Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn và kháng nấm của cây cốt khí củ (Polygonum Cuspidatum Sieb. ET Zucc - Polygonaceae)

Bệnh lý về nhiễm trùng ngày một thay đổi do các vi sinh vật biến đổi theo hướng bất lợi. Tình trạng kháng kháng sinh là vấn đề của y tế toàn cầu hiện nay. Vì vậy, việc đi tìm những loại kháng sinh mới thực sự cần thiết. Xuất phát từ vấn đề trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu “KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB. ET ZUCC - POLYGONACEAE”. Đối tượng nghiên cứu: Rễ của cây cốt khí củ, tên khoa học Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc họ Polygonaceae. Phương pháp nghiên cứu: Chiết xuất cao với dung môi ethanol 80 % (TT). Khảo sát khả năng kháng vi sinh vật bằng phương pháp khuếch tán giếng thạch và đánh giá MIC trên các chủng vi khuẩn thử nghiệm. Xác định vết cho hoạt tính kháng khuẩn bằng kỹ thuật hiện hình sinh học.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÙI THỊ PHƯƠNG THẢO KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ (POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB ET ZUCC - POLYGONACEAE) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC TPHCM - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÙI THỊ PHƯƠNG THẢO KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ ( POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB ET ZUCC - POLYGONACEAE) Chuyên ngành : Sản xuất phát triển thuốc KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn Thị Hồng Phúc TPHCM - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Chữ ký sinh viên SV BÙI THỊ PHƯƠNG THẢO LỜI CẢM ƠN Quãng thời gian đại học năm khoa Dược trường Đại học Nguyễn Tất Thành để lại nhiều kỉ niệm đẹp thầy cô bạn bè Một chặng đường dài nổ lực cố gắng chúng bạn, may mắn thay chặng đường cuối tơi thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Để khóa luận tơi hồn thành khơng cố gắng thân mà cịn có nhiều giúp đỡ động viên từ gia đình, thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên bạn bè Xin gửi ngàn lời cảm ơn tới ba mẹ sinh thành cho sống thật tốt, cảm ơn anh chị yêu thương em Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô ThS Nguyễn Thị Hồng Phúc Cô PGS TS Võ Thị Bạch Huệ Cô TS Nguyễn Hữu Lạc Thủy tận tình dẫn giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn thầy DS Phan Cảnh Trình, anh (chị) bạn môn Vi sinh – Ký sinh khoa Dược – ĐH Y Dược Tp HCM hướng dẫn giúp đỡ em thời gian làm việc Cảm ơn tất Thầy, Cô Anh, Chị kỹ thuật viên khoa Dược – Trường ĐH Nguyễn Tất Thành, đặc biệt thầy Đoàn Phú Quý, chị Trần Hà Linh kỹ thuật viên môn Kiểm nghiệm tạo điều kiện cho em thực đề tài Cảm ơn tất bạn bè tôi, người đồng hành năm qua người bạn làm đề tài khóa luận tốt nghiệp niên khóa 2013 – 2018 MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH iv DANH MỤC CÁC BẢNG v ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan dược liệu .3 1.1.1 Vị trí phân loại, hình thái phân bố 1.1.2 Bộ phận dùng công dụng dân gian 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Hoạt tính sinh học 1.2 Công trình nghiên cứu ngồi nước hoạt tính kháng vi sinh vật rễ cốt khí củ .9 1.3 Tình hình bệnh nhiễm trùng thuốc điều trị 10 1.3.1 Tình hình bệnh nhiễm vi khuẩn thuốc điều trị 10 1.3.2 Tình hình bệnh nhiễm vi nấm thuốc điều trị 11 1.4 Tổng quan vi khuẩn vi nấm gây bệnh người 12 1.4.1 Escherichia coli 12 1.4.2 Pseudomonas aeruginosa 13 1.4.3 Staphylococcus aureus 13 1.4.4 Candida albicans 14 1.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật 15 1.5.1 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật 15 1.5.2 Xác định giá trị MIC 15 1.5.3 Kỹ thuật hình sinh học 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 i 2.1.2 Vi sinh vật thử nghiệm 16 2.1.3 Môi trường nuôi cấy thử hoạt tính kháng vi sinh vật 16 2.1.4 Hóa chất, dung mơi 17 2.1.5 Dụng cụ, trang thiết bị 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Khảo sát sơ thực vật học rễ cốt khí củ 19 2.2.2 Lựa chọn dung mơi chiết xuất rễ cốt khí củ 21 2.2.3 Khảo sát việc chiết tách cao toàn phần tách phân đoạn với dung mơi có độ phân cực khác từ rễ cốt khí củ 21 2.2.4 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật rễ cốt khí củ 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Kết .26 3.1.1 Khảo sát thực vật học rễ cốt khí củ 26 3.1.2 Lựa chọn dung môi chiết xuất 29 3.1.3 Chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn 31 3.1.4 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật 31 3.2 Bàn luận 38 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 4.1 Kết luận 40 4.2 Kiến nghị 40 ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ tiếng Anh CHCl3 Chloroform ESBL Extended - spectrum beta – lactamases Chữ viết đầy đủ tiếng Việt Mở rộng phổ beta – lactamases EtOAc Ethyl acetat HBV Hepatitis B virus Virus viêm gan B ICU Intensive care unit Đơn vị hồi sức tích cực MBC Minimal bactericidal concentratiol Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MeOH Methanol MIC Minimal inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu Meticilline - resistant Staphylococcus aureus kháng Staphylococcus aureus kháng sinh meticilline Meticilline - susceptible Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus nhạy với kháng sinh meticilline MRSA MSSA SKLM TI Sắc ký lớp mỏng Therapeutic index TT Chỉ số điều trị Thuốc thử WHO World Health Organization DMSO Dimethyl sulfoxide DĐVN Tổ chức y tế giới Dược điển Việt Nam OD Optic density Mật độ quang học CFU Colony forming unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc Human immunodeficiency virus Hội chứng suy giảm miễn dịch infection mắc phải người HIV iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Sơ đồ phân loại thực vật cốt khí củ .3 Hình 1.2 Tồn (A), hoa (B), rễ (C) cốt khí củ Hình 1.3 Cấu trúc hóa học emodin, chrysophanol physion Hình 1.4 Cấu trúc chất thuộc nhóm stilbenoids có hoạt tính kháng virus Hình 1.5 Escherichia coli 12 Hình 1.6 Pseudomonas aeruginosa 13 Hình 1.7 Staphylococcus aureus .13 Hình 1.8 Candida albicans .14 Hình 2.1 Sơ đồ phân tích nhóm hợp chất dịch chiết cồn 20 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn .22 Hình 3.1 Rễ cốt khí củ .26 Hình 3.2 Soi bột rễ cốt khí củ 27 Hình 3.3 Phản ứng hóa học định tính alkaloid, coumarin tanin 28 Hình 3.4 Phản ứng hóa học định tính anthranoid, saponin, chất khử acid hữu 28 Hình 3.5 Sắc ký đồ hệ dung môi Toluen - EtOAc (93:7) 29 Hình 3.6 Sắc ký đồ hệ dung mơi CHCl3 - EtOAc (11:1) 30 Hình 3.7 Sắc ký đồ hệ dung môi MeOH - EtOAc - H2O (13,5:100:10) 30 Hình 3.8 Kết vòng kháng khuẩn MSSA .32 Hình 3.9 Kết vịng kháng khuẩn MRSA 33 Hình 3.10 Kết vòng kháng khuẩn C albicans 33 Hình 3.11 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn n - hexan 36 Hình 3.12 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn chloroform 36 Hình 3.13 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn ethyl acetat 37 Hình 3.14 Sắc ký lớp mỏng cao toàn phần, n - hexan, chloroform, ethyl acetat cao nước 37 iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các chất phân lập từ Cốt khí củ Bảng 2.1 Các vi si sinh vật thử nghiệm 16 Bảng 2.2 Hóa chất, dung mơi 17 Bảng 2.3 Trang thiết bị sử dụng 18 Bảng 2.4 Bảng đối chiếu đường kính vịng kháng vi sinh vật 24 Bảng 3.1 Kết khảo sát thành phần hóa học rễ cốt khí củ 27 Bảng 3.2 Khối lượng cao toàn phần cao phân đoạn .31 Bảng 3.3 Đường kính vịng ức chế vi sinh vật cao toàn phần cao phân đoạn (mm) 34 Bảng 3.4 Kết MIC cao toàn phần cao phân đoạn vi khuẩn MSSA MRSA (mg/ml) 35 Bảng 3.5 Bảng kết giá trị Rf .37 v Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học - Năm học 2017 – 2018 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ (POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB ET ZUCC - POLYGONACEAE) Bùi Thị Phương Thảo Hướng dẫn khoa học: ThS Nguyễn Thị Hồng Phúc Mở đầu: Bệnh lý nhiễm trùng ngày thay đổi vi sinh vật biến đổi theo hướng bất lợi Tình trạng kháng kháng sinh vấn đề y tế tồn cầu Vì vậy, việc tìm loại kháng sinh thực cần thiết Xuất phát từ vấn đề tiến hành nghiên cứu “KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB ET ZUCC - POLYGONACEAE” Đối tượng nghiên cứu: Rễ cốt khí củ, tên khoa học Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc họ Polygonaceae Phương pháp nghiên cứu: Chiết xuất cao với dung môi ethanol 80 % (TT) Khảo sát khả kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán giếng thạch đánh giá MIC chủng vi khuẩn thử nghiệm Xác định vết cho hoạt tính kháng khuẩn kỹ thuật hình sinh học Kết quả: Cao toàn phần cao phân đoạn cho khả kháng tốt chủng MSSA, MRSA C albicans, với MIC từ 0,45 – 4,55 mg/ml Cao phân đoạn n – hexan chloroform cho nồng độ MIC thấp hai chủng vi khuẩn MSSA MRSA (MIC = 0,45 mg/ml) Bằng kỹ thuật hình sinh học xác định vết số (Rf = 0,80) sắc ký đồ cho khả kháng MSSA Kết luận: Cao toàn phần cao phân đoạn rễ cốt khí củ có tiềm lớn việc tìm ứng dụng điều trị chống lại chủng vi sinh vật đề kháng thuốc Từ khóa: Cốt khí củ, dịch chiết cồn, cao phân đoạn, kháng vi khuẩn, kháng vi nấm 3.1.3 Chiết xuất cao toàn phần cao phân đoạn 3.1.3.1 Chiết xuất cao tồn phần Từ kg bột rễ cốt khí củ chiết phương pháp ngâm lạnh với ethanol 80 % (TT), lọc cô bếp cách thủy thu 127,69 g cao tồn phần, hiệu suất q trình chiết 12,77 % 3.1.3.2 Chiết xuất cao phân đoạn Xử lý sơ cao tồn phần theo quy trình sau: Cân 20 g cao tồn phần, hịa tan với 100 ml nước cất, tiến hành lắc phân bố với dung môi n – hexan tách làm hai phần dịch n – hexan (màu vàng) dịch nước (1) Phân đoạn n – hexan cô quay áp suất giảm thu cao phân đoạn (0,75 g) Dịch nước (1) tiếp tục lắc phân bố với chloroform thu dịch chloroform (màu vàng) phần dịch nước (2), phân đoạn chloroform