xây dựng phương pháp định lượng fenofibrat và acid fenofibric trong huyết tương chó phục vụ việc xác định các thông số dược động học viên nang fenofbrat 160mg

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ HUYỀN CHANG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG FENOFIBRAT VÀ ACID FENOFIBRIC TRONG HUYẾT TƢƠNG CHĨ PHỤC VỤ VIỆC XÁC ĐỊNH CÁC THƠNG SỐ DƢỢC ĐỘNG HỌC VIÊN NANG FENOFBRAT 160MG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ HUYỀN CHANG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG FENOFIBRAT VÀ ACID FENOFIBRIC TRONG HUYẾT TƢƠNG CHÓ PHỤC VỤ VIỆC XÁC ĐỊNH CÁC THÔNG SỐ DƢỢC ĐỘNG HỌC VIÊN NANG FENOFBRAT 160MG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Thuận HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Thuận – Bộ mơn Hóa dược, Trường đại học Dược Hà Nội người tận tình hướng dẫn, dành nhiều thời gian tâm huyết cho hoàn thành luận văn tốt nghiệp Nhân dịp muốn gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến ThS Trần Ngọc Bảo – Bộ môn Công Nghiệp Dược thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên mơn Hóa dược viện Cơng nghệ Dược phẩm Quốc gia quan tâm giúp đỡ tạo điều kiện để tơi thực đề tài Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu, phòng Quản lý đào tạo sau đại học thầy cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ trau dồi kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt trình học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè người dành cho ủng hộ,chia sẻ giúp đỡ tận tình Hà Nội, ngày 27 tháng 09 năm 2018 Học viên Phạm Thị Huyền Chang MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1.TỔNG QUAN 1.1 Fenofibrat acid fenofibric 1.1.1 Tính chất 1.1.2 Đặc điểm dược động học 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Chỉ định, chống định 1.1.5 Liều lượng cách dùng 1.1.6 Một số phương pháp định lượng fenofibrat, acid fenofibric huyết tương 1.2 Sơ lƣợc phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Nguyên tắc trình sắc ký 1.2.3 Cơ sở lý thuyết trình sắc ký 1.2.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 1.2.5 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc ký 11 1.3 Phƣơng pháp phân tích định lƣợng thuốc dịch sinh học 12 1.3.1 Kỹ thuật xử lý mẫu 13 1.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học 15 1.4 Sinh khả dụng 19 Chƣơng 2.ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1.Nguyên vật liệu, thiết bị đối tƣợng nghiên cứu 20 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.1.2 Nguyên vật liệu, dung mơi hóa chất 20 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 24 2.1.4 Động vật thí nghiệm 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.2.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 21 2.2.2 Xây dựng quy trình xử lý mẫu huyết tương 21 2.2.3 Thẩm định phương pháp 21 2.2.4 Ứng dụng xác định thông số DĐH viên nang fenofibrat 160mg 22 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng FB FA huyết tương chó 22 2.3.2 Ứng dụng xác định thông số dược động học 27 2.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 27 Chƣơng 3.KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Khảo sát xây dựng phƣơng pháp 29 3.2 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 32 3.2.1 Sự phù hợp hệ thống sắc ký 32 3.2.2 Độ chọn lọc - đặc hiệu 33 3.2.3 Độ nhiễm chéo 33 3.2.4.Tỷ lệ thu hồi 33 3.2.5 Đường chuẩn khoảng tuyến tính 34 3.2.6 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 36 3.2.7 Độ độ lặp lại 38 3.2.8 Độ ổn định 43 3.3 Xác định thông số DĐH viên nang fenofibrat 46 Chƣơng BÀN LUẬN 49 4.1 Về phƣơng pháp định lƣợng 49 4.2 Về ứng dụng xác định thông số DĐH 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 Kết luận 53 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Chú thích AN Chất phân tích AUC Diện tích đường cong ASEAN Hiệp hội nước Đông Nam Á Autosampler Hệ thống tiêm mẫu tự động C18 Octadecylsilan CV Hệ số biến thiên DĐVN IV Dược điển Việt Nam IV EMA Cơ quan quản lý dược phẩm Châu Âu EtOAc Ethyl acetat FA Acid fenofibric FB Fenofibrat FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Mỹ HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao HT Huyết tương IS Chuẩn nội LC-MS/MS Sắc ký lỏng khối phổ LLOQ Giới hạn định lượng LOD Giới hạn phát LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp MeOH Methanol MF Ảnh hưởng mẫu MQC Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình r Hệ số tương quan RSD Độ lệch chuẩn tương đối SD Độ lệch chuẩn SKD Sinh khả dụng SPE Chiết pha rắn Spic Diện tích pic TB Trung bình TĐSH Tương đương sinh học Tltk Tài liệu tham khảo tR Thời gian lưu giữ ULOQ Giới hạn định lượng UHPLC Sắc ký siêu hiệu cao WHO Tổ chức y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Các phương pháp định lượng acid fenofibric huyết tương Bảng 2.1 Danh mục chất chuẩn 20 Bảng 2.2 Danh mục thuốc thử 20 Bảng 2.3 Bảng nồng độ mẫu QC 23 Bảng 3.1 Chương trình gradient 31 Bảng 3.2 Kết phù hợp hệ thống 32 Bảng 3.3 Kết tỷ lệ thu hồi IS sau chiết 34 Bảng 3.4 Các giá trị sử dụng trọng số 34 Bảng 3.5 Kết khảo sát đường chuẩn FA 35 Bảng 3.6 Kết khảo sát đường chuẩn FB 36 Bảng 3.7 Kết xác định giới hạn định lượng FA 37 Bảng 3.8 Kết xác định giới hạn định lượng FB 38 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ đúng, độ lặp lại ngày FA 39 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ đúng, độ lặp lại ngày FB 40 Bảng 3.11 Kết xác định độ đúng, độ lặp lại khác ngày FA 40 Bảng 3.12 Kết xác định độ đúng, độ lặp lại khác ngày FB 42 Bảng 3.13 Độ ổn định thời gian ngắn nhiệt độ phòng 43 Bảng 3.14 Độ ổn định mẫu sau xử lý 44 Bảng 3.15 Độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kì đơng – rã 45 Bảng 3.16 Độ ổn định 30 ngày mẫu huyết tương 46 Bảng 3.17 Nồng độ FA huyết tương chó sau uống thuốc 47 Bảng 3.18 Thông số dược động học FA theo cá thể 47 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo acid fenofibric (FA) fenofibrat (FB) Hình 1.2 Sơ đồ máy HPLC Hình 3.1 Phổ xác định bước sóng hấp thụ FA FB 29 Hình 3.2 Sắc ký đồ thu chạy MeCN: đệm phosphat pH3 30 Hình 3.3 Sắc ký đồ thu chạy MeOH: đệm phosphat pH3 30 Hình 3.4 Sắc ký đồ thu chạy hệ MeOH: đệm phosphat pH3= 80: 20 30 Hình 3.5 Sắc ký đồ thu chạy hệ MeOH: đệm phosphat pH3= 90: 10 31 Hình 3.6 Sắc ký đồ chương trình gradient 31 Hình 3.7 Sắc ký đồ kiểm tra phù hợp hệ thống 32 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu LLOQ 33 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu trắng 33 Hình 3.10 Sắc ký đồ phát giới hạn phát FA 37 Hình 3.11 Sắc ký đồ phát giới hạn phát FB 28 Hình 3.12 Nồng độ trung bình FA huyết tương chó theo thời gian 48 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, lối sống đại làm cho bệnh lý tăng mỡ máu ngày trở nên phổ biến nguy gây biến chứng nguy hiểm bệnh lý tim mạch hay chứng gan nhiễm mỡ Sử dụng kết hợp thuốc với lối sống lành mạnh giúp trì số mỡ máu ngăn chặn nguy Các thuốc sử dụng phổ biến để điều trị bệnh nhóm dẫn xuất acid fibric nhóm statin Fenofibrat thuốc nhóm fibrat có hiệu lực điều trị cao, dùng thời gian dài an toàn kết hợp với thuốc hạ lipid máu khác nên bác sĩ sử dụng phổ biến để điều trị cho bệnh nhân Tuy nhiên, thuốc có độ tan nước dẫn tới sinh khả dụng thấp không ổn định Các tác dụng phụ hay gặp không nghiêm trọng xuất với tần suất cao gây khó chịu cho bệnh nhân Gần đây, nhiều nghiên cứu áp dụng kỹ thuật bào chế đại với mục đích tăng sinh khả dụng, giảm liều dùng hạn chế tác dụng không mong muốn thuốc Điều đặt yêu cầu trình nghiên cứu phát triển thuốc cần có phương pháp định lượng thuốc động vật giúp bước đầu thử tác dụng thuốc thông qua việc xác định thơng số dược động học Từ đưa hướng bào chế tiến đến nghiên cứu tác dụng đánh giá tương đương sinh học người tình nguyện Theo số tài liệu tham khảo hấp thu vào thể fenofibrat chuyển hóa thành acid fenofibric có hoạt tính, nhiên mục đích bào chế khác giải phóng chậm, giải phóng có kiểm sốt, tăng tốc độ hấp thu… nên trường hợp fenofibrat huyết tương chưa chuyển hóa Như nhằm phục vụ nhu cầu nghiên cứu dạng bào chế tiến hành thực đề tài : ‘‘Xây dựng phương pháp định lượng fenofibrat acid fenofibric huyết tương chó phục vụ việc xác định thơng số DĐH viên nang fenofibrat 160 miligam’’ PHỤ LỤC 3: SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU LLOQ, ULOQ, LQC, MQC, HQC PHỤ LỤC 4: SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU HUYẾT TƢƠNG CHÓ SỐ UỐNG VIÊN NANG FENOFIBRAT 160MG ... phục vụ việc xác định thông số DĐH viên nang fenofibrat 160 miligam’’ Với mục tiêu : Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng fenofibrat, acid fenofibric huyết tương chó Ứng dụng phương pháp xây. .. phương pháp 21 2.2.4 Ứng dụng xác định thông số DĐH viên nang fenofibrat 160mg 22 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng FB FA huyết tương chó. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ HUYỀN CHANG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG FENOFIBRAT VÀ ACID FENOFIBRIC TRONG HUYẾT TƢƠNG CHĨ PHỤC VỤ VIỆC XÁC ĐỊNH CÁC THƠNG SỐ DƢỢC