Xây dựng phương pháp phân tích đồng phân đối quang của amlodipin

B ộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO B ộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Đỗ THU TRANG XÂY DựNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA AMLODIPIN LUẬN Vă N THẠC s ĩ • • D ợ c HỌC • • CHUYÊN N G À N H : KIỂM NGHIỆM THUỐC- ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 607315 Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Đình Chi P G S.T S Thái Nguyễn Hùng Thu I TRƯỜNG ĐH DƯỢC HA Lnấv J>2.lháL% [s|đ k M HÀ NỘI, NĂM 2011 ^ Crijlocojis j LỜ3 CẢm OR Sau thời gian thực luận văn tốt nghiệp với nhiều cố gắng, thời điểm hoàn thành luận văn lúc tơi xin phép bày tỏ lòng biết ơn chân thành cuả tới người thầy dạy dỗ, hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian qua Đầu tiên tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - TS Lê Đình Chi - PGS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu Là hai người thầy tận tình giúp đỡ tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Lê Thị Hường Hoa - Trưởng khoa Mỹ Phẩm toàn thể cán bộ, nhân viên khoa Mỹ Phẩm tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn giúp đỡ Bộ mơn Hóa phân tích trường Đại học Dược hà Nội tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn quan tâm Ban giám hiệu, phòng đào tạo sau đại học thầy cô dạy dồ suốt thời gian học tập trường Cuối xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới bạn bè, đồng nghiệp gia đình tơi- người động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập thời gian thực luận văn Hà Nội, ngày 19 tháng 10 năm 2011 Học viên Đỗ Thu Trang MỤC LỤC ĐẢT VẤN Đ Ề CHƯƠNG TỎNG Q UAN 1.1 TÔNG QUAN VỀ AMLODIPIN .3 1.1.1 Tính chất 1.1.2 Định tính, định lượng 1.1.3 Tác dụng dược lý chế tác dụng 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG 1.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG 1.3.1 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC): 1.3.2 Điện di mao quản hiệu cao (HPCE) 11 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN c ứ u TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 14 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước .14 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 18 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN c ứ u 18 2.2 HÓA CHẤT, DỤNG c ụ VÀ THIẾT BỊ 18 2.2.1 Hóa chất, chất chuẩn: 18 2.2.2 Dụng cụ, thiết b ị 19 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN c ứ u 20 2.3.1 Khảo sát khả tách đồng phân đối quang amlodipỉn phương pháp sắc ký ỉỏng hiệu cao 20 2.3.2 Khảo sát khả tách đồng phân đối quang amlodipin phương pháp điện di mao quản hiệu cao 20 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích .211 2.3.4 ứng dụng để phân tích amlodipin chế phẩm 211 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 21 2.4.1 Sắc ký lỏng hiệu cao cột sắc ký hoạt quang 21 2.4.2 Điện di mao quản sử dụng dẫn chất cyclodextrỉn làm chất chọn lọc đối quang 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u 26 3.1 XÂY D ựN G PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG PHẢN ĐỐI QUANG CỦA AMLODIPIN BẰNG HPLC 26 3.1.1 Khảo sát khả tách đối quang pha tĩnh gắn chất chọn lọc đối quang 26 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng pH đến khả tách đồng phân .31 3.1.3 Lựa chọn điều kiện sắc ký 33 • • • 3.1.4 Thẩm định qui trình phân tích 33 3.2 XÂY D ựN G PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG PHẢN ĐỐI QUANG CỦA AMLODIPIN BẰNG HPCE 2646 3.2.1 Khảo sát khả