Khảo sát đặc điểm hình thái giải phẫu và định tính hoạt chất coumarin trong cây cỏ mực (eclipta prostrata l )

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii TÓM TẮT .iii DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO i DANH SÁCH BẢNG ii DANH SÁCH HÌNH iii DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT iv CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước có hệ thực vật chúng đa dạng, nhiều lồi cỏ mọc hoang dại lại có giá trị cao, nguồn dược liệu quý trị bệnh Trong phải nói đến cỏ mực Cỏ mực hay gọi cỏ nhọ nồi, lồi mọc hoang dại tìm gặp khắp nơi tự nhiên, vườn nhà,… Đây thuốc nam sử dụng thường xuyên thuốc dân gian để chữa bệnh chảy máu, đau răng, đau bụng, cảm, ho… Ngày nay, với phát triển khoa học, người nghiên cứu khả bảo vệ gan trừ nọc độc rắn từ cỏ mực Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu Cỏ mực nước như: Ân Độ, Trung Quốc, Pakistan, Thái Lan, Banglades, Còn Việt Nam có cơng trình nghiên cứu Từ sở trên, đề tài “Khảo sát đặc điểm hình thái giải phẫu định tính hoạt chất comarin cỏ mực” thực 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Tìm hiểu đặc điểm hình thái, giải phẫu quan dinh dưỡng cỏ mực (Eclipta prostrata L.) Đồng thời xác định phận dùng có diện nhóm hoạt chất coumarin góp phần hồn thiện việc tìm hiểu đặc điểm hình thái giải phẫu cỏ mực bổ sung nguồn dược liệu có nhóm hoạt chất coumarin tự nhiên CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY CỎ MỰC 2.1.1 Vị trí phân loại Cỏ mực hay có tên gọi khác: Cỏ nhọ nồi Cỏ mực, hạn liên thảo, lệ trường, phong trường, mạy mỏ lắc nà (Tày), nhả cha chát (Thái) Tên khoa học: Eclipta prostrata (L.) hay [Eclipta alba (L.) Hassk.] Theo DĐVN IV (2009), có vị trí phân loại sau: Loài: E.alba Chi: Eclipta Họ: Họ Cúc Asteraceae Bộ: Bộ Cúc (Asterales) Lớp: Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Ngành: Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Giới: Plantae 2.1.2 Phân bố Theo Phạm Hoàng Hộ (2000), cỏ mực mọc tập trung hầu vùng Nam Đông Nam châu Á Ở Việt Nam, Cỏ mực phân bố rộng rãi khắp tỉnh vùng đồng bằng, trung du miền núi đến độ cao 1500 m (ở tỉnh phía Nam) Cây ưa ẩm, ưa sáng chịu bóng râm, thường mọc lẫn với loại cỏ thấp, đất ẩm bãi sông, ruộng trồng hoa màu, ven đường đi, bãi hoang quanh làng Ra hoa nhiều hàng năm, tái sinh tự nhiên chủ yếu hạt Bên cạnh đó, với khả mọc chồi gốc phân cành nhiều, dễ dàng phát triển, tạo thành đám bò lan mặt đất Ngoài việc thu hái từ nguồn hoang dại, trước cỏ mực trồng lẻ tẻ với quy mơ gia đình Gần đây, bắt đầu trồng phổ biến số nơi 2.2 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA CỎ MỰC 2.2.1 Y học dân gian 2.2.1.1 Y học dân gian Việt Nam Cỏ mực thường dùng làm thuốc bổ máu, cầm máu bên bên ngoài, chữa ho máu, rong kinh, băng huyết, chảy máu cam, trĩ máu, nôn máu, đái máu, bị thương chảy máu Còn dùng chữa ban sởi, ho, hen, viêm họng, bỏng, lao phổi, di mộng tinh, bệnh nấm da, làm thuốc mọc tóc (sắc uống ngâm vào dầu dừa mà bơi) nhuộm tóc Ngồi ra, Cỏ mực dùng làm thuốc sát trùng chữa vết thương vết loét gia súc Bài thuốc Cỏ mực: Thuốc cầm máu: Mỗi ngày 12 g Cỏ mực khô 30-50 g tươi, sắc uống Dùng riêng phối hợp với ngó sen, trắc bá, bách hợp Chữa lị: Cỏ mực 10 g, rau sam 10 g, cỏ sữa to 10 g, nhót 10 g, búp ổi 10 g Dạng thuốc bột, thuốc hoàn, ngày uống 2-3 lần, lần 10 g Chữa ỉa chảy (do nhiểm khuẩn đường tiêu hóa): Cỏ mực nắm, mã đề tươi 1-2 nắm, rau má nắm Sắc đặc chia nhiều lần uống ngày Chữa sốt xuất huyết: Cỏ mực tươi 30 g, rau má tươi 30 g, mã đề tươi (hoặc cối xay, rễ cỏ tranh) 20 g Vắt lấy nước uống sắc uống Bài thuốc dùng để phòng bệnh Chữa chứng đau sưng trẻ em người lớn: Cỏ mực, rau diếp cá, xương sông, huyết dụ, khế, dưa chuột, nhài, cải trời giã nát, thêm nước, vắt lấy nước uống, bã dùng xoa, đắp chỗ sưng Chữa trẻ em tưa lưỡi: Cỏ mực tươi g, hẹ g Hai vị rửa sạch, giã nhỏ, vắt lấy nước cốt, hòa mật ong, trộn đều, chấm thuốc vào lưỡi, cách lần Ho viêm họng viêm amidan cấp: Cỏ mực tươi 50 g, sắc uống ngày thang, ngày Chữa thấp khớp: Cỏ mực 16 g, rễ cỏ xước 16 g, hy thiêm 16 g, thổ phục linh 20 g, ngải cứu 12 g, thương nhĩ tử 12 g Sao vàng, sắc đặc, ngày uống thang, 7-10 ngày liền Chữa di mộng tinh: Cỏ mực sấy khô tán nhỏ, uống lần g với nước cơm, hay sắc 30 g uống Chữa chảy máu kéo dài nguyên nhân bệnh: Cỏ mực, đảng sâm, ô tặc cốt, vị 16 g; hoàng kỳ, bạch truật, địa du, ngải cứu, trắc bá diệp, vị 12 g; đương quy g, cam thảo g Sắc uống ngày thang Chữa đáy máu viêm nhiễm mãn tính đường tiết niệu: Cỏ mực 16 g; hoàng bá, thục địa, quy bản, rễ cỏ tranh, vị 12 g; tri mẫu, chi tử đen, vị g Sắc uống ngày thang Chữa rong kinh: Cỏ mực 20 g, đảng sâm, ý dĩ, hoài sơn, vị 16 g, huyết dụ g bạch truật 12 g Sắc uống ngày thang Chữa phong tê thấp: Cỏ mực 100 g, vòi voi 300 g, củ bồ bồ 150 g, rễ nhàu 100 g Các vị tán nhỏ làm hoàn to hạt tiêu Liều uống 20 hoàn, ngày lần Chữa lao phổi: Cỏ mực 12 g, đảng sâm 16 g, bạch truật, tử uyển, vị 12 g; phục linh, bách hợp, vị g; cam thảo, ngũ vị tử, bối mẫu, vị g Sắc uống ngày thang Chữa viêm gan virus thể mạn tính tiến triển: Cỏ mực 12 g, mẫu lệ 16 g, kê huyết đằng, sinh địa, vị 12 g, quy 10 g, uất kim, tam lăng, nga truật, xác, vị g Sắc uống ngày thang Chữa đáy máu kéo dài bệnh toàn thân: Cỏ mực, đảng sâm, vị 16 g; hoài sơn, bạch truật, thạch hộc, ngẫu tiết đen, thục địa, trắc bá diệp, ngải cứu, vị 12 g Sắc uống ngày thang Chữa bệnh bại liệt trẻ em giai đoạn khởi phát: Cỏ mực, cỏ tranh, bồ công anh, cam thảo đất, liên kiều, mã đề, vị 10 g; ngân hoa g Sắc uống ngày thang 2.2.1.2 Y học dân gian giới Cỏ mực dùng phổ biến dân gian Ân Độ, Pakistan, Trung Hoa quốc gia vùng Nam Á Theo Karthikumar, S., Vigneswari, K and Jegatheesan, K.(2007): Cỏ mực dùng làm thuốc bổ chữa ứ tắt bệnh phì đại gan lách, chữa số bệnh da Dịch ép dùng phối hợp với số chất thơm để chữa vàng da xuất tiết Dịch ép dùng với mật ong để chữa sổ mũi trẻ nhỏ Một chế phẩm làm từ dịch ép Cỏ mực đun nóng với dầu dừa dầu vừng dùng để bơi đầu làm tóc mọc dầy đen Cây tươi có tác dụng giảm đau thấm hút Nó trộn với gơm để chữa đau đắp với dầu để trị nhức đầu Nó đắp với dầu vừng để trị phù voi Cây cỏ mực dùng làm chất nhuộm để xăm hình Lá cỏ mực dùng làm rau ăn Java, làm gia vị số vùng Ân Độ Cỏ mực gọi Bhangra, bhringaraja, dùng dân gian nhiều dạng Cây tươi dùng làm thuốc bổ chung, giúp giảm sưng gan lách, trị bệnh da, trị suyễn, dùng trị bệnh gan liều nước sắc sử dụng thìa cà phê hai lần ngày; giã nát, trộn với dầu mè dùng để đắp vào nơi hạch sưng, trị bệnh da Lá dùng trị ho, nhức đầu, hói tóc, gan lách sưng phù, vàng da Eclipta prostrata, hay Mò hàn lian: Lá cho giúp mọc tóc Tồn làm chất chát cầm máu, trị đau mắt, ho máu, tiểu máu, đau lưng, sưng gan, vàng da Lá tươi cho bảo vệ chân tay nông gia chống lại sưng nhiễm độc làm việc đồng-áng, tác dụng theo Viện Y học Chiang-su thiophene Đông Y cổ truyền gọi cỏ mực Hạn liên thảo (Han lian cao), hay Mặc hạn liên (Nhật dược gọi Kanrensò) dược liệu toàn thu hái vào đầu mùa thu Cây mọc hoang vùng Giang Tây, Triết Giang, Quảng Đơng, cho có vị ngọt/chua, tính mát; tác dụng vào kinh mạch thuộc Can, Thận Han lian cao có tác dụng: Dưỡng Bổ Âm-Can Âm-Thận Được dùng trị chứng suy Âm Can Âm Thận với triệu chứng choáng váng, mắt mờ, chóng mặt, tóc bạc sớm; thường dùng phối hợp với Nữ trinh tử Lương huyết cầm máu (Chỉ huyết): trị chứng Âm suy với triệu chứng chảy máu nhiệt huyết ói máu, ho máu, chảy máu cam, phân có máu, chảy máu tử cung tiểu máu Để trị tiểu máu cỏ mực dùng chung với Mã đề (Xa tiền thảo = Che qian cao (Plantaginis)) rễ cỏ tranh (Bạch mao = Bai mao gen (Rhizoma Imperatae)); để trị phân có máu, dùng chung với Địa du = di yu (Radix Sanguisorbae); để trị ói máu, dùng chung với Trắc bách diệp xấy khô = Ce bai ye (Cacumen Biotae) 2.2.2 Y học hóa sinh học đại Theo nghiên cứu tác giả Trần Vũ Thiên (2008): Cỏ mực có tác dụng cầm máu làm tăng tổng lượng prothrombin máu, giống chế tác dụng vitamin K Hoạt tính cầm máu g bột cỏ mực khơ tương đương 1,33 mg vitamin K Khi dùng dài ngày, có tác dụng chống chống phản vệ, kháng histamin giảm viêm Khác với thuốc kháng histamin tổng hợp, Cỏ mực không kháng tác dụng histamin liều cao, gây chống chết Có tác dụng ức chế chủng vi khuẩn: liên cầu, tụ cầu khuẩn vàng, trực khuẩn bạch hầu, Bacillus anthracis, Bacillus subtilis Các chế phẩm sirô viên nén bào chế từ cao cỏ mực áp dụng cho 500 bệnh nhân theo dõi kết điều trị bệnh viện nhà hộ sinh cho thấy tác dụng sau: Cầm máu tốt vài trường hợp cá biệt, tác dụng cỏ mực thể rõ rệt tác dụng vitamin K Nâng cao tổng hợp lượng prothrombin máu rõ rệt trường hợp suy gan Chống viêm nhiễm trường hợp cảm sốt, cúm, nhiễm khuẩn đường hơ hấp thể cấp tính nhẹ trung bình, mụn nhọt, viêm Để phòng nhiễm khuẩn sau mổ ổ bụng, mổ cắt ruột thừa, đặt vòng, nạo thai Chóng làm lành vết cắt, vết mổ phẫu thuật, làm đóng giả mạc sớm tốt trường hợp cắt amiđan, làm chóng khơ khơng tụ máu vết mổ bụng Cao lỏng Cỏ mực áp dụng để điều trị 70 bệnh nhân bị viêm âm đạo (23 người tạp khuẩn, 26 nấm, 21 Trichomonas) Trước áp dụng thuốc, thụt âm đạo nước chín Sau tẩm cao lỏng Cỏ mực vào bấc, bội khắp diện âm đạo Sau 6-8 giờ, bệnh nhân tự rút bấc Tỷ lệ bệnh nhân khỏi đỡ viêm âm đạo tạp khuẩn: 86,3%, nấm: 73%, Trichomonas: 61,9% Bài thuốc có Cỏ mực thuốc khác áp dụng để điều trị viêm âm đạo Trichomonas thể hư chứng, phối hợp với thuốc khác dùng Kết điều trị 68 bệnh nhân: khỏi 80,8 %, đỡ 11,7 % Trên lâm sàng, dùng cao cầm máu bào chế từ Cỏ mực dược liệu khác thay hoàn toàn nước oxy già 697 ca cắt amidan, 3.162 ca nạo VA (sùi vòm họng) 417 ca nhổ răng, khơng có tai biến Một