rễ 2,62 cm Môi trường MS kết hợp với NAA nồng độ 0,5 mg/L than hoạt tính 0,5 g/L tốt đến khả tạo rễ chồi lan Thủy tiên trắng in vitro với kết quả: 7,33 rễ chiều dài rễ 2,90 cm Ở giai đoạn vườn ươm, với thời gian huấn luyện 15 ngày cho tỷ lệ sống cao phát triển tốt MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii TÓM TẮT .iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC BẢNG .ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ ix CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu .2 1.3 Ý nghĩa CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược phong lan 2.1.1 Giới thiệu chung họ lan .3 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.2 Giới thiệu lan Thủy tiên trắng 2.2.1 Phân bố 2.2.2 Đặc điểm hình thái, sinh thái 2.3 Kỹ thuật nhân giống in vitro 2.3.1 Vài nét nhân giống in vitro 2.3.2 Các kỹ thuật nhân giống in vitro 2.3.3 Quy trình nhân giống in vitro 2.3.4 Ưu nhân giống in vitro .9 2.3.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến qui trình nhân giống in vitro 2.4 Giới thiệu phân bón Hyponex liquid 6-10-5 .18 2.5 Các nghiên cứu trước liên quan đến đề tài 19 2.5.1 Các nghiên cứu nước 19 2.5.2 Các nghiên cứu nước 20 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 3.1 Địa điểm thời gian tiến hành thí nghiệm 22 3.2 Nội dung nghiên cứu 22 3.3 Vật liệu nghiên cứu .22 3.3.1 Nguyên liệu nuôi cấy 22 3.3.2 Trang thiết bị dụng cụ .22 3.3.4 Môi trường nuôi cấy 22 3.3.5 Điều kiện nuôi cấy .23 3.4 Phương pháp thí nghiệm .23 3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine .23 đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) 23 3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex .24 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) .25 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến .25 khả sống in vitro lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) giai đoạn vườn ươm 25 3.5 Xử lý số liệu .26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine .27 đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) 27 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex .31 4.3.i Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến 35 khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) .35 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống in vitro lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) giai đoạn vườn ươm 39 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO .44 PHỤ LỤC .48 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BA : 6-benzyladenine NAA : Naphthaleneacetic Kinetin : 6-furfurylaminopurin MS : Murashige-Skoog ĐC : Đối chứng Cs : Cộng TNHH : Trách nhiệm hữu hạn NT : Nghiệm thức DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Một số lồi lan Thủy tiên .3 Hình 2.2 Cấu tạo hoa lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) Hình 2.3 Cơng thức cấu tạo BA 15 Hình 2.4 Cơng thức cấu tạo Kinetine 16 Hình 2.5 Cơng thức cấu tạo NAA 16 Hình 2.6 Phân bón Hyponex liquid 6-10-5 17 Hình 4.1 Ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày ni cấy 29 Hình 4.2 Ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex 6-10-5 đến số số rễ chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày ni cấy 33 Hình 4.3 Ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày 37 Hình 4.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến chiều cao chiều dài rễ in vitro lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) giai đoạn vườn ươm 39 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các chất dùng khử trùng với nồng độ thời gian khuyến cáo Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) 22 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex 6-10-5 đến sinh trưởng chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) 23 Bảng 3.3 Ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) 24 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến khả sống in vitro lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) giai đoạn vườn ươm 25 Bảng 4.1 Ảnh hưởng ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 30 ngày nuôi cấy 26 Bảng 4.2 Ảnh hưởng ảnh hưởng nồng độ BA Kinetine đến khả nhân chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày nuôi cấy 27 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex 6-10-5 đến sinh trưởng chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 30 ngày nuôi cấy .30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nồng độ phân bón Hyponex 6-10-5 đến sinh trưởng chồi lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày nuôi cấy .31 Bảng 4.5 Ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 30 ngày nuôi cấy 34 Bảng 4.6 Ảnh hưởng NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ lan Thủy tiên trắng (Dendrobium farmeri) sau 60 ngày nuôi cấy 35 56 A 2.5667 NT4 B 2.1000 NT5 1.9467 NT1 B 1.8667 NT3 C 1.4000 NT6 D 1.0100 NT2 B B B Dependent Variable: CHIEUDAIRE Sum of Source DF Squares Model 2.00833333 Error 10 17 7.609230 Source DF 43.82 F Root MSE CHIEUDAIRE Mean 0.080911 Anova SS 1.063333 Mean Square F Value Pr > F LLL 0.01453333 0.00726667 1.11 0.3670 NT 1.99380000 0.39876000 60.91 F 88.58 F 0.03177222 1.50 0.2688 NT 13.04757778 2.60951556 123.41 F 7.979030 Root MSE Y Mean 0.317432 Source DF Anova SS K 0.18130000 NT 10.58711667 3.978333 Mean Square F Value Pr > F 0.09065000 2.11742333 0.90 0.4372 21.01 F 0.05272333 9.79740000 Coeff Var 8.854073 DF 25.12 F LLL 0.15210000 0.07605000 1.44 0.2816 NT 9.11806667 1.82361333 34.59 F 0.80259127 137.85 F LLL 0.01151111 0.00575556 0.99 0.4057 NT 5.60662778 1.12132556 192.59 F 62 LLL 0.22423333 0.11211667 NT 22.14091667 4.42818333 3.20 0.0843 126.41 F 0.08499365 6.97 0.0034 0.01219556 0.71691111 Coeff Var 7.501143 Root MSE CHIEUDAIRE Mean 0.110433 1.472222 63 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F LLL 0.05884444 0.02942222 2.41 0.1396 NT 0.53611111 0.10722222 8.79 0.0020 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 10 0.012196 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.2009 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean 1.74000 N NT NT5 A B A 1.58000 NT6 1.53333 NT3 1.42000 NT4 1.36667 NT2 B B C B C B C C D C D D KẾT QUẢ SAU 60 NGÀY NUÔI CẤY Dependent Variable: SORE 1.19333 NT1 64 Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 45.64783889 6.52111984 91.27 F 0.22823889 9.03827222 3.19 0.0846 126.51 F LLL 0.12154444 0.06077222 4.41 0.0424 NT 1.46037778 0.29207556 21.18 F 0.403733 Anova SS 5.606667 Mean Square F Value Pr > F LLL 0.16933333 0.08466667 0.52 0.6136 NT 6.27600000 1.56900000 9.63 0.0038 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.007333 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.1612 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean 6.5000 N NT NT4 67 A B A 6.0667 NT3 5.7000 NT2 5.0000 NT1 B B C C D C D D 4.7667 NT5 Dependent Variable: SOLA Sum of Source DF Squares Model 22.80000000 3.80000000 Error 4.53333333 0.56666667 Corrected Total 14 R-Square 0.834146 Source 6.71 0.0085 27.33333333 Coeff Var Root MSE 17.37168 DF Mean Square F Value Pr > F SOLA Mean 0.752773 Anova SS LLL 0.13333333 NT 22.66666667 4.333333 Mean Square F Value Pr > F 0.06666667 5.66666667 0.12 0.8905 10.00 0.0033 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 0.007333 2.30600 Least Significant Difference 0.1612 68 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean 6.0000 N NT NT4 A B A 5.3333 NT2 4.3333 NT3 3.3333 NT1 B B C C D C D D 2.6667 NT5 Dependent Variable: SORE Sum of Source DF Squares Model 10.00000000 Error 5.60000000 Corrected Total 14 R-Square 0.641026 Source 1.66666667 2.38 0.1274 0.70000000 15.60000000 Coeff Var 11.30622 DF Mean Square F Value Pr > F Root MSE SORE Mean 0.836660 Anova SS 7.400000 Mean Square F Value Pr > F LLL 0.40000000 0.20000000 0.29 0.7588 NT 9.60000000 2.40000000 3.43 0.0650 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 69 Error Mean Square 0.007333 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.1612 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean 8.6667 N NT NT4 A B A 8.0000 NT3 B B 7.0000 NT2 6.6667 NT1 6.6667 NT5 B B B B Dependent Variable: CHIEUDAIRE Sum of Source DF Squares Model 37.56400000 Error 1.08533333 Corrected Total 14 R-Square 8.969064 Source DF 6.26066667 46.15 F Root MSE CHIEUDAIRE Mean 0.368330 Anova SS 4.106667 Mean Square F Value Pr > F LLL 0.26133333 0.13066667 0.96 0.4219 NT 37.30266667 9.32566667 68.74