tách đối quang C E 466 3.2.2 Lưa chon điều kiên điên di 51 • • • • 3.2.3 Thẩm định qui trình phân tích 522 3.3 ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP XÂY DựNG ĐƯỢC ĐẾ ĐÁNH GIÁ BẢN CHẤT ĐỒNG PHÂN CỦA AMLODIPIN ĐƯỢC s DỤNG TRONG MỘT SỐ BIỆT DƯỢC TRÊN THỊ TRƯỜNG 59 3.3.1 Phân tích đồng phân đối quang amlodỉpin số chế phẩm HPLC 59 3.3.2 Phân tích đồng phân đối quang amlodipin số chế phẩm C E 61 CHƯƠNG BÀN LUẬN 65 KÉT LUẬN VÀ ĐẺ XUẤT 70 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AGP: acid al- glycoprotein BGE (background electrolyte): Dung dịch điện ly BP (British Pharmacopoeia): Dược điển Anh BSA (Bovine Serum Albumine): Albumin huyết bò CE (capillary electrophoresis): Điện di mao quản CD: cyclodextrin CMCD: carboxymethyl-P-cyclodextrin EOF ( Electro-osmotic flow):Dòng điện thẩm EP (European Pharmacopoeia): Dược điển châu Âu GLP (Good Laboratory Practice): Thực hành tốt phòng thí nghiệm HPLC (High Performance Liquid Chromatography): sắc ký lỏng hiệu HSA (Human Serum Albumine): Albumin huyết người ISO/IEC 17025: Quy chuẩn quốc tế quản lý phòng thí nghiệm LOD (Limit of Detection): Giới hạn phát LOQ (Limit of Quantitation): Giới hạn định lượng PDA (Photo Diode Array): Mảng diod quang RSD (Relative Standard Deviation): Độ lệch chuẩn tương đối TRIS: tris (hydroxymethyl) aminomethane USP (United States Pharmacopoeia): Dược điển Mỹ UV-VIS (Ultraviolet - visible): Tử ngoại - khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Nội dung Trang Bảng 3.1 Độ pha loãng dung dịch chuẩn 34 Bảng 3.2 Độ pha loãng dung dịch chuẩn amlodipin besỉlat racemỉc 34 Bảng 3.3 Kết hàm lượng S-amlodipỉn R-amlodỉpỉn chuẩn amlodỉpin besilat racemỉc 35 Bảng 3.4 Ket khảo sát khoảng tuyến tính R-Amlodipin 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính S-Amlodỉpin 39 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ lặp lại hệ thống 41 Bảng Khảo sát độ lặp lại phương pháp 43 Bảng 3.8 Kết đánh giá khả tìm lại với R-amlodỉpỉn 44 Bảng 3.9 Kết đánh giá khả tìm lại với S-amlodipin 45 Bảng 3.10 Quan hệ tuyến tính diện tích pic nồng độ S-amlodipin 54 Bảng 3.11 Quan hệ tuyến tính diện tích pỉc nồng độ R-amlodipin 54 Bảng 3.12 Kết đánh giá độ lặp lại hai đồng phân đối quang amlodỉpin 56 Bảng 3.13 Ket đánh giá độ với S-amlodipỉn 57 Bảng 3.14 Ket đánh giá độ với R-amlodipin 57 Bảng 3.15 Thành phần công thức chế phẩm chứa amlodipỉn kiểm tra quy trình phân tích sử dụng phương pháp HPLC 59 Bảng 3.16 Kết xác định hàm lượng amlodỉpỉn chế phẩm quy trình phân tích sử dụng phương pháp HPLC 61 Bảng 3.17 Thành phần công thức chế phẩm chứa amlodipỉn kiểm tra quy trình phân tích sử dụng phương pháp CE 62 Bảng 3.18 Kết xác định hàm lượng amlodỉpin chế phẩm quy trình phân tích sử dụng phương pháp CE 64 DANH MỤC CÁC HÌNH Nội dung Hình 1.1 Cấu trúc phân tử amlodỉpin besilat (a), cấu hình tuyệt đối S- amlodipỉn besỉỉat (b) Hình 3.1 Sắc ký đồ thu với dung dịch chất đổi chiếu amlodipin besỉlat racemic với cột Cyclobond 2000, pha động Trỉethylamỉn p H 4,0 Hình 3.2 Sắc kỷ đồ dung dịch chuẩn amlodipỉn racemic với dung mơi acetonỉtril Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn amlodỉpỉn racemỉc với dung mơi methanol Hình 3.4 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn amlodipỉn racemỉc với dung mơi 1-propanol Hình 3.5 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn amlodipỉn racemỉc với 1propanol 1% Hình 3.6 Sắc kỷ đồ dung dịch chuẩn amlodỉpin racemỉc với 1propanol 2% Hình Sắc kỷ đồ dung dịch chuẩn amlodỉpỉn racemic với 1propanol 3% Hình 3.8 Sắc ký đồ thu với dung dịch chuẩn amlodỉpin besilat racemỉc khỉ phân tích cột Chiral AGP khỉ thay đối p H pha động Hình 3.9 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn amlodỉpin racemỉc (a), dung dịch thử viên nén Amlodỉpỉn amsyn-5(b) Hình 3.10 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn S-amỉodỉpỉn (a), dung dịch thử viên nén Asomex(b) Hình 3.11 Chồng phổ dung dịch chuẩn, dung dịch thử S-amlodipin 37 (à), R-amlodỉpỉn (b) Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích pỉc 39 R-amlodipỉn Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích 40 pic S-amlodipin Hình 3.14 Anh hưởng chất chất hoạt quang tới độ phân 48 giải đồng phân đối quang amlodipỉn (a) P-cyclodextrin; (b) CMCD Hình 3.15 Anh hưởng p H dung dịch điện ly acid phosphoric 50 mM tới độ phân giải đồng phân đổi quang amlodỉpỉn 49 a) p H = 1,6; b) p H = 2,5; c) pH = 3,5 Hình 3.16 Anh hưởng nồng độ CMCD tới độ phân giải đồng 50 phân đổi quang amlodipin a) 0,1% ; b) 0,2%; c) 0,3% Hình 3.17 Điện di đồ dung dịch chuẩn amlodipỉn racemic (a) 51 dung dịch chuẩn S-amlodipin (b) Hình 3.18 Đánh giá độ đặc hiệu quy trình phân tích đồng phân đổi quang amlodipỉn CE (Điện di đồ chuẩn S-amlodỉpỉn 53 racemỉc (a), mẫu Asomex 2,5 (b), chuẩn amlodỉpỉn racemỉc (c) mẫu Amlodipỉn STADA (d)) Hình 3.19 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích 54 pỉc S-amlodipin Hình 3.20 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ diện tích 55 pỉc R-amlodỉpỉn Hình 3.21 Điện di đồ chuẩn amlodỉpỉn besilat racemic giới hạn 58 phát (a) giới hạn định lượng (b) Hình 3.22 Phân tích định tính amlodỉpỉn chế phẩm bang HPLC (Sắc kỷ đồ chuẩn amlodipin racemic (a), mẫu Amsyn-5 chứa 60 amlodỉpỉn racemic (b), chuẩn S-amlodỉpin (c) mẫu Asomex chứa S-amlodỉpỉn (d)) Hình 3.23 Phân tích định tính amlodỉpỉn chế phẩm CE (Điện di đồ chuẩn S-amlodipỉn racemỉc (a), mẫu Asomex 2,5 (b), chuẩn amlodỉpin racemic (c) mẫu Amlodỉpỉn STADA (b)) 63 CHƯƠNG BÀN LUẬN • Qua thực tế công tác kiểm nghiệm, nhận thấy thị trường Việt Nam có nhiều hoạt chất lưu hành song song hai dạng racemic đồng phân đối quang tinh khiết chế phẩm thuốc khác Các chế phẩm chứa amlodipin đăng ký lưu hành thị trường Việt Nam chủ yếu chứa amlodipin dạng racemic Nhưng thấy với xu chuyển từ racemic sang đồng phân đối quang nay, amlodipin khơng phải ngoại lệ với biệt dược công bố S-Amlip Cipla Generics Pharmaceuticals Ltd hay Asomex Emcure Pharmaceuticals Ltd việc amlodipin xuất dạng levamlodipin (S-amlodipin) nước ta vấn đề thời gian Như vậy, kỹ thuật phân tích đồng phân đối quang có vai trò quan trọng kiểm tra chất lượng thuốc hệ thống kiểm nghiệm nhà nước phòng quản lý chất lượng doanh nghiệp kinh doanh, sản xuất dược phẩm, với xu hướng tỷ trọng thuốc có chất đồng phân đối quang tinh khiết ngày tăng lên tương lai gần Nghiên cứu thực cần thiết hữu ích để nâng cao lực Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương việc đánh giá chất lượng thuốc có hoạt chất hỗn họp racemic hay đồng phân đối quang tinh khiết Đây bước đắn, kịp thời để chuẩn bị sở chuyên môn kỹ thuật Viện nói riêng, hệ thống kiểm nghiệm thuốc nói chung, sẵn sàng đáp ứng yêu cầu thời gian tới, sản phẩm thuốc có chất đồng phân đối quang xuất ngày nhiều thị trường Việt Nam Chúng người Việt Nam tiến hành nghiên cứu định tính, phân biệt đồng phân đối quang amlodipin chế phẩm thuốc 65 phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, chủ đề hoàn toàn lĩnh vực kiểm nghiệm Trong trình tách đồng phân đối quang