cô quay áp suất giảm thu cao phân đoạn (0,99 g) Dịch nước (2) lắc với ethyl acetat thu dịch ethyl acetat (màu cam) dịch nước (3), phân đoạn ethyl acetat cô quay áp suất giảm thu cao phân đoạn (3,56 g) Dịch nước (3) cô bếp cách thủy thu cao nước (5,06 g) Khối lượng cao phân đoạn trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Khối lượng cao toàn phần cao phân đoạn Phân đoạn Khối lượng (g) Cao toàn phần 20,00 Hiệu suất (%) Ethyl Cao nước n-hexan Chloroform 0,75 0,99 3,56 5,06 3,75 4,95 17,80 10,12 acetat 3.1.4 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật 3.1.4.1 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Trộn 100 mg cao toàn phần cao phân đoạn ml DMSO 10 % (TT) để dung dịch thử có nồng độ 100 mg/ml Cho vào giếng 100 μl dung dịch chất kháng khuẩn, xác định hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Cao toàn phần cao phân đoạn khảo sát tác động kháng vi sinh vật 31 vi khuẩn vi nấm phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Kết cho thấy, cao toàn phần cao phân đoạn n – hexan, chloroform cho tín hiệu kháng khuẩn mạnh chủng vi khuẩn MSSA, MRSA nấm mem C albicans Trong phân đoạn n – hexan cho tín hiệu kháng tốt chủng MSSA (22,93 mm) C albicans (27,32 mm), phân đoạn chloroform lại tốt chủng MRSA (18,93 mm) Cao ethyl acetat cho khả kháng khuẩn mạnh chủng vi khuẩn MSSA (19,75 mm) MRSA (19,28 mm), lại có vịng kháng khuẩn vừa C albicans (13,41 mm) Cao nước cho vòng kháng khuẩn với mức độ kháng vừa với MSSA (14,95 mm) mạnh với MRSA (15,62 mm) Cao tồn phần cao phân đoạn khơng cho khả kháng khuẩn chủng vi khuẩn Gram âm Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Chứng âm DMSO 10 % (TT) khơng cho vịng kháng khuẩn Ghi chú: (1) Cao toàn phần (4) Cao ethyl acetat (2) Cao n – hexan (5) Cao nước (3) Cao chloroform (6) Chứng âm DMSO 10 % (TT) 1 6 4 Hình 3.8 Kết vòng kháng khuẩn MSSA 32 6 1 Hình 3.9 Kết vịng kháng khuẩn MRSA 1 5 6 4 Hình 3.10 Kết vòng kháng khuẩn C albicans 33 Bảng 3.3 Đường kính vịng ức chế vi sinh vật cao toàn phần cao phân đoạn (mm) Vi khuẩn Vi nấm Cao MSSA MRSA Ec Pa Ca TP 19,86 17,31 - - 16,98 n-hex 22,93 18,92 - - 27,32 CHCl3 18,45 18,93 - - 17,27 EtOAc 19,75 19,28 - - 13,41 CN 14,95 15,62 - - - Chứng âm - - - - - Ghi chú: Ec: Escherichia coli (TP): Cao toàn phần Pa: Pseudomonas aeruginosa (n – hex): Cao phân đoạn n – hexan Ca: Candida albicans (CHCl3): Cao phân đoạn chloroform (-): Không xác định (CN): Cao nước 3.1.4.2 Xác định nồng độ tối thiểu ức chế vi sinh vật Để đánh giá xác hoạt tính kháng vi sinh vật cao tồn phần cao phân đoạn rễ cốt khí củ, tiến hành xác định giá trị MIC chủng vi khuẩn MSSA MRSA Từ kết bảng 3.4, cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu cao n – hexan cao chloroform chủng vi khuẩn MSSA, MRSA 0,45 mg/ml Khả kháng vi khuẩn MSSA, MRSA cao ethyl acetat vơi MIC 0,91 mg/ml thấp so với cao n – hexan cao chloroform Cao toàn phần có MIC 1,14 mg/ml cao nước có MIC 4,55 mg/ml 34 Bảng 3.4 Kết MIC cao toàn phần cao phân đoạn vi khuẩn MSSA MRSA (mg/ml) Cao Vi khuẩn MSSA MRSA TP 1,14 1,14 n-hex 0,45 0,45 CHCl3 0,45 0,45 EtOAc 0,91 0,91 CN 4,55 4,55 Ghi chú: (TP): Cao toàn phần (CHCl3): Cao phân đoạn chloroform (n – hex): Cao phân đoạn n – hexan (CN): Cao nước 