thuốc cầm máu gồm Cỏ mực cóc kèn nghiên cứu dược lý áp dụng lâm sàng dược lý, thuốc có độc tính thấp, khơng ảnh hưởng tim, huyết áp hô hấp, làm gia tăng bền vững thành mạch, làm tăng số lượng tiểu cầu máu thỏ, làm giảm thời gian máu đông rút ngắn thời gian máu chảy Trên lâm sàng, thuốc không gây phản ứng phụ, khơng có tượng dị ứng, khơng làm hạ huyết áp, có tác dụng lợi tiểu Một thuốc khác gồm Cỏ mực dược liệu khác áp dụng cho 24 bệnh nhân viêm gan virus, kết tốt lâm sàng xét nghiệm sinh hoá 22 bệnh nhân Chế phẩm bào chế từ dược liệu: Cỏ mực, huyền sâm, sài đất áp dụng để điều trị bệnh cao huyết áp, chế phẩm có tác dụng sau: an thần 66,66% bệnh nhân, hạ áp ổn định 66,66% bệnh nhân; lợi tiểu (tăng lượng nước tiểu 300-400 ml/ngày) 63,88% bệnh nhân, thuốc không gây phản ứng phụ dùng điều trị lâu dài Bài thuốc có Cỏ mực 12 dược liệu khác dùng điều trị sốt xuất huyết, làm bớt sốt từ từ, tránh hạ nhiệt độ đột ngột, đồng thời có tác dụng ngăn chặn chảy máu, làm giảm nhẹ bệnh trạng Rễ Cỏ mực có tác dụng gây nơn tẩy Cao chồi có tác dụng kháng sinh tụ cầu vàng Escherichia coli Cây Cỏ mực có hoạt tính kháng siêu vi khuẩn bệnh Ranikhet in vitro, gây hạ áp thời có tác dụng chống co thắt hồi tràng cô lập chuột lang Cao cỏ mực có tác dụng bảo vệ chống nhiễm độc gan gây carbon tetraclorid chuột nhắt tăng tiết mật chuột cống trắng Một thuốc cổ truyền Ân Độ gồm Cỏ mực dược liệu khác có tác dụng điều trị tốt 30 bệnh nhân có sỏi thận Sỏi tống qua nước tiểu kết tinh calci carbonat calci oxalat vòng 15-30 ngày Những triệu chứng khác kết hợp với sỏi thận chữa khỏi Bài thuốc có Cỏ mực dược liệu khác áp dụng để điều trị sỏi niệu quản đái máu nhiều Có 51 ca tổng số 89 bệnh nhân điều trị đạt kết tốt (57,3%) 15 ca có tiến (16,8%) Ngồi ra, Cỏ mực có khả trung hòa tác dụng nọc rắn: Nghiên cứu ĐH Universidade Federal Rio de Janeiro (1989) ghi nhận dịch chiết EtOH E.alba có khả trung hòa hoạt tính nguy hại (đến gây chết người) nọc độc loài rắn chuông Nam Mỹ (Crotalus durissus terrificus) Các mẫu dịch chiết tương đương với 1,8 mg trích tinh khơ dùng cho chuột thử trung hồ đến liều nọc độc gây tử vong (LD50 = 0,08 microgram nọc/g thú vật) Một nghiên cứu khác, Ba tây (1994), khảo sát tác dụng chống độc tính nọc rắn bắp thịt chống chảy máu, chất thành phần cỏ mực: CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 PHƯƠNG TIỆN 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu Cỏ mực Eclipta prostrata (L.) thu hái tự nhiên số khu vườn thành phố Cần Thơ Thời gian địa điểm nghiên cứu: Đề tài thực từ tháng đến tháng năm 2018 phòng thí nghiệm thực vật dược dược liệu – Trường Đại học Tây Đô 3.1.2 Dụng cụ 3.1.3 Hóa chất 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.2.1 Thu mẫu Quan sát mơ tả đặc điểm hình thái thực vật về: dạng sống; thân; (hình dạng phiến, chóp, gân, gốc, cuống, kích thước…); hoa (dạng cụm hoa, vị trí cụm hoa, kích thước, bắc, nhị, nhụy…); hạt (hình dạng, màu sắc, kích thước…) Xác định tên khoa học lồi nghiên cứu dựa tài liệu tham khảo so sánh với tiêu mẫu Một số tài liệu sử dụng để tham khảo gồm thực vật chí của: Thực vật chí Trung Quốc, Cây cỏ Việt Nam Bên cạnh đó, có giúp đỡ chun gia phân loại thực vật 3.2.2 Thực vi mẫu quan sát giải phẫu quan dinh dưỡng Sau thu hái, mẫu đem xử lý phương pháp thích hợp nghiên cứu: Vi phẫu tiến hành làm vi phẫu theo bước sau: Chọn mẫu thích hợp Cắt tiêu dụng cụ cắt vi phẫu cầm tay Xử lý lát cắt: Lựa chọn lát cắt mỏng, tẩy dung dịch javen, rửa nước cất, ngâm acid acetic 5%, rửa nước cất đến hết acid Sau tiến hành nhuộm với Sol phèn Quan sát, mô tả chụp ảnh: Lên tiêu dung dịch nước quan sát kính hiển vi, mô tả đặc điểm giải phẫu, chụp ảnh máy ảnh qua kính hiển vi 3.2.3 Định tính hoạt chất coumarin Chuẩn bị mẫu: Sấy khô riêng: rễ, thân dược liệu Cỏ mực tủ sấy nhiệt độ 600C Đem tán nhỏ thuyền tán thành bột thơ, bảo quản túi nilon kín, để chỗ thống mát, khơ Định tính hoạt chất coumarin rễ, thân dược liệu cỏ mực phản ứng hóa học đặc trưng theo tài liệu: Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ (1999-2000), Nguyễn Ngọc Hạnh (2002) 3.2.3.1 Định tính coumarin Thí nghiệm thực ống nghiệm kích cỡ chia thành nghiệm thức: Nghiệm thức 1: Nghiệm thức đối chứng, sử dụng ống nghiệm Ống cho 2ml dung dịch rễ cỏ mực, ống 2: Cho 2ml dịch chiết thân ống cho 2ml dung dịch cỏ mực Sau thêm vào ống nghiệm 4ml nước cất, lắc Nghiệm thức 2: Chuẩn bị ống nghiệm, ống cho vào 2ml dịch chiết rễ, thân, cỏ mực giống nghiệm thức Sau thêm 0,5ml dd NaOH 10% vào ống nghiệm tiến hành đun cách thủy từ 2-3 phút Cho thêm nước cất vào để tích ống nghiệm nghiệm thức 1, lắc so sánh cặp ống nghiệm nghiệm thức ngiệm thức theo quan dinh dưỡng, dựa vào màu sắc để xác định lên coumarin Nếu có coumarin xuất màu xanh 3.2.3.2 Chiếu tia UV, phát coumarin Chuẩn bị mẫu chứng mẫu thử: Mẫu chứng có vết dịch chiết, sấy khơ để so sánh Mẫu thử: Lấy 3ml dịch chiết rễ, thân, cỏ mực Thêm giọt NaOH 5% Đun cách thủy phút nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, chờ khô dung môi lặp lại lần Để khô Che nửa vết dịch chiết miếng kim loại đem soi đèn UV 365nm 1-2 phút Quan sát: phần không bị che mẫu thử sáng Chụp hình Lấy miếng kim loại thấy không bị che phát quang sáng bị che Nếu tiếp tục chiếu UV sau vài phút cường độ phát quang 3.2.3.3 Định tính coumarin sắc ký lớp mỏng Dịch chấm sắc ký: Dịch chiết cồn dược liệu cỏ mực bốc nước bếp cách thủy đến cạn Hòa tan với CHCl3, dùng dịch làm dịch chấm sắc ký Chuẩn bị mỏng: Lắc kỹ 0,5 g silicagel G với khoảng 1,2 ml nước cất ống nghiệm nhỏ, tráng lên kính 3x12 cm Đặt kính lên giá, chờ cho lớp silicagel mặt (tráng đều, khơng lống nước) đem sấy 1100C Lấy bảng mỏng ra, để nguội bình hút ẩm Có thể sử dụng mỏng silicagel trán sẵn với kích thước thích hợp (thường 2,5 x 10 cm), khơng cần thiết phải hoạt hóa bảng tráng sẵn Dung môi sắc ký: Hệ S1 = Benzen – EtOAc (20:2) ml S2 = Benzen – Aceton (20:2) ml 10 Cho dung mơi vào bình sắc ký (đã lót sẵn giấy lọc) cho lớp dung mơi bình cao khoảng 0,5 cm Đậy nắp sắc ký, để bão hòa 30 phút Khai triển: Dùng mao quản lấy dịch chiết, chấm lên bảng mỏng thành vết gọn (chấm đến lần) thành vạch mm x mm cách mép - 1,5 cm (Vết cách vết khoảng 1cm vị trí cao mực dung mơi bình sắc ký) Đặt bảng mỏng vào bình sắc ký tư nghiêng đậy nắp bình Khi dung mơi dịch mép khoảng 0,5 cm lấy bảng mỏng để bay dung mơi tủ hút nhiệt độ phòng Phát vết tính giá trị Rf Quan sát