amlodipin chúng tơi lựa chọn phương pháp gián tiếp, cột sắc ký chứa chất chọn lọc đối quang chất chọn lọc đối quang dùng điện di mao quản yếu tố định khả tách đồng phân đối quang amlodipin Trong trình xây dựng phương pháp nghiên cứu gặp nhiều khó khăn q trình lựa chọn cột phân tích, pha động Chúng tơi tham khảo tài liệu nước ngồi nghiên cứu amlodipin, sau tiến hành xây dựng phát triển phương pháp để thu mục tiêu đề Với phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao tiến hành cột Cyclobond I 2000 chứa chất chọn lọc đối quang P-cyclodextrin, pha động amoniacetat 10 mM, pH 4,0- dung môi (dung môi: acetonitril, methanol, 1-propanol) tỷ lệ từ 0-9% hai đồng phân đối quang amlodipin trùng thành pic Vì chúng tơi chuyển sang hướng nghiên cứu chọn cột sắc ký chứa chất chọn lọc đối quang acid a l- glycoprotein, pha động dung dịch acetat pH 4,5 - dung môi (99:1) (dung môi: acetonitril, methanol, 1-propanol) hai đồng phân đối quang amlodipin tách hồn tồn, dung mơi 1-propanol thời gian phân tích ngắn Sau lựa chọn pha tĩnh, dung môi pha động, tiếp tục thay đổi tỷ lệ dung môi 1propanol 1-3%, kết cho thấy tăng tỷ lệ dung môi dẫn đến thời gian phân tích giảm độ phân giải giảm theo Khi pha động chứa 2% 1-propanol hai đồng phân đối quang amlodipin tách hoàn toàn thời gian phân tích họp lý Cuối để tối ưu hóa điều kiện phân tích thay đổi pH dung dịch amoniacetat lOmM từ 3,5- 5,5 lựa chọn pH 4,0 điều kiện tối ưu để phân tích hai đồng phân đối quang amlodipin Kết tối 66 ưu hóa cho thấy thời gian phân tích giảm rõ rệt (thời gian phân tích nghiên cứu cơng bố khoảng 25 phút) , độ doãng pic giảm, độ phân giải 1,92 ưu điểm nghiên cứu so với nghiên cứu công bố Với phương pháp điện di mao quản hiệu cao, để tìm điều kiện phân tích tối ưu, khảo sát kỹ ba yếu tố ảnh hưởng quan trọng tới khả tách hai đồng phân đối quang amlodipine chất chất chọn lọc đối quang, nồng độ chất chọn lọc đối quang pH dung dịch điện ly Khi chất chọn lọc đối quang P-cyclodextrin hai đồng phân đối quang amlodipin trùng thành pic nhất, chất chọn lọc đối quang CMCD hai đồng phân đối quang amlodipin tách hoàn toàn Sau lựa chọn chất chọn lọc đối quang tiếp tục thay đổi pH dung dịch chất điện ly dung dịch acid phosphoric 50 mM từ 1,6 đến 3,5 với nồng độ CMCD (0,2% kl/tt) Ở pH 2,5 độ phân giải hai đồng phân đối quang amlodipin cải thiện rõ ràng thời gian phân tích tương đối ngắn Cuối khảo sát ảnh hưởng nồng độ CMCD cách trì pH dung dịch acid phosphoric 50 mM 2,5 tiến hành phân tích nồng độ khác CMCD từ 0,1% (kl/tt) đến 0,3% (kl/tt) Kết thực nghiệm cho thấy CMCD 0,2% điều kiện tốt để tách hoàn toàn hai đồng phân đối quang amlodipin thời gian phân tích tương đối ngắn Đây ưu điểm so với nghiên cứu cơng bố trước Qua q trình kiểm tra số sản phẩm amlodipin dạng đồng phân tinh khiết hỗn hợp racemic thấy sản phẩm kiểm tra phù hợp với công bố mà nhà sản xuất đưa kể mặt định tính lẫn 67 định lượng, chưa phát thấy tạp đối quang đồng phân tinh khiết hay giả mạo dược chất so với công bố Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng phổ biến định tính lẫn định lượng dược chất chế phẩm Đây phương pháp có độ nhạy cao, ổn định phổ biến phòng thí nghiệm Tuy nhiên u cầu phương pháp HPLC để tách đồng phân đối quang phải đầu tư trang thiết bị với giá thành cao, cột hoạt quang AGP đắt tiền khó khăn việc bảo quản mặt hạn chế phương pháp, rõ ràng phương pháp phát huy ưu để phân tích đồng phân đối quang, kiểm tra hàm lượng thực tế có tác dụng sinh học Do đặc điểm Pha tĩnh chọn lọc hoạt quang acid a l- glycoprotein protein nên khó bảo quản, dễ bị nấm mốc, dễ bị đơng vón mơi trường acid, dễ bị hỏng áp suất cao chúng tơi lựa chọn tốc độ dòng tối đa 0,8 ml/phút hợp lý So với phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, phương pháp điện mao quản hiệu cao phổ biến trang bị phòng thí nghiệm, phương pháp có nhiều ưu điểm so với phương pháp HPLC khơng cần dùng cột đối quang đắt tiền mà cần sử dụng mao quản silica nung chảy chứa dung dịch điện li với lượng nhỏ phí thấp, kinh tế hơn, khơng cần dùng dung mơi nên độc hại, thân thiện với mơi trường, có nhiều nhược điểm thời gian cân mao quản lâu, mao quản dễ tắc trình vận hành, độ nhạy thấp so với phương pháp HPLC Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao điện di mao quản hiệu cao khắc phục nhược điểm phương pháp phân biệt R-amlodipin S-amlodipin phép đo suất quay cực phương pháp đòi hỏi 68 nồng độ dung dịch đo phải lớn, khơng áp dụng cho chế phẩm có chứa tá dược định Hơn trình thẩm định cho thấy phương pháp có tính khả thi cao việc định tính phân biệt, định lượng amlodipin chế phẩm Do đó, tùy vào tình hình cụ thể phòng thí nghiệm trang bị cột sắc ký, chất chọn lọc đối quang thiết bị áp dụng phương pháp HPLC HPCE để đánh giá chất đồng phân đối quang amlodipin Để xác định tạp đối quang chế phẩm phương pháp HPLC nên sử dụng độ nhạy phương pháp tốt phương pháp HPCE nên nồng độ đem tiêm vào hệ thống sắc ký thường thấp nhiều so với điện di 69 KẾT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT Kết luân: Qua trình thực đề tài, đạt kết sau: Đã xác định điều kiện sắc ký lỏng hiệu cao điện di mao quản hiệu cao để phân tích đồng phân đối quang Amlodipin Cụ thể là: Điều kiện sắc kỷ: - Cột sắc ký: cột chiral AGP - Hệ thống HPLC với detector PDA đặt bước sóng 235 nm - Cột sắc ký hoạt quang Chiral AGP (acid a l- glycoprotein) (4,0 X 150 mm; 5|im) - Pha động: 1-propanol: amoni acetat 0,0IN, pH = 4,0 (2: 98, v/v) - Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút - Thể tích lần tiêm: 20 |Ltl - Nhiệt độ: nhiệt độ phòng Điều kiện điện di: - Mao quản silica nung chảy (chiều dài hữu ích 30 cm, đường kính 50 ịim), trì nhiệt độ phòng (khoảng 25°C) q trình phân tích - Dung dịch điện ly nền: dung dịch acid phosphoric 50 mM pH = 2,5 chứa 0,2% (kl/tt) carboxymethyl-P-cyclodextrin - Điện thế: +15 k v - Detector UV: 214 nm - Điều kiện tiêm mẫu: 5s 50 mbar - Điều kiện xử lý mao quản: 70 + Mao quản rửa 60 phút với dung dịch natri hydroxyd M 15 phút với nước trao đổi ion trước sử dụng + Giữa hai lần phân tích liên tiếp, mao quản hoạt hóa sau: rửa phút với nước trao đổi ion, phút với dung dịch natri hydroxyd 0,1 M, phút với nước trao đổi ion phút với dung dịch điện ly Bảo quản mao quản qua đêm nước trao đổi ion Trong trường hợp mao quản để lâu không sử dụng, đẩy toàn dung dịch bên mao quản bảo quản khô Nếu bảo quản khô dài ngày mao quản cần hoạt hóa lại với mao quản trước sử dụng Đã xây dựng thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao cột sắc ký hoạt quang gắn pha tĩnh acid a 1-glycoprotein cho phép tách riêng biệt hai đồng phân đối quang amlodipin thời gian phân tích mẫu tương đối ngắn (khoảng phút) Phương pháp cho phép định tính phân biệt cách đặc hiệu dạng amlodipin racemic S-amlodipin tinh khiết Diện tích pic đối quang tuyến tính khoảng nồng độ mẫu 10-50 l-ig/ml Đã xây dựng thẩm định phương pháp điện di mao quản hiệu cao mao quản silica nung chảy với chất chọn lọc đối quang chứa carboxymethyl-(3-cyclodextrin cho phép tách riêng biệt hai