Nghiên cứu ứng dụng phương pháp phun đông tụ để điều chế vi nang vitamin b12

So sánh độ ổn định của viên 3B điều ch ế bằng phương pháp phun đông tụ và viên 3B điều chế bằng phương pháp tách pha đông tụ 3.3.4.4.. Góp phần vào việc nghiên cứu độ ổn định của vitamin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

ĐỖ THỊ HOÀ

NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP

PHUN ĐÔNG TỤ ĐỂ ĐIỀU CHẾ

Đ ề tài này được thực hiên tại Bộ môn Bào chê, Trường Đ ại hoc Dược

H à Nội.

Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sáu sắc tới:

PGS.TS Phạm N gọc Bùng

Là người trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn

N hân dịp này tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới:

PGS TS Võ Xuân M inh

TS N guyễn Đ ăng H oà ThS Nguyễn Trần Linh ThS Vũ Thu Giang

Là những người đ ã tạo điều kiện làm thực nghiệm và giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đ ề tài tại Bộ môn Bào chế.

Trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn tôi cũng nhận được

sự giúp đỡ nhiệt tình của các thầy giáo, cô giáo, các kỹ thuật viên trong Bộ môn Bào c h ế , phòng đào tạo sau đại học, thư viện Trường Đ ại học Dược Hà Nội, của gia đình và bạn bè.

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với tất cả những giúp đỡ qui báu này.

H à Nội, ngày 16 tháng 12 năm 2002

Người viết luận văn

Đ ỗ Thị Hoà

1.3.2 N guyên tắc điều ch ế vi nang bằng phương pháp phun đông tụ 61.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng tới tính chất vi nang điều c h ế bằng

1.3.4 Tính chất vi nang điều ch ế bằng phương pháp phun đông tụ 11

1.4.1.2 M ục tiêu chính của việc thử nghiệm độ ổn định của thuốc 13

1.4.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc 141.4.1.5 Các kiểu thử nghiệm độ ổn định của thuốc, đặc điểm và

1.4.2.3 Phạm vi ứng dụng của phương pháp lão hoá cấp tốc 17

1.4.2.5 Cách tính tuổi thọ của thuốc theo phương pháp lão

C H Ư Ơ N G 2: Đ ố i TƯ Ợ N G , N Ộ I D U N G , PH Ư Ơ N G PH Á P

2.1 Đối tượng nghiên cứu

2.2 Nôi dung nghiên cứu

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp phun đông tụ tạo vi nang

2.3.2 Phương pháp tách pha đông tụ tạo vi nang

2.3.3 Phương pháp khảo sát tính chất vi nang vitam in Bp

2.3.4 Phương pháp bào c h ế viên nén Bị, B6, Bp

2.3.5 Phương pháp định lượng vitam in Bp trong viên nén 3B

2.3.5.1 Phương pháp đo quang

2.3.5.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) định

lượng vitam in Bp trong viên nén 3B theo USP 24

2.3.6 Phương pháp xác định độ hoà tan của vitam in B |2 từ

2.4.2 Phương tiện nghiên cứu

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u , KHẢO SÁT

3.1 N ghiên cứu chẽ tạo vi nang vitam in B 12 bằng phương pháp

phun đôn g tụ

3.1.1 T hiết lập các điều kiện kỹ thuật

3.1.1.1 Tốc độ phun

3.1.1.2 N hiệt độ buồng phun

3.1.2 Đ iều c h ế vi nang vitam in Bp bằng phương pháp phun

đông tụ

3.1.2.1 Các công thức vi nang không sử dụng chất diện

hoạt và chất tăng độ tan

3.1.2.2 Các công thức vi nang sử dụng chất diện hoạt

3.1.2.3 Các công thức vi nang sử dụng tinh bột

3.2 Đ iều chê vi nang vitam in B 12 bằng phương pháp tách

pha đông tụ

3.2.1 C ông thức điều ch ế

3.2.2 X ác định độ hoà tan của vi nang

3.3 N ghiên cứu điều chê viên nén vitam in 3B

3.3.1 Đ iều c h ế viên nén vitam in 3B

3.3.2 Xác định độ hòa tan của các m ẫu viên

28 29 29 31 31 32 34

34 34 34 35 37

37 47 51

56 56 56 58 58 61

3.3.4.1 Đ ánh giá độ ổn định của m ẫu viên 3B chứa vi

nang vitam in Bp điều c h ế bằng phương pháp tách pha đông tụ

3.3.4.2 Đ ánh giá độ ổn định của m ẫu viên 3B điều c h ế từ bột

nguyên liệu vitam in Bp

3.3.4.3 So sánh độ ổn định của viên 3B điều ch ế bằng phương

pháp phun đông tụ và viên 3B điều chế bằng phương pháp tách pha đông tụ

3.3.4.4 So sánh độ ổn định của viên 3B chứa vi nang B 12 điều

c h ế bằng phương pháp phun đông tụ và viên 3B điều c h ế từ bột

nguyên liệu Bp

C H Ư Ơ N G 4: B À N L U Ậ N

4.1 Về điều kiện tiến hành thí nghiêm - T rang thiết bị

4.2 Về phương pháp bào c h ế vi nang

71

71727273737475

ĐẶT VÂN ĐỂ •

Hiện nay thị trường dược phẩm nước ta rất đa dạng cả về chủng loại và

số lượng Các dạng thuốc rắn để uống chiếm tỷ lệ khá lớn, trong số này dạng viên nén chứa nhiều dược chất rất phổ biến do tính tiện dụng trong sử dụng và hiệu quả điều trị cao

Trong các dạng viên hỗn hợp, viên B|, B6 B12 đã được nhiều hãng nước ngoài cũng như các xí nghiệp dược phẩm trong nước sản xuất, độ ổn định của viên Bị, B6 Bp không cao do Bp bị giảm hàm lượng rất nhanh khi tiếp xúc với

Bị, B6

Trong 5 năm trỏ' lại đây có nhiều công trình nghiên cứu về độ ổn định của vitamin B12 trong viên nén 3B nhằm mục đích khắc phục và cải thiện tình trạng chất lượng viên 3B quá kém như :

- Kỹ thuật dùng tá dược hấp phụ

- Kỹ thuật tạo vi nang bằng phương pháp tách pha đông tụ do thay đổi nhiệt độ

- Kỹ thuật phun sấy

Góp phần vào việc nghiên cứu độ ổn định của vitamin Bp, đặc biệt nghiên cứu áp dụng kỹ thuật bào chế mới chúng tôi tiến hành

"Nghiên cứu ứng dụng phương pháp phun đông tụ đê điều ch ế vi nang vitamin B ỉ2".

Mục tiêu của đề tài là :

1 Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật phun đông tụ để điều chế vi nang vitamin B|2 nhằm đảm bảo độ ổn định của viên nén 3B

2 Đánh giá so sánh độ ổn định của viên nén điều chế từ vi nang vitamin Bi2 theo 2 phương pháp: Phương pháp phun đông tụ và phương pháp tách pha đông tụ

1

1.1 Tổng quan về vitamin Iĩp B6 B12 :

1.1.1 Tổng quan về vitamin Bp (Cyanocobalamin) :

+ Vitamin Bp là những tinh thể màu đỏ tối, kết tinh hoặc vô định hình,

ở dạng khan rất dễ hút ẩm, khi để ngoài không khí có thể hút tới 12% nước

+ Tan trong nước (1:80), tan rất ít trong ethanol đặc biệt không tan trong aceton, cloroform và ether

* Dược động học [30], [31]:

+ Khi vào đường tiêu hoá, vitamin B12 liên kết với yếu tố nội, sau đó được hấp thu tích cực, hấp thu bị giảm ở những bệnh nhân không có yếu tố nội, rối loạn hấp thu, bị bệnh hay có khuyết tật ruột, hoặc sau cắt bỏ dạ dày, vitamin Bl2 còn được hấp thu theo cơ chế khuyếch tán thụ động

+ Vitamin B, 2 được liên kết chủ yếu với Protein huyết tương, gọi là transcobalamins, transcobalamin II có liên quan tới sự vận chuyển nhanh cobalamin tới các mô

+ Vitamin B, 2 được dự trữ ở gan, bài tiết hầu hết trong 8 giờ đầu qua mật, một phần bài tiết qua nước tiểu

+ Vitamin B, 2 khuyến tán được nhau thai và hiện diện trong sữa của người mẹ

* Tác dụng dược lý [30]:

+ Vitamin Bl2 có trong cơ thể chủ yếu ở dạng Methylcobalamin và Adenosylcobalamin Hydroxocobalamin, Methylcobalamin và Cobamamiđe đóng vai trò là những Coenzym trong việc tổng hợp axit Nucleic

+ Thiếu hụt vitamin Bp xảy ra ở người ăn kiêng với chế độ nghèo chất dinh dưỡng, ở bệnh nhân rối loạn hấp thu, rối loạn chuyển hoá và cắt bỏ dạ dày

+ Thiếu vitamin B12 dẫn tới thiếu máu nguyên hồng cầu khổng lổ và huỷ hoại hệ thần kinh Đặc biệt thiếu máu ác tính xuất hiện ở những bệnh

nhân thiếu yếu tố nội Yếu tố nội rất cần thiết cho việc hấp thu vitamin

* Công dụng - cách dùng - liều dùng [4], [20]:

+ Vitamin Bp được sử dụng điều trị và phòng ngừa bệnh thiếu vitamin Bl2 thiếu máu ác tính, thiếu máu nguyên hổng cầu khổng lồ, vitamin B |2 cần thiết cho phụ nữ có thai, nuôi con bú

+ Vitamin Bl2 được dùng theo đường tiêm bắp (cả Hydroxocobalamin

và Cyanocobalamin), Cyanocobalamin còn dùng để uống

+ Liều lượng : 250 - lOOOỊig tiêm bắp cách ngày X 1 - 2 tuần

Sau đó 250|ag mỗi tuần cho tới khi chức năng máu bình thường.

Duy trì liều lOOOịig mỗi tháng với Cyanocobalamin, mỗi

* Tính chất hoá lý [31]:

Thiamin hydroclorid là những tinh thể trắng nhỏ hay bột kết tinh thường có mùi đặc trưng, khi tiếp xúc với không khí, chế phẩm khan nhanh chóng hút ẩm (khoảng 4% nước) Dung dịch trong nước acid với giấy quỳ (dung dịch 1% pH từ 2,7 đến 3,4) Nóng chảy ở 248°c với sự phân huỷ Dễ tan trong nước, khó tan trong ethanol, không tan trong ether, benzen hay cloroform

* Công dụng [30]:

Dùng để phòng và điều trị bệnh thiếu vitamin Bị (do dùng thức ăn chứa

ít vitamin B,; người kém hấp thu, phụ nữ mang thai, cho con bú); bệnh lê phù (Beri - beri); người bị viêm các dây thần kinh ngoại biên [3]; [10]

1.1.3 Tổng quan về vitamin Bfi (pyridoxin) [4], [30]:

* C T C T :

.HCI CH,OH

* CTPT : CgHnNOj HC1Tên khoa học : 5-Hydroxy-6-methyl-3,4-pyridindimethanol hydroclorid

* Tính chất hoá lý [31]:

Pyridoxin là những tinh thể không màu, dễ tan trong nước (1:5) khó tan trong ethanol (1:115), không tan trong cloroform và ether Dung dịch trong nước acid với giấy quỳ, dung dịch 5% trong nước có pH 2,4 đến 3,0 bền vững khi đun nóng

Vitamin B6 dễ bị oxy hoá, tác nhân xúc tác sự oxy hoá là ánh sáng, tia

tử ngoại, do đó phải bảo quản các chế phẩm vitamin Bố trong thủy tinh màu vàng, tránh ánh sáng

* Công dụng [31]: Phòng và điều trị bệnh thiếu vitamin B6 (như người nghiện

rượu, người kém hấp thu) Dùng để phòng và điều trị bệnh viêm dây thần kinh

ngoại vi do dùng thuốc (Isoniazid; cycloserin; hydralazin; penicillamin) Dùng

điều trị thiếu máu nhược sắc hay thiếu máu nguyên đại hổng cầu mà các thuốc khác không có tác dụng khi lượng sắt trong cơ thể là đủ Dùng điều trị các hội chứng co giật ở trẻ em do phụ thuộc pyridoxin, dùng khi cơ thể có nhu cầu cao

1.2 Vài nét về viên nén chứa vitamin Bj, B6, B 12:

* Trong nước : Viên nén vitamin B|, B6, B12 chủ yếu bào chế dưới dạng viên bao bằng phương pháp xát hạt ướt Công thức hàm lượng viên thường là :

CHpH

4

(hoặc Thiamin hydroclorid).

Pyridoxin hydroclorid : 125mg

Một số chế phẩm 3B như : TriBfort của XNDPTW 24, Becovifort của CTDP Quận 4 -TPHCM (Coviphar), Trivita BF của CTCPDP -Dược liệu (Pharmedic)

Các sản phẩm nước ngoài có trên thị trưòng Việt Nam : Vitamin Bị, B6, B12 của Roche (Pháp), Nevramin của Takeda (Nhật), Terneurine của Bristol - Myers Squibb, các viên thường có hàm lượng rất cao

Chất lượng của các chế phẩm B|, B6, Bị, được coi là vấn đề thời sự của ngành Dược Qua kiểm tra của các cơ quan chức năng, có tới 50% số mẫu

không đạt tiêu chuẩn hàm lượng [21] trong đó có cả sản phẩm của các hãng

nước ngoài nổi tiếng

Trước thực trạng trên, vấn đề đặt ra làm thế nào để sản xuất ra viên nén3B có độ ổn định cao an toàn và hiệu quả với người sử dụng

1.3 Tổng quan về kỹ thuật tạo vi nang bằng phương pháp phun đông tụ [28], [38], [39], [40]:

1.3.1 Khái niệm về phun đồng tụ [28]:

Phun đông tụ là quá trình phân tán dược chất vào hỗn hợp cốt trơ đã được đun chảy, sau đó hỗn hợp được phun vào một khoang có nhiệt độ thấp tạo ra các hạt có kích thước từ 0,25 - 2,0mm

1.3.2 Nguyên tác điều chẽ vi nang bằng phương pháp phun đông tụ [28]:

* Cơ sở lý thuyết :

Đặc điểm của vi nang phun đông tụ phụ thuộc vào tính chất của cốt sử dụng Việc lựa chọn màng bao hay nguyên liệu tạo cốt thích hợp dựa vào các

chỉ tiêu như độ tan của dược chất, tính thân nước của màng bao [28],

Nguyên liệu màng bao được làm nóng chảy ở nhiệt độ thích hợp, sau đó dược chất được phân tán vào Hỗn hợp được phun vào buồng có nhiệt độ thấp hơn nhiệt độ nóng chảy của nguyên liệu làm màng bao Khi hỗn hợp được

phun ra, tạo thành những hạt nhỏ, nhiệt độ ở súng phun và ở buồng thu được điều chỉnh để đảm bảo các hạt nhỏ đông tụ sau khi phun Bột thu được bao gồm nhiều tiểu phân có kích thước khác nhau, mỗi tiểu phân có chứa dược chất được phân phối trong cốt tá dược Để phân phối dược chất vào cốt tá dược, nguyên liệu làm màng bao khi đun chảy phải đạt được độ nhớt thích hợp

[39]

Trong quá trình phun đông tụ, bộ phận cấp khí phải luôn ỉuôn đảm báo được luồng khí nóng để tránh việc các hạt đông tụ lại trước khi ra khỏi vòi phun gây tắc vòi

* Thiết bị phun đông tụ :

Các máy phun sấy thông thường hoạt động với luồng khí mát đi vào được sử dụng với mục đích phun đông tụ Thiết bị phun đông tụ gồm hai phầnchính : Buồng mát và bộ phận phun, bộ phận phun ở bên trong buồng mát cónhiệm vụ phân chia hạt thành các tiểu phân nhỏ

Có ba phương pháp phun đông tụ :

- Phun đông tụ với vòi phun đơn

- Phun đông tụ với vòi phun kép

- Phun ly tâm : Phun ly tâm có nhiều kiểu khác nhau :

- R : VAN GIẢM ÁP , ,

- Ta : CẶP NHIÊT ĐIỆN HÌNH 1.1 : s ơ Đ ổ CẤU TRÚC THIÊT BỊ PHUN ĐÔNG TỤ

Scott và cộng sự [28] đã sử dụng máy phun sấy trong phòng thí nghiệm (có tên gọi là Niro) hoạt động với luồng khí đi vào ở nhiệt độ thường (từ 25 đến 27°C) để nghiên cứu phun đông tụ Thiết bị Niro cần một vòng xoay có các lỗ phun tạo ra các hạt lỏng Tốc độ vòng xoay được điều khiển bằng áp lực turbin qua van giảm áp và bộ van kim Tốc độ vòng xoay vào khoảng 12.000 đến 43.000 vòng/phút

Một tác giả khác đã sử dụng mô hình phun sấy Nerco để điều chế vii nang bằng phương pháp phun đông tụ Tác giả giữ nhiệt độ của hỗn dịch ở 98°c và nhiệt độ ở phễu phân chia là 110°c Bộ phận phun ly tâm được nâng nhiệt độ lên 120°c Không khí nén ở áp suất 6 kg/cm3 làm quay bộ phận phun với tốc độ 35.000 vòng/phút

Người ta còn dựa trên cơ sở lý thuyết của việc các tia chất lỏng phân chia để mô tả quá trình hoạt động sản xuất ra các tiểu phân bằng phương pháp phun đông tụ Trong phương pháp này, một loại sóng hướng trục được phóng

vào tia chất lỏng bằng sự rung động cưỡng bức của vòi phun [39]

Elderm và cộng sự [28] đã sử dụng mô hình phun sấy Biichi 190 có vòi phun 0,5mm để phun đông tụ Hỗn hợp nóng chảy được phun vào 1 buồng hình trụ ở nhiệt độ phòng

1.3.3 Các yếu tô ảnh huỏng tới tính chất vi nang điều chế bằng phương pháp phun đỏng tụ [28]:

* Yếu tố công thức :

+ Chất mang (nguyên liệu tạo cốt) ;

Nguyên liệu tạo cốt thường dùng là các loại sáp như :

- Alcol stearyl.

- Parafin long

- Dầu thầu dầu hydrogen hoá (Castor wax)

- Lecithin, gelatin, monodiglycerid

- Ethyl cellulose, alcol, đường, chất dẻo

- Các chất thể chất mềm ở nhiệt độ phòng và nóng chảy không bị phânhuỷ

- Màng trao đổi ion được dùng để làm thay đổi mùi vị của thuốc.Tính chất của vi nang phụ thuộc vào độ tan của dược chất, tính thân nước của cốt sử dụng

+ Độ nhớt :

- Độ nhớt của hỗn hợp thuốc - chất mang tại thời điểm phun có ảnh hưởng đến tính chất vật lý của vi nang

ở 55°c độ nhớt của hỗn hợp thuốc chất mang 24 cP là điều kiện tối ưu

để thu được vi nang đạt yêu cầu về kích thước

- Độ nhớt còn ảnh hưởng tới đường kính vi nang, độ nhớt của hỗn hợp lại bị ảnh hưởng bởi tổng số thuốc phân tán trong dung dịch màng bao và lượng chất lỏng có trong dung dịch

- Độ nhớt của hỗn hợp phun cao vi nang có kích thước lớn chiếm tỷ lệ nhiều và ngược lại khi độ nhớt thấp

- Độ nhớt cao quá gây tắc vòi phun, vi nang có kích thước không đồng đều

+ Thành phần trong công thức [37]:

Việc lập công thức phụ thuộc vào loại sáp sử dụng, thành phần trong công thức, môi trường hoà tan Chất diện hoạt và Castor wax (CW) có trong thành phần công thức có khả năng cải thiện đáng kể tốc độ giải phóng dược chất Nồng độ chất diện hoạt tăng, khả năng giải phóng dược chất tăng lên và ngược lại

Nhiệt độ vào và ra khỏi hệ thống phải được điều chỉnh để đảm bảo việc làm nguội các vi nang sau khi phun.

+ Tốc độ làm nguội :

Một hỗn hợp nóng chảy của chất béo có thể kết tinh dưới nhiều dạng thù hình khi thay đổi tốc độ làm nguội

Tốc độ làm nguội nhanh triglycerides kết tinh ở dạng a không ổn định

1.3.4 Tính chất vi nang điều chê bằng phương pháp phun đông tụ [28]:

+ Độ nhớt của dầu và hỗn hợp dược chất - tá dược ảnh hưởng tới kích thước vi nang : Độ nhớt cao, vi nang có kích thưóc lớn nhiều và ngược lại.

+ Kích thước vi nang còn phụ thuộc vào lượng c w sử dụng và kích thước vòi phun

+ Nhiệt độ trong môi trường phun thay đổi, ảnh hưởng tiêu cực tới kích thước vi nang, vi nang không tơi xốp, kích thước không đổng đều

+ Tốc độ khuấy tăng, vi nang có kích thước nhỏ chiếm tỷ lệ lớn

* Độ tan :+ Tốc độ giải phóng dược chất từ các chế phẩm phun đông tụ phụ thuộc vào bề dày lớp màng bao, loại vòi phun, loại cw , việc có hay không sử dụng chất diện hoạt

+ Kích thước vi nang càng nhỏ, tốc độ giải phóng dược chất càng nhanh

+ Thành phần c w và môi trường hoà tan cũng ảnh hưởng tới độ tan.+ Chất diện hoạt có mặt, giúp sự thấm ướt lớp màng bao càng nhanh, phá vỡ nhanh cấu trúc lóp áo và dược chất hoà tan càng nhiều

Trên thế giới công nghệ phun đông tụ đã được sử dụng từ lâu, các thiết

bị phun đông tụ truyền thống đã được cải tiến Sản phẩm phun đông tụ được dùng để điều chế các dạng thuốc rắn để uống

Kỹ thuật này áp dụng với các vitamin tan trong nước, muối sắt Một vài phương pháp phun đông tụ áp dụng điều chế acid citric, natri bicarbonat, vitamin A, vitamin B|, B2, B6, B12

Phương pháp phun đông tụ sử dụng để làm tăng độ ổn định của dược chất, che dấu mùi vị khó chịu của một số chất như muối sắt, vitamin A và B

▲

1.4.1.2 Mục tiêu chính của việc thử nghiệm độ ổn định của thuốc [10]:

Việc nghiên cứu độ ổn định của thuốc nhằm các mục tiêu chính sau :

+ Lựa chọn công thức bào chế hợp lý, hệ thống bao bì hoàn chỉnh.+ Xác định tuổi thọ và điều kiện bảo quản hợp lý

+ Chứng minh tuổi thọ đã được đề xuất

+ Thẩm định sự thay đổi trong công thức hoặc quá trình sản xuất có những yếu tố nào ảnh hưởng bất lợi đến độ ổn định của chế phẩm để có biện pháp khắc phục

1.4.1.3 Các chi tiêu đánh giá độ ổn định của thuốc [15]:

* Chỉ tiêu vật lý: + Màu sắc

+ Mùi vị + Trạng thái + Độ đồng đều + Độ hoà tan + Độ rã

* Chỉ tiêu hoá học:

4- Định tính : Sự thay đổi thành phần + Định lượng : Sự biến đổi hàm lượng hoạt chất

+ Sản phẩm phân huỷ + Tạp chất liên quan + Thay đổi pH

* Chỉ tiêu sinh học:

+ Hoạt lực + Độ nhiễm khuẩn + Nấm mốc

+ Chất gây sốt

* Chỉ tiêu độc tính : Độc tính tăng lên hay vẫn như lúc đầu

Khi nghiên cứu một chế phẩm thuốc mới hay hoàn thiện nâng cao chất lượng thuốc đã được sử dụng trong lâm sàng đều phải nghiên cứu độ ổn định

để từ đó qui định hạn dùng, điều kiện bảo quản

1.4.1.4 Các yếu tô ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc:

Độ ổn định của thuốc chịu ảnh hưởng của hai nhóm yếu tố cơ bản

* Nhóm yếu tố nội tại :

+ Thành phần của thuốc: Dược chất, tá dược, chất phụ

+ Kỹ thuật bào chế

+ Bao bì

* Nhóm yếu tố ngoại lai:

Nhóm yếu tố này bao gồm: Nhiệt độ, ánh sáng, không khí và độ ẩm Trong suốt quá trình bảo qụản thuốc luôn chịu ảnh hưởng của các yếu tố ngoại cảnh này Vì vậy, điều kiện bảo quản có ảnh hưởng rất lớn tới độ ổn định của thuốc

+ Nhiệt độ :

Khi tăng nhiệt độ, tốc độ phản ứng phân huỷ thuốc tăng nhanh Đối với

các phản ứng đồng thể, tốc độ riêng k thường tăng 2 3 lần khi nhiệt độ tănglên 10°c Ngoài ra, nhiệt độ còn ảnh hưởng tới trạng thái bền vững của một số dạng thuốc như hỗn dịch, nhũ tương, thuốc tan và khí dung

+ Ánh sáng : Một số hoạt chất bị phân huỷ dưới tác dụng của ánh sáng

+ Độ ẩm : Độ ẩm của không khí cao tạo điều kiện cho nấm mốc phát triển, ngoài ra hơi nước còn gây phân huỷ một số thuốc

I.4.I.5 Các kiểu thử nghiệm độ ổn định của thuốc, đặc điểm và mục đích thử nghiệm [7], [15]:

Có thể khái quát các kiểu thử nghiệm độ ổn định của thuốc, đặc điểm

và mục đích thử nghiệm theo bảng sau

Bảng 1.1 : Các kiểu thử nghiệm độ ổn định của thuốc:

1 Nhanh (Rapid trial) Nhiệt độ và độ ẩm cao

trong vòng 1 - 1 2 tuần (lão hoá cấp tốc)

Xác định nhanh các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc Từ đó lựa chọn công thức qui trình bào chế thích hợp

2 Đầy đủ (Full trial) Nhiệt độ và độ ẩm khác

nhau trong 5 năm

Tìm hạn dùng tuổi thọ của thuốc

3 Ngắn hạn (Short duration trial)

Trong điều kiện và thời gian giới hạn

Xem xét khi có sự thay đổi sản xuất

4 Từng phần (Limited trial)

Đánh giá một số chỉ tiêu Xem xét một ảnh hưởng

đặc biệt nào đó

1.4.2.1 "hử nghiệm độ ổn C ịnh và dự báo tuổi thọ của thuốc bằng phương pháp lão hoá cấp tốc [7]:

I.4.2.I Khái niệm:

"Lão hoá cấp tốc" là phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc trong điều kiện tăng cường các tác nhân gây phân huỷ thuốc nhằm giảm thời gian cần thiết để đánh giá độ ổn định của thuốc

I.4.2.2 Mục tiêu:

+ Thúc đẩy nhanh mức độ phân huỷ của thuốc trong các công thức bào chế khác nhau nhằm lựa chọn được công thức tốt nhất

4

H ìnhl.2: Lựa chọn công thức bào chế

+ Dự đoán tuổi thọ của thuốc: đó là thời gian mà chế phẩm vẫn giữđược chất lượng khi bảo quản ở những điều kiện khác nhau Đây là một trongnhững cơ sở để xác định hạn dùng của thuốc

Hìnhl.3: Xác định hạn dùng của thuốc

+ Lựa chọn được điều kiện bảo quản để có tuổi thọ của thuốc theo mong muốn

Phương pháp lão hoá cấp tốc ở nhiệt độ cao thường được áp dụng đối với các thuốc tổng hợp, các kháng sinh, các vitamin, các hoạt chất tinh khiết chiết từ dược liệu, không áp dụng đối với các dược liệu, men, nội tiết tố và các chế phẩm có nguồn gốc vi sinh vật khác.

Việc xác định tuổi thọ của thuốc theo phương pháp lão hoá cấp tốc được tiến hành trên 3 lô thuốc

Tuổi thọ của thuốc là kết quả tính trung bình trên một số lô thuốc Trong các số liệu thu được nếu có tuổi thọ chênh lệch vượt quá 130 ngày thì phải loại bỏ Nếu thời gian lưu mẫu thuốc kể từ ngày sản xuất đến ngày thử

ngày thử nghiệm lão hoá vượt quá 30 ngày, cần phải cộng thêm vào kết quả tuổi thọ số ngày bảo quản ở nhiệt độ thường.

1.4.2.4 Những qui định cụ thẻ về tác nhân lào hơá :

* Nhiệt độ: Nhiệt độ thúc đẩy tốc độ của phản ứng phân huỷ thuốc Khi tăng nhiệt độ, tốc độ phản ứng tăng nhanh Đối với mỗi loại thuốc cần phải xác định nhiệt độ bảo quản giới hạn, tránh thay đổi trạng thái của thuốc và gây ra những phản ứng lẽ ra không xảy ra ở điều kiện thường

Nhiệt độ lão hoá cấp tốc được đề nghị như sau :

+ Không cao hơn 60° đối với nguyên liệu, viên nén, viên nang cứng và dung dịch thuốc tiêm

+ Không quá 30°c đối với các thuốc đạn và aerosol

+ Không quá 40°c đối với nang mềm và các thuốc khác

* Độ ẩm : Độ ẩm cao sẽ thúc đẩy sự phân huỷ thuốc do phản ứng thuỷ phân

và làm thay đổi tính chất lý, hoá của thuốc Nhìn chung độ ẩm mẫu thử không được lớn hơn 90%

* Ánh sáng: Các nguồn sáng nhân tạo phải có sự phân phối năng lượng bức xạ

tương tự ánh sáng mặt trời do các phản ứng quang hoá chủ yếu xảy ra bởi các bức xạ có bước sóng nhất định

Cơ quan quản lý thuốc và thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) hướng dẫn về thực hành sản xuất thuốc tốt (GMP) và hạn dùng của thuốc có ghi rõ : Một nguyên tắc đối với dạng thuốc phân liều rắn, cho phép thuốc có hạn dùng 2 năm ở nhiệt độ phòng nếu sau 90 ngày bảo quản (lão hoá) ở nhiệt độ 40°c và độ ẩm tương đối là 75%, hàm lượng dược chất của thuốc còn lại 90% so với hàm lượng ban đầu

1.4.2.5 Cách tính độ tuổi thọ của thuốc theo phương pháp lão hoá cấp tốc [7]:

Theo nguyên tắc VanHoff, có thể tính toán gần đúng tuổi thọ của thuốc theo công thức sau đây

Tuổi thọ thuốc = K X tuổi thọ ở điều kiện lão hoá

A : Hệ số nhiệt độ của tốc độ phản ứng, thường chấp nhận A = 2

K : Hệ số tốc độ suy giảm tuổi thọ thuốc

Hệ số K phụ thuộc vào mức tăng nhiệt độ Trong phương pháp VanHoff giá trị hệ số K được chấp nhận theo bảng 1.2:

Bảng 1.2 : Giá trị hệ số K trong phương pháp VanHoff:

Trong đó :

E : là năng lượng hoạt hoá (Kcal/mol)

R : là hằng số khí lý tưởng (1,987 cal/Cmol)

T: là nhiệt độ tuyệt đối (K) = nhiệt độ thực nghiệm (°C) + 273,15 (°C)

2.2 Nội dung nghiên cứu :

+Nghiên cứu điều chế vi nang vitamin Bp bằng phương pháp phun đông tụ

+ Đánh giá độ hoà tan của các mẫu vi nang đã điều chế

+ Lựa chọn công thức vi nang đảm bảo độ ổn định của vitamin B12 từ đó dập viên B,,B6, Bi2

+ Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng tới tính chất và độ ổn định của vinang:

+ Đánh giá so sánh độ ổn định của viên nén 3B chứa vi nang vitamin

Bp điều chế bằng phương pháp phun đông tụ với viên nén 3B điều chế từ bột nguyên liệu B|2

2.3.Phương pháp nghiên cứu:

+ Phương pháp phun đông tụ tạo vi nang

+ Phương pháp xác định kích thước vi nang.

+ Phương pháp xác định độ hoà tan của B12 từ vi nang và từ viên nén

+ Phương pháp bào chế viên nén Bị, Bò, Bl2

+ Phương pháp định lượng vitamin Bp trong viên nén 3B

+ Phương pháp thử nghiệm độ ổn định

2.3.1 Phương pháp phun đông tụ tạo vi nang :

Bước 1: Đun chảy c w

( T^C: 85 - 88°C)

Tween 80 - ►

▼Bước 2: Phân tán dược chất vào cốt tá dược

yBước 3: Phun hỗn hợp dược chất

2.3.2 Phương pháp tách pha đông tụ tạo vi nang:

• Cân nguyên liệu:

Bước 1 và 2 dùng máy khuấy liên tục với tốc độ 400 vòng/phút

Bước 3: Tạo vỏ nang: Để nhiệt độ hạ từ từ tới khi đạt 40°c thì giảm tốc độ khuấy còn 200 vòng/ phút

Bước 4: Làm rắn vỏ nang: Cho tinh bột vào hệ, khuấy với tốc độ 200 vòng/ phút Trong quá trình này nhiệt độ hệ vẫn giảm, khi nhiệt độ hệ đạt 20°c làm lạnh hệ để nhiệt độ còn 5°c

Bước 5: Tách, lọc, rửa

Bước 6: Làm khô vi nang( để bay hơi dung môi, sấy nhẹ ở 30°C)

Bước 7: Phối hợp Tween 80: Tween 80 được cho vào vi nang với nồng độ 0,025mg/viên

Pha Tween 80 trong cồn tuyệt đối với nồng độ 2,5%(kl/tt).Dung dịch Tween 80/ cồn được phân tán vào Avicel rồi sấy khô, sau đó phối hợp với vi nang tạo hỗn hợp đổng nhất gọi chung là bột vi nang vitamin B12

Chúng tôi tiến hành làm 3 lô vi nang, mỗi lô làm với lượng vi nang đủ dập 500 viên 3B, sau đó trộn lẫn 3 lô với nhau

2.3.3 Phương pháp khảo sát tính chất vi nang vitamin B 12:

• Khảo sát tốc độ giải phóng hoạt chất từ vi nang:

Tiến hành trắc nghiệm hoà tan trên máy thử độ hoà tan VANKEL( Máy cánh khuấy), đánh giá kết quả theo DĐVN lần xuất bản thứ III [6]:

và vẽ đồ thị biểu diễn quá trình giải phóng vitamin B12 từ vi nang.

Mẫu chuẩn: Cốc thứ 7, là cốc đựng dung dịch vitamin B , 2 chuẩn, dung dịch này có nồng độ khoảng 30|j.g/ml

Mẫu trắng: Cốc số 8, mẫu trắng là nưóc cất

+ Đánh giá kết quả: Trong mỗi cốc lượng vitamin B12 hòa tan vào dung dịch không được ít hơn 70% lượng hoạt chất quy định Nếu có một cốc không đạt yêu cầu thì phải làm lại, lần này cả 6 cốc phải đạt yêu cầu

• Phân tích kích thước vi nang:

Sử dụng buồng đếm Goriev có thước đo chính xác đến 1/100 mm và kính hiển vi có độ phóng đại (10 15) để đo kích thước hạt Kích thước vi nang được xác định ở các điều kiện kỹ thuật khác nhau : Nhiệt độ phun khác nhau, tốc độ phun khác nhau, điều kiện công thức khác nhau, tỷ lệ c w khác nhau

* Nguyên tắc: Vi nang sau khi sấy khô được phân tán vào dung dịch ethanol 70°, đưa hỗn dịch thu được vào buồng đếm đã biết rõ kích thước (buồng đếm Goriev) tiến hành đếm và đo kích thước dưới kính hiển vi có lắp sẵn thước đo

* Tiến hành: Mẫu vi nang khô đem trộn đều, sau đó lấy một lượng thích hợp phân tán vào dung dịch ethanol 70° để thu được hỗn dịch có nồng độ vi nang thích hợp cho việc đếm và đo kích thước vi nang (khoảng cách giữa các

vi nang không quá dầy đặc hay quá loãng)

Hỗn dịch được lắc đều trước khi chuyển vào buồng đếm Việc đếm và

đo kích thước vi nang được thực hiện trên 6 ô vuông trong tổng số 25 ô vuông

*

2.3.4 Phương pháp bào chê viên nén B1? B6, Bp [13], [18]:

Các kết quả nghiên cứu trước đây [8], [9],[10] cho thấy:

+ Vitamin B12 bị giảm hàm lượng đáng kể do tiếp xúc trực tiếp với Bị, B6

+ Vitamin B |2 bền hơn khi kết hợp với Bị ở dạng muối hydroclorid

+ Vitamin B|, B6 cũng bị giảm hàm lượng đáng kể khi kết hợp với nhau trong điều kiện ẩm

Do vậy chúng tôi chọn phương pháp xát hạt ướt Bị riêng, B6 riêng, vi nang B12 được kết hợp vói tá dược độn sau đó ba loại hạt vitamin được kết hợp với nhau và dập viên

Công thức hạt vitamin B,( lOOgam hạt):

Công thức hạt vitamin B6( 100 gam hạt):

Công thức hạt vitamin B12( 100 gam h ạ t ):

Vi nang vitamin B |2 ~ 0,125g vitamin B12

Dập viên đường kính 12mm, có khối lượng khoảng 600mg

2.3.5 Phuong pháp định lượng vitamin B 12 trong viên nén 3B:

2.3.5.1 Phương pháp đo quang:

Nguyên tắc của phương pháp là sử dụng đặc tính hấp thụ tử ngoại của các chất để từ đó xác định chúng Các vitamin đều có dây nối đôi, nối ba liên hợp Các dây nối đều hấp thụ bức xạ tử ngoại Phương pháp quang phổ tử ngoại được sử dụng rộng rãi để định lượng, tuy nhiên ứng dụng của phương pháp bị hạn chế do ít cực đại hấp thụ đặc trưng trong vùng bức xạ tử ngoại nên nhiều khi không định lượng được các thành phần trong hệ đa thành phần Phương pháp này đã được dùng để định lượng thành phần vitamin Bị, B6 trong

Detector quang phổ tử ngoại khả kiến với bước sóng 550nm.

• Phương pháp định lượng:

Dung dịch chuẩn: Hoà tan một lượng chính xác vitamin B |2 chuẩn trong nước để thu được dung dịch chuẩn gốc có nồng độ khoảng 10 ng vitamin B12 trong 1 ml nước( Chú ý: Dung dịch chuẩn gốc được bảo quản ở nơi mát, tránh ánh sáng và sử dụng trong vòng một tuần) Pha loãng dung dịch thu được với nước để thu được dung dịch có nồng độ khoảng 1 |ig/ lm l (Dung dịch chuẩn)

Dung dịch thử: Cân và nghiền ít nhất 30 viên, lấy chính xác một lượng bột viên tương đương khoảng 100(J.g vitamin Bp cho vào bình định mức 250

ml, thêm 100 ml nước cất, lắc cho tan hoàn toàn, lọc dung dịch qua màng lọc 0,45|am Bỏ 20ml dịch lọc đầu, dịch lọc được sử dụng làm dung dịch thử

Căn cứ vào diện tích pic thử so sánh với diện tích pic chuẩn xác định được hàm lượng vitamin B12 có trong viên

• Cách tính kết quả :

Hàm lượng vitamin B |2 có trong viên được tính theo công thức :

*

c%= V - v v - ioo

Sc -W,-c,

St : Diện tích pic mẫu thử

Sc : Diện tích pic mẫu chuẩn

mc : Lượng cân chất chuẩn,

m, : Lượng cân mẫu thử

C0 : Hàm lượng chất chuẩn

Ct : Hàm lượng ghi trên nhãn của vitamin B, 2 có trong viên nén 3B

m : khối lượng trung bình viên

2.3.6 Phương pháp xác định độ hoà tan của B12 từ viên nén 3B:

Phương pháp xác định độ hoà tan của Bp từ viên nén 3B được thực hiện theo Được điển Việt Nam III [6] và định lượng bằng HPLC theo Được điển Anh (BP 98) [25]

* Giai đoạn hòa tan:

Máy thử độ hòa tan VANKEL (máy cánh khuấy)

Môi trường hòa tan: Nước cất, mỗi cốc 900ml

Nhiệt độ : 37°c ± 0,5°c

Tốc độ khuấy : 100 vòng/phút

*Giai đoạn định lượng:

Pha động : 26,5 V methanoỉ : 73,5 V dung dịch Na2HP04 1% (kl/tt)

Detector quang phổ tử ngoại ở bước sóng 361nm

Dung dịch chuẩn: Hòa lan lOmg vitam in B p chuẩn trong pha động và pha loãng ( bằng pha động) vừa đú 100ml Pha loãng 2 ml dung dịch trên (bàng pha động) vừa đủ 100 ml Dung dịch sử dụng trong vòng 1 giờ

Dung dịch thử: Sau khi viên được hoà tan, lấy dịch hoà tan pha loãng bằng pha động để thu được dung dịch có chứa khoảng 2 fig vitam in B 12/ml

Tiến hành định lượng dung dịch Ihử và dung dịch chuẩn trong cùng điều kiện

Căn cứ vào s pic thử và s pic chuẩn tính được lượng vitam in B12 giải phóng sau 45 phúl

.• Cách tiến hành: Mỗi lô thử trên 6 viên bất kỳ, lấy m ẫu định lượng ở phút thứ 45 theo phương pháp HPLC, mỗi viên được đo 3 lần K ết quả là trung bình của 3 lần đo Lượng vilam in B p giải phóng trong 1 viên ở phút thứ 45 được tính trung bình trên 6 viên

• Đ ánh giá kết quả: trong 6 viên thư lượng vitam in Bp giải phóng ở mỗi viên không dưới 70% hàm lượng quy định N ếu có 1 viên không đạt yêu cầu thì phải làm lại trên 6 viên khác, lần này tất cả phải đạt

2.3.8 Phương pháp xử lý sô liệu [14]:

Áp dụng chương trình thống kê ứng dụng trong công tác dược và chương trình EXCEL 7.0 để xử lý các số liệu

Mỗi phép thử được lặp lại n lần trong cùng m ột điều kiện cho các kếl quả tương ứng x l, x2, x3, ,xn Các số liệu này được xử lý thống kê để xác định giá trị trung bình X , Khoảng tin cậy trung bình (ụ,),Test F, Test l.

Giá trị trung hình X : X =

n

Phương sai m ẫu s 2: s , 2

2.4 Nguyên vật liệu, phưưng tiện nghiên cứu:

2.4.1 Nguyên vật liệu:

¥■

2.4.2 Phương tiện nghiên cứu:

+ Thiết bị phun đông tụ tự tạo ( Hình 2.1)

+ Thiết bị tạo vi nang bằng phương pháp tách pha đông tụ

+ Máy dập viên tâm sai ERWEKA với bộ chày cối ộ = 12mm

+ Máy thử độ hoà tan VANKEL750

+ Máy trắc nghiệm hoà tan ERWEKA - DT60

+ Máy đo quang BECKMAN DƯ 640(USA)

+ Máy đo độ trơn chảy ERWEKA - GVVF

+ Máy đo thể tích biểu kiến của hạt ERWEKA SVM

+ Máy đo lực gây vỡ viên ERWEKA TBH 200( GERMANY)

+ Máy khuấy từ HEIDOLPH MR 3001

+ Cân phân tích SATORIƯS

+ Cân kỹ thuật SATORIUS

+ Dung dịch NaCl bão hòa tạo độ ẩm thực nghiệm

+ Máy HPLC: Máy THERMO FINNIGAN, bơm cao áp P4000, hệthống tiếp mẫu tự động và ổn định nhiệt độ cột với phần mềm CHROM

QUEST VERIAN 2.51 Cột HYPRITY C |8, kích thước cột 150 X 4,6mm, kích

thước hạt 5|j.m

CHƯƠNG 3: KÊT QUẢ NGHIÊN c ứ u , KHẢO SÁT

3.1 N ghiên cứu chê tạo vi nang vitam in B 12 bằng phương pháp phun đông tụ [17], [28]:

3.1.1 T hiết lập các điều kiện kỹ thuật:

Trong điều kiện thiết bị phun đông tụ chưa có ở V iệt Nam, chúng tôi đã

tự thiết k ế thiết bị để điều ch ế vi nang Các yếu tố kỹ thuật ảnh hưởng đến tính chất vi nang chưa được xác định thông số, do vậy trước tiên chúng tôi thiết lập các điều kiện kỹ thuật phù hợp cho việc phun đông tụ

Các điều kiện này bao gồm: Tốc độ phun và nhiệt độ buồng phun

3.1.1.1 Tốc độ phun:

Đ ể lựa chọn tốc độ phun thích hợp, chúng tôi tiến hành phun m ẫu vi nang với tỷ lệ (B p : CW )/( 1: 5) ở hai mức tốc độ: 6m l/giây và 4m l/giây với áp lực khí nén khoảng 5 atm /cm 2, sau đó tiến hành phân tích kích thước vi nang ở hai mức tốc độ trên (Tốc độ phun của súng được chuẩn theo nước cất ở 80°C)

B ảng 3.1 : K ết quả phân tích thành phần phân đoạn theo kích thước vi nang vitam in B p (%) ở hai m ức tốc độ: