Thực hành di truyền đại cương cô Trà Mi (có đáp án)

DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành LABORATORY & TUTORIAL MANUAL ANIM 2503 ANIMAL BREEDING AND MOLECULAR GENETIC MSc BUI THI TRA MI DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG MỤC LỤC Bài Tách chiết ADN Phần I Thao tác với Micropipette Phần II Tách chiết ADN từ máu heo Bài Polymerase Chain Reaction (PCR) Phần I Pha loãng nồng độ ADN Phần II Chạy phản ứng PCR Bài Điện di kết 10 Phần I Điện di 10 Phần II Phân tích kết 11 Bài tập tổng hợp Hướng dẫn thực hành DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành Bài 1: TÁCH CHIẾT ADN Phần 1: Thao tác với micropipette Micropipette thiết bị dùng để thao tác thể tích cấp độ micro lit (µl) Trong thực hành này, bạn tập làm quen với cách sử dụng micropipette: cách cầm, điều chỉnh thể tích, hút nhả dung dịch cho xác A Cách sử dụng: Mỗi micropipette tích đo lường khác Biên độ đo thể tích ghi rõ pipette Khi điều chỉnh hút dung dịch phải ý chọn pipette phù hợp điều chỉnh thể tích nằm biên độ cho phép Tuyệt đối khơng điều chỉnh thể tích vượt ngồi biên độ a Cái móc: cầm Pipet nghiêng phía cách lỏng lẻo sống bàn tay không sử dụng, làm tay bị sức b Cầm chặt bàn tay Tránh cầm pipet chặt để giảm mỏi tay vai sau sử dụng pipet lâu c Để lộ phần ghi số thể tích: nhìn suốt thời gian để kiểm sốt thể tích lấy sử dụng d Nút nhấn lớn: nhấn để đẩy đầu tip khỏi pipette e Vặn điều chỉnh thể tích; nhấn/thả để hút/đẩy dung dịch e DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành B Cách lấy mẫu Mỗi micropipette có biên độ đo thể tích khác sử dụng đầu tip khác Dung tích đo lường loại đầu tip: Tip trắng: – 10 µl Tip vàng: 10 – 200 µl Tip xanh: 100 – 1000 µl - Chọn loại đầu tip cho pipette tương ứng Ấn pipette vào đầu tip kết hợp xoay nhẹ Nếu khơng xoay có khe hở đầu tip pipette dẫn đến thể tích hút thực bị sai pipette bị nhỏ giọt Cầm pipet tư thắng đứng Ấn tới nấc dừng thứ Nhúng đầu pipet tip khoảng – mm vào dung dịch Thả pittông từ từ Để cho mẫu, ấn tới nấc dừng thứ Chuyển tất phần lại chất lỏng đầu pipet tip ra, ấn tới nấc dừng thứ hai (để hết dung dịch DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành khỏi pipet tip) Dưới số kích thước pipette thường sử dụng Pipette P10 P20 P40 Biên độ đo lường (µl) 0.0 – 10.0 2,0 – 20,0 5,0 – 40,0 P100 10 - 100 P200 20 - 200 P1000 100 - 1000 Lưu ý Không điều chỉnh thể tích 10 Khơng điều chỉnh thể tích 20 Khơng điều chỉnh thể tích 40 Khơng điều chỉnh thể tích 10 100 Khơng điều chỉnh thể tích 20 200 Khơng điều chỉnh thể tích 100 1000 a Dựa vào pipette thực tế nhóm, chọn pipette đầu tip cho phù hợp để đo lường thể tích sau đây: Thể tích 2.3 µl 154.6 µl 783 µl 36,2 µl 19.0 µl Loại pipette P10 P200 (150) + P10 (4.6) P1000 P20 (18 + 18.2) P20 Biên độ đo lường (µl) 0.5 - 10 40 - 200; 0.5 - 10 100 - 1000 - 20 - 20 Màu sắc tip tương ứng Trắng Vàng; Trắng Xanh Vàng Vàng C Thực hành thao tác với micropipette: Mỗi sinh viên cung cấp dụng cụ gồm pipette kích cỡ khác nhau, đĩa petrie có lót sẵn giấy thấm kích thước khác nhau, màu nhuộm sinh viên/ nhóm: làm chung mẫu Mỗi nhóm hút dung dịch nhỏ vào bên đĩa petrie theo kích thước cho bên quan sát dung dịch đĩa petrie nhóm đối diện A: 250 µl B: 90 µl C: 5µl b Quan sát ghi nhận vòng thấm lan giấy nhóm? DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành Kết nhóm nhau: A: Vòng thấm lan thành hình elip chiếm gần 3/4 tờ giấy B: Vòng thấm lan thành hình elip chiếm khoảng 1/4 tờ giấy C: Vòng thấm hình tròn có đường kính khoảng cm Phần Tách chiết ADN từ máu heo A Tách lọc bạch cầu Thông thường lấy mẫu về, trước tách chiết ADN, thường có bước đầu thao tác nhằm loại bỏ thành phần tạp chất hay thành phần khơng có chứa ADN, nhằm góp phần giúp thu ADN tinh sau hồn tất quy trình tách chiết Trong phần thực hành này, sinh viên thao tác tách chiết thành phần khơng có chứa ADN máu động vật hữu nhũ (heo) Lưu ý: mặc áo blue đeo găng tay thao tác (tự chuẩn bị) SV làm chung mẫu Rửa ống nghiệm dơ sau thao tác Dụng cụ, thiết bị: Máy ly tâm, Ống nghiệm chứa 15ml chứa mẫu, micropippete loại, đầu tip loại, lọ chứa dung dịch bỏ Hóa chất: dung dịch NaCl 0,2% Thao tác: Hút 5ml NaCl 0,2% vào ống nghiệm có chứa sẵn 1ml máu heo, trộn đều, ly tâm với vận tốc 3000 vòng/phút phút Hút bỏ phần Tiếp tục cho vào 5ml NaCl 0.2%, trộn đều, ly tâm 3000 vòng/phút phút Lập lại thao tác bốn lần a Thành phần máu bao gồm gì? - Các tế bào máu: hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG - Hướng dẫn thực hành Huyết tương b Với mẫu máu heo, ADN nằm đâu thành phần kể trên? Bạch cầu B Tách chiết ADN Lưu ý: mặc áo blue đeo găng tay thao tác (tự chuẩn bị) SV làm chung mẫu Rửa ống nghiệm dơ sau thao tác Dụng cụ, thiết bị: Máy ly tâm, ống nghiệm chứa mẫu, micropippete loại, đầu tip loại, lọ chứa dung dịch bỏ Hóa chất: Lysis Buffer, Proteinase K, Phenol, CIAA (Chloroform/Isoamyl Alcohol), Ethanol 95%, Ethanol 70%, TE 1X Thao tác: Cho 3ml Lysis Buffer + 30 µl Proteinase K vào ống mẫu trên, trộn đều, ủ 550C qua đêm ( tối thiểu tiếng) c Proteinase K (PK) gì? Tác dụng PK? Proteinase K (PK) serine protease phổ rộng Enzyme có tác dụng phân cắt protein, làm vỡ màng tế bào giải phóng ADN môi trường Cho vào 3ml Phenol, trộn đều, ly tâm 3000 vòng/phút phút d Ở bước xuất hiện tượng kết tủa? Kết tủa gì? Tại xuất kết tủa? Kết tủa protein biến tính bạch cầu lại Phenol không tan nước nhờ trộn tạo thành nhũ tương giọt dầu nước Protein bị biến tính phenol ADN nguyên nước Khi ly tâm, hai lớp phenol nước tách ra, phenol nặng nên lắng DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành xuống dưới, protein biến tính bạch cầu sót nằm ranh giới phenol nước Hút phần chuyển vào ống nghiệm mới, sau thêm vào 3ml Phenol/CIAA, trộn đều, ly tâm 3000 vòng/phút phút e ADN nằm đâu? Phần loại bỏ bao gồm gì? ADN tan nước nằm Phần loại bỏ gồm protein biến tính sót thành phần Lysis Buffer bị hòa tan CIAA Hút phần chuyển vào ống nghiệm mới, sau thêm vào 3ml CIAA (Chloroform/Isoamyl Alcohol), trộn đều, ly tâm 3000 vòng/phút phút f ADN lúc nằm đâu? Phần loại bỏ bao gồm gì? ADN tan nước nằm lớp Phần loại bỏ Lysis Buffer bị hòa tan CIAA Hút phần chuyển vào ống nghiệm có chứa sẵn 5ml Ethanol 95% lạnh g Hiện tượng kết tủa xuất Chất kết tủa gì? ADN Ly tâm 6000 vòng/phút phút Hút cạn phần dung dịch bỏ Lưu ý đừng loại bỏ ADN Cho vào 3ml Ethanol 70% Trộn Ly tâm 3000 vòng/phút phút h Tác dụng EtOH 70% bước gì? Cho EtOH 70% vào để loại bỏ muối NaCl lại Hút cạn phần dung dịch bỏ Làm mẫu Cho vào 200 µl TE 1X Ủ 370C qua đêm i Tác dụng dung dịch TE 1X? Tách sợi ADN môi trường Bảo quản mẫu DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành 10 Chuyển dung dịch ADN vào eppendorf 1.5ml 11 Trữ mẫu 40C Bài 2: POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) Phần I Pha loãng nồng độ ADN Tùy theo lượng mẫu thao tác, nồng độ ADN thu không giống sau tách chiết (thường nồng độ đậm đặc) Và phản ứng PCR, lượng ADN mẫu đưa vào có khác biệt Vì cần phải pha lỗng ADN theo nồng độ phù hợp trước thực PCR nhằm đơn giản thao tác phản ứng xảy xác Chuẩn bị: ống eppendorf, micropipette, nước cất TE 1X Thao tác: Ghi nhận kết đo nồng độ mẫu ADN nhóm vào cột C (Giáo viên cung cấp số liệu cho bạn) Hãy tính tốn lượng ADN lượng nước/TE 1X bạn cần thêm vào để có tổng thể tích mẫu 200µl với nồng độ 100ng ADN/µl theo cơng thức sau: Nồng độ ban đầu x thể tích mẫu gốc = nồng độ cần pha loãng x thể tích mẫu cần pha Hay ta có D = (A x B)/C Lượng nước/TE 1X bạn cần thêm vào để có tổng thể tích 200µl với nồng độ 10ng ADN/µl? E = B – D Mẫu A B C D E Nồng độ cần Thể tích mẫu Nồng độ Thể tích mẫu Thể tích pha lỗng cần pha gốc ban gốc cần nước/TE 1X đầu thêm vào cần thêm vào Hiệu 100ng/ µl 200 µl chỉnh 10ng/ µl 156 µl 520ng/ µl µl 153 µl DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành Trộn lượng nước tính từ cột E với lượng ADN từ cột D vào ống eppendorf Phần II Chạy phản ứng PCR Để phản ứng PCR xảy tốt dễ dàng dự đoán điều chỉnh thành phần để kết thu rõ ràng hơn, cần phải tính tốn trộn lượng hỗn hợp tổng cho xác Hỗn hợp tổng chuẩn bị bao gồm mẫu đối chứng (N) Chuẩn bị ống eppendorf 1,5ml để trộn hỗn hợp tổng Ghi số nhóm thực lên nắp ống - Tính tốn thành phần để chạy phản ứng + phản ứng đối chứng (N) a Tính tốn thể tích thành phần cho phản ứng Điền kết vào cột C Sử dụng công thức sau để tính thể tích thành phần : Cơng thức tam suất C = B x V∑/A H2O = V∑ - Các thành phần biết b Tính tốn điền kết thành phần tổng vào cột D Thành phần A (Nồng độ gốc) ADN Nước cất Dung dịch đệm dNTPs Mồi xuôi F Mồi ngược R MgCl2 Enzyme (Taq DNA 10ng/ µl B (Nồng độ phản ứng) 50ng (**) 10X 1.0mM 10pmol/µl 10pmol/µl 25mM 5UI/ µl 1X 150µM 30pmol 30pmol 2,25mM 1UI C (Thể tích cho phản ứng) 5µl 2µl 2µl 3µl 3µl 3µl 1,8µl 0,2µl D (Thể tích cho phản ứng +1) 25µl 10µl 10µl 15µl 15µl 15µl 9µl 1µl DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành polymerase)* Tổng (V∑) 20 µl(**) 100µl *: đưa vào hỗn hợp cuối cùng; **: số liệu thay đổi tùy theo nhóm thực hành Hút thành phần tính vào ống eppendorf 1,5ml Trộn nhẹ nhàng cho Chuẩn bị ống eppendorf 200 µl Đánh số từ 1->4 eppendorf ghi chữ N Dùng micropipette hút …15… µl hỗn hợp vào eppendorf 200 µl Thêm …5…… µl ADN vào eppendorf Khơng cho ADN vào ống N Phản ứng PCR chạy theo quy trình sau: Bước 1: tiền biến tính 940C, 10phút Bước 2: Biến tính 940C, 30 giây Bước 3: Ủ bắt cặp 550C, 45 giây Lặp lại 35 lần Bước 4: Kéo dài 72 C, 45 giây Bước 5: Bù thêm 720C, 5phút Bước 6: Giữ mẫu 0C a Tổng thời gian chạy phản ứng PCR kéo dài bao lâu? tiếng 25 phút b Tại cần phải có mẫu đối chứng N? Mẫu đối chứng có thành phần khác so với mẫu thí xét nghiệm? Ở mẫu đối chứng N chứng âm (Negative control): Phân biệt có ngoại nhiễm hay khơng Đối chứng N khơng cho ADN mà thay nước cất Ngồi có chứng dương (Positive control): Đảm bảo phản ứng tốt Có lượng ADN biết phản ứng Tóm lại, phản ứng cần có chứng âm chứng dương để loại trừ tượng âm tính giả hay dương tính giả DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành Bài 3: ĐIỆN DI KẾT QUẢ Phần I Điện di A Pha agarose nồng độ 1% Cân 1g agarose + 100ml dd TAE 1X Nếu muốn pha 100ml dd agarose có nồng độ 1,5%, cần gram agarose? 1,5g Microwave cho agarose tan đều, sôi khoảng lần Đợi dd agarose nguội, khoảng 500C, thêm µl ETBr vào Chú ý lắc nhẹ bình chứa agarose đá bào theo chiều kim đồng hồ lắc ngược lại để ETBr tan gel tránh bọt khí a ETBr gì? Tác dụng ETBr? ETBr (Ethidium bromide) chất nhuộm sử dụng để phát ADN/ARN điện di gel agarose ETBr kích thích đèn UV phát ánh sáng huỳnh quang màu cam đỏ, quan sát mắt thường ETBr phát ng ADN băng (Lưu ý: ETBr có khả gây đột biến mạnh) b Tại phải tránh tạo bọt khí q trình đổ gel? Nếu để bọt khí xảy mà khơng làm vỡ trước gel đơng cứng tạo biến dạng làm ảnh hưởng đến đường chạy mẫu khơng thẳng – tránh bọt, dẫn đến việc đo đạc, ước lượng kích thước phân tử ADN khơng xác Đổ gel vào khn gắn lược, chờ gel đông đặc DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành B Load mẫu: Hút µl Ladder 100 (ABM) cho vào giếng c Ladder gì? Tác dụng ladder? Ý nghĩa số 100? Ladder (Marker), tập hợp đoạn ADN có kích thước xác định biết trước dùng làm thang chuẩn để ước lượng kích thước phân tử ADN chưa rõ tiến hành điện di Ladder 100, số 100 cho biết Ladder thiết kế để đo kích thước phân tử ADN phạm vi 100bp-1000bp (số 1000 tùy vào Ladder thiết kế), độ chia nhỏ dải tham chiếu 100bp, tức vạch chênh 100bp d Theo hình, Ladder 100 giếng:……………1 10…………………………… e Xem hình bên điền kích thước tương ứng với band ladder Hút µl mẫu cho vào giếng khác - Điện di 100 V 30 phút Phần II Phân tích kết Mỗi nhóm nhận kết điện di sản phẩm PCR nhằm xác định vật nuôi có nhiễm bệnh sau: PRRS PED DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành f PRRS viết tắt của:……… Porcine Reproductive & Respiratory Syndrome………… PRRS bệnh: ……tai xanh……………………………………………………………………………………………… Có tên gọi khác là……Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp ……………………………………… xảy trên………heo (lợn)…………………………………………… virus……PRRS (PRRSV) ……… ……… ……gây g PED viết tắt của………Porcine Epidemic Diarrhoea …………………………………………… PED bệnh: ………tiêu chảy cấp………………………………………… xảy trên……heo (lợn) … ……………………………………………………………………………… virus………PED (PEDv) ……………… …………………… gây Để xác định bệnh, phản ứng PRC thực với cặp primer sau: h F viết tắt của……forward ……………………………… R viết tắt của…………reverse…………………………… i Hãy tìm gạch trình tự Nucleotid quy định mồi xuôi mồi ngược đoạn gien giải mã dây: (Lưu ý: Khi xác định trình tự mồi ngược, trước tiên nhóm phải viết lại trình tự Nucleotid bắt cặp theo chiều 3’.) LOCUS AY612613 14281 GCAAAGTTGA GGTCGAAGGT CATCTGATCG ACCTCAAAAG AGTTGTGCTT GATGGTTCCG 14341 TGGCAACCCC TATAACCAGA GTTTCAGCGG AACAATGGGG TCGTCCTTAG ATGACTTCTG 14401 TCATGATAGC ACGGCTCCAC AAAAGGTGCT TTTGGCGTTT TCTATTACCT ACACGCCAGT Primer Trình tự (5’ – 3’) ORF6-F GTGGCAACCCCTATAACCAGAG ORF6-R ACGACAGACACAATTGCCGCTCAC E pro-F CGCAGTTTACACACCTATAGGG M pro-R CCTGCGCCACAACCGAATGCTATT Đối tượng phát Vùng gen khuếch đại Kích thước sản phẩm PRRSV ORF6 780 bp Coronavirus E&M 412 bp DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành 14461 GATGATATAT GCCCTAAAGG TGAGTCGCGG CCGACTGCTA GGGCTTCTGC ACCTTTTGAT 14521 CTTCCTGAAT TGTGCTTTCA CCTTCGGGTA CATGACTTTC GCGCACTTTC AGAGTACAAA 14581 TAAGGTCGCG CTCACTATGG GAGCAGTAGT TGCACTCCTT TGGGGGGTGT ACTCAGCCAT 14641 AGAAACCTGG AAATTCATCA CCTCCAGATG CCGTTTGTGC TTGCTAGGCC GCAAGTACAT 14701 TCTGGCCCCT GCCCACCACG TTGAAAGTGC CGCAGGCTTT CATCCGATTG CGGCAAATGA 14761 TAACCACGCA TTTGTCGTCC GGCGTCCCGG CTCCACTACG GTCAACGGCA CATTGGTGCC 14821 CGGGTTAAAA AGCCTCGTGT TGGGTGGCAG AAAAGCTGTT AAACAGGGAG TGGTAAACCT 14881 TGTCAAATAT GCCAAATAAC AACGGCAAGC AGCAGAAGAG AAAGAAGGGG GATGGCCAGC 14941 CAGTCAATCA GCTGTGCCAG ATGCTGGGTA AGATCATCGC TCAGCAAAAC CAGTCCAGAG 15001 GCAAGGGACC GGGAAAGAAA AATAAGAAGA AAAACCCGGA GAAGCCCCAT TTTCCTCTAG 15061 CGACTGAAGA TGATGTCAGA CATCACTTTA CCCCTAGTGA GCGGCAATTG TGTCTGTCGT 15121 CAATCCAGAC CGCCTTTAAT // LOCUS JQ282909 25561 GCTTCACTTG TCACCGGTTG TGTAATAGCG CAGTTTACAC ACCTATAGGG CGTTTGTATA 25621 GAGTTTATAA GTCTTACATG CAAATAGACC CCCTCCCTAG TACTGTTATT GACGTATAAA 25681 CGAAATATGT CTAACGGTTC TATTCCCGTT GATGAGGTGA TTCAACACCT TAGAAACTGG 25741 AATTTCACAT GGAATATCAT ACTGACGATA CTACTTGTAG TGCTTCAGTA TGGCCATTAC 25801 AAGTACTCTG CGTTCTTGTA TGGTGTCAAG ATGGCTATTC TATGGATACT TTGGCCTCTT 25861 GTGTTAGCAC TGTCACTTTT TGATGCATGG GCTAGCTTTC AGGTCAATTG GGTCTTTTTT 25921 GCTTTCAGCA TCCTTATGGC TTGCATCACT CTTATGCTGT GGATAATGTA CTTTGTCAAT 25981 AGCATTCGGT TGTGGCGCAG GACACATTCT TGGTGGTCTT // j Sau khuếch đại đoạn gien cặp mồi cho trên, kích thước sản phẩm DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành PCR phát PRRSv là…………………….bp PEDv là……………………………… bp Dựa theo kết nhận được, mẫu xét nghiệm*………………….: Dương tính hay âm tính:……………………………………………………………… Kích thước sản phẩm:…………………………bp Dương tính với bệnh:……………………………………………………………………………………………………… (*: nhóm nhận kết từ giáo viên) k Nếu có nhiều kích thước giếng đối chứng âm tính, điều có ý nghĩa nào? l Nếu có nhiều kích thước mẫu xét nghiệm PRRS/ PED điều có ý nghĩa nào? PCR đơn mồi: Nhân không hay tách chiết sai Ở trường hợp PCR đa mồi, mẫu xét nghiệm có chủng PRRS PED BÀI TẬP TỔNG HỢP Nhóm thực hành:……N12/01 … Học kỳ:………1………….Năm học:………2018 – 2019…… Họ tên SV:……… VÕ PHẠM DANH………………MSSV:……17111020………Lớp:…DH17CN…… …………NGUYỄN HẢI ĐĂNG………….MSSV:……17111018………Lớp:…DH17CN…… Dựa vào báo (Giáo viên cung cấp), trả lời điền thông tin (bằng tiếng Việt) vào nội dung sau: Tên báo, tên tác giả DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG - Hướng dẫn thực hành Tên báo: Phát đột biến lặn (BLAD CVM) đàn bò Holstein Friesian Cộng hòa Macedonia - Nhóm tác giả: Nikola Adamov, Dine Mitrov, Igor Esmerov, Peter Dovc - Address URL: https://www.researchgate.net/publication/275595943 Mục đích nghiên cứu? Mục đích nghiên cứu để tối ưu hóa thực thử nghiệm đáng tin cậy hiệu chi phí để phát hai alen BLAD CVM phòng thí nghiệm, để có kết sơ có mặt chúng quần thể bò HF Macedonia Đối tượng lấy mẫu số lượng mẫu thực nghiên cứu? Mẫu máu lấy từ 84 gia súc thuộc giống HF nuôi số trang trại khác Macedonia từ liều tinh trùng đông lạnh từ bò HF khác sử dụng cho việc thụ tinh nhân tạo Macedonia Điền thành phần/thông tin cần thiết để thực phản ứng PCR vào bảng sau: Đối với khuếch đại alen BLAD Thành phần tham gia phản ứng ADN Nước cất Dung dịch đệm Nồng độ/thể tích phản ứng 50-100 ng 1X Quy trình chạy phản ứng Tiền biến tính Biến tính Ủ bắt cặp Nhiệt độ 95°C 94°C 58°C Thời gian phút phút phút DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG dNTPs Mồi xuôi F Mồi ngược R MgCl2 Enzyme (Taq DNA polymerase)* Tổng (V∑) 200 μM 0.2 μM 0.2 μM 2.0 mM 0,6 UI Hướng dẫn thực hành Kéo dài Bù thêm Số chu kỳ 72°C 72°C phút phút 35 Tổng thời gian chạy hết phản ứng: ……1…giờ……53…phút…00…giây…00…… 25 µl Đối với khuếch đại alen CVM Thành phần tham gia phản ứng ADN Nước cất Dung dịch đệm dNTPs Mồi xuôi F Mồi ngược R MgCl2 Enzyme (Taq DNA polymerase)* Tổng (V∑) Nồng độ/thể tích phản ứng 50-100 ng 1X 200 μM 0.2 μM 0.2 μM 2.0 mM 0,6 UI Quy trình chạy phản ứng Tiền biến tính Biến tính Ủ bắt cặp Kéo dài Bù thêm Số chu kỳ Nhiệt độ Thời gian 94°C 94°C 54°C 72°C 72°C phút phút phút 35 giây phút 35 Tổng thời gian chạy hết phản ứng: ……1…giờ……42…phút…25…giây…00…… 25 µl Kích thước sản phẩm khuếch đại:…………341……… bp BLAD …………287……… bp CVM Kết luận tác giả nghiên cứu: Phương pháp phát dựa phân tích PCR – RFLP công cụ mạnh mẹ để xác định hai chất mang BLAD VÀ CVM Đây báo cáo công bố vệ tồn BLAD CVM quần thể bò HF Macedonia Mặc dù chúng tìm thấy tần suất thấp, nghiên cứu cho thấy cần phải kiểm tra thêm mức độ phân tán alen gây hại này, đồng thời khẳng định cần thiết phải kiểm tra bắt buộc bò DI TRUYỀN HỌC ĐẠI CƯƠNG Hướng dẫn thực hành đực trước đưa vào chương trình thụ tinh nhân tạo để ngăn chặn lây lan chúng đến số lượng lớn bò hệ  ... gia súc thuộc giống HF nuôi số trang trại khác Macedonia từ liều tinh trùng đơng lạnh từ bò HF khác sử dụng cho việc th tinh nhân tạo Macedonia Điền th nh phần /th ng tin cần thiết để th c phản... tốn th tích th nh phần cho phản ứng Điền kết vào cột C Sử dụng cơng th c sau để tính th tích th nh phần : Công th c tam suất C = B x V∑/A H2O = V∑ - Các th nh phần biết b Tính tốn điền kết th nh... lọc bạch cầu Th ng th ờng lấy mẫu về, trước tách chi t ADN, th ờng có bước đầu thao tác nhằm loại bỏ th nh phần tạp chất hay th nh phần khơng có chứa ADN, nhằm góp phần giúp thu ADN tinh sau hồn