đồng phân đối quang amlodipin thời gian phân tích mẫu vừa phải (khoảng 11 phút) Phương pháp cho phép định tính phân biệt cách đặc hiệu dạng amlodipin racemic S-amlodipin tinh khiết Diện tích pic đối quang tuyến tính khoảng nồng độ mẫu 10-200 I^g/ml Đã ứng dụng phương pháp để phân tích đồng phân đối quang Amlodipin chế phẩm hành Kết cho thấy chế phẩm 71 đạt yêu cầu định tính (dạng hoạt chất sử dụng so với cơng bố), định lượng (hàm lượng so với công bố) phù hợp với công bố nhà sản xuất, chế phẩm chứa hoạt chất dạng đồng phân đối quang đảm bảo độ tinh khiết, không phát thấy tạp đối quang lại Đề xuất: Trên sở nghiên cứu đạt được, xin đề xuất sau: Đối với quan quản lý nhà nước cần khuyến cáo nhà sản xuất đưa thơng tin xác hoạt chất đồng phân đối quang amlodipin chế phẩm thuốc Các quan kiểm nghiệm doanh nghiệp sản xuất thuốc áp dụng phương pháp việc kiểm nghiệm chất lượng thuốc nguyên liệu sản xuất lưu hành thị trường Các quan nghiên cứu tiếp tục hướng nghiên cứu để xây dựng phương pháp phân tích đồng phân đối quang hoạt chất khác có hoạt tính sinh học lớn, nhằm hội nhập với xu hướng phát triển chung ngành dược giới tỷ trọng thuốc có chất đồng phân đối quang ngày nhiều Dược điển Việt Nam nên xem xét để đưa thêm chuyên luận phân tích đồng phân đối quang số hoạt chất Các quan nghiên cứu phối hợp với doanh nhiệp sản xuất thuốc tiến hành nghiên cứu sản xuất thiết lập chất chuẩn đồng phân đối quang S- amlodipin có hoạt tính sinh học lớn, nhằm tạo nguồn nguyên liệu tinh khiết hạn chế nguồn chất chuẩn nhập ngoại với giá thành cao 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO r Tài liệu tiêng Việt Bộ môn Dược lý (2006), Dược lý học tập //, Trường Đại học Dược Hà Nội, 43-46 Bộ mơn Hố hữu (2007), Hố hữu tập /, Nhà xuất Y học, 66-82 Bộ mơn Hố phân tích (2006), Hố phân tích tập I, Trường Đại học Dược Hà Nội, 29-44 Bộ mơn Hố phân tích (2006), Hố phân tích II, Trường Đại học Dược Hà Nội, 173-248 Bộ mơn Hố dược (2006), Hoá dược tập /, Trường Đại học Dược Hà Nội, 160-161 Bộ Y tế, Dược thư quốc gia Việt Nam 2002, 139-140 Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (2010), Đảm bảo chất lượng thuốc sổ phương pháp kiểm nghiệm thuốc, Tài liệu đào tạo nâng cao kiểm nghiệm thuốc Lê Thị Thu Cúc, Từ Thị Minh Tâm, Đặng Văn Tịnh, Nguyễn Đức Tuấn (2011), “ứ n g dụng tác nhân đối quang hydroxybutyl betacyclodextrin phân tích đồng phân quang học promethazin phương pháp điện di mao quản”, Tạp chí Dược học, số 8, 49-53 Lê Thị Thu Cúc, Nguyễn Ngọc Vinh, Đặng Văn Tịnh, Nguyễn Đức Tuấn (2009), “ứ n g dụng tác nhân đối quang 2-hydroxypropyl beta- 73 cyclodextrin phân tích đồng phân amlodipin phương pháp điện di mao quản” Tạp chí Dược học, số 10, 41-44 10 Lê Thị Thu Cúc, Từ Thị Minh Tâm, Đặng Văn Tịnh, Nguyễn Đức Tuấn (2010), “ứ n g dụng tác nhân đối quang betacyclodextrin hydroxyalkyl betacyclodextrin phân tích đồng phân quang học miconazol phương pháp điện di mao quản”, Tạp chí Dược học, số 11,39-43 11 Nguyễn Xuân Lý, Lê Thị Thu Cúc, Nguyễn Ngọc Vinh, Nguyễn Đức Tuấn (2008), “Phân tích Lamivudin tạp đồng phân phương pháp điện di mao quản”, Tạp chí Dược học, số 385 (5/2008), 38-42 Ị Tài liệu tiêng Anh 12 A.M Krstulovic (1989), Chiral separation by HPLC, Kill Horwood Ltd, London, Great Britain 13 B.Awadallah, p.c.Schmidt, M.A.Wahl (2003), “Quantitation of the enantiomers of ofloxacin by capillary electrophoresis in the parts per billion concentration range for in vitro drug absorption studies”, Journal o f Chromatography A, 988, 135-143 14 B Chankvetadze, G Blaschke (2001), “Enantioseparations in capillary electromigration techniques: recent developments and future trends”, Journal o f Chromatography A, 906, 309-363 15 British Pharmacopoeia 2007, điện tử 16 B.Streel, C.Lainé, C.Zimmer, R.Sibenaler, A.Ceccato (2002), “Enantionmeric determination of amlodipin in human plasma by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry”, Journal o f 14 Biochemical and Biophysical Methods, 54, 357-368 17 F Scharpf, K-D Riedel, H Laufen, M Lietold (1994), “Enantioselective gas chromatographic assay with electron- capture detection for amlodipine in biological samples”, Journal of Chromatography B, 655, 225-233 18 G.Boatto, M.Nieddu, M.V.Faedda, p de Caprariis (2003), “Enantiomeric separation by HPLC of 1,4-dihydropyridines with vancomycin as chiral” , Chirality 75, 494-497 19 G.N Okafo, p Camilleri (1993), Separation o f enantiomers by capillary electrophoresis, in p Camilleri (Ed), Capillary electrophoresis: Theory and practice, CRC Press, Dlorida 20 G.Subramanian (editor) (2001), Chiral Separation Techniques: A practical approach,2nd edition, Wiley-WCH 21 S.Fanali (2000), “Enantioselective determination by capillary electrophoresis with cyclodextrins as chiral selectors”, Journal o f Chromatography A, 875, 89-122 22 H.Engelhardt, W.Beck; T.Schmitt (1996), Capillary Electrophoresis: Method and Potential, Vieweg, 140-165 23 R.c.Gupta (2011), Reproductive and Developmental Toxicology, Academic Press, 395-402 24.H.Shintani, J.Polonsky (editor) (1997), Handbook o f Capillary Electrophoresis Application, Blackie Academic 75 25 I.W.Wainer (1987) “Proposal for the classification of high performance liquid chromatographic chiral phases: how to chose the right column”, Trends in analytical chemistry, Vol 6, No.5 26 J Luksa, Dj Josic, B.Podobnik, B Furlan, M.Kremser (1997), “Semi- preparative chromatographic purification of the enantionmers S(-)- amlodipine and R- (+)- amlodipin”, Journal o f Chromatography B, 693, 367-375 27 J.Y.Park, K.A.Kim, et al (2006), “Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Characteristics of a New S- amlodipine Foemulation in Healthy Korean Male Subjectcs: Arandomized, open- label , Twoperiod, Comparative, Crossover Study”, Clinical Therapeutic, 28, 18371847 28 KD Altria, M.A Kelly, B.J Clark (1998), J.chromatographia, “Current applications in the analysis of pharmaceuticals by capillary electrophoresis”, 204-214 29 M.Gilar, M.ưhrová, E.Tesarová (1996), “Enantionmer separation of dihydropyridine calcium antagonists with cyclodextrins as chiral selectors: structural correlation”, Journal o f Chromatography B, 681, 133-141 30 N Matthijs, Y Vander Heyden (2005), “Enantiomeric impurity determination in capillary electrophoresis using a highly-sulfated cyclodextrins-based method”, Biomedical Chomatography, 20, 696-709 31 P.Mikus, K.Marakova, J.Marak, I.Nemec, I.Valaskova, E.Havranek (2008), “Direct quantitative determination of amlodipine enanetiomers in 76 urine samples for pharmacokinetic study using on- line coupled isotachophoresis- capillary zone electrophoresis separation method with diode array detection”, Journal o f Chromatography B, 875, 266-272 32.P.K.Owens, A.F.Fell, M.W.Coleman, J.C.Berridge (1998), “Effect of charged and uncharged chiral additives on the resolution of amlodipine enantiomers in liquid chromatography and capillary electrophoresis”, Journal o f Chromatography A, 797, 187-195 33 M Beaufour1, p Morin, J.Paul