NGHIÊN CƢ́ U SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA NẤ M Metarhizium anisopliae DƢ̣A VÀO TRÌNH TƢ̣ GEN Pr1 VÀ VÙNG rDNA-ITS

Đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu sƣ̣ tính đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS “ đƣợc thực hiện từ ngày 26 tháng 3 năm 2007 đến ngày 31 tháng 8 năm 2007 tại trƣờng Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh. Đề tài do Trần Nhật Nam thực hiện dƣới sự hƣớng dẫn của ThS. Võ Thị Thu Oanh và TS. Lê Đình Đôn. Đối tƣợng nghiên cứu là nấm Metarhizium anisopliae ký sinh trên côn trùng gây hại. Đây là giống nấm có hoạt tính tiêu diệt côn trùng mạnh. Mục đích đề tài nhằm nghiên cƣ́u sƣ̣ đa dạng về mặt di truyền giƣ̃a các dòng nấm dƣ̣a trên cơ sở trình tƣ̣ nucleotide của gen Pr1 và vùng rDNA-ITS Kết quả thu đƣợc nhƣ sau: - Xác định đƣợc những dòng nấm Metarhizium anisopliae sƣ̉ dụng trong nghiên cƣ́u thuộc dòng Metarhizium anisopliae var. anisopliae. - Phát hiện gen Pr1 ở trên 10 dòng nấm Metarhizium anisopliae. Tiến hành giải trình tự gen Pr1 của10 mẫu nấm. Kích thƣớc của gen Pr1 ở 7 mẫu nấm là 1091bp. - Có sự khác biệt về mặt di truyền giƣ̃a các dòng Metarhizium anisopliae trong nƣớc và giƣ̃a các dòng trong nƣớc với các dòng trên genbank.Tỉ lệ tƣơng đồng giữa các dòng trong nƣớc khoảng 95-100%, và giữa các dòng trong nƣớc so với các dòng trên thế giới là 94-99% khi so sánh trình tƣ̣ gen Pr1 - Phát hiện đƣợc 4 vị trí đột biến ở 2 dòng BXDTG và RBCQ9 so với nhƣ̃ng dòng còn lại. Nhƣ̃ng đột biến này đều xảy ra ở vùng ITS1. - Có sự bảo tồn cao trong vùng 5.8S và vùng ITS2 giƣ̃a nhƣ̃ng dòng nấm Metarhizium anisopliae đƣợc sƣ̉ dụng trong đề tài. Tỉ lệ tƣơng đồng giữa những dòng trong nƣớc là 99-100% và giữa các dòng trong nƣớc với các dòng trên genbank là 92-100% khi so sánh trình tƣ̣ vùng rDNA-ITS.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************* KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ́ ́ NGHIÊN CƢU SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦ A NÂM Metarhizium anisopliae DƢ̣A VÀO TRÌNH TƢ̣ GEN Pr1 VÀ VÙNG rDNA-ITS Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2003 - 2007 Sinh viên thƣ ̣c hiên: TRẦN NHẬT NAM ̣ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************* KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ́ ́ NGHIÊN CƢU SƢ̣ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦ A NÂM Metarhizium anisopliae DƢ̣A VÀO TRÌNH TƢ̣ GEN Pr1 VÀ VÙNG rDNA-ITS Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thƣc hiên: ̣ ̣ ThS VÕ THỊ THU OANH TRẦN NHẬT NAM TS LÊ ĐÌ NH ĐÔN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LỜI CẢM ƠN  Con xin cảm ơn Ba Mẹ gia đình nuôi đến ngày khôn lớn và cho ăn học thành tài Em xin chân thành cảm ơn:  Các Thầy Cô trƣờng Đại học Nông Lâm TP Hờ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức cho em suốt năm học  Ban chủ nhiệm các Thầy Cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học động viên, giúp đỡ em thời gian thực khóa luận  TS Lê Đình Đơn, ThS Võ Thị Thu Oanh , CN Lƣu Phúc Lợi tận tình dẫn em śt quá trình thực khóa luận  Anh Nguyễn Văn Lẫm hết lịng hƣớng dẫn em quá trình thực khóa luận  Các anh chị Trung tâm Phân tích và Thí nghiệm Hóa sinh động viên, chia sẻ kinh nghiê ̣m và giúp đỡ em quá trình thực khóa luận  Xin cám ơn c ̣c số ng đã đem la ̣i cho nhƣ̃ng ngƣời ba ̣n , nhƣ̃ng ngƣờ i đã cùng chia sẻ và động viên suố t quá trinh thƣ̣c hiê ̣n khóa ̀ luâ ̣n Xin chân thành cảm ơn! ̀ TRÂN NHẬT NAM iii TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu sƣ̣ tính đa dạng di truyền nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS “ đƣợc thực từ ngày 26 tháng năm 2007 đến ngày 31 tháng năm 2007 trƣờng Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Đề tài Trầ n Nhâ ̣t Nam thực dƣới hƣớng dẫn ThS Võ Thị Thu Oanh và TS Lê Đình Đơn Đối tƣợng nghiên cứu là nấm Metarhizium anisopliae ký sinh côn trùng gây hại Đây là giố ng nấ m có hoa ̣t tính tiêu diê ̣t côn trùng ma ̣nh Mục đích đề tài nhằm nghiên cƣ́u sƣ̣ đa da ̣ng về mă ̣t di truyề n giƣ̃a các dòng nấ m dƣ̣a sở trinh tƣ̣ ̀ nucleotide của gen Pr1 và vùng rDNA-ITS Kết thu đƣợc nhƣ sau: - Xác định đƣợc những dòng nấm Metarhizium anisopliae sƣ̉ du ̣ng nghiên cƣ́u thuô ̣c dòng Metarhizium anisopliae var anisopliae - Phát gen Pr1 10 dòng nấm Metarhizium anisopliae Tiế n hành giải trình tự gen Pr1 của10 mẫu nấ m Kích thƣớc gen Pr1 mẫu nấ m là 1091bp - Có khác biê ̣t về mă ̣t di truyề n giƣ̃a các dòng Metarhizium anisopliae nƣớc và giƣ̃a các dòng nƣớc với các dòng genbank Tỉ lệ tƣơng đờng giữa các dịng nƣớc khoảng 95-100%, và giữa các dòng nƣớc so với các dòn g thế giới là 94-99% so sánh trinh tƣ̣ gen Pr1 ̀ - Phát đƣợc vị trí đột biến dòng BXDTG và RBCQ so với nhƣ̃ng dòng lại Nhƣ̃ng đô ̣t biế n này đề u xảy ở vùng ITS - Có bảo tờn cao vùng 5.8S và vùng ITS2 giƣ̃a nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng đề tài Tỉ lệ tƣơng đờng giữa những dịng nƣớc là 99- 100% và giữa các dòng nƣớc với các dòng genbank là 92-100% so sánh trinh tƣ̣ ̀ vùng rDNA-ITS iv MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ .iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách các chữ viết tắt viii Danh sách các bảng ix Danh sách các hình x ̀ ̉ MƠ ĐÂU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu và yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3.Đối tƣợng nghiên cứu 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiê ̣u nấ m Metarhizium anisopliae 2.2 Sơ lƣợc phƣơng thức xâm nhiễm nấm ký sinh côn trùng 2.3 Hoạt tính sinh học 2.4 Hiệu phòng trừ sâu hại chế phẩm nấm 2.5 Một số nghiên cứu nƣớc và ngoài nƣớc nấm Metarhizium anisopliae và những nấm ký sinh trùng khác ứng dụng để phịng trừ sâu hại 2.5.1 Nghiên cứu nƣớc 2.5.2 Nghiên cứu ngoài nƣớc 2.6 Giới thiê ̣u gen Pr1 10 2.7 Vai trò của Protease Pr1 10 v 2.8.Tổ ng quan về ITS-rDNA 10 2.8.1 Giới thiê ̣u về vùng rDNA và vùng ITS 10 2.9 Mô ̣t số nghiên cƣ́u nƣớc và nƣớc ngoài về sƣ̣ đa da ̣ng của nấ m Metarhizium anisopliae dƣ̣a vào gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 12 2.9.1 Nghiên cƣ́u nƣớc ngoài 12 2.9.2 Nghiên cƣ́u nƣớc 14 2.10 Phƣơng pháp phát hiê ̣n gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 14 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Thời gian và địa điểm 16 3.1.1 Thời gian 16 3.1.2 Địa điểm 16 3.2 Vật liệu và hoá chất 16 3.2.1 Vật liệu 16 3.2.2 Hoá chất 17 3.2.3 Các thiết bị chính 17 3.3 Nội dung nghiên cứu 18 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 3.4.1.Kiể m tra DNA tổ ng số đƣơ ̣c ly trich tƣ̀ các dòng nấ m ́ Metarhizium anisopliae 18 3.4.2 Khuếch đại gen Pr1 18 3.4.3 Khuế ch đa ̣i vùng rDNA-ITS 21 3.5 3.6 Tinh sa ̣ch sản phẩ m PCR 22 3.7 Tinh sản phẩm đọc trình tự 24 3.8 Tiế n hành giải trinh tƣ̣ gen gây đô ̣c Pr1 và vùng ITS 22 ̀ Phƣơng pháp phân tich trinh tƣ̣ 24 ́ ̀ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.4 DNA của các mẫu nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c dùng nghiên vi cƣ́u 26 4.5 4.6 Kế t quả khuế ch đa ̣i vùng ITS1-5.8S-ITS2 28 4.7 Kế t quả giải trình tƣ̣ vùng ITS1-5.8S-ITS2 29 4.8 Kế t khuếch đại gen Pr1……………………………………………… 36 4.9 Kế t quả tinh sa ̣ch DNA tổ ng số 28 Kế t quả đo ̣c trình tƣ̣ gen Pr1………………………………………………………36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42 5.4 Kết luận 42 5.4.2 Phát và đọc trình tự gen Pr1 42 5.4.3 Phát và đọc trình tự vùng rDNA-ITS 42 5.5 Đề nghị 43 5.6 Hạn chế đề tài 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 47 vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BXĐTG BXĐTV RBCQ9 BDQ96 BDTV5 BDTN BDBD7 SCLLLA RNBT RNLA ng nm g m M l TE dNTP TAE UI bp Kb ctv PCR Rpm : Bọ xít đen Tiền Giang : Bọ xít đen Trà Vinh : Rầy cúc Quận : Bọ dừa Quận : Bọ dừa Trà Vinh : Bọ dừa Tây Ninh : Bọ dừa Bình Định : Sâu ćn lá lúa Long An : Rầy nâu Bến Tre : Rầ y nâu Long An : nano gram : nano mol : micro gram : micro mol : micro mol/lít : micro lít : tris EDTA : deoxyribonucleotide – – trphosphate : tris acetic EDTA : unit international : base pair : kilo base : cộng tác viên : Polymerase Chains Reaction : Revolutions per minute viii DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1 Giới thiê ̣u nấ m Metarhizium anisopliae Bảng 3.1 Nguồ n nấ m Metarhizium anisopiae đƣơ ̣c thu thâ ̣p ở mô ̣t số điạ phƣơng dùng thí nghiê ̣m 16 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen Pr1 với că ̣p primer METPR1/METPR4 19 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen Pr1 với că ̣p primer METPR2/METPR5 20 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen vùng rDNA -ITS .21 Bảng 3.5 Thành phần phản ứng đọc trình tự 23 Bảng 4.1 Các nguồn nấm Metarhizium anisopliae genbank đƣơ ̣c dùng để so sánh trinh tƣ̣ vùng rDNA-ITS 30 ̀ Bảng 4.2 Ma trâ ̣n khoảng cách giƣ̃a các dòng nấ m Metarhizium anisopliae nƣớc dƣ̣a vào trinh tƣ̣ vùng rDNA-ITS 31 ̀ Bảng 4.3 Ma trâ ̣n khoảng cách giƣ̃a các dòng nấ m Metarhizium anisopliae nƣớc và thế giới dƣ̣a vào trinh tƣ̣ vùng rDNA-ITS .33 ̀ Bảng 4.4 Các nguồn nấm Metarhizium anisopliae genbank đƣơ ̣c dùng để so sánh trình tự gen Pr1 37 Bảng 4.5 Ma trâ ̣n khoảng cách giƣ̃a các dòng nấ m Metarhizium anisopliae nƣớc dƣ̣a vào trình tƣ̣ gen Pr1 38 Bảng 4.6 Ma trâ ̣n khoảng cách giƣ̃a các dòng nấ m Metarhizium anisopliae nƣớc và giới dƣ̣a vào trinh tƣ̣ gen Pr1 40 ̀ ix DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Nấm Metarrhizium anisopliae ký sinh những côn trùng khác Hình 2.2 Sơ đờ của các vùng rDNA 12 Hình 3.1 Sơ đờ primer đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng để khuế ch đa ̣i gen Pr1 18 Hình 3.2 Sơ đờ primer đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng để khuế ch đa ̣i vùng ITS 21 Hình 3.3 Nhƣ̃ng phƣơng pháp đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng phân tích trình tự 24 Hình 3.4 Sơ đờ phân tich trinh tƣ̣ có đô ̣ tƣơng đồ ng cao 25 ́ ̀ Hình 4.1 DNA tổng số nấm Metarrhizium anisopliae 26 Hình 4.2 Sơ đờ tinh sa ̣ch DNA tổ ng số của các mẫu nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng nghiên cƣ́u 27 Hình 4.3 DNA tở ng số của nấ m Metarhizium anisopliae đƣơ ̣c tinh sa ̣ch 28 Hình 4.4 Hình khuếch đại vùng rDNA-ITS 28 Hình 4.5 Cây phát sinh loài giữa các dịng Metarhizium anisopliae nƣớc dựa vào trình tự vùng rDNA-ITS 32 Hình 4.6 So sánh quan ̣ giữa các dòng Metarhizium anisopliae nƣớc và giới dƣ̣a vào trinh tƣ̣ vùng rDNA-ITS 34 ̀ Hình 4.7 Hình khuếch đại gen Pr1 36 Hình 4.8 Cây phát sinh loài giữa các dịng Metarhizium anisopliae nƣớc dựa vào trình tự gen Pr1 39 Hình 4.9 So sánh quan ̣ giữa các dòng Metarhizium anisopliae nƣớc và giới dƣ̣a vào trinh tƣ̣ gen Pr1 41 ̀ x 52 BDQ96 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC BDBD7 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC RNBT TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC RNLA TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC BXDTV TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC EF113339 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC SCLLLA TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC EF113341 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC BXDTG TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC RBCQ9 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC AF136376 TCTGCGCAGTAGTAAAGCACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC EF051717 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC EF051721 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC AF516320 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC DQ679899 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC AB071714 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC AB071712 TCTGCGCAGTAGTAAAACACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGC **************** ********************************* BDTN CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - 473 BDTV5 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - BDQ96 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - BDBD7 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - RNBT CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - RNLA CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - BXDTV CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - EF113339 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - SCLLLA CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - EF113341 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - BXDTG CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - RBCQ9 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - AF136376 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - EF051717 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - EF051721 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - AF516320 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - DQ679899 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - 53 AB071714 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG - AB071712 CGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG ************************* Dấu * biểu thị tƣơng đờng giữa các dịng so sánh, vùng in đậm là 5.8S, trình tự đƣợc gạch chân thể đột biến 54 Phụ lục Kế t quả sắ p gióng cô ̣t trinh tƣ ̣ các dòng nấ m ̀ Metarhizium anisopliae var anisopliae nƣớc và thế giới dƣ ̣a vào trinh tƣ ̣ gen Pr1 ̀ BDTV5 GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA 50 RNLA GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA RNBT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA BDTN GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA BXDTV GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA BDQ96 -AGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389121 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389133 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA SCLLLA GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389128 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCAGACAA AY389132 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389119 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCAGACAA AY389123 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCAGACAA AY389126 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCAGACAA AY389122 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389129 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA AY389127 GAGCCAGCTCCTCTCTTCACTCCTCAGGCTGAGAGCATCATTGCCGACAA ****************** ***** BDTV5 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA 100 RNLA GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA RNBT GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA BDTN GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA BXDTV GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA BDQ96 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA AY389121 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA AY389133 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA SCLLLA GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389128 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389132 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGATA AY389119 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389123 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389126 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA 55 AY389122 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389129 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA AY389127 GTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTATCGCTACCGATGACA ************************************************ * BDTV5 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC 150 RNLA CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC RNBT CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC BDTN CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC BXDTV CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC BDQ96 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389121 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389133 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC SCLLLA AGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389128 AGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389132 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389119 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389123 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389126 CGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389122 CGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389129 CGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC AY389127 CGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGCCTTC *** ********************************************* BDTV5 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG 200 RNLA CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG RNBT CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCGGTG BDTN CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG BXDTV CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG BDQ96 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389121 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389133 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG SCLLLA CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389128 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389132 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389119 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG 56 AY389123 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389126 CACGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389122 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389129 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG AY389127 CATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TG ** ******************************************** ** BDTV5 AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA 250 RNLA AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA RNBT AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA BDTN AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA BXDTV AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA BDQ96 AGCACCCCGGTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAA AY389121 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG AY389133 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG SCLLLA AGCACCCCGGTGTAAGTTCCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG AY389128 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG AY389132 AGCACCCCGGTGTAAGCACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG AY389119 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAGGGAG AY389123 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAGGGAG AY389126 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAG AY389122 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAGGGAG AY389129 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAGGGAG AY389127 AGCACCCCGGTGTAAGTACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAGGGAG **************** **************************** **** BDTV5 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG 300 RNLA ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG RNBT ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG BDTN ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG BXDTV ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG BDQ96 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG AY389121 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG AY389133 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG SCLLLA ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG AY389128 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTG 57 AY389132 ACATGTAGTTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTTGATTTCATTG AY389119 ACATGTAGGTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCCCCATAGGTCGATTTCATTG AY389123 ACATGTAGGTGTTTGTTCCTGACCCGCTGCCCCATAGGTCGATCTCATTG AY389126 ACATGTAGTTGTTTGTTGCTGACCCGCTGCACCATAGGTCGATTTCATTG AY389122 ACATGCAGGTGTTTGTTGCTGACCCGCTGCCCCATAGGTCGATTTCATTG AY389129 ACATGTAGGTGTTTGTTGCTGACCCGCTGCCCCATAGGTCGATTTCATTG AY389127 ACATGTAGGTGTTTGTTGCTGACCCGCTGCCCCATAGGTCGATTTCATTG ***** ** ******** ************ ******** *** ****** BDTV5 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT 350 RNLA AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT RNBT AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT BDTN AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT BXDTV AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT BDQ96 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389121 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389133 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT SCLLLA AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389128 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389132 AGAAGGACGCCTTGATGCGTATCAGCGGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389119 AGAAGGACGCCGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389123 AGAAGGACGCCGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389126 AGAAGGACGCCGTGATGCGTATCAGCAGCTTCACTGACCAGAGCGGTGCT AY389122 AGAAGGACGCCGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389129 AGAAGGACGCCGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT AY389127 AGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGCGGCATCACTGAGCAGAGCGGTGCT ********** ************** ** ******* ************ BDTV5 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT 400 RNLA CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT RNBT CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT BDTN CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT BXDTV CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT BDQ96 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT AY389121 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAGTAAGGGAAGCACCACCT 58 AY389133 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAGTAAGGGAAGCACCACCT SCLLLA CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAGTAGGGGAAGCACCACCT AY389128 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAGTAGGGGAAGCACCACCT AY389132 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAGGGGAAGCACCACCT AY389119 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAAGGGAAGCACCACCT AY389123 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAAGGGAAGCACCACCT AY389126 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAATAAGGGAAGCACCACCT AY389122 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCACACCGCCAGAAGGGAAGCACCACCT AY389129 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCACACCGCCAGAAGGGAAGCACCACCT AY389127 CCCTGGGGTCTTGGGCG-CATCTCTCACCGCAGTAAGGGAAGCACCACCT ***************** ****** ****** * ************** BDTV5 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC 450 RNLA ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC RNBT ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC BDTN ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC BXDTV ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC BDQ96 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389121 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTCAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389133 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTCAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC SCLLLA ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389128 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389132 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389119 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389123 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389126 ATCGCTACGATGATAGTGCCGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389129 ATCGCTACGATGATAGTGCCGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC AY389127 ATCGCTACGATGATAGTGCTGGTCAGGGTACTTGCGTATATATCATTGAC ******************* *** ************************** BDTV5 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA 500 RNLA ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA RNBT ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA BDTN ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA BXDTV ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA BDQ96 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATA 59 AY389121 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGTCAAAACTCCATA AY389133 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGTCAAAACTCCATA SCLLLA ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATA AY389128 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATA AY389132 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATA AY389119 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGTCAAAACTCCATA AY389123 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGTCAAAACTCCATA AY389126 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGTCAAAACTCCATA AY389122 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATA AY389129 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATA AY389127 ACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGGCAAAACTCCATA *********************************** * ***** ****** BDTV5 GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC 550 RNLA GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC RNBT GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC BDTN GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC BXDTV GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC BDQ96 GTGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC AY389121 GTGCGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC AY389133 GTGCGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC SCLLLA GGGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC AY389128 GGGAGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC AY389132 GGGCGGAGTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGC AY389119 GTGCGGAGTAGGAAATTTACCAATATCATCCAGGAGTTTCAGGGTCGCGC AY389123 GTGCGGAGTAGGAAATTTACCAATATCATCCAGGAGTTTCAGGGTCGCGC AY389126 GTGCGGAGTAGAAAATTTACCAATATCATCCAGGAGTTTCAGGGTCGCGC AY389122 GTGCGGAGTAGGAAATTTACCAATATCATCCAGGATTTTGGGGGTCGCGC AY389129 GTGCGGAGTAGGAAATTTACCAATATCATCCAGGATTTTGGGGGTCGCGC AY389127 GTGCGGAGTAGGAAATTTACCAATATCATCCAGGATTTTGGGGGTCGCGC * ********* ******* *************** *** ********* BDTV5 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC 600 RNLA CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC RNBT CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC 60 BDTN CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC BXDTV CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC BDQ96 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCC AY389121 CACTTCTCTTAAGAGCTTCATCAGAGGTCAAAACACTGATGGCCACGGCC AY389133 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAAACACTGATGGCCACGGCC SCLLLA CACTTTTCTTAGGAGCTTCATCAGCGGTCAAGAAACTGATGGCCACGGCC AY389128 CACTTTTCTTAGGAGCTTCATCAGCGGTCAAGAAACTGATGGCCACGGCC AY389132 CACTTTTCTTAGGAGCTTCATCAGCGGTCAAGAAACTGATGGCCACGGGC AY389119 CACTCTTCTTAAGAGCTTCATCAACGGTCAAAACAGTGACGGCCACGGCC AY389123 CACTCTTCTTAAGAGCTTCATCAACGGTCAAAACAGTGACGCCCACGCCC AY389126 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAACGGTCAAAACAGTGACGGCCACGGCC AY389122 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAAACAGTGATGGCCACGGCC AY389129 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAAACAGTGATGGCCACGGGC AY389127 CACTTTTCTTAAGAGCTTCATCAGCGGTCAAAACAGTGATGGCCACGGCC **** ***** *********** ****** * *** * ***** * BDTV5 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC 650 RNLA ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC RNBT ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC BDTN ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC BXDTV ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC BDQ96 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCC AY389121 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGACCTACGGTGTTGCC AY389133 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAGAACTACGGTGTTGCC SCLLLA ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC AY389128 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC AY389132 ATGGGACTCGCTGCGCTGGTACCATGGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC AY389119 ATGGGACTCACTGCGCTGGAACCATTGGTAGCAAGACCTACGGTGTTGCC AY389123 ATGGGACTCACTGCGCTGGAACAATTGGTAGCCAGACCTACGGTGTTGCC AY389126 ATGGGACTCACTGCGCTGGAACAATTGGTAGCAAGAACTACGGTGTTGCC AY389122 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC AY389129 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC AY389127 ATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTGGTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCC ********* ********* ** ** ****** * ************* 61 BDTV5 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG 700 RNLA AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG RNBT AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG BDTN AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG BXDTV AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG BDQ96 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389121 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389133 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG SCLLLA AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389128 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389132 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAGGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389119 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACGACCAGGGCAGTGG AY389123 CAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACGACCAGGGCAGTGG AY389126 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389122 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389129 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG AY389127 AAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACAACCAGGGCAGTGG ************************ ********** ************* BDTV5 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA 750 RNLA TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA RNBT TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA BDTN TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA BXDTV TCCTTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA BDQ96 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA AY389121 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA AY389133 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA SCLLLA TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCCAGTGACTCCA AY389128 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCCAGTGACTCCA AY389132 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCCAGTGACTCCA AY389119 TTCCTACTCCGGTATCATCGGTGGCATGGACTACGTTGCCAAGGACTCCA AY389123 TTCCTACTCCGGTATCATCGGTGGCATGGACTACGTTGCCAAGGACTCCA AY389126 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCCAAGGACTCCA AY389122 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA AY389129 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA AY389127 TTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACTCCA ******************* ******************* ******* 62 BDTV5 AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT 800 RNLA AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT RNBT AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT BDTN AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT BXDTV AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT BDQ96 AGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389121 AGACCCGCGGCTGCCCCAACGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389133 AGACCCGCGGCTGCCCCAACGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT SCLLLA AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389128 AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389132 AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389119 AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389123 AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389126 AGACCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389122 AGACCCGCGGCTGCCCTAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389129 AGACCCGCGGCTGCCCTAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT AY389127 AGACCCGCGGCTGCCCTAAAGGCGCCATTGCTTCCATGAGCCTGGGAGGT *** ************ ** ****************************** BDTV5 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG 850 RNLA GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG RNBT GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG BDTN GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG BXDTV GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG BDQ96 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389121 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389133 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG SCLLLA GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTGAATTCTGG AY389128 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTGAATTCTGG AY389132 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTGAATTCGGG AY389119 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389123 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389126 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389122 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389129 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG AY389127 GGCTACTCGGCGTCCGTCAACCAAGGTGCTGCTGCTTTGGTCAATTCTGG ***************************************** ***** ** 63 BDTV5 TGTCTTCCTGTCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA 900 RNLA TGTCTTCCTGTCCGTCGCCGCCGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA RNBT TGTCTTCCTGGCCGTCGCCGCCGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA BDTN TGTATTCCTGGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA BXDTV TGTATTCCTGGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA BDQ96 TGTCTTCCTGGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389121 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389133 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA SCLLLA TGTATTCCTGGCCGTCGCCGCCGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389128 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389132 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389119 TGTCTTCGTTGCCGTCGCCGCTGGCAATGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389123 TGTCTTCGTTGCCGTCGCCGCTGGCAATGATGACCGGGATGCCCAGAACA AY389126 TGTCTTCCTCGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389122 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389129 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA AY389127 TGTCTTCCTTGCCGTCGCCGCTGGCAACGATAACCGGGATGCCCAGAACA *** *** * ********** ***** *** ****************** BDTV5 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCATGCACTGTTGGTGCCTGTGCGGAA 950 RNLA CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCATGCACTGTTGGTGCCTGTGCGGAA RNBT CCTCTGCCGCTTCCGAGCCTTTTGCGTGCATTGTTGGTGCCTTTGCGGAA BDTN CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTTTGCCTGCACTGTTGGTGCCTCTGCGGAA BXDTV CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTTTGCCTGCACTGTTGGTGCCTCTGCGGAA BDQ96 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTTTGCCTGCACTGTTGGTGCCTCTGCGGAA AY389121 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACTGTTGGTGCCTCTGCGGAA AY389133 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACTGTTGGTGCCTCTGCGGAA SCLLLA CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCATGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389128 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389132 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389119 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTACTGTCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389123 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTACTGTCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389126 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTACTGCCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389122 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGTCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389129 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACTGTTGGTGCCACTGATTCA AY389127 CCTCTCCCGCTTCCGAGCCTTCTGCCTGCACCGTTGGTGCCACTGATTCA ***** ************** ** **** ********* ** * 64 BDTV5 AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT 1000 RNLA AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT RNBT AATGACAGCAGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT BDTN AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT BXDTV AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT BDQ96 AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCAAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT AY389121 AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCCAACTACGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389133 AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCCAACTACGGCAGAGTTGTCGATATTTT SCLLLA AGTGACAGACGATCTTCCTTCTCCAACTTCGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389128 AGTGACAGACGATCTTCCTTCTCCAACTTCGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389132 AGTGACAGACGATCTTCCTTCTCCAACTTCGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389119 AGTGACAGACGATCTTCCTTCTCCAACTTCGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389123 AGTGACAGACGATCTTCCTTCTCCAACTTCGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389126 GGTGACAACCGATCTTCTTTCTCCAACTACGGCAGAGTTGTCGATATTTT AY389122 AATGACAACCGATCTTCCTTCTCCAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT AY389129 AATGACAACCGATCTTCCTTCTCCAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT AY389127 AATGACAGCCGATCTTCCTTCTCCAACTACGGCAAAGTTGTCGATATTTT ***** ******* ***** **** ***** *************** BDTV5 CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCCCACCTGGATTGGCGCCCGCACAGTA 1050 RNLA CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGCCCGCACAGTA RNBT CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGGCCGCACAGTA BDTN CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGGCCGCACAGTA BXDTV CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGGCCGCACAGTA BDQ96 CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGGCCGCACAGTA AY389121 CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCCGCACAGTA AY389133 CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCCGCACAGTA SCLLLA CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGCGGCAGCACTGTA AY389128 CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA AY389132 CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA AY389119 CGCTCCTGGTACCGGTATTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGCCAGCACTGTA AY389123 CGCTCCTGGTACCGGTATTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA AY389126 CGCTCCTGGTAGCAATGTTCTCTCC-ACCTGGATTAATGGTGGCACCGTA AY389122 CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA AY389129 CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA AY389127 CGCTCCTGGTACCGGTGTTCTTTCC-ACCTGGATTGGTGGCAGCACTGTA *********** * * **** *** ********* * **** *** 65 BDTV5 AGTAAT -CGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC 1100 RNLA AGTAAT -CGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC RNBT AGTAAT -CGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC BDTN AGTAAT -TGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC BXDTV AGTAAT -TGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC BDQ96 AGTAAT -TGTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC AY389121 AGTATT GTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC AY389133 AGTATT GTACCTCGATAAGCTCGGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC SCLLLA AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC AY389128 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC AY389132 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC AY389119 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACACGCTTTTGCTTCAGAAC AY389123 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACACGCTTTTGCTTCAGAAC AY389126 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTCAGAGACACGCTTTTGCTTCAGCAC AY389122 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC AY389129 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC AY389127 AGTATTGTACCTACCTCGATAAGCTTAGAGACAGGCTTTTGCTTCAGAAC **** * ************** ****** ************* ** BDTV5 CAGCTCTAACAAGGTT 1150 RNLA CAGCTCTAACAAGGTT RNBT CAGCTCTAACAAGGTT BDTN CAGCTCTAACAAGGTT BXDTV CAGCTCTAACAAGGTT BDQ96 CAGCTCTAACAAGGTT AY389121 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACTCCATCTCTGGTACCTCCATGGCTACTC AY389133 CAGCTCTAACAAGGATTAGAACACCATCTCTGGTACCTCCATGGCTACTC SCLLLA CAGCTCTAACAAGGTT AY389128 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACACCATCTCTGGTACCTCCATGGCTACTC AY389132 CAGCTCTAACAAGGTTCAGAACACCATCTCTGGTACCTCCATGGCTACTC AY389119 CAGCTCTAACAAGATTTAGAACACCATCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC AY389123 CAGCTCTAACAAGATTTAGAACACCATCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC AY389126 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACTCCATCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC AY389122 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACACCATCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC AY389129 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACACCATCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC AY389127 CAGCTCTAACAAGGTTTAGAACACCTTCTCTGGCACCTCCATGGCTACTC ************* * 66 Dấu * thể tƣơng đờng, trình tự đƣợc gạch chân thể khác biệt giữa các dòng Metarhizium anisopliae nƣớc so với các dòng thế giới Trình tự tơ đậm thể hiê ̣n sƣ̣ khác biệt giữa các dịng có đột biến so với những dịng khác nƣớc ... n? ?m Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNAITS “ 1.2 M? ??c ti? ?u y? ?u c? ?u đề tài 1.2.1 .M? ??c ti? ?u Nghiên cƣ? ?u sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae. .. thuộc nh? ?m này 35 Nh? ?m II: Dịng n? ?m Metarhizium anisopliae var acridum Nh? ?m II: Dịng n? ?m Metarhizium anisopliae var lepidiotum Hầ u hế t nhƣ̃ng dòng nấ m Metarhizium anisopliae var anisopliae. .. quan tới tính độc (gen Pr1 )và vùng rDNA-ITS n? ?m Metarhizium anisopliae Nghiên c? ?u đa dạng di truyền n? ?m Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự vùng rDNA-ITS và gen Pr1 3.4 Phƣơng pháp nghiên