3.1.4.3 Xác định chất có hoạt tính kháng vi sinh vật kỹ thuật tự sinh đồ Cao phân đoạn n – hexan, chloroform ethyl acetat hòa tan dung môi chloroform, đưa lên mỏng silicagel 60 F254, khai triển hệ dung môi CHCl3 - EtOAc (11:1), sau phát cách soi UV bước sóng 254 nm Bằng kỹ thuật hình sinh học đối tượng MSSA, phát vết có hoạt tính kháng vi sinh vật, thể hình 3.11, 3.12 3.13 Khi phát vết sắc ký đồ cách soi UV bước sóng 254 nm, có tất vết đánh số từ đến hình 3.14 Giá trị Rf vết trình bày bảng 3.5 Với phân đoạn n – hexan: Kết tự sinh đồ cho thấy vết số (Rf = 0,80) cho vòng kháng khuẩn Với phân đoạn ethyl acetat: Kết tự sinh đồ cho thấy vết số (Rf = 0,80) cho vòng kháng khuẩn Dựa kết tự sinh đồ cao phân đoạn n – hexan, cao chloroform cao ethyl acetat, có cao phân đoạn n – hexan cao ethyl acetat cho vết kháng MSSA Khi so với sắc ký đồ cao cho vết số (Rf = 0,28) vết số (Rf = 0,78) 35 Riêng cao phân đoạn n – hexan cao ethyl acetat, có vết số (Rf = 0,80) Kết luận vết số (Rf = 0,80) sắc ký đồ cho hoạt tính kháng vi khuẩn MSSA Hình 3.11 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn n - hexan Hình 3.12 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn chloroform 36 Hình 3.13 Kết tự sinh đồ cao phân đoạn ethyl acetat TP n-hex CHCl3 Et CN Hình 3.14 Sắc ký lớp mỏng cao toàn phần, n - hexan, chloroform, ethyl acetat cao nước Bảng 3.5 Bảng kết giá trị Rf Vết số Rf Cao TP n-hex CHCl3 EtOAc 0,28 x x x x 0,65 x x 0,78 x x x x 0,80 x 37 x CN Ghi : (x) cho vết mỏng (TP): Cao toàn phần (n – hex): Cao phân đoạn n – hexan (CHCl3): Cao phân đoạn chloroform (CN): Cao nước 3.2 Bàn luận Dịch chiết cao ethanol 80 % (TT) tiến hành so sánh kết thử vi sinh vật với tài liệu tham khảo, nhận thấy cao tồn phần có đường kính vịng kháng khuẩn chủng MSSA (19,86 mm) nhỏ so với kết nghiên cứu dịch chiết cao methanol (TT) Bin Shan cộng (20,2 mm) [32] dịch chiết ethanol 96 % (TT) Pai We Soo có đường kính vòng kháng chủng MSSA ( 20 – 21 mm) [35] Cao phân đoạn n – hexan (22,93 mm) lớn kết Pai We Soo (17 – 20 mm), cao phân đoạn chloroform (18,45 mm) nhỏ so với Pai We Soo (17 – 20 mm) Đối với cao phân đoạn ethyl acetat (19,75 mm) nhỏ so với kết Pai We Soo (23 – 26 mm) Phân đoạn cao nước (14,95 mm) cao Pai We Soo (12 – 14 mm) Các chủng vi khuẩn gram âm E coli P aeruginosa dịch chiết cao ethanol 80 % (TT) cho kết âm tính, kết Bin Shan E coli ( 6,40 mm) Pai We Soo chủng P aeruginosa ( 11,50 mm) Dịch chiết cao toàn phần ethanol 80 % (TT) cho giá trị MIC 1,14 mg/ml lớn so với dịch chiết cao methanol (TT) Bin Shan (MIC = 0,31 mg/ml) [32] dịch chiết cao ethanol 96 % (TT) Pai We Soo (MIC = 0,38 mg/ml) Dựa kết đường kính vịng kháng khuẩn cho thấy cao n – hexan có khả kháng khuẩn tốt vi khuẩn MSSA (22,93 mm) nấm mem C albicans (27,32 mm), cao n – hexan cho giá trị MIC thấp MSSA (0,45 mg/ml) Vì vậy, chúng tơi cho cao phân đoạn n – hexan có tiềm cho việc phân lập chất tinh khiết cho hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm từ rễ cốt khí củ Kết tự sinh đồ cao n – hexan, cao chloroform cao ethyl acetat cho thấy khả kháng khuẩn kháng nấm rễ cốt khí củ khơng phải chất 38 cụ thể định tác dụng sinh học mà nhiều nhóm chất hỗ trợ Trong đó, cao phân đoạn n – hexan cho khả kháng vi sinh vật