Thu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An Giang (Luận án tiến sĩ)

Thu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An GiangThu thập, tuyển chọn và nghiên cứu quy trình nuôi trồng hai loại nấm ăn và nấm dược liệu hoang dại từ vùng Thất Sơn, An Giang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ HỒ THỊ THU BA THU THẬP TU ỂN CHỌN VÀ NGHI N C U QU TR NH NU I TRỒNG H I OẠI NẤ N VÀ NẤ Ƣ C IỆU HO NG ẠI TỪ V NG THẤT SƠN N GI NG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã ngành: 94 20 2001 Cần Thơ 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ HỒ THỊ THU BA THU THẬP TU ỂN CHỌN VÀ NGHI N C U QU TR NH NU I TRỒNG H I OẠI NẤ N VÀ NẤ Ƣ C IỆU HO NG ẠI TỪ V NG THẤT SƠN N GI NG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã ngành: 94 20 201 CÁN BỘ HƢỚNG DẪN PGS TS TRẦN NH N TS I THỊ NG INH IỆU Cần Thơ 2019 LỜI CẢM TẠ Đầ Ngh Sinh Họ T ạo V K oa Sa Đại Họ ễ N a G o ứu Phát Triển Công H T Đạ ọ ầ ọ Xin chân thành c ầy PGS.TS Trầ N dẫn suốt th i gian thực hi n lu n án Dũ X Thành Hổ GS.TSKH Trịnh Tam Ki thức cần thi t kinh nghi ầy PGS.TS Phạm n tình truy ạt ki n Xin trân trọng c PGS.TS Nguyễ Vă T TS Ngôn, PGS.TS Nguyễn Hữu Hi báo suốt khóa học Ga N ạo ũ u ki Xin c e T N ọ Đ trình học t p ể N o ẫ o n tình ầy PGS.TS Nguyễ M ù T ị Minh Di PGS TS T T ọng ấp cho ki n thức quý ửi l i bi o n quý thầ ì ễn Thị T a e s Ga e ỡ T Đại Học An T ần Thu n, em ộng viên suốt Xin chân thành c a N ễ Vă ì Ha (V Đ Dựng), anh Ẩ … ất nhi u bà Núi Cấ N D ỗ trợ ỡ mang thầy trò chúng tơi suốt th i gian tìm ki m loài nấm m i Đặc bi ũ a n lý Núi Cấ ễn phí hồn tồn vé vào cổng cho thầy trò chúng tơi suốt bố ă a Xin trân trọng c ất c Cần Thơ, ngày 14 tháng 12 năm 2017 i TÓM TẮT Lu “Thu th p, tuyển chọn nghiên cứu quy trình ni tr ng hai loại nấ ă ấ ợc li u hoang dại từ vùng Thấ S A Ga ” ợc thực hi n v i mục tiêu xây dựng quy trình tố ng loại nấ ă loại nấ ợc li u m i Lu ợc hoàn thành v i bốn nội dung Nội dung thứ thu th ợc 28 mẫu nấm hoang dại từ tự o ó có mẫu nấ ă ẫu nấ ợc li u, mẫu nấ ộc 11 mẫ a ịnh Dựa theo k t qu u tra kh o sát từ ịa ng th i dựa eo ặ ể ì ì ự gen Internal Transcribed S a e o ấ ợ ị nấm t ợng hoàng (Phellinus sp.), linh chi tầng (Ganoderma applanatum), nấm vân chi (Trametes sp.), nấm dai (Lentinus squarrosolus) Nội dung thứ a ị ộc tính cấp c ă ẫu nấ u ộc tính cấp chuộ ợc bố o ợng hoàng, linh chi tầng, nấm dai nấm vân chi Nội dung ti eo ịnh thành phầ ỡ ợc tính bốn lồi nấ ợc chọn K t qu cho thấy hai loài nấm nấm t ợng toàng Phellinus sp nấm dai Lentinus squarrosolus có giá trị ỡ ợ ao o ó a o nấ ợc chọ ể ti p tục nghiên X ị ộ ng diễn nấm t ợng hoàng chuột, k t qu chuộ o o ì ng th i gian thử nghi m Ti p tục thử tác dụng nấm t ợng hoàng dòng t o K562 ại trự H T116 apoptosis ợc kích hoạt, t o a ă ể a ă n ộ Nội dung cuối nghiên cứu quy trình ni tr ng nấ ă nấm dai Lentinus squarrosolus nấ ợc li u nấm t ợng hoàng Phellinus sp Quy trình ni tr ng nấm dai Lentinus squarrosolus: M ng nhân giống cấp tốt v i ngày g m PDA bổ s c dừa, môi ng nhân giống cấp hai g m lúa bổ s 5% ợc chọn v i th i gian 12 ng nuôi tr ợc chọ 90% ù a ao s ổ sung 5% cám 5% bột bắp v 70 ă ắng bịch thể qu sau 28 Đối v i quy trình ni tr ng nấm t ợng hồng Phellinus sp mơi ng nhân giống cấp tốt v PDA ng nhân giống cấp hai g m lúa bổ s 5% ợc chọn v i th i gian 12 ngày môi ng nuôi tr ợc chọ 90% ù a ao s ổ sung 5% cám 5% bột bắp v 50 ă ắng bịch nấm thể qu sau 70 ngày Từ khóa: Nấ oa ầ ấ a ấ ù T ấ S ii ấ ợ o ấ ABSTRACT The dissertation, entitled “Collecting, selecting and the studying the cultivation of a wild edible mushroom and a wild medicinal mushroom in the T a So e o A G a o e“ was o e establish the optimal procedure for cultivation of a wild edible mushroom and a wild medicinal mushroom There were four main research contents The first content was that twenty-eight wild mushroom samples were collected, whereas there were five edible mushrooms, seven medicinal mushrooms, five poisonous mushrooms and eleven unidentified mushrooms Based on the results of surveys, questionares, and morphological and Internal Transcribed Spacer sequences characteristics, five mushrooms were identified as Linh Chi Tang mushroom (Ganoderma applanatum), Van Chi mushroom (Trametes sp.), Thuong Hoang mushroom (Phellinus sp.), Dai mushroom (Lentinus squarrosolus) and Moc Ba Hue mushroom The second research content was evaluating acute toxicity of the selected mushrooms, and the results showed that all wild mushroom species were not toxic to tested mice Subsequently, all wild mushrooms were isolated using PDA medium, and only four mushrooms consisting of Linh Chi Tang mushroom, Van Chi mushroom, Thuong Hoang mushroom, Dai mushroom were successfully isolated The third research content related to determination of nutrient contents and pharmaceutical activity of the selected mushrooms As a result, Phellinus sp and Lentinus squarrosolus were selected for further experiments The sub-chronic toxicity was also evaluated on mice, and the tested mice had no effects The activity of Thuong Hoang mushroom was examined using K562 blood cancer cells and HCT116 colorectal cancer cells The cancer cells reduced when the concentrations of sample were increased The final content focused on the cultivation of Phellinus sp and Lentinus squarrosolus For the Lentinus squarrosolus mushroom, the best medium for the first propagation was PDA added coconut milk with days growth in vitro; the best medium for the second propagation was intact rice + 5% rice bran with 12 days developing in the culture bottle; and the optimal medium for fruit body development with high yield was 90% rubber sawdust + 5% rice bran + 5% corn flour with 70 days full development and 28 days for harvesting of fruit bodies For the Phellinus sp mushroom, the best medium for the first propagation was PDA with days growth in vitro; the best medium for the second propagation was intact rice + 5% rice bran with 12 days in the culture bottle; and the optimal medium for fruit body development with high yield was 90% rubber sawdust + 5% rice bran + 5% corn flour with 50 days for full development and 70 days for harvesting of fruit bodies Key words: wild mushroom in the That Son region, Phellinus sp., Trametes sp., Ganoderma applanatum and Lentinus squarrosolus iii CAM KẾT KẾT QUẢ T a oa ì ứu b n thân thầy ng dẫn Các số li u, k t qu trình bày lu ự a ợc công bố lu o Ngƣời hƣớng dẫn khoa học Tác giả luận án PGS TS Trần Nhân ũng Hồ Thị Thu Ba iv MỤC LỤC ỤC ỤC v NH S CH ẢNG viii NH S CH H NH x DANH MỤC C C TỪ VIẾT TẮT xii CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1 Đ t vấn ề 12 c ti u v n i dung nghi n c u Mụ …………………… ……… ………………………… … 2 Nộ ứ ………………………………………… …… Đ i tƣ ng v ph m vi nghi n c u Đố ứ ………………………………… ………… ứ ……………………………………………… ợ 132P 1.4 Những óng góp ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án CHƢƠNG TỔNG QU N TÀI IỆU 21 h i qu t nấm trồng 1 Nấ s 212G ị 2.1.3 Nấ ă ọ ấ ỡ ……………… …………… ………… ợ ấ … …………… …… phát triể ữ ……………… … 2 Sự ph t triển nghề trồng nấm 10 11 ă …………… 11 2.2.2 Sự phát triển ngh tr ng nấm th gi ………………………… 12 Vi Na ………………………… 15 2.2.1 Lịch sử phát triển ngh tr ng nấ 2.2.3 Sự phát triển ngh tr ng nấm ấ ợc li C ng nghệ trồng nấm 231S ì Meo ố ấ ng nấ … … ……………………… ………………………………………… ………… 233 ấ G eo 235 16 ă eo só ( ủ a ấ 16 17 …… ……………… 17 ……………………………… ……………… 18 ……………… ……… 19 ố Định danh nấm ăn v nấm dƣ c liệu 20 C c phƣơng ph p x c ịnh ho t tính gây c tế b o v chế tác ng kh ng ung thƣ m t s loài nấm dƣ c liệu 22 v 2.6 Các nghiên c u có li n quan 23 Vi Na 2.6.1 Các nghiên cứu v khu h nấm ă 25 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PH P NGHI N C U 27 Phƣơng tiện nghi n c u 27 311T 27 a ịa 312N ể ợc li u Vi Na 23 ………… 2.6.2 Các nghiên cứu v nấ ấ ……………………… ………………………………………… … …………………………………… ………… …… 3 Hóa ấ …………………………………………………………… 314T ị ụ 27 27 ụ ……………………………… ……… ………… 27 Phƣơng ph p nghi n c u 28 321S ột số o ấ n vùng rừng núi Thấ S AG u tra kh o s ịa ì a o ấm sử dụ ợ ịnh 28 danh loài nấm ……………………………………… 322X nấ ị ộc tính cấp, phân l p gi i trình tự gen lồi nấ ợc li u hoang dại không chứa ộ …………… 323 X ịnh thành phầ ỡ ợ ộ diễn thử ộng nấm dòng t o trự ……………………………………………… … … ă 29 ng ại 33 3.2.4 Nghiên ì o ỉnh hai chủng nấ ợc tuyển chọ ………………………… …… …… 43 CHƢƠNG ẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 Sƣu tập m t s lo i nấm lớn vùng rừng núi Thất Sơn n Giang iều tra khảo s t ngƣời dân ịa phƣơng tìm c c lo i nấm sử d ng ƣ c ịnh danh loài nấm 48 4.1.1 Thu th p mẫu nấm l n ……………………… …………………… 48 Đ u tra kh o sát mẫu nấ 53 Định danh loài nấ ợc chọ ………… ……………… ợc chọ eo ì ………………… 54 X c ịnh c tính cấp, phân lập giải trình tự gen loài nấm ăn v nấm dƣ c liệu hoang d i khơng ch a c tính 58 421 X ị ộc tính cấp mẫu nấ ợc chọn từ ịa …………………………………………………………………… 58 4.2.2 Phân l p loài nấ ợc chọn lọc ……………………… 63 4.2.3 Gi i trình tự ITS ịnh lồi dựa o ặ ểm hình thái trình 65 tự ITS …………………………………………………………………… vi X c ịnh thành phần dinh dƣỡng dƣ c tính c tính b n trƣờng diễn thử t c ng nấm dòng tế b o ung thƣ m u v ung 68 thƣ i trực tr ng 431X ịnh thành phầ ỡ ợ ng diễ … 68 432X ịnh thành phầ ợc tính hai mẫu nấm linh chi tầng ợ o …………………………………………………………… 69 433 X ị ộ ng diễn nấm t ợng hoàng …………………………………………………………………………… 71 434 X ịnh kh ă ụng v i t o nấm t ợng hoàng Phellinus s ………………………………………… …………… 81 4.4 Nghiên c u quy trình c ng nghệ nu i trồng ho n chỉnh hai chủng nấm ã ƣ c tuyển chọn 85 4.4.1 Nghiên cứu quy trình ni tr ng nấm dai Lentinus squarosolus…… 85 ợng hoàng Phellinus sp 93 4.4.2 Nghiên cứu quy trình ni tr ng nấm t CHƢƠNG ẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 105 5.1 Kết luận 105 5.2 Kiến nghị 105 TÀI LIỆU THAM KHẢO 107 PHỤ LỤC 120 vii ... tháng 12 năm 2017 i TÓM TẮT Lu Thu th p, tuyển chọn nghiên cứu quy trình ni tr ng hai loại nấ ă ấ ợc li u hoang dại từ vùng Thấ S A Ga ” ợc thực hi n v i mục tiêu xây dựng quy trình tố ng loại. .. Nghiên c u quy trình c ng nghệ nu i trồng ho n chỉnh hai chủng nấm ã ƣ c tuyển chọn 85 4.4.1 Nghiên cứu quy trình ni tr ng nấm dai Lentinus squarosolus…… 85 ợng hoàng Phellinus sp 93 4.4.2 Nghiên. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ HỒ THỊ THU BA THU THẬP TU ỂN CHỌN VÀ NGHI N C U QU TR NH NU I TRỒNG H I OẠI NẤ N VÀ NẤ Ƣ C IỆU HO NG ẠI TỪ V NG THẤT SƠN N GI NG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên