Nghiên cứu nâng cao tiêu chuẩn viên nang mềm cebraton

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU NÂNG CAO TIÊU CHUẨN VIÊN NANG MỀM CEBRATON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU NÂNG CAO TIÊU CHUẨN VIÊN NANG MỀM CEBRATON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM THUỐC - ĐỘC CHẤT MÃ SỐ 60 73 15 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh HÀ NỘI 2012 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, tơi xin gửi lời biết ơn chân thành, lòng kính trọng tới PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh – người Cô trực tiếp hướng dẫn, người dành nhiều thời gian tâm huyết, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn Công ty Cổ phần Dược Phẩm Traphaco cung cấp sản phẩm, nguyên liệu tạo điều kiện thuận lợi cho chúng tơi hồn thành đề tài Xin cảm ơn cô, chú, anh chị cơng tác phòng Thí nghiệm trung tâm, Viện Công nghệ dược phẩm Quốc gia, người ln tận tình giải đáp thắc mắc cơng việc hết lòng giúp đỡ tơi trình thực luận văn tốt nghiệp Xin gửi lời biết ơn tới ban lãnh đạo Trường Đại học Dược Hà Nội thầy cô giáo trực tiếp tham gia giảng dạy giúp đỡ suốt trình học tập trường Và cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn người thân, bạn bè, người sát cánh, chia sẻ, động viên giúp tơi hồn thành khóa học luận văn tốt nghiệp Hà Nội, tháng 09 năm 2012 Học viên Ngô Thị Hồng Vân MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Đinh lăng 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Tác dụng dược lý Đinh lăng 1.1.3 Bộ phận sử dụng thu hái 1.1.4 Thành phần hóa học 1.2 Tổng quan Bạch 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Tác dụng dược lý Bạch 1.2.3 Bộ phận dùng thu hái 1.2.4 Thành phần hóa học 1.3 Tổng quan chất hóa học định lượng chế phẩm Cebraton 1.3.1 Acid oleanolic 1.3.2 Flavonol glycosid cao bạch 11 1.4 Một số chế phẩm có chứa Đinh lăng cao Bạch thị trường Việt Nam 17 1.5 Tình hình tiêu chuẩn hóa chế phẩm đông dược 18 1.6 Vài nét sắc ký lỏng hiệu cao 19 1.6.1 Nguyên tắc HPLC 19 1.6.2 Các thông số đặc trưng cho trình sắc ký 20 1.7 Các phương pháp định lượng HPLC 21 PHẦN II ĐỐI TƯỢNG, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng, nguyên vật liệu trang thiết bị 24 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị 24 2.1.3 Hóa chất thuốc thử 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 2.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc 25 2.2.2 Phương pháp chiết định lượng acid oleanolic viên nang mềm Cebraton 26 2.2.3 2.3 Định lượng flavonol glycosid chế phẩm nang mềm Cebraton 31 Phương pháp xử lý số liệu 34 PHẦN III THỰC NGHIỆM – KẾT QUẢ 35 3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng acid oleanolic viên nang mềm Cebraton 35 3.1.1 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu định lượng acid oleanolic 35 3.1.2 Xây dựng phương pháp định lượng acid oleanolic chế phẩm Cebraton HPLC 38 3.1.3 Thẩm định phương pháp phân tích acid oleanolic chế phẩm Cebraton 39 3.2 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng flavonol glycosid chế phẩm viên nang mềm Cebraton 47 3.2.1 Phương pháp xử lý mẫu để định lượng flavonol glycosid 47 3.2.2 Điều kiện sắc ký 49 3.2.3 Thẩm định phương pháp định lượng flavonol glycosid chế phẩm Cebraton 50 3.3 Ứng dụng định lượng acid oleanolic flavonol glycoside số lô chế phẩm Cebraton 62 CHƯƠNG BÀN LUẬN 63 4.1 Phương pháp xử lý mẫu 63 4.1.1 Phương pháp xử lý mẫu định lượng acid oleanolic 63 4.1.2 Phương pháp xử lý mẫu định lượng flavonol glycoside 63 4.2 Phương pháp phân