1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nâng cao tiêu chuẩn chất lượng viên nang ích trí vương

80 104 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 80
Dung lượng 1,97 MB

Nội dung

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ðẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ KIỀU DUNG NÂNG CAO TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VIÊN NANG ÍCH TRÍ VƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC-ðỘC CHẤT Mà SỐ: 607315 Người hướng dẫn khoa học: TS Trần Việt Hùng HÀ NỘI 2012 LỜi i cẢm n c m Ơn ðể hồn thành khóa luận tốt nghiệp, trước hết tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Việt Hùng, người ñã tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian qua Tơi xin chân thành cảm ơn ThS Trần Thị Bích Vân, người có nhiều ý kiến đóng góp q báu để tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị, bạn, em khoa Vật lý ño lường – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương, ñặc biệt DS Trịnh Thị Hồng Thảo ñã tạo ñiều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Sau đại học, thầy trường ðại học Dược Hà Nội, thầy cô cán Bộ mơn Hóa phân tích dạy dỗ, dìu dắt tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Cuối tơi vơ biết ơn gia đình, bạn bè người ln bên động viên, khuyến khích giúp đỡ để tơi có kết ngày hôm Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2012 Học viên Phạm Thị Kiều Dung MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ðẶT VẤN ðỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan dược liệu Bạch quả, Hoàng Kỳ, ðan sâm, ðương quy………………………………………………………………………… 1.1.1 Bạch quả……………………………………………………… 1.1.1.1 Thành phần hóa học………………………………… 1.1.1.2 Cơng dụng, định phối hợp…………………… 1.1.1.3 Tiêu chuẩn chất lượng cao Bạch quả………………… 1.1.1.4 Một số nghiên cứu liên quan ñến Bạch quả………… 1.1.2 Hồng kỳ……………………………………………………… 1.1.2.1 ðặc điểm dược liệu Hồng kỳ……………………… 1.1.2.2 Thành phần hóa học………………………………… 1.1.2.3 Cơng dụng, định phối hợp…………………… 1.1.2.4 Thực trạng cần thiết phải kiểm nghiệm chất lượng dược liệu Hoàng kỳ…………………………………… 1.1.2.5 Một số nghiên cứu liên quan đến Hồng kỳ………… 1.1.3 ðan sâm ……………………………………………………… 1.1.3.1 ðặc ñiểm dược liệu ðan sâm………………………… 1.1.3.2 Thành phần hóa học………………………………… 10 1.1.3.3 Cơng dụng, định phối hợp…………………… 10 1.1.3.4 Thực trạng cần thiết phải kiểm nghiệm chất lượng dược liệu ðan sâm…………………………………… 11 1.1.3.5 Một số nghiên cứu liên quan ñến ðan sâm………… 12 1.1.4 ðương quy…………………………………………………… 13 1.1.4.1 ðặc ñiểm dược liệu ðương Quy…………………… 13 1.1.4.2 Thành phần hóa học………………………………… 14 1.1.4.3 Cơng dụng, định phối hợp…………………… 14 1.1.4.4 Một số nghiên cứu liên quan ñến ðương quy……… 15 1.1.5 Luận giải việc ñặt mục tiêu nội dung cần nghiên cứu ñề tài……………………………………… 1.2 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao dùng định tính, định lượng đề tài……………………………………………… 15 18 1.2.1 Khái niệm…………………………………………………… 18 1.2.2 Bộ phận phát hiện…………………………………………… 19 Chương ðỐI TƯỢNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………………………………………… 21 2.1 ðối tượng nghiên cứu………………………………………………… 21 2.2 Nguyên vật liệu, hóa chất, thuốc thử, thiết bị……………………… 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 23 2.3.1 Nghiên cứu phương pháp định lượng flavonoid tồn phần cao Bạch quả………………………………………………… 23 2.3.2 Nghiên cứu phương pháp ñịnh lượng Tanshinon IIA 23 2.3.3 Nghiên cứu phương pháp ñịnh lượng Astragalosid IV 24 2.3.4 Thẩm ñịnh phương pháp ñã xây dựng 25 2.4 Phương pháp xử lý số liệu…………………………………………… 25 Chương THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 Xây dựng phương pháp định tính, định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần cao Bạch 27 3.1.1 Lựa chọn tốc ñộ dòng……………………………………… 27 3.1.2 Khảo sát lượng acid hydrocloric 25% 27 3.1.3 Như chúng tơi đưa quy trình phân tích hàm lượng flavonoid tồn phần sau……………………………………… 3.1.4 Thẩm định phương pháp 3.2 Xây dựng phương pháp định tính, định lượng hàm lượng tanshinon IIA 27 29 41 3.2.1 Khảo sát tỷ lệ pha ñộng tốc ñộ dòng…………………… 41 3.2.2 Chuẩn bị dung dịch thử……………………………………… 42 3.2.3 Như chúng tơi đưa quy trình phân tích tanshinon IIA sau……………………………………………………………… 42 3.2.4 Thẩm ñịnh phương pháp 3.3 Xây dựng phương pháp định tính, định lượng hàm lượng astragalosid IV 51 3.3.1 Khảo sát tỷ lệ pha ñộng……………………………………… 51 3.3.2 Khảo sát tốc ñộ dòng………………………………………… 