ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG LAN RƢ̀ NG Dendrobium THU THẬP TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÀ RƢ̀ NG NAM CÁT TIÊN BẰNG KỸ THUÂṬ RAPD

Hoa lan là một trong những sản phẩm đặc thù của ngành nông nghiệp đô thị, không những góp phần tích cực vào việc nâng cao hiệu quả sử dụng lao động, đất, nƣớc và các nguồn lực khác, mà còn làm cho chất lƣợng môi trƣờng sống ngày càng mỹ quan hơn. Vì vậy phát triển hoa lan là một xu thế trong sản xuất nông nghiệp ở các đô thị hiện nay và ngay cả trong tƣơng lai. Với khí hậu nhiệt đới, Việt Nam nói chung và Thành phố Hồ Chí Minh, Nam Cát Tiên nói riêng có nhiều điều kiện tự nhiên thích hợp với việc phát triển nhiều loại phong lan, địa lan, đặc biệt là giống Dendrobium. Lan Dendrobium không nhƣ̃ng đẹp mà còn có giá trị cao về mặt kinh tế. Bên cạnh việc nhập nội, lai tạo, nhân giống các giống mới, chúng ta còn sở hữu nhiều nguồn gen quý hiếm, độc đáo, mới lạ của giống lan rƣ̀ng Dendrobium. Do hiện nay, các giống lan rừng vẫn chƣa đƣợc quan tâm nhiều trong xã hội, nên tiềm năng phát triển của giống lan rƣ̀ng Dendrobium vẫn chƣa đƣợc khai thác triệt để. Vì vậy, trƣớc hết chúng ta cần phải tiến hành khảo sát tính đa dạng di truyền các giống lan rƣ̀ng Dendrobium giƣ̃a các địa phƣơng, trên cơ sở đó thực hiện có hiệu quả việc nhân và tạo giống mới, đồng thời xây dựng các định hƣớng về kiểm tra, quản lý và bảo vệ nguồn gen giống lan Dendrobium trong nƣớc. Để nghiên cứu đa dạng di truyền, trên thế giới hiện có nhiều phƣơng pháp khác nhau: phƣơng pháp sử dụng các chỉ thị hình thái, chỉ thị isozyme hay chỉ thị phân tử (RFLP, AFLP, RAPD, SSR). Tùy vào đối tƣợng, điều kiện và mục đích nghiên cứu mà ngƣời ta lựa chọn phƣơng pháp phù hợp nhất. Trong đề tài này chúng tôi tiến hành nghiên cứu tính đa dạng về di truyền của giống lan rƣ̀ng Dendrobium bằng kỹ thuật RAPD vì đây là kỹ thuật đơn giản, cho kết quả nhanh, và đặc biệt là không cần phải biết trƣớc trình tự bộ gen của đối tƣợng

           Dendrobium T      H           2007                Dendrobium T      H         2007   TS.    CN.        iii           : -  -                      -            : -  - TS.  -             ,                      .         TP. HCM             ,  Nai      .     , ,          .          iv    ,      .   , 9/2007.     Dendrobium                        : TS.   , TS. , CN.     .       :            ,          .         ,     ,          Dendrobium. Dendrobium     ,  ,   . ,                  Dendrobium,    ,     ,       .                            h cao.     ,              .     ,          10   Dendrobium     c Version 2.1 Winboot.                              . 6    : OPAC10, OPAH13, 0PB01, OPB08, S1384, U693                    .     , x        10    Dendrobium.                  ,   h 5 0.39  0.79. v SUMMARY Genetic diversity analysis of wild Dendrobium stem at Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest by RAPD Supervisor: Tran Thi Dung 1 , PhD; Vo Thai Dan 2 , PhD; Luu Phuc Loi 1 , BSc Student: Truong Minh Dung 1 1 Department of Biotechnology, Nong Lam university, Ho Chi Minh city 2 Faculty of Agriculture, Nong Lam university, Ho Chi Minh city To analysis the genetic diversity of wild Dendrobium orchid, six decamers were used for 10 wild Dendrobium species, collected from Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest (Dong Nai province). Collecting 10 species from Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest (Dong Nai province), optimizing of protocols for DNA extraction and purification, constructing of protocol for RAPD, analyzing the genetic of 10 wild Dendrobium species by RAPD and constructing the dendrogram by NTSYSpc 2.1 software, Winboot program are the objective of the study. Methods - To identify 10 wild Dendrobium species with genotype. - Extraction of total DNA from fresh tissue of 10 wild Dendrobium species. - Six random primer: OPAC10, OPAH13, OPB01, OPB08, S1384, U693 were used to analysis of genetic diversity. - Following RAPD reactions, dendrogram were constructed by NTSYSpc 2.1 and Winboot program. Conclusion Six decamers are enough to compare the identity of all samples. We could use those primers to establish the methodology to perform genetic comparisons in Vietnam. Besides, the genetic diversity among 10 wild Dendrobium species were established to support the breeder overcome difficulties in plant salection. vi   Trang       iii   . iv SUMMARY . v  . vi          . ix        x         x        xi 1.      . 1 1.1.  . 2 1.2.    ung     2 2.        3 Dendrobium 3  . 3 Dendrobium 5  6   8  . 11  11  14  . 14 2.3.2.2. Primer . 14 2.3.2.3. dNTP . 16 2.3.2.4. MgCl2 . 17 2.3.2.5. Taq 17 vii 2.3.5.6. Buffer 17    . 18  18  18  . 18  . 19   19 2.5.           Winboot 26 2.5.1. NTSYSpc version 2.1 26 2.5.2. Winboot . 28 2.6 . 29 2.6.1.  29 2.6.2. nh h 31 3.              32  . 32  32 3.1.2  . 32  32 Dendrobium  . 32 3.2.2. T-  . 34  34  36  36  . 36 -  . 45 4.1.         Dendrobium                          45 viii 4.2.                          . 48 4.3.                 . 53 4.4.         10   Dendrobium d  54 4.5.         10   Dendrobium b 2.1 Winboot 60   -  69 5.1.    . 69 5.2.   70  . 71  ix               AFLP: Amplified Fragment Length Polymorphism bp: base pair CTAB: Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA: Deoxyribonucleic acid dNTP: Deoxyribonucleotide triphosphate EB: extraction buffer EDTA: Ethylene Diamine Tetra acetic Acid mM: milimolar (milimol/lite) NCT:    OD: Optical density PCR: Polymerase Chain Reaction pmol: Picomol RAPD: Random Amplified Polymorphic DNA RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism RNA: Ribonucleic acid Rnase: Ribonuclease SSR: Simple Sequence Repeat Ta : Annealing t TAE: Tris  Acetate  EDTA TE: Tris  EDTA  TP. HCM:   UPGMA: Unweighted Pair Group Method with Arithmetic VNTR: variable number tandem repeat x         Trang  11  34   . 37  . 40  42  42 4.1.               Dendrobium 46 4.2.              Dendrobium . 47 B       50 4.4.   (ng/)  51  . 53  . 53  . 55 Dendrobium thu      62            Trang  3 qu 50  . 51 . Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest by RAPD Supervisor: Tran Thi Dung 1 , PhD; Vo Thai Dan 2 , PhD; Luu Phuc Loi 1 , BSc Student: Truong Minh Dung 1. Biotechnology, Nong Lam university, Ho Chi Minh city 2 Faculty of Agriculture, Nong Lam university, Ho Chi Minh city To analysis the genetic diversity