tích 64 4.2.1 Phương pháp phân tích acid oleanolic 64 4.2.2 4.3 Phương pháp phân tích flavonol glycosid 65 Kết định lượng 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 Kết luận 68 Kiến nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ACN Acetonitril DAD Detector mảng diod (Diode Array Detector) DDVN Dược điển Việt Nam HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) IR Hồng ngoại (Infrared) IUPAC Liên minh quốc tế hóa học túy ứng dụng (International Union of Pure and Applied Chemistry) LC-MS Sắc ký lỏng khối phổi (Liquid chromatography- mass spectrometry) MeOH Methanol mtb viên Khối lượng trung bình viên RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard) RRT Thời gian lưu tương đối (Relative retention time) Spic Diện tích pic tR Thời gian lưu (Retention time) TEA Triethyl amin THF Tetrahydrofuran tt Thể tích USP Dược điển Mỹ (United state pharmacopoeia) UV-VIS Tử ngoại khả kiến (Ultraviolet visible) DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số nghiên cứu định lượng acid oleanolic Bảng 1.2 Một số nghiên cứu định lượng flavonol glycosid 14 Bảng 1.3 Các sản phẩm lưu hành thị trường 17 Bảng 2.1 Danh mục chất chuẩn 25 Bảng 3.1 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống phương pháp định lượng acid oleanolic 39 Bảng 3.2 Sự phụ thuộc diện tích pic nồng độ acid oleanolic 43 Bảng 3.3 Kết xác định độ lặp lại phương pháp định lượng acid oleanolic 45 Bảng 3.4 Kết xác định độ phương pháp định lượng acid oleanolic 46 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ phù hợp hệ thống sắc ký định lượng Quercetin, Kaempferol, Isorhamnetin 51 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc diện tích pic nồng độ Quercetin, Kaempferol, Isorhamnetin 58 Bảng 3.7 Kết xác định độ lặp lại định lượng flavonol glycosid 59 Bảng 3.8 Kết xác định độ định lượng flavonol glycoside 61 Bảng 3.9 Kết định lượng acid oleanolic flavonol glycosid số lô chế phẩm Cebraton 62 Tiếng Anh 11 Andrade P.B et al (1998), “Simultaneous determination of Flavonoids, Phenolic Acids, and Coumarins in Seven Medicinal Species by HPLC/DAD”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 21(18), pp 2813-2820 12 Calderon-Montaño J.M et al (2011) "A review on the dietary flavonoid kaempferol", Mini Rev Med Chem, 11 (4), pp 298–344 13 Chen J.H., (2003), “HPLC analysis of bioactive triterpenes in Perilla frutescens”, Journal of pharmaceutical and biochemical analysis, 32(6), pp 1175–1179 14 Dallimore William (1967), “A handbook of Coniferae and Ginkgoaceae”, pp 229233, St Martin's Press, New York 15 Võ Huy Huấn et al (1998), “Olean saponin from polyscias fruticosa”, Phytochemistry, 47, pp 451-457 16 Janssen K., Mensink R.P., Cox F.J., Harryvan J.L., Hovenier R., Hollman P.C., and Katan M.B (1998), “Effects of the flavonoids quercetin and apigenin on hemostatis in healthy volunteers: result from an in vitro and a dietary supplement study”, The American Journal of Clinical Nutrition, 67, pp 255-262 17 Joachin Ermer, John Mc.B Miller (2005), “Method Validation on pharmaceutical analysis”, pp 195-212, Wiley-VCH, Weiheim 18 Kennedy D.O., Scholey A.B., Wesnes K.A (2000), “Dose dependent cognitive effects of acute administration of Ginkgo biloba to healthy young volunteers”, Psychopharmacology (Berl)., 151(4), pp 416-23 19 Lewington A (1999) Ancient Trees, Collins & Brown Ltd., London 20 Li G., Zhang X., You J., Song C., Sun Z., Xia L, Sua Y (2011), “Development of a New HPLC Method with Precolumn Fluorescent Derivatization for Rapid, Selective