Ribet2 (2005), “Chiral separation of the four stereoisomers of a novel antianginal agent using a dual cyclodextrin system in capillary electrophoresis”, Journal o f Separation Science, 28, 529-533 34 United States Pharmacopoeia 30, tr.2447 77 PHỤ LỤC Hình Sắc kv đồ dunọ dỉch chuẩn S-amlodivỉn besilat D-7000 HSM: Samples _Series: 0953 _ Report: original System: Sys D-7000 HPLC System Manager Report A n aly zed : / / 1 : PM R e p o r t e d : / / 1 : PM P r o c e s s e d : / / 1 : PM D a t a P a t h : C :\ W i n A p p \ H S M \ s a m p l e s \ D A T A \ \ P r o c e s s i n g M e t h o d : De t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n S y s t e m ( a c q u i s i ti o n ) : Sys A p p l i c a t i o n : S am ples S a m p l e Name: Do d u n g I n j e c t i o n from t h i s v i a l : o f S am ple D e s c r i p t i o n : C hrom T y p e : S e r i e s : 0953 V i a l N u m b e r: V i a l T y p e : STD1 V o lu m e : u l HPLC C h a n n e l : 300 250 200 _ * ị - ISO Retention Tin* (min) A c q u i s i t i o n M e t h o d : Đe t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n C o lu m n T y p e : C18 D ev elo p ed by: Pump A T y p e : L - 0 S o l v e n t A: S o l v e n t B: S o l v e n t C: S o l v e n t D: M e t h o d D e s c r i p t i o n : De t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n chrom T ype: HPLC C h a n n e l : P e a k Q u a n t i t a t i o n : AREA C a l c u l a t i o n M e t h o d : AREA% No Peak r e j e c t i o n RT A rea 4 5 le v e l: C on e 59445 257187 6134 982115 5 0 7 1304881 0 0 0 Page Indicator 1/1 BC BB BB BB BB Hình Sắc ký đồ dung dịch chuấn amlodipin besilat racemỉc D-7000 HSM; Samples Series: 0908 _ Report: original System: Sys D-7000 HPLC System Manager Report a ly z e d : /0 /1 :1 PM R e p o r t e d : / / 1 : PM P r o c e s s e d : / / 1 : PM D a ta P a t h : C :\W in A p p \H S M \sam p les\D A T A \0 \ P r o c e s s i n g M e t h o d : De t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n S y s t e m ( a c q u i s i ti o n ) : Sys A p p l i c a t i o n : S am p les S a m p l e Name: c h u a n I n j e c t i o n from t h i s v i a l : o f S am ple D e s c r i p t i o n : S e r i e s : 0908 v i a l N u m b e r: v i a l T y p e : STD1 V o lu m e : u l C h ro m T y p e : HPLC c h a n n e l Retention Time : (min) A c q u i s i t i o n M e t h o d : De t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n C o lu m n T y p e : C18 D e v elo p ed b y: Pump A T y p e : L - 0 S o l v e n t A: S o l v e n t B: S o l v e n t C: S o l v e n t D: M e t h o d D e s c r i p t i o n : De t a i d o n g p h a n A m l o d i p i n C hrom T y p e : HPLC C h a n n e l : P e a k Q u a n t i t a t i o n : AREA C a l c u l a t i o n M e t h o d : AREA% No Peak r e j e c t i o n RT A rea 7 5 8 90 1076619 990290 0 8 2067899 0 0 le v e l: Cone Page Indicator / BC BB BB BB ... tài: Xây dựng phương pháp phân tích đồng phân đối quang amlodipin với hai mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp tách đồng phân đối quang amlodipin nhằm định tính định lượng dạng đồng phân đối quang. .. PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG Phân tích đồng phân đối quang chủ đề khó hóa phân tích chất lý hóa q gần hai đồng phân đối quang cặp đồng phân đối quang Các đồng phân đối quang tách cách,... Thơng qua phương pháp phân tích đồng phân đối quang amlodipin xây dựng thẩm định phương pháp, ta tiến hành phân tích đồng phân đối quang R -amlodipin S -amlodipin có số chế phẩm có chứa amlodipin dạng