tốt chúng tơi nhận định nhóm chất phân cực dạng aglycon rễ cốt khí củ bao gồm: anthranoid, stilbenoids, flavonoid, coumarin bổ trợ lẫn tạo khả ức chế vi khuẩn MSSA, MRSA vi nấm C albicans 39 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau tháng thực hiện, đề tài hoàn thành mục tiêu đưa thu kết sau: Định tính sơ dược liệu rễ cốt khí củ:  Soi bột tìm cấu tử bột rễ cốt khí củ theo DĐVN V  Khảo sát sơ thành phần hóa học cho thấy rễ cốt khỉ củ có thành phần: Anthranoid, flavonoid, coumarin tanin Khảo sát để chọn dung môi chiết xuất: Kết chọn ethanol 80 % (TT) để chiết xuất cao tồn phần dung mơi (n – hexan, chloroform, ethyl acetat) để tách phân đoạn cao phân đoạn đơn giản Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm cao toàn phần cao phân đoạn n – hexan, chloroform, ethyl acetat cao nước rễ cốt khí củ Kết cho thấy cao phân đoạn n – hexan cho hoạt tính kháng khuẩn tốt chủng vi khuẩn MSSA nấm men C albicans Cao phân đoạn ethyl acetat cho hoạt tính kháng khuẩn tốt chủng vi khuẩn MRSA Xác định nồng độ tối thiếu ức chế vi sinh vật: Kết giá trị MIC cao toàn phần cao phân đoạn n – hexan, chloroform, ethyl acetat, cao nước chủng vi khuẩn MSSA MRSA là: 1,14 mg/ml, 0,45 mg/ml, 0,45 mg/ml, 0,91 mg/ml 4,55 mg/ml Cao n – hexan cho nồng độ kháng tốt (MIC = 0,45 mg/ml) Từ kết tự sinh đồ để xách định chất kháng vi sinh vật Kết phát vết số sắc ký đồ cho hoạt tính kháng chủng MSSA 4.2 Kiến nghị Kết nghiên cứu từ đề tài sở khoa học cho nghiên cứu dược liệu này: Mở rộng vùng dược liệu để đánh giá xác khả kháng vi sinh vật rễ cốt khí củ Tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao tồn phần rễ cốt khí củ Phân lập xác định cấu trúc chất cho hoạt tính kháng vi sinh vật rễ cốt khí củ Chiết tách tinh khiết hóa chất hóa học đạt tiêu chuẩn làm chất đối chiếu 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thanh Bảo (2008), Vi khuẩn học, Đại học Y Dược Tp.HCM Đỗ Huy Bích, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 1, NXB Khoa Học Kỹ Thuật tr 529-531 Bộ Y tế - Việt Nam phối hợp với Dự án Hợp tác toàn cầu kháng kháng sinh GARP Việt Nam Đơn vị Nghiên cứu Lâm sàng ĐH Oxford (2008-2009), "Báo cáo sử dụng kháng sinh kháng kháng sinh 15 bệnh viện " Bộ môn Vi sinh - Ký sinh trường Đại học Nguyễn Tất Thành (2015), Gíao Trình Thực Hành Vi Sinh Học, MIC, tr 28 - 29 GS.TS Lê Huy Chính (2007), Vi Sinh Vật Y Học, NXB Y Học, Hà Nội, tr 133 - 141, 165 - 175, 218 - 221, 142 - 147 Nguyễn Đức Độ, Võ Ngọc Thanh, Nguyễn Văn Băn, Phan Thanh Khiêm, Nguyễn Thị Tâm, Huỳnh Ngọc Thanh Tâm (2017), "Khảo sát đặc tính sinh hóa khả kháng khuẩn cao chiết từ môn (colocasia esculenta)", tạp chí khoa học & cơng nghệ nơng nghiệp", Tập 1(2), tr 265 274 Nguyễn Thu Gương, Nguyễn Vũ Giang Bắc, Lê Thị Lệ Uyên, Nguyễn Đinh Nga (2014), "Phân lập xác định cấu trúc hóa học hoạt chất kháng nấm có cao chiết từ trầu khơng", Y Học TP Hồ Chí Minh, Tập 18, tr 235 - 239 Nguyễn Nhị Hà, Phạm Hồng Nhung (2017), "Tình hình nhiễm nấm máu bệnh viện Bạch Mai từ tháng 1/2016 đến tháng 10/2016", Tạp chí nghiên cứu y học Nguyễn Thị Thanh Hà, Nguyễn Thanh Hải, Nguyễn Nam Phương, Nguyễn Văn Thanh (2017), "Tác dụng diệt khuẩn in vitro cao khô dịch chiết thảo dược vi khuẩn Staphylococcus spp Streptococcus spp phân lập từ dịch viêm tử cung bò", Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam, tr 876 - 884 10 Trần Thanh Hà (2014), "Nghiên cứu thành phần hóa học rễ cốt khí củ (Reynoutria japonica Houtt.) ", tr 4-5 11 Phạm Thị Nguyệt Hằng (2014),"Phân lập khảo sát hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn vi sinh vật nội sinh Muồng Trâu (Cassia alata L.)" 12 Vũ Ngọc Hiếu, Phạm Hồng Nhung (2017), "Mức độ kháng kháng sinh số vi khuẩn thường gặp gây nhiễm trùng da mô mềm bệnh nhân đái tháo đường phân lập bệnh viện Bạch Mai " 13 PGS TS Trần Hùng (2016), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đh Y Dược Tp Hồ Chí Minh, tr 29 - 31 14 Nguyễn Trần Giáng Hương (2003), "Nghiên cứu độc tính cấp số tác dụng dược lý cốt khí củ", Tạp chí y học thực hành, tr 35-38 15 Liêu Thùy Linh, Ngô Nguyễn Nhật Hà, Phan Thị Kim Liên, Trần Thị Minh Hà, Nguyễn Thúy Hương, Liêu Mỹ Đông (2017), "Khảo Sát Ảnh Hưởng Của Tinh Dầu Quế, Sả Chanh, Húng Quế, Bạc Hà Và Tác Dụng Kết Hợp Của Chúng Tới Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger", Tạp chí Khoa học Giáo dục, Trường Đại học Công Nghiệp Thực Phẩm Tp Hồ Chí Minh, tr 134 - 127 16 Hà Tuấn Minh, Lê Hữu Doanh (2016), "Mức độ nhạy cảm với kháng sinh chống nấm số chủng Candida gây bệnh miệng", Tạp chí nghiên cứu y học, tr 40-46 17 Đặng Thị Thanh Nhàn,Lê Thị Huyền (2017), "Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm tinh dầu kinh giới (Elsholtzia ciliata (Thunb.) Hyland.,)", Tạp chí Khoa học Giáo dục, Trường Đại học Sư phạm Huế, tr 85 - 91 18 Lê Văn Phủng (2012), Vi khuẩn y học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam 19 Respiratory Society Ho Chi Minh City, Hôị Lao Bệnh Phổi Việt Nam, Hội Hô Hấp Việt Nam, Bệnh Viện Chợ Rẫy (2017), "Hội nghị đề kháng kháng sinh viêm phổi cộng đồng viêm phổi bệnh viện lần thứ 4", tr 19, 23, 27, 64 - 66 20 Ngô Thu Vân,Trần Hùng (2011), Dược liệu học, tập 1, NXB Y HỌC, tr 339340 21 Mai Thị Yến,Võ Văn Lẹo (2011), Khảo sát thành phần hóa học cốt khí củ (Polygonum cuspidatum Sieb Et Zucc.), Tập 15 Tài liệu tiếng nước 22 Debby Bogaert, NT Ha, Marcel Sluijter, N Lemmens, Ronald de Groot,PWM Hermans (2002), "Molecular epidemiology of pneumococcal carriage among children with upper respiratory tract infections in Hanoi, Vietnam", Journal of clinical microbiology, 40(11), pp 3903-3908 23 Jung-San Chang, Hong-Wen Liu, Kuo-Chih Wang, Mei-Chun Chen, LienChai Chiang, Yi-Cheng Hua,Chun-Ching Lin (2005), "Ethanol extract of Polygonum cuspidatum inhibits hepatitis B virus in a stable HBV-producing cell line", Antiviral research, 66(1), pp 29-34 24 Irena M Choma, Edyta M Grzelak (2011), "Bioautography detection in thinlayer chromatography", Journal of Chromatography A, 1218(19), pp 26842691 25 Chin-Yuan Hsu, Yu-Pei Chan,Jeli Chang (2007), "Antioxidant activity of extract from Polygonum cuspidatum", Biological research, 40(1), pp 13-21 26 Hong-Wei Lin, Ming-Xue Sun, Yun-Hua Wang, Liu-Meng Yang, Ying-Ruo Yang, Ning Huang, Li-Jiang Xuan, Ya-Ming Xu, Dong-Lu Bai,Yong-Tang Zheng (2010), "Anti-HIV activities of the compounds isolated from Polygonum cuspidatum and Polygonum multiflorum", Planta medica, 76(09), pp 889-892 27 Yun-Wei Lin, Fu-Jung Yang, Chia-Ling Chen, Wei-Ting Lee, Ruey-Shyang Chen (2010), "Free radical scavenging activity and antiproliferative potential of Polygonum cuspidatum root extracts", Journal of natural medicines, 64(2), pp 146-152 28 Dinesh K Maheshwari (2010), Plant growth and health promoting bacteria, Springer Science & Business Media, pp 445 29 DN Muanza, BW Kim, KL Euler,L Williams (1994), "Antibacterial and antifungal activities of nine medicinal plants from Zaire", International Journal of Pharmacognosy, 32(4), pp 337-345 30 Chang Eun Park, Min-Jung Kim, Jong Hwa Lee, Byung-Il Min, Hyunsu Bae, Wonchae Choe, Sung-Soo Kim,Joohun Ha (2007), "Resveratrol stimulates glucose transport in C2C12 myotubes by activating AMP-activated protein kinase", Experimental & molecular medicine, 39(2), pp 222 31 Wei Peng, Rongxin Qin, Xiaoli Li, Hong Zhou (2013), "Botany, phytochemistry, pharmacology, and potential application of Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc.: a review", Journal of ethnopharmacology, 148(3), pp 729-745 32 Bin Shan, Yi-Zhong Cai, John D Brooks, Harold Corke (2008), "Antibacterial properties of Polygonum cuspidatum roots and their major bioactive constituents", Food Chemistry, 109(3), pp 530-537 33 J H Song, T C Yang, K W Chang, S K Han, H K Yi,J G Jeon (2007), "In vitro effects of a fraction separated from Polygonum cuspidatum root on the viability, in suspension and biofilms, and biofilm formation of mutans streptococci", J Ethnopharmacol, 112(3), pp 419-25 34 Jae-Hoon Song, Sook-In Jung, Kwan Soo Ko, Na Young Kim, Jun Seong Son, Hyun-Ha Chang, Hyun Kyun Ki, Won Sup Oh, Ji Yoeun Suh, Kyong Ran Peck (2004), "High prevalence of antimicrobial resistance among clinical Streptococcus pneumoniae isolates in Asia (an ANSORP study)", Antimicrobial agents and chemotherapy, 48(6), pp 2101-2107 35 Pai-Wei Su, Cheng-Hong Yang, Jyh-Ferng Yang, Pei-Yu Su, Li-Yeh Chuang (2015), "Antibacterial Activities and Antibacterial Mechanism of Polygonum cuspidatum Extracts against Nosocomial Drug-Resistant Pathogens", Molecules, 20(6), pp 11119-11130 36 Ying Xu, Zhichao Wang, Wenting You, Xiuhua Zhang, Shan Li, Philip A Barish, Matthew M Vernon, Xia Du, Gaowen Li, Jianchun Pan (2010), "Antidepressant-like effect of trans-resveratrol: involvement of serotonin and noradrenaline system", European neuropsychopharmacology, 20(6), pp 405413 37 Jung-Mi Yun, Alexander Chien, Ishwarlal Jialal, Sridevi Devaraj (2012), "Resveratrol up-regulates SIRT1 and inhibits cellular oxidative stress in the diabetic milieu: mechanistic insights", The Journal of nutritional biochemistry, 23(7), pp 699-705 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÙI THỊ PHƯƠNG THẢO KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN VÀ KHÁNG NẤM CỦA RỄ CÂY CỐT KHÍ CỦ ( POLYGONUM CUSPIDATUM SIEB ET ZUCC - POLYGONACEAE). .. nghiên cứu cốt khí củ, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm rễ cốt khí củ Polygonum cuspidatum Sieb Et Zucc - Polygonaceae” với mục tiêu cụ thể sau: Khảo sát thực... (mm) Vi khuẩn Vi nấm Cao MSSA MRSA Ec Pa Ca TP 19,86 17,31 - - 16,98 n-hex 22,93 18,92 - - 27,32 CHCl3 18,45 18,93 - - 17,27 EtOAc 19,75 19,28 - - 13,41 CN 14,95 15,62 - - - Chứng âm - - - - - Ghi