mỏng đèn UV 365 nm, 254 nm, đánh dấu (vết bút chì) tính Rf Cơng thức: Rf =a/b Sau quan sát đèn UV, phun dung dịch KOH 5% cồn (làm tủ hút) sấy nhẹ nhàng phút Phun tiếp thuốc thử diazo lên trên, dẫn chất coumarin cho vết có màu cam đến đỏ 11 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 KẾT QUẢ Theo nguồn DĐVN IV, tạp chí khoa học tài liệu nước ngồi có liên quan trích dẫn cụ thể rõ ràng mục tài liệu tham khảo 4.1.1 Đặc điểm hình thái Cỏ mực, gọi cỏ nhọ nồi, thuộc loại thân thảo niên lồi cỏ mọc bò, có gần thẳng đứng cao từ 25-90 cm, phân nhánh Tồn phủ lơng cứng Cây có nhựa mủ khơng khí có màu đen Tên khoa học: Ecliptaprostrata (L.) hay [Eclipta alba (L.) Hassk.] Hình 4.1 Cây cỏ mực Thân hình trụ, có khía dọc, dài khoảng 30-50 cm, đường kính 2-5 cm Mặt ngồi thân màu tím nâu nhạt mang lơng cứng, trắng Hình 4.2 Thân cỏ mực 12 Lá nguyên, mọc đối, phiến thuôn dài hình mũi mác, đỉnh nhọn, gốc hẹp, dài 3,5-5 cm, rộng 0,8-1,5 cm, xanh đậm mặt trên, nhạt mặt Gân lông chim, rõ mặt dưới, 4-7 cặp gân phụ nối với gần mép lá, có lơng cứng Hai mặt có lơng cứng ngắn, màu trắng Mép phiến có cưa to nơng đơi gợn sóng Cuống ngắn, mảnh, ơm sát vào thân Gốc phiến men xuống nên coi khơng có cuống Hình 4.3 Lá cỏ mực Cụm hoa hình đầu, màu trắng, đường kính 4-8 cm, mọc kẽ hay cành Đầu mang hai loại hoa: hoa hình lưỡi nhỏ ngồi, hoa lưỡng tính hình ống trong, có hoa rụng, lại bao hoa trục cụm hoa Cây hoa từ tháng đến tháng Hoa hình lưỡi xếp vòng ngồi, hoa lưỡng tính hình ống Hoa hình lưỡi màu trắng, đài hoa dính có to số nhỏ, dài 0,2-0,3 mm; tràng hoa dính thành ống dài mm, phiến nguyên có hai khơng, dài 1-1,2 mm; bầu dẹp, đính nỗn đáy, vòi nhụy dài khoảng 1,5 mm, phân nhánh đầu nhụy Hoa hình ống màu trắng; đài hoa giống hoa hình lưỡi; tràng hoa dính thành ống dài 1,5 mm, chia thùy hình tam giác dài 0,3 mm có vài gai nhọn mặt ngồi; nhị 4, nhị hình sợi, màu trắng, dài 0,5 mm, đính đáy, ống tràng xen kẽ cánh hoa, bao phấn dài gần 0,5 mm, màu vàng, dính thành ống bao vòi nhụy, ơ, hướng trong, có tai, nứt dọc, đính đáy, có phụ phiến mỏng hình tam giác, hạt phấn hình cầu gai, màu vàng, đường kính 17,5-22,5 µm; nhụy bầu giống hoa cái, vòi nhụy màu trắng, hình trụ dài 1,5 mm, đầu nhụy chia nhánh ngắn, dài 0,3-0,4 mm, có lơng Quả bế dẹp, dài 2,5-3 mm, màu đen có cánh ngắn 13 Hình 4 Hoa cỏ mực Quả đóng hình trái xoan hẹp, đầu cụt, non có màu xanh, già có màu đen, dài mm, rộng 1-1,5 mm Quả từ tháng đến tháng 10 Hình 4.5 Quả cỏ mực 14 1.2 Đặc điểm hình thái giải phẫu cỏ mực 1.2.1 Cấu tạo vi phẫu rễ cỏ nực Vi phẫu thân cỏ mực khảo sát trình bà y hình 4.6, mơ tả cụ thể sau: Vi phẫu rễ tròn, từ ngồi vào gồm loại mơ: bần 2-3 lớp tế bào hình chữ nhật, vách tẩm bần mỏng bong tróc Nhu bì, 1-2 lớp tế bào hình chữ nhật Mơ mềm đạo, 2-3 lớp tế bào hình đa giác, kích thước khơng đều, xếp lộn xộn, Hệ thống dẫn không liên tục thường có 3-5 vùng libe-gỗ Libe khó nhận diện, libe có tế bào hình chữ nhật, xếp xun tâm, vùng libe có nhiều mạch rây to, rõ Gỗ chiếm tâm không liên tục, tia tủy rộng, mạch gỗ gần tròn hình chữ x, kích thước to, nhiều, xếp lộn xộn, mô mềm gỗ có tế bào hình đa giác vách tẩm chất gỗ Tia tủy rộng, 4-8 dãy tế bào hình bầu dục hẹp, dài, vách cellulose Tóm lại, vi phẫu rễ cỏ mực khảo sát khó phân biệt miềm vỏ trung trụ, khơng có ranh giới rõ ràng, vỏ mỏng Bó gỗ đặc biệt, có dạng hình chữ thập, xen kẽ tia ruột, gỗ chiếm tủy Hình 4.6 Đặc điểm cấu tạo chung rễ cỏ mực Bần Tầng sinh bần Mô mềm Libe Libe 6.Tượng tần Mạch gỗ Tia ruột 15 1.2.1 Cấu tạo vi phẫu rễ cỏ nực Vi phẫu thân cỏ mực khảo sát trình bày hình 4.7 mơ tả cụ thể sau: Vi phẫu tiết diện tròn Biểu bì tế bào hình chữ nhật, kích thước khơng đều, cutin mỏng, có lơng che chở đa bào Mơ dày góc gồm 2-3 lớp tế bào hình chữ nhật đa giác, khơng đều, có lơng che chở Mơ mềm tế bào hình đa giác thn dài, vách mỏng, xếp tạo khuyết to nhỏ hình bầu dục Sát vòng nội bì rải rác có túi tiết li bào Nội bì khung Caspary rõ, rải rác hạt tinh bột Trụ bì 3-4 lớp tế bào đa giác, hóa mơ cứng thành cụm úp libe Libe gỗ không liên tục Libe gồm 4-5 lớp tế bào vách uốn lượn, xếp lộn xộn Libe gồm 2-3 lớp tế bào hình chữ nhật, vách uốn lượn, xếp xuyên tâm Mạch gỗ nhiều, to, hình đa giác, phân bố gần vùng mơ mềm gỗ; mơ mềm gỗ hình đa giác hình chữ nhật, vách dày, kích thước nhỏ Gỗ tập trung thành nhiều cụm, mạch gỗ hình tròn đa giác gần tròn, mơ mềm quanh gỗ gồm nhiều lớp tế bào hình đa giác, vách cellulose Mơ mềm tủy đạo gồm nhiều lớp tế bào hình tròn đa giác gần tròn, kích thước lớn Tóm lại, vi phẫu thân cỏ mực khảo sát khó phân biệt có hình ngũ giác gốc lồi, gốc lồi có mơ dày góc có bó libe- gỗ kiểu chồng kép ,mạch gỗ có tiết diện gần tròn,mơ mềm tủy hẹp 16 A B Hình 4.7 Đặc điểm cấu tạo chung thân cỏ mực A Thân non; B Thân già Bần Tầng sinh bần Mô mềm Libe Libe 6.Tượng tần Mạch gỗ Tia ruột 17 Vi phẫu cuống cỏ mực khảo sát trình bày hình 4.8 mơ tả cụ thể sau: Vi phẫu cuống có mặt lõm, mặt lồi, biểu bì lớp tế bào hình tròn xếp sát vào theo chiều dài cuống Lông che chở đa bào, lơng tiết Sát lớp biểu bì mơ dày, mô dày gốc (4-5) lớp tế bào, mô dày (2-3) lớp tế bào, tế bào gần tròn hay bầu dục kích thước khơng xếp lộn xộn để hở khoảng giang bào có chức nâng đỡ bảo vệ Tiếp đến mô mềm đạo gồm tế bào hình đa giác hình trứng có kích thước khơng đồng xếp lộn xộn Tiếp giáp với hệ thống dẫn libe- gỗ cụm tế bào hình đa giác nhỏ vách cellulose xếp khít nhau.Hệ thống dẫn gồm 7-8 bó libe-gỗ xếp vòng cung khơng liên tục với libe gỗ trên, lớp libe tế bào hình đa giác, nhỏ vách uốn lượn, xếp lộn xộn Các bó dẫn nằm khối mô mềmhợp thành đám lớn, hơng từ 5-15 tế bào hình đa giác bao xung quanh tầng libe làm nhiệm vụ nâng đỡ Các bó nhỏ bó to libe phía ngồi gỗ phía Xung quanh libe có thêm mô cứng làm chức nâng đỡ Tầng libe xếp thành vòng tròn lượn sóng nằm ngồi bao quanh tầng gỗ nằm Các bó mạch tập trung chủ yếu mặt cuống Ở khối mơ mềm chiếm diện tích lớn, mơ mếm ruột cò hình đa giác Tóm lại, vi phẫu cỏ mực khảo sát khó phân biệt hệ thống dẫn có 7-8 bó libe, kiểu chồng kép xếp thành vòng cung khơng liên tục, nằm khối mô mềm mô mềm chiếm diện tích lớn Hình 4.7 Đặc điểm cấu tạo chung cỏ mực Biểu bì Mơ dày Mơ mềm Libe Mạch gỗ 18 19 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Đề tài “Khảo sát đặc điểm hình thái giải phẫu định tính hoạt chất coumarin cỏ mực” thu số kết sau: - Mô tả chi tiết đặc điểm hình thái giải phẫu quan dinh dưỡng cỏ mực (Eclipta prostrata L.) - Cả ba phương pháp thí nghiệm chứng minh có diện coumarin quan dinh dưỡng ĐỀ NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu xác định loại nhóm chất thuộc coumarin - Thử nghiệm chiết xuất coumarin từ cỏ mực 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Đỗ Tất Lợi (1995), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, trang 367-368 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu thuốc, Nhà xuất Y học Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Diễm Hồng (2002), Thăm dò tác dụng cỏ mực đường huyết, Tạp chí dược liệu, tập 7, số 3, trang 82-86 Nguyễn Khắc Quỳnh Cứ (1999-2000), Bài giảng chiết xuất dược liệu, Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Ngọc Hạnh (2002), Tách chiết cô lập hợp chất thiên nhiên, Giáo trình cao học, Viện Cơng nghệ Hóa học-Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, Thành phố Hồ Chí Minh Phạm Hồng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam tập III, Nhà xuất trẻ, trang 272 Trần Vũ Thiên (2008), Góp phần nghiên cứu thành phần hóa hoc cỏ mực (Eclipta prostrata L.), Họ cúc (Asteraceae), Luận văn thạc sĩ, Trung tâm học liệu, Đại hoc Cần Thơ Tiếng Anh Anuradha S Majumdar, Madhusudan N Saraf, Norma R Andrades and Rahul Y Kamble (2008), Preliminary studies on the antioxidant activity of Tribulus terrestris andEclipta alba, Pharmacognosy Magazine, ISSN: 0973-1296, 102-107 Bohlmann, F et al., Phytochemistry, 1976, 15, 1309 Curtis, R.F et al., Tetrahedron, 1967 Karthikumar, S., Vigneswari, K and Jegatheesan, K.(2007), Screening of antibacterial and antioxidant activities of leaves of Eclipta prostrata (L) Zhang M, Chen Y (1996), Chemical constituents of Eclipta alba (L.) Hassk, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi Website https://caythuocdangian.com/cay-co-muc https://tailieu.vn/doc/co-nho-noi-tac-dung-co-nho-noi-bo-am-cam-mau-html http://ydvn.net/contents/view/1643.cay-co-nho-noi-eclipta-prostrata-l.html 21 XÁC NHẬN CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TP Cần Thơ, ngày…….tháng……… năm 2018 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS NGUYỄN XUÂN LINH NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA GIẢNG VIÊN CHẤM Họ Tên:……………………………… …………………………………… Nhận xét: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… ĐIỂM Ký tên NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA GIẢNG VIÊN CHẤM Họ Tên: ……………………………………………………………………… Nhận xét: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… ĐIỂM Ký tên ... KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Đề tài Khảo sát đặc điểm hình thái giải phẫu định tính hoạt chất coumarin cỏ mực thu số kết sau: - Mô tả chi tiết đặc điểm hình thái giải phẫu quan dinh dưỡng cỏ mực. .. hình thái giải phẫu định tính hoạt chất comarin cỏ mực thực 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Tìm hiểu đặc điểm hình thái, giải phẫu quan dinh dưỡng cỏ mực (Eclipta prostrata L. ) Đồng thời xác định phận... 10 Hình 4.5 Quả cỏ mực 14 1.2 Đặc điểm hình thái giải phẫu cỏ mực 1.2.1 Cấu tạo vi phẫu rễ cỏ nực Vi phẫu thân cỏ mực khảo sát trình bà y hình 4.6, mơ tả cụ thể sau: Vi phẫu rễ tròn, từ ngồi vào