51 3.3.3 Chuẩn bị dung dịch thử……………………………………… 51 3.3.4 Như chúng tơi đưa quy trình phân tích astragalosid IV sau………………………………………………………… 52 3.3.5 Thẩm định phương pháp …………………………………… 54 Chương BÀN LUẬN…………………………………………………… 62 4.1 Về ñối tượng nghiên cứu…………………………………………… 62 4.2 Về quy trình thẩm định quy trình phân tích…………………… 62 4.3 Về kết định lượng viên nang mềm Ích trí vương……………… 64 4.4 Về phương pháp sử dụng…………………………………………… 65 KẾT LUẬN VÀ ðỀ XUẤT……………………………………………… 66 Kết luận………………………………………………………………… 66 ðề xuất………………………………………………………………… 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DðTQ : Dược ñiển Trung Quốc DAD : Diode Array Detector ELSD : Evaporative Light Scattering detector HPLC : High performance liqiud chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao ) RSD : Relative standard deviation SKð : Sắc ký đồ S : Diện tích píc Tr : Thời gian lưu TCCS : Tiêu chuẩn sở UV-VIS : Ultraviolet–visible DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số phương pháp nghiên cứu sử dụng ñề tài…… 16 Bảng 1.2 Giới hạn ñịnh lượng hoạt chất nghiên cứu ñề tài… 18 Bảng Cách ñánh giá số tiêu thẩm ñịnh phương pháp 26 Bảng 3.1 ðộ thích hợp hệ thống………………………………… 31 Bảng 3.2 Cách pha dãy dung dịch chuẩn thứ cấp quercetin………… 31 Bảng 3.3 Cách pha dãy dung dịch chuẩn thứ cấp kaempferol……… 32 Bảng 3.4 Cách pha dãy dung dịch chuẩn thứ cấp isorhamnetin……… 32 Bảng 3.5 Kết khảo sát mối tương quan nồng ñộ diện tích píc quercetin……………………………………………………………… Bảng 3.6 Kết khảo sát mối tương quan nồng độ diện tích píc kaempferol…………………………………………………………… Bảng 3.7 Kết khảo sát mối tương quan nồng độ diện tích píc isorhamnetin…………………………………………………………… Bảng 3.8 Lượng thêm vào ba chuẩn quercetin, kaempferol isorhamnetin…………………………………………………………… Bảng 3.9 Kết diện tích píc quercetin, kaempferol isorhamnetin mẫu thử………………………………………………………… 32 33 34 36 37 Bảng 3.10 Kết khảo sát ñộ ñúng phương pháp……………… 37 Bảng 3.11 Kết diện tích pic mẫu thử…………………… 39 Bảng 3.12 Kết khảo sát ñộ lặp lại phương pháp…………… 39 Bảng 3.13 Kết diện tích píc mẫu thử…………………… 40 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian ………………… 41 Bảng 3.15 ðộ thích hợp hệ thống………………………………… 45 Bảng 3.16 Cách pha dãy dung dịch chuẩn thứ cấp tanshinon IIA 46 Bảng 3.17 Kết khảo sát mối tương quan nồng độ diện tích píc tanshinon IIA………………………………………………………… 46 Bảng 3.18 Kết khảo sát ñộ ñúng phương pháp……………… 48 Bảng 3.19 Kết khảo sát ñộ lặp lại phương pháp…………… 50 Bảng 3.20 Kết khảo sát độ xác trung gian ………………… 51 Bảng 3.21 ðộ thích hợp hệ thống………………………………… 56 Bảng 3.22 Cách pha dãy dung dịch chuẩn thứ cấp astragalosid IV 56 Bảng 3.23 Kết khảo sát mối tương quan nồng độ diện tích píc astragalosid IV………………………………………………………… 57 Bảng 3.24 Kết khảo sát ñộ ñúng phương pháp……………… 58 Bảng 3.25 Kết khảo sát ñộ lặp lại phương pháp…………… 60 Bảng 3.26 Kết khảo sát độ xác trung gian ……………… 61 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Lá Bạch quả………………………………………… Hình 1.2 Cây Hồng kỳ…………………………………………… Hình 1.3 Dược liệu Hồng kỳ……………………………………… Hình 1.4 Cây ðan sâm……………………………………………… Hình 1.5 Dược liệu ðan sâm……………………………………… Hình 1.6 Cây ðương quy…………………………………………… Hình 1.7 Dược liệu ðương quy…………………………………… Hình 3.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn……………………………………… Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu thử ……………………………………… Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu placebo…………………………………… Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu trắng……………………………………… Hình 3.5 ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng ñộ quercetin diện tích píc……………………………………………………… Hình 3.6 ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ kaempferol diện tích píc……………………………………………………… Hình 3.7 ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ isorhamnetin diện tích píc……………………………………… Hình 3.8 Sắc ký đồ tanshinon IIA dung dịch chuẩn………… Hình 3.9 Sắc ký đồ tanshinon IIA dung dịch thử…………… Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu placebo………………………………… Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu trắng…………………………………… Hình 3.12 ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng ñộ tanshinon IIA diện tích píc………………………………………………… Hình 3.13 Sắc ký đồ astragalosid IV dung dịch chuẩn……… Hình 3.14 Sắc ký đồ astragalosid IV dung dịch thử ………… Hình 3.15 Sắc ký ñồ mẫu placebo………………………………… Hình 3.16 Sắc ký ñồ mẫu trắng…………………………………… Hình 3.17 ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ astragalosid IV diện tích píc……………………………………… Trang 10 13 13 28 29 30 30 33 33 34 43 43 44 45 47 53 54 55 55 57 ðẶT VẤN ðỀ Thiểu tuần hoàn não triệu chứng thường gặp người lớn tuổi có nguy gây tử vong đứng thứ ba sau bệnh tim mạch ung thư Tỷ lệ thường gặp chứng - 8/1.000 dân/năm chiếm 9-25% tổng số tai biến mạch máu não; nam giới tỷ lệ cao nữ giới chiếm 75% trường hợp người 60 tuổi Tỷ lệ tái phát thành tai biến mạch máu não chiếm 6-8% tháng ñầu 3-5% năm sau Chỉ tính riêng Mỹ, chi phí y tế ñiều trị chứng chiếm khoảng 40 tỷ USD/năm Ở nước ta, số người bị thiếu máu não chiếm tỷ lệ cao Nguyên nhân gây thiểu tuần hoàn não người cao tuổi chủ yếu xơ vữa ñộng mạch, biểu hiện: giảm lưu lượng máu lên não, thiếu máu não cục thoáng qua, tai biến mạch máu não dạng thiếu máu não cục bộ, dị dạng bẩm sinh hay u, sùi, bóc tách thành mạch làm hẹp lòng mạch, cục máu đơng gây cản trở dòng tuần hồn máu, chèn ép từ bên ngồi vào thành động mạch [20], [32] Hiện thị trường có số thuốc tân dược ñang ñược sử dụng ñể ñiều trị thiểu tuần hoàn não piracetam, cinnarizin, vinpocetin… Tuy nhiên bên cạnh tác dụng điều trị tích cực, thuốc gây nên tác dụng không mong muốn quan thể hệ tiêu hóa, hệ tim mạch…ðiều quan trọng việc ñiều trị bệnh cần tìm ngun nhân gây bệnh để ngăn ngừa, ñồng thời sử dụng thuốc hỗ trợ với tác dụng phụ nhằm dự phòng bệnh Do nhu cầu phát triển thuốc có nguồn gốc thiên nhiên, ñặc biệt sản phẩm có phối hợp có tương đồng hiệp đồng tác dụng vấn ñề cấp thiết Một số thuốc thực phẩm chức có nguồn gốc dược liệu Hoạt huyết dưỡng não, Hoa đà tái tạo hồn, Cebraton, Tarviginkgo… ñược sử dụng ñiều trị hỗ trợ ñiều trị thiểu tuần hồn não có hiệu tốt Viên nang Ích trí vương cơng ty cổ phần dược phẩm Mediplantex sản xuất, kết hợp loại dược liệu Bạch quả, Hoàng kỳ, ðan sâm, ðương Bảng 3.23: Kết khảo sát mối tương quan nồng độ diện tích píc astragalosid IV Nồng độ (mg/ml) 0,0822 0,1233 Diện tích píc (mAu.s) 640186 1293492 2045007 2793271 3478249 Pt hồi quy 0,1644 0,2055 0,2466 Y= 2E + 07X -820321 Hệ số tương quan 0,9997 4000000 y = 2E+07x - 820321 R2 = 0.9994 Di n tích pic (mAu.s) 3500000 3000000 2500000 2000000 1500000 1000000 500000 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 N ng đ (mg/ml) Hình 3.17: ðồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ astragalosid IV diện tích píc * Nhận xét: Như vậy, khoảng nồng độ khảo sát có phụ thuộc tuyến tính diện tích píc nồng độ chất khảo sát với hệ số tương quan R > 0,999 chứng tỏ có tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích píc nồng độ chất khảo sát d ðộ ñúng * Thực nghiệm: - Chuẩn bị mẫu chuẩn: Là mẫu chuẩn phần ñộ lặp lại - Chuẩn bị mẫu tự tạo sau: - Mẫu thử 80%: Hòa tan khoảng 1,4 mg astragalosid IV vừa đủ 2ml methanol Hút xác 200µl dung dịch vào bình nón nút mài 100ml 57 chứa sẵn lượng tá dược lượng cao Bạch quả, cao ðan sâm, cao ðương quy tương ứng với 1,6 viên, thêm 30 ml methanol, siêu âm 30 phút, lọc, rửa phễu giấy lọc với 5ml methanol, cô dịch lọc đến khơ Hòa cắn 20ml dung dịch ammoniac 10% ðể 10 phút, lắc Chuyển dịch chiết sang bình gạn, chiết với 30, 20, 20ml n- butanol bão hòa nước Tập trung dịch chiết n – butanol, cô cách thủy ñến cạn Hòa cắn 1,0ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45µm - Mẫu thử 100%: Tiến hành tương tự mẫu thử 80% thay lượng cân chuẩn astragalosid IV khoảng 1,7mg - Mẫu thử 120%: Tiến hành tương tự mẫu thử 80% thay lượng cân chuẩn astragalosid IV khoảng 2,1mg Ở nồng ñộ tiến hành với mẫu thử riêng biệt Tiến hành ñịnh lượng hàm lượng astragalosid IV có mẫu thử theo quy trình phân tích *Kết quả: Bảng 3.24: Kết khảo sát ñộ ñúng phương pháp Mẫu Lượng cân mẫu giả dược (g) Lượng chuẩn astragalosid thêm vào mẫu (mg) Diện tích píc astragalosid (mAu.s) Lượng chuẩn astragalosid tìm lại (mg) Tỷ lệ thu hồi (%) 80% 0,8513 1,39 1679452 1,35 97,1 80% 0,8516 1,39 1715349 1,38 99,2 80% 0,8538 1,39 1704285 1,37 98,6 100% 0,8514 1,75 2189573 1,76 100,6 100% 0,8524 1,75 2098472 1,69 96,4 100% 0,8535 1,75 2139754 1,72 98,2 120% 0,8516 2,11 2578935 2,07 98,3 120% 0,8509 2,11 2518531 2,02 96,0 120% 0,8523 2,11 2570963 2,08 98,7 TB RSD Diện tích píc mẫu chuẩn: 2045007(mAu.s) 58 98,1 1,5 * Nhận xét: Từ kết cho thấy tỷ lệ thu hồi khoảng từ 96,4 % ñến 100,6% nằm giới hạn cho phép Như phương pháp định lượng astragalosid IV có độ ñúng cao e ðộ lặp lại * Thực nghiệm: - Chuẩn bị mẫu chuẩn gốc: Hòa tan 2,46 mg astragalosid IV vừa ñủ 3ml methanol - Chuẩn bị mẫu chuẩn: Hút xác 1ml dung dịch mẫu chuẩn gốc vừa đủ 5ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45µm - Mẫu thử: Cân lượng chế phẩm tương ứng với viên vào bình nón nút mài 100ml, thêm 30 ml methanol, siêu âm 30 phút, lọc, rửa phễu giấy lọc với 5ml methanol, cô dịch lọc đến khơ Hòa cắn 20ml dung dịch ammoniac 10% ðể 10 phút, lắc Chuyển dịch chiết sang bình gạn, chiết với 30, 20, 20ml n- butanol bão hòa nước Tập trung dịch chiết n – butanol, cách thủy đến cạn Hòa cắn 5ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45µm Làm với sáu mẫu thử riêng biệt * Kết quả: Hàm lượng astragalosid IV (mg/viên) tính theo cơng thức sau: X (mg/viên) = Trong đó: ST ×C × × mtb SC mt St, Sc S píc Astragalosid IVcủa thử chuẩn C: Nồng độ chuẩn (mg/ml) mt: Lượng cân thử (g) mtb: Khối lượng trung bình thuốc nang (g) 59 Bảng 3.25: Kết khảo sát ñộ lặp lại phương pháp Lượng cân mẫu thử Diện tích píc Kết định lượng (g) (mAu.s) (mg/viên) T1 4,6718 2067395 0,10 T2 4,6722 2104286 0,11 T3 4,6739 2119734 0,11 T4 4,6743 2287846 0,12 T5 4,6772 2196307 0,11 T6 4,6789 2084185 0,10 Mẫu TB 0,11 RSD 3,9 - Diện tích píc mẫu chuẩn: Sc = 2045007(mAu.s) - Khối lượng trung bình thuốc nang: mtb = 0,5847 g * Nhận xét:Từ kết cho thấy, ñộ lệch chuẩn tương ñối RSD < 5% nằm khoảng cho phép Như phương pháp ñịnh lượng astragalosid IV có độ lặp lại tốt f ðộ xác trung gian - Chuẩn bị mẫu chuẩn gốc: Hòa tan 2,51mg astragalosid IV vừa đủ 3ml methanol - Chuẩn bị mẫu chuẩn: Hút xác 1ml dung dịch mẫu chuẩn gốc vừa ñủ 5ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45µm - Mẫu thử: Tiến hành tương tự phần ñộ lặp lại Làm với mẫu thử riêng biệt 60 Bảng 3.26: Kết khảo sát ñộ xác trung gian Lượng cân mẫu thử Diện tích píc Kết định lượng (g) (mAu.s) (mg/viên) T1 4,6759 2146973 0,11 T2 4,6779 2116794 0,11 T3 4,6781 2067153 0,10 T4 4,6801 2016897 0,10 T5 4,6812 2314687 0,12 T6 4,6823 2138745 0,11 Mẫu TB 0,11 RSD 4,2 - Diện tích píc mẫu chuẩn: Sc = 2091736(mAu.s) - Khối lượng trung bình thuốc nang: mtb = 0,5851 g * Nhận xét: ðộ lệch chuẩn tương ñối mười hai thử RSD = 4,2% chứng tỏ phương pháp có độ xác cao 61 Chương BÀN LUẬN 4.1 Về đối tượng nghiên cứu Ích Trí Vương thực phẩm chức Công ty cổ phần dược liệu trung ương Mediplantex sản xuất, theo kết ñề tài khoa học công nghệ cấp Thành phố phối hợp Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương Công ty cổ phần dược liệu trung ương Mediplantex Sản phẩm có tác dụng hoạt huyết, tăng cường tuần hoàn não giúp ñiều trị suy giảm trí nhớ ðây chế phẩm đơng dược kết hợp bốn dược liệu phổ biến cao Bạch quả, cao Hoàng kỳ, cao ðan sâm cao ðương quy mà thị trường Việt Nam chưa có chế phẩm tương tự Do ngồi đánh giá tác dụng dược lý, tác dụng lâm sàng, công tác kiểm tra giám sát chất lượng thuốc chế phẩm đóng vai trò quan trọng việc đảm bảo tác dụng thực chế phẩm ðặc biệt tình trạng chất lượng dược liệu thuốc đơng dược nước ta chưa trọng thuốc tân dược ða phần tiêu chuẩn sở chế phẩm đơng dược đưa phương pháp định tính mà chưa có phương pháp định lượng ngồi dược liệu có khả định lượng ñược như: dược liệu có chứa tinh dầu, alcaloid, flavonoid, acid amin…hoặc dược liệu có chứa hoạt chất nghiên cứu kỹ lưỡng, có cơng thức cấu trúc hóa học chứng minh rõ ràng, có hàm lượng đủ để phát định lượng Hơn tiêu chuẩn sở chất lượng cao Bạch hầu hết cơng ty khơng đạt theo tiêu chuẩn DðTQ Tình trạng dược liệu ðan sâm, Hồng kỳ giả mạo hay bị rút hết hoạt chất phổ biến Do chúng tơi phối hợp với cơng ty cổ phần Dược liệu trung ương Mediplantex ñể tiến hành nghiên cứu phương pháp kiểm tra ñánh giá chất lượng số hoạt chất có chế phẩm nhằm ñảm bảo tác dụng thực chế phẩm 62 4.2 Về quy trình thẩm định quy trình phân tích - Cao Bạch quả: Qua tham khảo số tài liệu chúng tơi tiến hành phân tích cao Bạch theo DðTQ Với quy trình phân tích phương pháp xử lý mẫu không phức tạp thực phòng thí nghiệm, điều kiện sắc ký ñơn giản, lựa chọn cột ngắn ñể thời gian phân tích khơng kéo dài, ba píc quercetin, kaempferol isorhamnetin ñược tách hoàn toàn cân ñối, thời gian phân tích mẫu khoảng 18 phút Kết thẩm ñịnh cho thấy phương pháp có ñộ ñặc hiệu ñộ tuyến tính rộng (quercetin khoảng 0,0191 mg/ml – 0,0573 mg/ml, kaempferol khoảng từ 0,0178 mg/ml – 0,0534 mg/ml isorhamnetin khoảng từ 0,00508 mg/ml – 0,01524 mg/ml) ðộ lặp lại phương pháp tốt (1,9%), tỷ lệ thu hồi khoảng từ 95,1 % ñến 98,8% nằm giới hạn cho phép ñối với chế phẩm đơng dược Như phương pháp phù hợp để xác định hàm lượng flavonoid tồn phần cao Bạch có viên nang Ích Trí Vương - Tanshinon IIA Tanshinon IIA tiến hành phân tích dựa theo DðTQ Với pha động ñơn giản hỗn hợp methanol nước tỷ lệ 80:20, píc tanshinon phút thứ 7, píc đẹp, cân đối khơng bị dính vào píc tạp Phương pháp xử lý mẫu dễ thực hiện, thể phần thẩm ñịnh, ñộ lặp lại phương pháp 1,5%, độ từ 96,5% đến 100,3% ðộ tuyến tính tanshinon IIA rộng từ 8,48 µg/ml – 25,44 µg/ml Như phương pháp phù hợp ñể xác ñịnh hàm lượng tanshinon IIA có viên nang Ích Trí Vương - Astragalosid IV Astragalosid IV phân tích theo báo tạp chí kiểm nghiệm tập số năm 2005 Cách xử lý mẫu theo phương pháp ñơn giản phù hợp với trang thiết bị sẵn có phòng thí nghiệm so với phương pháp xử lý mẫu theo DðTQ Pha ñộng hỗn hợp acetonitril nước chạy theo chương 63 trình dung mơi, khác với DðTQ chạy đẳng dòng với tỷ lệ acetonitril nước (32:68) nhằm tách ñược píc astragalosid IV khỏi thành phần khác chế phẩm ñồng thời tách ñược chất tạp khỏi cột, giúp bảo vệ cột sắc ký tốt Với điều kiện sắc ký trên, píc astragalosid IV phút thứ 37, píc cân đối gọn Kết thẩm định cho thấy phương pháp có độ ñặc hiệu ñộ tuyến tính rộng từ 0,0822mg/ml – 0,2466 mg/ml Do cách xử lý mẫu phải chiết sau bay dung mơi thu cắn hòa tan cắn methanol nên độ lặp lại phương pháp so với phương pháp (RSD = 3,9%) Tuy nhiên hiệu suất chiết tương ñối cao nên phương pháp có ñộ ñúng tốt từ 95,2% - 99,7% Như phương pháp phù hợp ñể xác ñịnh hàm lượng astragalosid IV có viên nang Ích Trí Vương 4.3 Về kết định lượng viên nang mềm Ích trí vương * Cao Bạch - ðịnh tính: Kết phần định tính cho thấy thời gian lưu píc có sắc ký ñồ dung dịch thử tương ứng với thời gian lưu píc quercetin, kaempferol isorhamnetin có sắc ký đồ dung dịch chuẩn, đồng thời tỷ lệ diện tích píc quercetin so với isorhamnetin nằm khoảng từ 0,8 ñến 1,5 ñáp ứng với yêu cầu theo DðTQ - ðịnh lượng: Kết ñịnh lượng trung bình 10,1mg/viên, lớn so với giới hạn định lượng 8,6mg/viên Như viên nang có kết phân tích cao Bạch tốt * Tanshinon IIA - ðịnh tính: Kết phần định tính cho thấy sắc đồ dung dịch thử cho píc có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu tanshinon IIA sắc ñồ dung dịch thử - ðịnh lượng: Kết định lượng trung bình 0,56mg/viên, lớn so với giới hạn ñịnh lượng 0,50mg/viên 64 * Astragalosid IV - ðịnh tính: Kết phần định tính cho thấy sắc đồ dung dịch thử cho píc có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu astragalosid IV sắc ñồ dung dịch thử - ðịnh lượng: Kết ñịnh lượng trung bình 0,11mg/viên, lớn so với giới hạn định lượng 0,10mg/viên Như chế phẩm Ích Trí Vương mà chúng tơi phân tích đạt u cầu hàm lượng 4.4 Về phương pháp sử dụng - Phương pháp HPLC với detector UV phương pháp ñược sử dụng rộng rãi ñịnh tính, ñịnh lượng chất Phương pháp cho ñộ nhạy cao, kết phân tích xác, phân tích ñồng thời chất mà phải chiết tách riêng biệt chất tiết kiện thời gian giảm sai số - Phương pháp HPLC với detecor ELSD phổ biến phương pháp sử dụng detector UV hạn chế detector sở nước có thiết bị Việc sử dụng detector ELSD phức tạp so với dùng detector UV phải có khí thiết bị dẫn khí nitơ có phận phun sương phương pháp tương ñối ổn ñịnh suốt trình phân tích ðây detector vạn năng, đáp ứng với chất phân tích bay pha động, có nhiều chất phát với detector khó khăn việc tách riêng biệt chất cần phân tích Tuy nhiên cơng thức cấu tạo astragalosid IV khơng có khả hấp thụ UV-VIS nên thời điểm phương pháp HPLC với detector ELSD phương pháp hữu hiệu dùng định tính, ñịnh lượng astragalosid IV 65 KẾT LUẬN VÀ ðỀ XUẤT Kết luận Qua thời gian từ tháng 1/2012 – 9/2012, chúng tơi tiến hành làm thực nghiệm ñạt ñược mục tiêu ñề ra: - Xây dựng quy trình phân tích định tính, định lượng số thành phần có viên nang mềm Ích Trí Vương cho kết ñáng tin cậy ðịnh lượng cho kết trung bình hàm lượng flavonoid toàn phần 10,8mg/viên, hàm lượng tanshinon IIA 0,56mg/viên, hàm lượng astragalosid IV 0,11mg/viên ñều ñạt yêu cầu ñịnh lượng ñã ñặt - Về thẩm ñịnh phương pháp phân tích: tiến hành thẩm định quy trình phân tích với số tiêu gồm: ñộ thích hợp hệ thống, tính ñặc hiệu, tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, độ xác trung gian Kết cho thấy tiêu ñều ñạt yêu cầu, ñảm bảo quy trình phân tích áp dụng cho định tính ñịnh lượng ðề xuất - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp phân tích định tính, định lượng acid ferulic cao ðương quy viên nang Ích Trí Vương thẩm ñịnh phương pháp ñã xây dựng - Trên sở kết nghiên cứu ñề tài, chúng tơi tiếp tục nghiên cứu số chế phẩm đơng dược có thành phần khác nhằm đảm bảo chế phẩm đơng dược nước có ñược tiêu chuẩn chất lượng tốt - Triển khai nghiên cứu quy trình chiết xuất chất chuẩn tanshinon IIA astragalosid IV ñể cung cấp nguồn chất chuẩn cho sở kiểm tra, giám sát chất lượng thuốc dược liệu đơng dược 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Trần Tử An (2007), Hóa phân tích II, NXB Y học, tr 168-212 Bộ y tế (2002), Dược ñiển Việt Nam IV, Nhà xuất y học, tr 751 – 752, 782 - 783, PL-127-PL-131 Bộ y tế (2010), Sổ tay hướng dẫn tạm thời ñăng ký thuốc, tr 40-50 Công ty cổ phần dược liệu TW Mediplantex (2011), tiêu chuẩn sở cao khơ Hồng kỳ Cơng ty cổ phần dược liệu TW Mediplantex (2011), tiêu chuẩn sở cao khô ðan sâm Công ty cổ phần dược liệu TW Mediplantex (2011), tiêu chuẩn sở cao Bạch Công ty cổ phần dược phẩm Traphaco (2008), tiêu chuẩn sở cao Bạch Công ty cổ phần dược phẩm Traphaco (2008), tiêu chuẩn sở viên nang mềm hoạt huyết dưỡng não Công ty cổ phần dược phẩm Traphaco (2005), tiêu chuẩn sở viên nén Cebraton 10 Công ty cổ phần dược phẩm Hà Tây (2008), tiêu chuẩn sở viên nang mềm Tarvibilo 11 ðỗ Huy Bích, ðặng Quang Trung, Bùi Xuân Trương, Nguyễn Thượng Dong (2004), Cây thuốc ñộng vật làm thuốc Việt Nam tập II, NXB Y học, tr 732-738 12 Võ Văn Chi (1997), Từ ñiển thuốc Việt Nam , NXB Y học 13 Võ Văn Chi (2003), Từ ñiển thực vật thông dụng, NXB Khoa học kỹ thuật 14 Nguyễn Văn ðàn (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, tr.34,35, 42-52 15 Nguyễn Minh ðức (2006), Sắc ký lỏng hiệu cao số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất tự nhiên, tr 49-234, Nhà xuất Y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh 16 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ 17 Lê Thị Kim Loan (2002), Nghiên cứu hóa học, tác dụng sinh học ðương quy di thực từ Nhật Bản (Angelica acutiloba Kit.), Luận án Tiến sỹ Dược học 18 ðỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt nam, tr 55 – 59; 774775; 818 – 820; 887 - 889, NXB Y học Hà Nội 19 Từ Văn Mạc (1995), Phân tích hóa lý, tr 293-338, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 20 ðoàn Thị Nhu cs (1974), Nghiên cứu thuốc điều trị rối loạn tuần hồn não từ xuyên khung, ñương quy hy thiêm Tóm tắt báo cáo Hội nghị Khoa học cơng nghệ lần IX, Viện Dược liệu, tháng – 2001 21 Võ Xuân Phương, Thực vật chí Việt Nam - tập 2, NXB Khoa học Kỹ Thuật 22 GS.TS Phạm Xuân Sinh (2006), Dược học cổ truyền, tr 231, NXB Y học 23 Nguyễn Văn Thuận (2010), Hoàn thiện quy trình sản xuất chế biến dược liệu ñương quy, ngưu tất, actiso cúc hoa, tr 24, 25, 47-69, Báo cáo tổng hợp kế t khoa học công nghệ dự án 24 Trường ðại học Dược Hà Nội (1998), Bài giảng Dược liệu, tập 1, tr 259323 25 Trường ðại học Y Dược TPHCM (2006), Phương pháp nghiên cứu dược liệu 26 Viện Dược Liệu (2002), Cây thuốc ñộng vật làm thuốc việt nam, Tập II, tr 101-106, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 27 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc ñộng vật làm thuốc Việt nam, Tập I, tr 732 - 738; 833 – 840; 946 - 950, NXB Khoa học kỹ thuật 28 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, tr 101 – 123; 311 – 313; 355 – 367, NXB Khoa học kỹ thuật 29 Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương (2005), "Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao", ðảm bảo chất lượng thuốc số phương pháp kiểm nghiệm thuốc, tr 230-250 30 Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương (2005), Tạp chí kiểm nghiệm thuốc,5(2),tr 11-14 31 ðào Hữu Vinh (1985), Các phương pháp sắc ký, tr 163-179, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội Tiếng anh 32 Adams J D., Wang R., Yang J., Lien E J (2006), "Preclinical and clinical examinations of Salvia miltiorrhiza and its tanshinones in ischemic conditions", Chin Med, 1, pp 33 Beaufour Ipsen co., LTD (2007), Specification of the finished product: Tanakan soft cap 34 Binex co.,LTD (2007), Specification of the finished product: Ginkobila soft cap 35 Carini M et al (2001), Complexation of Ginkgo biloba extract with phosphatidylcholine improves cardioprotective activity and increases the plasma antioxidant capacity in the rat, Planta Medica, 326 – 330 36 Feng L (2010), Ginkgo biloba and cognitive decline, Jama 2010 Apr 21 37 Hu P., Liang Q L., Luo G A., Zhao Z Z., Jiang Z H (2005), "Multi component HPLC fingerprinting of Radix Salviae Miltiorrhizae and its LC-MS-MS identification", Chem Pharm Bull (Tokyo), 53(6), pp 67783 38 Kiyohara Hiroaki et al (1989), “Studies on polysaccharides from Angelica acutiloba part X Structure of an anti complementary arabinogalactan from the roots of Angelica acutioba Kitagawa”, Carbohydr res 193,173-192 39 Kiyohara Hiroaki et al (1988), “Studies on polysaccharides from Angelica acutiloba part VIII Structure of an anti complementary activity of pectic polysaccharide isolated from the root of Angelica acutiloba Kitagawa”, Carbohydr res 182(2), pp 259-75 40 Leehey DJ, Casini T, Massey D (2010), Remission of membranous nephropathy after therapy with astragalus membranaceus, Am J Kidney Dis 2010 Apr;55(4), pp.772 41 Ma Lanfang et al (1988) The effect of Angelica sinensis polysaccharides on mouse bone marrow hematopoiesis Chem Abs, pp 109 42 Meng L, Van Putten V, Qu L, Nemenoff RA, Shang MY, Cai SQ, Li X Renal Division, Department of Medicine, Peking University First Hospital, Beijing, China (2010), Altered Expression of Genes Profiles Modulated by a Combination of Astragali Radix and Angelicae Sinensis Radix in Obstructed Rat Kidney, Planta Med 2010 Mar 43 Pharmacopoeia of the people's republic of China, (2005), pp 213-214 44 Powers WJ, Zazulia AR.,Department of Neurology, University of North Carolina School of Medicine, Chapel Hill, NC (2010), PET in Cerebrovascular Disease, PET Clin 2010 Jan 1;5(1):83106 45 Raymond P W Scott (2003), Liquid Chromatography 46 Xiaohui Z., Xinfeng Z., Xin Z., Shixiang W., Yinmao W., Jianbin Z (2007), "Determination of the main bioactive metabolites of Radix salvia miltiorrhizae in compound Danshen dripping pills and the tissue distribution of Danshensu in rabbit by SPE-HPLC-MSn", J Sep Sci, 30(6), pp 851-857 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sắc ký ñồ phần thẩm định quy trình phân tích cao Bạch Sắc ký ñồ dung dịch chuẩn Sắc ký ñồ dung dịch thử Sắc ký ñồ placebo Sắc ký ñồ mẫu trắng Sắc ký đồ tuyến tính 50% Sắc ký đồ tuyến tính 150% Sắc ký đồ độ 80% Sắc ký ñồ ñộ ñúng 120% Phụ lục 2: Sắc ký ñồ phần thẩm định quy trình phân tích tanshinon IIA Sắc ký ñồ dung dịch chuẩn Sắc ký ñồ dung dịch thử Sắc ký ñồ placebo Sắc ký ñồ mẫu trắng Sắc ký đồ tuyến tính 50% Sắc ký đồ tuyến tính 150% Sắc ký đồ độ 80% Sắc ký ñồ ñộ ñúng 120% Phụ lục 3: Sắc ký ñồ phần thẩm định quy trình phân tích astragalosid IV Phụ lục Phụ lục Sắc ký ñồ dung dịch chuẩn Sắc ký ñồ dung dịch thử Sắc ký ñồ placebo Sắc ký ñồ mẫu trắng Sắc ký ñồ tuyến tính 50% Sắc ký đồ tuyến tính 150% Sắc ký ñồ ñộ ñúng 80% Sắc ký ñồ ñộ ñúng 120% Tiêu chuẩn sở thực phẩm chức ÍCH TRÍ VƯƠNG Dự thảo tiêu chuẩn sở nâng cấp viên nang ÍCH TRÍ VƯƠNG ... Ích trí vương cho phù hợp với tiêu chuẩn thuốc đơng dược cần thiết Do ñể ñảm bảo ñược chất lượng thực hiệu tác dụng sinh học viên nang, chúng tơi tiến hành đề tài “ Nâng cao tiêu chuẩn chất lượng. .. chất lượng dược liệu ðương quy 1.1.5 Viên nang Ích Trí Vương Ích Trí Vương thực phẩm chức công ty cổ phần dược liệu Trung Uơng Mediplantex sản xuất Thành phần hoạt chất viên gồm có cao Bạch chuẩn. .. tài “ Nâng cao tiêu chuẩn chất lượng viên nang Ích Trí Vương với mục tiêu sau: Xây dựng ñược phương pháp ñịnh tính, ñịnh lượng số hoạt chất viên nang Ích Trí Vương Thẩm định phương pháp xây dựng

Ngày đăng: 11/04/2019, 00:25

Nguồn tham khảo

Tài liệu tham khảo Loại Chi tiết
1. Trần Tử An (2007), Hóa phân tích II, NXB Y học, tr. 168-212 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Hóa phân tích II
Tác giả: Trần Tử An
Nhà XB: NXB Y học
Năm: 2007
2. Bộ y tế (2002), Dược ủiển Việt Nam IV, Nhà xuất bản y học, tr. 751 – 752, 782 - 783, PL-127-PL-131 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Dược ủiển Việt Nam IV
Tác giả: Bộ y tế
Nhà XB: Nhà xuất bản y học
Năm: 2002
3. Bộ y tế (2010), Sổ tay hướng dẫn tạm thời ủăng ký thuốc, tr. 40-50 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Sổ tay hướng dẫn tạm thời ủăng ký thuốc
Tác giả: Bộ y tế
Năm: 2010
11. ðỗ Huy Bích, ðặng Quang Trung, Bùi Xuân Trương, Nguyễn Thượng Dong (2004), Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở Việt Nam tập II, NXB Y học, tr. 732-738 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở Việt Nam tập II
Tác giả: ðỗ Huy Bích, ðặng Quang Trung, Bùi Xuân Trương, Nguyễn Thượng Dong
Nhà XB: NXB Y học
Năm: 2004
12. Vừ Văn Chi (1997), Từ ủiển cõy thuốc Việt Nam , NXB Y học Sách, tạp chí
Tiêu đề: Từ ủiển cõy thuốc Việt Nam
Tác giả: Vừ Văn Chi
Nhà XB: NXB Y học
Năm: 1997
13. Vừ Văn Chi (2003), Từ ủiển thực vật thụng dụng, NXB Khoa học và kỹ thuật Sách, tạp chí
Tiêu đề: Từ ủiển thực vật thụng dụng
Tác giả: Vừ Văn Chi
Nhà XB: NXB Khoa học và kỹ thuật
Năm: 2003
14. Nguyễn Văn đàn (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc, tr.34,35, 42-52 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc
Tác giả: Nguyễn Văn đàn
Năm: 1985
15. Nguyễn Minh ðức (2006), Sắc ký lỏng hiệu năng cao và một số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu và hợp chất tự nhiên, tr. 49-234, Nhà xuất bản Y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh Sách, tạp chí
Tiêu đề: Sắc ký lỏng hiệu năng cao và một số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu và hợp chất tự nhiên
Tác giả: Nguyễn Minh ðức
Nhà XB: Nhà xuất bản Y học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh
Năm: 2006
16. Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cây cỏ Việt Nam
Tác giả: Phạm Hoàng Hộ
Nhà XB: NXB Trẻ
Năm: 2000
17. Lê Thị Kim Loan (2002), Nghiên cứu về hóa học, tác dụng sinh học của cây ðương quy di thực từ Nhật Bản (Angelica acutiloba Kit.), Luận án Tiến sỹ Dược học Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiên cứu về hóa học, tác dụng sinh học của cây ðương quy di thực từ Nhật Bản (Angelica acutiloba
Tác giả: Lê Thị Kim Loan
Năm: 2002
18. ðỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt nam, tr. 55 – 59; 774- 775; 818 – 820; 887 - 889, NXB Y học Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Những cây thuốc và vị thuốc Việt nam
Tác giả: ðỗ Tất Lợi
Nhà XB: NXB Y học Hà Nội
Năm: 1999
19. Từ Văn Mạc (1995), Phân tích hóa lý, tr. 293-338, Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phân tích hóa lý
Tác giả: Từ Văn Mạc
Nhà XB: Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật
Năm: 1995
20. ðoàn Thị Nhu và cs (1974), Nghiờn cứu thuốc ủiều trị rối loạn tuần hoàn nóo từ cỏc cõy xuyờn khung, ủương quy và hy thiờm. Túm tắt bỏo cỏo Hội nghị Khoa học công nghệ lần IX, Viện Dược liệu, tháng 5 – 2001 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Nghiờn cứu thuốc ủiều trị rối loạn tuần hoàn nóo từ cỏc cõy xuyờn khung, ủương quy và hy thiờm
Tác giả: ðoàn Thị Nhu và cs
Năm: 1974
21. Võ Xuân Phương, Thực vật chí Việt Nam - tập 2, NXB Khoa học và Kỹ Thuật Sách, tạp chí
Tiêu đề: Thực vật chí Việt Nam - tập 2
Nhà XB: NXB Khoa học và Kỹ Thuật
22. GS.TS Phạm Xuân Sinh (2006), Dược học cổ truyền, tr. 231, NXB Y học Sách, tạp chí
Tiêu đề: Dược học cổ truyền
Tác giả: GS.TS Phạm Xuân Sinh
Nhà XB: NXB Y học
Năm: 2006
23. Nguyễn Văn Thuận (2010), Hoàn thiện quy trình sản xuất và chế biến dược liệu sạch ủương quy, ngưu tất, actiso và cỳc hoa, tr. 24, 25, 47-69, Bỏo cáo tổng hợp kế t quả khoa học công nghệ dự án Sách, tạp chí
Tiêu đề: Hoàn thiện quy trình sản xuất và chế biến dược liệu sạch ủương quy, ngưu tất, actiso và cỳc hoa
Tác giả: Nguyễn Văn Thuận
Năm: 2010
24. Trường ðại học Dược Hà Nội (1998), Bài giảng Dược liệu, tập 1, tr. 259- 323 Sách, tạp chí
Tiêu đề: Bài giảng Dược liệu
Tác giả: Trường ðại học Dược Hà Nội
Năm: 1998
26. Viện Dược Liệu (2002), Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở việt nam, Tập II, tr. 101-106, Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở việt nam
Tác giả: Viện Dược Liệu
Nhà XB: Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật
Năm: 2002
27. Viện Dược liệu (2004), Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở Việt nam, Tập I, tr. 732 - 738; 833 – 840; 946 - 950, NXB Khoa học và kỹ thuật Sách, tạp chí
Tiêu đề: Cõy thuốc và ủộng vật làm thuốc ở Việt nam
Tác giả: Viện Dược liệu
Nhà XB: NXB Khoa học và kỹ thuật
Năm: 2004
28. Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc từ dược thảo, tr. 101 – 123; 311 – 313; 355 – 367, NXB Khoa học và kỹ thuật Sách, tạp chí
Tiêu đề: Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc từ dược thảo
Tác giả: Viện Dược liệu
Nhà XB: NXB Khoa học và kỹ thuật
Năm: 2006

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w