and Sensitive Detection of Triterpenic Acids in Fruits”, J Agric Food Chem., 59(7), pp 2972-9 21 Li G., Zhang X., You J., Song C., Sun Z., Xia L, Sua Y (2011), “Highly sensitive and selective pre-column derivatization HPLC app.roach for rapid determination of triterpenes oleanolic and ursolic acids and app.lication to Swertia species: Optimization of triterpenic acids extraction and pre-column derivatization using response surface methodology”, Anal Chim Acta., 688(2), 208-18 22 Li Y., Yang Y., Wang S., Wei Y., Zheng X (2012), “Simultaneous LC Determination of Quercetin, Kaempferol and Isorhamnetin in Rabbits after Intragastric Administration of an Ethanol Extract from Pollen Typhae”, Chromatographia, 69(1), pp.117-121 23 Ma G., Yang C., Qu Y., Wei H., Zhang T., Zhang N (2007), “The flavonoid component isorhamnetin in vitro inhibits proliferation and induces apoptosis in Eca-109 cells”, Chemico-Biological Interactions, 167 (2), pp 153-160 24 Nöthlings U., Murphy S.P., Wilkens L.R., Henderson B.E., Kolone L.N (2007), "Flavonols and Pancreatic Cancer Risk", American Journal of Epidemiology, 166 (8), pp 924–931 25 Obmann A., Purevsuren S., Zehl M., Kletter C., Reznicek G., Narantuya S., Glasl S (2012), “HPLC Determination of Flavonoid Glycosides in Mongolian Dianthus versicolor Fisch (Caryophyllaceae) Compared with Quantification by UV Spectrophotometry”, Phytochem Anal., 23, pp 254-259 26 Olszewska M., Glowacki R., Wolbis M., and Bald E (2001), “Quantative determination of flavonoids in the flowers and leaves of Prunus spinosa”, Drug research, 58 (3), pp 199-203 27 Paliwal S., Sundaram, J., Mitragotri S (2005), "Induction of cancer-specific cytotoxicity towards human prostate and skin cells using quercetin and ultrasound", British Journal of Cancer, 92 (3), pp 499–502 28 Park J.S., Rho H.S., Kim D.H., Chang I.S (2006), "Enzymatic Preparation of Kaempferol from Green Tea Seed and Its Antioxidant Activity”, J Agric Food Chem., 54 (8), pp 2951–2956 29 Sean C.S (2005), Martidale, London 30 Singh S., Yadav C.P.S., and Noolvi M.N (2012) “Quantification of Oleanolic acid in the lower of Gentiana olivieri Griseb by HPLC”, Journal of Basic and Clinical Pharmacy, 3(2), pp 241-5 31 Smith C., Lombard Kevin A.L., Peffley Ellen B., Liu Weixin (2003), “Generic analysis of quercetin on Onion (Allium cepa L.)”, The Texas journal of agriculture and natural resource, 16, pp 24-28 32 Smith P.F., Maclennan K., Darlington C.L (1996), “The neuroprotective properties of the Ginkgo biloba leaf: a review of the possible relationship to platelet-activating factor (PAF)”, Journal of ethnopharmacology, 50 (3), pp 131–9 33 Tian Shuge, Shi Yang, Yu Qian, Upur Halmurat (2010) “Determination of Oleanolic acid and Ursolic acid contents in Ziziphora clinopodioides Lam by HPLC method”, Pharmacognosy magazine, (22), pp 116-119 34 U.S Pharmacopeia (2011), USP 34, Mỹ 35 Wang C., Liu H., Zhang B., Guo H (2011), “Determination of Oleanolic and Ursolic acid in Chinese herbs using HPLC and γ-CD as mobile phase modifier”, J Sep Sci., 34(21), pp 3023-8 36 Wang H., Wang Z., Gua W (2008), “Comparative determination of ursolic acid and oleanolic acid of Macrocarpium officinalis (Sieb et Zucc.) Nakai by RP-HPLC”, Industrial Crops and Products, 28(3), pp 328-332 37 Wang Y., Cao J., Weng J H., Zeng S (2005), “Simultaneous determination of quercetin, kaempferol and isorhamnetin accumulated human breast cancer cells by HPLC”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 39, pp 328–333 38 Weerasak S and Suwanna V (2007), “Simultaneous Determination of Gallic acid, Catechin, Rutin, Ellagic Acid and Quercetin in Flower Extracts of Michelia alba, Caesalpinia pulcherrima and Nelumbo nucifera by HPLC”, Thai Pharmaceutical and Health Science Journal, 2(2), pp 131-137 39 Wu L.L., Yang X.B., Huang Z.M., Liu H.Z., Wu G.X (2007), "In vivo and in vitro antiviral activity of hyperoside extracted from Abelmoschus manihot (L) medik", Acta Pharmacologica Sinica, 28(3), pp 404-9 40 Yu Y.B., Miyashiro H., Nakamura N., Hattori M., Park J.C (2007), "Effects of triterpenoids and flavonoids isolated from Alnus firma on HIV-1 viral enzymes", Archives of Pharmacal Research, 30(7), pp 820-6 41 Yue P., Sun J., Zhang C., Ye R., Lu X., Zhou Y., Yang S., Peng M (2010), “HPLCDAD separation and determnation of major active constituents in an important Tibetan medicine Meconopsis quintuplinervia from different regions of QinghaiTibet Plateau”, Journal of Medicinal Plants Research, 4(11), pp 1053-1058 42 Zacchigna M., Cateni F., Faudale M., Sosa S., Loggia R.D (2009), “Rapid HPLC analysis for quantitative determination of the two Isometric Triterpenic acid, Acid Oleanolic and Ursolic acid in Plantago Major”, Scientia Pharmaceutica, 77, pp 79-86 43 Zhang L., Xiang Zhi Min (2002), “Determination of the Flavonoids from Ginkgo Biloba Extract by HPLC”, Chinese Chemical Letters, 13(10), pp 968 – 970 44 Zhang Q., Cui H (2005), “Simultaneous determination of quercetin, kaempferol, and isorhamnetin in phytopharmaceuticals of Hippophae rhamnoides L by HPLC with chemiluminescence detection”, J Sep Sci, 28(11), pp 1171-8 45 Zhao Y.Z., Hua H.Y., Liu L (2009), “Development and validation of an HPLC method for determination of Oleanolic acid content and partition of Oleanolic acid in submicron emulsions”, Pharmazie., 64(8), pp 491-4 46 Zhou C., Chen K., Sun C., Chen Q., Zhang W., Li X (2007) “Determination of oleanolic acid, ursolic acid and amygdalin in the flower of Eriobotrya japonica Lindl by HPLC”, Biomed Chromatogr., 21(7), pp.755-61 47 Zou S., Chen W (2008), “Determination of Oleanolic and Ursolic Acids in Different Parts of Perilla frutescens by High-Performance Liquid Chromatography”, Chem Soc., 19(7), pp 1429-1432 48 Zu Y., Li C., Fu Y., Zhao C (2006), “Simultaneous determination of catechin, rutin, quercetin, kaempferol and isorhamnetin in the extract of sea buckthorn (Hipp.ophae rhamnoides L.) leaves by RP-HPLC with DAD”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 41, pp 714–719 Phụ lục 1: Sắc ký đồ định lượng Acid Oleanolic Lô 17: Phụ lục 2: Sắc ký đồ định lượng Acid Oleanolic Lô 19: Phụ lục 3: Sắc ký đồ định lượng Acid Oleanolic Lô 23 Phụ lục 4: Sắc ký đồ định lượng flavonol glycosid Lô 17 Phụ lục 5: Sắc ký đồ định lượng flavonol glycosid Lô 19 Phụ lục 6: Sắc ký đồ định lượng flavonol glycosid Lô 23 Phụ lục 7: Tiêu chuẩn Cebraton – Công ty cổ phần dược phẩm traphaco ... tài Nghiên cứu nâng cao tiêu chuẩn chất lượng viên mang mềm Cebraton với mục tiêu sau: 1 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng acid oleanolic cao Đinh lăng aglycol glycosid cao Bạch viên nang. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU NÂNG CAO TIÊU CHUẨN VIÊN NANG MỀM CEBRATON LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM THUỐC - ĐỘC CHẤT... trăm tỷ đồng Do việc mở rộng nâng cao chất lượng sản phẩm việc cần thiết Thành phần Cebraton cao rễ Đinh lăng cao Bạch quả, công thức viên: - Cao rễ Đinh lăng: 300mg - Cao Bạch quả: 100mg - Tá dược: