Nghiên cứu bào chế liposome fluconazol

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TƢƠNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME FLUCONAZOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2011 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TƢƠNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME FLUCONAZOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: DS Nguyễn Nhật Dƣơng Nơi thực đề tài: Bộ môn Bào chế HÀ NỘI - 2011 LỜI CẢM ƠN Với tất lòng kính trọng chân thành, xin bày tỏ niềm biết ơn sâu sắc tới thầy: DS NGUYỄN NHẬT DƢƠNG người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo để tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến : PGS TS NGUYỄN VĂN LONG - người thầy tâm huyết truyền kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình làm khóa luận Đồng thời, tơi xin cảm ơn tất thầy (cô) giáo, anh chị kỹ thuật viên môn Bào chế nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm thực nghiệm Bộ môn Tôi xin gửi tới tất thầy (cô) giáo Trường Đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành dạy bảo, dìu dắt tận tình suốt năm năm tơi học tập Với tất tình u thương, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình - người thân ln động viên, khích lệ tơi suốt thời gian qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bạn bè người thân động viên giúp đỡ sống Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2011 Sinh viên Lê Thị Tương DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt MLV LUV SUV GUV Tiếng Anh Multilamellar Vesicle Large Unilamellar Vesicle Small Unilamellar Vesicle Giant Unilamellar Vesicle Tiếng pháp Multilamellaires Vesicles Unilamellaire de grande taille Vesicles Unilamellaire de petite taille Vesicles Liposomes unilamellaires géants Liposome nhiều lớp Liposome lớp cỡ to Liposome lớp cỡ nhỏ Liposome lớp khổng lồ Kích thước tiểu phân KTTP PL Phospholipid PC Phosphatidylcholin Chol Cholesterol REV Tiếng Việt Reverce phase Évaporation en Evaporation Vesicle phase inverse Liposome thu phương pháp bốc pha đáo DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Phân loại liposome theo đặc điểm cấu trúc Bảng 1.2 Ưu – nhược điểm phương pháp bào chế liposome 11 Bảng 2.1 Nguyên liệu sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Công thức bào chế liposome fluconazol 18 Bảng 3.1 Độ hấp thụ dung dịch fluconazol nồng độ 27 khác Bảng 3.2 Các công thức bào chế liposome fluconazol 32 Bảng 3.3 Phân bố KTTP liposome fluconazol 35 Bảng 3.4 Tỉ lệ liposome hóa liposome fluconazol 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Cấu trúc liposome Hình 1.2 Các phương pháp bào chế liposme Hình 2.1 Bào chế liposome fluconazol phương pháp hydrat 20 hóa màng PL Hình 3.1 Đồ thị tương quan mật độ quang nồng độ 27 dược chất Hình 3.2 Liposome thu nhiệt độ 25oC 4oC 30 Hình 3.3 Hình ảnh liposome khơng có sử dụng siêu âm 31 Hình 3.4 Hình ảnh liposome fluconazol kính hiển vi quang học 33 Hình 3.5 Hình ảnh SEM liposome fluconazol 34 Hình 3.6 Các loại lipid thường dùng để bào chế liposome 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, với phát triển nhanh chóng khoa học kĩ thuật nói chung, kĩ thuật bào chế dạng thuốc đạt nhiều thành tựu bật Nhiều kĩ thuật dạng thuốc đời Bào chế đại bước kế thừa thay bào chế quy ước [1] Đặc biệt lĩnh vực bào chế thuốc nhãn khoa, với mục đích kéo dài thời gian tác dụng thuốc, tăng sinh khả dụng, giảm tác dụng phụ thuốc, người ta tập trung nghiên cứu áp dụng dạng bào chế liposome - thuốc Do vậy, thuốc nhãn khoa dựa hệ tiểu phân nghiên cứu, ứng dụng rộng rãi nhiều nhóm hoạt chất [1], [2], [12] Trong nhãn khoa, bệnh nấm giác mạc nguy hiểm việc chẩn đốn điều trị khó khăn Bệnh làm giảm thị lực, chí dẫn đến mù Fluconazol dược chất kháng nấm triazol có tác động ức chế enzym phụ thuộc cytochrom P450 chủng nấm nhạy cảm, phá hủy trình tổng hợp ergosterol màng tế bào nấm Chính thế, fluconazol nghiên cứu bào chế dạng tiểu phân để tăng tác dụng điều trị bệnh Dạng bào chế thu hút mạnh mẽ quan tâm nhiều nhóm nghiên cứu, nhà khoa học Tại Việt Nam việc nghiên cứu nghiên cứu ứng dụng liposome – thuốc chưa nhận thức quan tâm đắn Trên sở đó, đề tài “Nghiên cứu bào chế liposome fluconazol” thực với mục tiêu:  Xây dựng cơng thức qui trình bào chế liposome fluconazol  Đánh giá kích thước tiểu phân, phân bố kích thước tiểu phân liposome fluconazol CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ FLUCONAZOL 1.1 N N N F CH2 N N H2 C C N OH F Fluconazol C13H12F2N6O PTL: 306,27 Tên khoa học: α-(2,4-difluorophenyl)- α (1H-1,2,4-triazol-1- yl methyl) -1H-1,2,4-triazol -1- ethanol [4] 1.1.2 Bột kết tinh hay tinh thể màu trắng gần trắng Dễ tan methanol, tan ethanol, khó tan dicloromethan, nước acid acetic Khơng tan ether Hóa tính fluconazol chủ yếu hóa tính nhân thơm Tuy có nguyên tử nitơ dị vòng triazol, song fluconazol có tính base yếu (pKa khoảng 1,76) [4], [6] 1.1.3 Tác dụng dƣợc lí  Fulconazol có tác dụng kháng Blastomyces dermatitidis, Candida spp., Coccidioides immitis, Crytococcus neoformans, Epidemophyton spp., Histoplasma capsulatum, Microsporum spp Trichophyton spp.[3], [7], [8]  Fluconazol thuốc kháng nấm triazol có tác động ức chế enzym phụ thuộc cytochrom P450 chủng nấm nhạy cảm, phá hủy trình tổng hợp ergosterol màng tế bào nấm [3], [7], [8] 1.1.4 điều trị Nhiễm nấm Candida niêm mạc nơng, nhiễm nấm ngồi da Nhiễm nấm tồn thân: Candida, Coccidioides, Crytococcus tồn thân Phòng ngừa: Fluconazol giảm khả nhiễm Candida bệnh nhân ghép tủy xương [3], [7], [8] 1.1.5 Tác dụng không mong muốn Thường gặp đường tiêu hóa: đau bụng, tiêu chảy, đầy hơi, buồn nôn, rối loạn vị giác Tác dụng phụ khác: đau đầu, chóng mặt, giảm bạch cầu, giảm tiểu cầu, cao lipid huyết tăng men gan Rụng tóc bệnh nhân dùng fluconazol điều trị lâu dài [3], [7], [8] 1.1.6 Một số chế phẩm fluconazol thị trƣờng Dạng uống: Viên nén 50mg, 100mg, 200mg; lọ 350mg, 1400mg bột tinh thể để pha 35 ml hỗn dịch Viên nang 150 mg, 200 mg Dạng tiêm (chỉ dùng để truyền tĩnh mạch): Lọ 200mg/100ml, 400 mg/200 ml dung dịch dextrose 5%, lọ 50 mg/25 ml, 200mg/100ml, 400 mg/200 ml dung dịch natri clorid 0,9% [3], [4], [7], [8] 1.2 ĐẠI CƢƠNG VỀ LIPOSOME 1.2.1 Khái niệm đặc điểm cấu tạo chung Liposome dạng đặc biệt vi nang (microcapsule) siêu vi nang (nanocapsule) gồm nhân nước bao bọc vỏ phospholipid (PL) gồm hay nhiều lớp đồng tâm có kích thước thay đổi từ hàng chục nanomet đến hàng chục micromet [1], [2] Lớp vỏ PL cấu tạo từ phân tử lipid lưỡng tính: đầu thân nước thân dầu Trong dung dịch nước, phân tử PL xếp: hướng đầu phân cực pha nước đuôi thân dầu vào phía màng tạo nên lớp “áo” lipid đồng tâm tách riêng pha nước [22], [25], [26] (Hình 1.1) 28  Nhận xét Phương trình hồi quy có giá trị R2 = 0,9995 xấp xỉ 1, chứng tỏ mơi trường hòa tan độ hấp thụ phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ fluconazol khoảng khảo sát Do vậy, sử dụng phương pháp đo quang λ = 260nm với khoảng nồng độ để định lượng fluconazol mẫu 3.2 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME BẲNG PHƢƠNG PHÁP HYDRAT HÓA MÀNG PHOSPHOLIPID 3.2.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng số yếu tố công thức kĩ thuật lên hình thành liposome 3.2.1.1 Lựa chọn thể tích hỗn hợp dung môi hữu Hỗn hợp dung môi sử dụng cloroform methanol tỉ lệ : theo thể tích Nghiên cứu tiến hành khảo sát với tổng thể tích 30ml, 60ml, 90ml Phương pháp tiến hành trình bày mục 2.3.2.1 Về bản, thể tích tăng độ nhớt dung dịch giảm đồng thời diện tích tiếp xúc dung dịch với thành bình tăng Do đó, màng PL tạo thành mỏng Kết đánh giá cảm quan nhận thấy với thể tích 90ml thu lớp màng tương đối mỏng Tuy nhiên, đáy bình, với thể tích tạo thành lỗ trống nhỏ, lớp màng PL khơng dàn bề mặt thành bình Hơn nữa, với thể tích tốn dung mơi cho lần sử dụng Với thể tích 60ml tượng tương tự xảy Với thể tích 30ml, màng PL tạo độ mỏng thích hợp, khơng bị lỗ trống thành bình, lớp màng PL tráng bề mặt thành bình, tiết kiệm đáng kể lượng dung môi hữu 29 Do vậy, lựa chọn thể tích hỗn hợp dung mơi hữu 30ml cho nghiên cứu 3.2.1.2 Lựa chọn thông số kĩ thuật  Tốc độ quay Phương pháp khảo sát tiến hành mục 2.3.2.2 Kết thu sau: Đối với trình bay dung môi hữu tạo lớp màng mỏng phospholipid, thực vận tốc 90 vòng/phút đáy bình có lỗ trống; độ dày, mỏng lớp màng bám thành bình tạo thành khơng đồng đều; thực vận tốc 60 vòng/phút khơng khơng bị lỗ trống đáy bình mà tạo lớp màng mỏng đồng bám thành bình Đối với q trình hydrat hóa màng mỏng PL để hình thành liposome khảo sát tốc độ: 60 vòng/phút; 90 vòng/phút 120 vòng/phút Kết thu được: Bằng cảm quan: Hydrat hóa với vận tốc quay nhỏ (60 vòng/phút 90 vòng/phút), thành bình mảng bám Trong hydrat hóa với tốc độ lớn (120 vòng/phút) khơng mảng bám thành bình Soi kính hiển vi quang học: Liposome hình thành vận tốc quay nhỏ (60 vòng/phút 90 vòng/phút) tròn kích thước lớn, không đồng mật độ thưa thớt Trong thực với vận tốc quay lớn (120 vòng/phút) tạo thành liposome tròn, kích thước nhỏ hơn, đồng mật độ nhiều 30 Như vậy, qua kết khảo sát, lựa chọn tốc độ quay bốc dung môi hữu tạo lớp màng mỏng PL 60 vòng/phút tốc độ quay hydrat hóa màng mỏng PL tạo liposome 120 vòng/phút  Nhiệt độ hydrat hóa màng phospholipid Tiến hành khảo sát theo phương pháp trình bày mục 2.3.2.2 Kết đánh giá cảm quan: nhiệt độ 25oC có tượng kết tụ thành mảng bám thành bình 4oC khơng có tượng Liposome thu đem soi kính hiển vi quang học: xuất bọc có nhiều liposome nhỏ nhiệt độ hydrat hóa 25oC, 4oC, tiểu phân liposome tròn, khơng bị kết tụ (hình 3.2) Hình 3.2 Liposome thu nhiệt độ 25oC 4oC Do vậy, lựa chọn nhiệt độ hydrat hóa 4oC khơng có tượng kết tụ tiểu phân, liposome có cấu trúc ổn định  Thời gian hydrat hóa Tiến hành trình bày mục 2.3.2.2 tốc độ quay 120 vòng/phút, nhiệt độ 4oC thời gian hydrat hóa khác nhau: giờ, giờ, giờ, Sau soi kính hiển vi quang học, kết cho thấy với thời gian 31 hydrat hóa ngắn (1 giờ, giờ) liposome hình thành ít, mật độ thưa Còn với thời gian hydrat hóa lâu (3 giờ, giờ) hình thành liposome nhiều (mật độ dày hơn) Tuy nhiên, thời gian hydrat hóa màng PL liposome thu đem soi kính hiển vi nhận thấy mật độ liposome khác không đáng kể, hydrat hóa lâu khơng tăng thêm Chính thế, nghiên cứu tiến hành thời gian hydrat hóa  Siêu âm Tiến hành trình bày mục 2.3.2.2 Thực tế cho thấy siêu âm phút điều kiện mẫu đặt bể điều nhiệt (duy trì nhiệt độ lạnh), thành cốc chứa mẫu có tượng nóng lên Do ảnh hưởng đến độ ổn định cấu trúc liposome Mẫu sau siêu âm đánh giá tiếp soi kính hiển vi quang học Liposome thu có kích thước nhỏ khơng tròn, lớp vỏ bị rách, khơng đồng (hình 3.3) Khơng siêu âm Siêu âm Hình 3.3 Hình ảnh liposome khơng có sử dụng siêu âm Như vậy, nghiên cứu không sử dụng phương pháp siêu âm để làm giảm kích thước tiểu phân cấu trúc liposome bị phá vỡ 32 3.2.2 Ảnh hƣởng tỉ lệ phosphatidylcholin : cholesterol tới hình dạng, kích thƣớc tiểu phân liposome Nghiên cứu khảo sát mẫu với tỉ lệ PC : Chol thay đổi theo khối lượng (1 : 0,2; : 0,4; : 0,6; : 0,8) Liposome fluconazol tiến hành bào chế theo phương pháp trình bày mục 2.3.1 với nhiệt độ hydrat hóa 4oC, vận tốc quay 120vòng/phút, thời gian hydrat hóa Cơng thức bào chế mẫu M1, M2, M3 M4 trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Các công thức bào chế liposome fluconazol Lƣợng chất STT Thành phần M1 M2 M3 M4 30 30 30 30 Fluconazol (mg) Phosphatidylcholin (mg) 170,0 158,0 130,2 157,8 Cholesterol (mg) 38,8 58,0 75,5 83,7 Đệm phosphat pH 7,4 (ml) 10 10 10 10 Liposome fluconazol thu đem soi kính hiển vi quang học để đánh giá sơ hình dạng, kích thước mật độ tiểu phân hình thành Sau đó, liposome thu được đánh giá kính hiển vi điện tử quét SEM 33  Sử dụng kính hiển vi quang học Các mẫu thu sau bào chế phương pháp hydrat hóa màng phospholipid soi kính hiển vi vật kính dầu, độ phóng đại 100 lần Kết thể hình 3.4 Hình 3.4 Hình ảnh liposome fluconazol kính hiển vi quang học Nhận xét Mẫu không bị kết tụ thành chùm, khóm Liposome thu liposome MLV có kích thước khoảng 400nm - 4000nm Mẫu M1 có tỉ lệ PC:Chol (1 : 0,2) mật độ ta quan sát thưa thớt Kích thước 34 liposome fluconazol lớn Mẫu M2 với tỉ lệ PC : Chol (1 : 0,4) KTTP mật độ thưa thớt liposome Mẫu M3 với tỉ lệ theo khối lượng PC : Chol (1 : 0,6) ta thấy KTTP nhỏ, hình tròn, đồng kích thước M4 mật độ Mẫu M4 với tỉ lệ theo khối lượng PC : Chol (1 : 0,8) ta thấy KTTP tương đối nhỏ, tròn, mật độ nhiều khơng đồng KTTP Như vậy, qua khảo sát sơ thực nghiệm cho thấy, liposome fluconazol thu liposome MLV, mẫu M3 mẫu M4 có khả tạo liposome tốt với hình dạng tròn, kích thước đồng đều, nhỏ, mật độ liposome nhiều  Sử dụng kính hiển vi điện tử quét SEM Các mẫu xử lí kính hiển vi điện tử qt trình bày mục 2.3.4.2 Kết trình bày hình 3.5 Hình 3.5: Hình ảnh SEM liposome fluconazol 35 Nhận xét Liposome dạng hình cầu, tròn, kích thước khoảng 400nm – 4000nm tương đối đồng Kết phân tích SEM phù hợp với kết đánh giá sơ kính hiển vi quang học Như vậy, qua hình ảnh soi kính hiển vi hình ảnh SEM cho thấy mẫu có khả tạo liposome tốt M3 M4 3.2.3 Ảnh hƣởng tỉ lệ phosphatidylcholin : cholesterol tới phân bố kích thƣớc tiểu phân Phân bố kích thước tiểu phân xác định máy phân tích kích thước trình bày mục 2.3.4.2 Kết trình bày bảng 3.3 phụ lục 1, phụ lục 2, phụ lục 3, phụ lục Bảng 3.3 Phân bố KTTP liposome fluconazol Mẫu Kích thƣớc trung bình (nm) M1 1278 M2 1091 % phân bố kích thƣớc 860,0nm - 60,3% 222,2nm - 39,7% 1910nm - 73,7% 289,8nm - 26,3% 173,3nm - 55,7% M3 302,7 950,5nm - 39,5% 5234nm - 4,8% 673,9nm - 66,2% M4 444,7 192,7nm - 29,6% 5227nm - 4,2% 36 Nhận xét Mẫu M1 có kích thước trung bình lớn (1278nm) giảm dần theo mẫu M2, M4, M3 Mẫu M3 có kích thước trung bình tiểu phân liposome nhỏ (302,7nm) Ở mẫu M1, phân bố KTTP tập trung kích thước 860,0nm (cường độ pic chiếm tới 60,3%) kích thước 222,2nm (cường độ pic 39,7%) Mẫu M2, tiểu phân liposome có kích thước trung bình 1091nm, phân bố KTTP tập trung kích thước 1910nm (cường độ pic chiếm tới 73,7%) kích thước 289,8nm (cường độ pic 26,3%) Ở mẫu M3 (kích thước trung bình nhỏ 302,7nm), kích thước tập trung 173,3nm (cường độ pic 55,7%), kích thước 950,5nm (cường độ pic 39,5%), kích thước 5234nm (cường độ pic 4,8%) Mẫu có kích thước trung bình 444,7nm, tập trung kích thước 673,9nm (cường độ pic 66,2%), kích thước 192,7nm (cường độ pic 29,6%), kích thước 5227nm (cường độ pic 4,2%) Kết cho thấy mẫu M3 mẫu M4 có phân bố KTTP đánh giá tốt Tuy nhiên, phân bố KTTP liposome không tập trung mẫu Như vậy, kết thu trùng hợp với kết đánh giá sơ hình dạng, kích thước mật độ liposome Kết cho thấy tăng thành phần cholesterol kích thước tiểu phân giảm, giảm cholesterol kích thước tiểu phân tăng lên 3.2.4 Ảnh hƣởng phosphatidylcholin : cholesterol tới tỉ lệ liposome hóa Sau q trình khảo sát yếu tố công thức, kĩ thuật bào chế ảnh hưởng đến hình thành liposome, tỉ lệ PC : Chol theo khối lượng yếu tố ảnh hưởng rõ rệt đến hiệu suất tạo liposome (điều thể kết khảo sát trình bày mục 3.2.2 3.2.3) Ngoài ra, tỉ lệ ảnh 37 hưởng đến tỉ lệ liposome hóa Do đó, mẫu liposome bào chế theo cơng thức trình bày mục 3.2.2 đem xác định tỉ lệ liposome hóa Cũng tiến hành bào chế song song mẫu trắng tương ứng không chứa fluconazol nhằm loại trừ ảnh hưởng tá dược đo quang Định lượng dược chất fluconazol bị “bẫy” liposome phương pháp đo quang λ = 260nm theo 2.3.4.1 Kết trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Tỉ lệ liposome hóa liposome fluconazol Mẫu Tỉ lệ PC : Chol (kl/kl) % liposome hóa (%m) M1 : 0,2 3,13 M2 : 0,4 4,75 M3 : 0,6 6,14 M4 : 0,8 7,15 Quan sát bảng trên, nhìn chung tỉ lệ liposome fluconazol bào chế phương pháp hydrat hóa màng PL có tỉ lệ fluconazol liposome hóa tương đối thấp Mẫu M1 có tỉ lệ liposome hóa thấp (3,13%), mẫu M2 có tỉ lệ liposome hóa 4,75%, mẫu M3 có tỉ lệ liposome hóa 6,14%, mẫu M4 có tỉ lệ liposome hóa cao (7,15%) Nhận thấy, tỉ lệ liposome hóa tăng lượng cholesterol thành phần phospholipid tăng Rõ ràng tỉ lệ khối lượng PC : Chol lớp màng PL ảnh hưởng tới tỉ lệ liposome hóa liposome fluconazol Mẫu tốt có tỉ lệ liposome hóa cao 38 M4 với tỉ lệ liposome hóa 7,15% với tỉ lệ theo khối lượng PC:Chol = 1:0,8 Kết phù hợp với kết khảo sát sơ cảm quan sử dụng kính hiển vi quang học trình bày 3.3 BÀN LUẬN 3.3.1 Về phƣơng pháp bào chế tỉ lệ liposome hóa Liposome fluconazol bào chế phương pháp hydrat hóa màng PL Ưu điểm phương pháp quy trình bào chế đơn giản, khơng nhiều thời gian, tốn [25] Liposome fluconazol thu liposome MLV có kích thước khoảng 400nm - 4000nm, giảm KTTP phương pháp siêu âm cần ý tới nhiệt độ, thời gian q trình siêu âm làm phá vỡ cấu trúc nhiễm tạp kim loại Yêu cầu phương pháp cần khả khéo léo người làm khảo sát kết thực nghiệm tốt Tuy nhiên, nhược điểm phương pháp không phù hợp sản xuất công nghiệp, tỉ lệ liposome hóa thấp (mẫu M4 cao 7,15%), kích thước tiểu phân khơng đồng [25] Tỉ lệ liposome hóa thấp nguyên nhân:  Nguyên liệu, hóa chất sử dụng Nguyên liệu hóa chất sử dụng chưa đạt chuẩn Do đó, ảnh hưởng đến khả tạo màng liposome Ví dụ PC sử dụng để bào chế gồm nhiều loại PL tan dầu, khả tạo màng liposome Hơn nữa, q trình bào chế, PC khác có ảnh hưởng tới tỉ lệ liposome hóa fluconazol độ ổn định liposome Ví dụ sử dụng PC cấu tạo từ acid béo khơng no acid béo khơng no nhanh chóng 39 bị tác động oxy khơng khí bị peroxyd hóa [25] Như vậy, chất lượng nguyên liệu đầu vào quan trọng Ngoài ra, loại lipid khác ảnh hưởng tới hiệu suất liposome hóa độ ổn định liposome Dưới loại lipid thường dùng bào chế liposome (hình 3.6) H H H HO Cholesterol Phosphatidylcholin Cardiolipin Sphingomyelin Hình 3.6: Các loại lipid thường dùng để bào chế liposome Trong nghiên cứu sử dụng PC Nhận thấy, liposome có độ ổn định tốt Đánh giá cảm quan cho thấy liposome không bị đóng thành mảng, khơng bị phân lớp,… Kết khẳng định soi kính hiển vi quét SEM  Phương pháp bào chế Trong đề tài này, phương pháp sử dụng hydrat hóa màng phospholipid, có ưu điểm nhược điểm trình bày Ngồi ra, hydrat hóa phụ thuộc vào thời gian điều kiện trình 40 hydrat hóa (toC hydrat hóa, vận tốc quay, thời gian hydrat hóa…) Nhiệt độ hydrat hóa trì 4oC, hydrat hóa thời gian lâu tăng tỉ lệ liposome hóa  Phương pháp xác định tỉ lệ liposome hóa liposome fluconazol Fluconazol bị liposome hóa tách phương pháp li tâm, thẩm tích, sau xác định tỉ lệ liposome hóa phương pháp đo quang Dễ nhận thấy phương pháp định lượng hạn chế Do tiểu phân liposome có kích thước lớn bị lắng (thu cặn), tiểu phân có kích thước nhỏ tồn lơ lửng dịch li tâm (dịch nổi) tính vào tỉ lệ khơng liposome hóa Hơn nữa, ta rửa cặn sau li tâm làm cho liposome fluconazol bị mát Bản thân trình siêu li tâm 12000vòng/phút ảnh hưởng đến độ bền, cấu trúc liposome Do vậy, cách xử lí mẫu ảnh hưởng bất lợi tới việc xác định tỉ lệ liposome hóa fluconazol  Lựa chọn tỉ lệ phosphatidylcholin : cholesterol PL sử dụng bao gồm PC Chol Trong đề tài này, khảo sát tỉ lệ theo khối lượng khác PC : Chol thu kết trình bày mục 3.2.1, 3.2.2 3.2.3 Từ đó, tạo điều kiện thuận lợi cho nghiên cứu sâu Trong liposome, Chol có vai trò làm giảm độ cứng, tăng tính thấm liposome, tăng độ ổn định giảm rò rỉ dược chất Sản phẩm thu hỗn dịch nên cần xem xét độ ổn định nhiều mặt cần có thời gian để đánh giá, phân tích Liposome fluconazol bào chế phương pháp bán thành phẩm để bào chế thuốc tiêm, dạng gel, thuốc dùng nhãn khoa 41 3.3.2 Về hình dạng, kích thƣớc tiểu phân liposome fluconazol Liposome bào chế phương pháp liposome MLV Về kích thước: có đường kính khoảng từ 400nm đến vài µm, số lớp lipid kép vào khoảng - 20 Về hình dạng: liposome có dạng hình cầu, tròn, khơng bị kết tụ (rất ít) Tuy vậy, tùy theo mục đích sử dụng, ta giảm kích thước tiểu phân nhiều phương pháp khác trình bày mục 1.2.4 hay sử dụng siêu âm Cơ chế làm giảm KTTP siêu âm tác dụng siêu âm, phân tử dao động với tần số cao, liên kết tiểu phân kết tụ bị phá vỡ Từ đó, tạo liposome đồng nhất, kích thước nhỏ, phù hợp phòng thí nghiệm Tuy nhiên, nhược điểm siêu âm làm ổn định phá vỡ cấu trúc liposome điều nhận thấy trình khảo sát Do vậy, phương pháp không sử dụng nghiên cứu Đánh giá hình thái liposome kính hiển vi điện tử qt SEM cho thấy hình ảnh liposome thu tọa độ, khơng thấy tồn liposome có mẫu Vì vậy, phân tích SEM đánh giá sơ hình dạng kích thước liposome Giải pháp kết hợp nhiều phương pháp đánh đánh giá sơ kính hiển vi quang học, kính hiển vi điện tử quét SEM mức độ phân bố kích thước tiểu phân Kết thu ta thấy: mẫu M1 M2 có tượng kết tụ (ít) Mẫu M3 M4, tiểu phân liposome tương đối đồng đều, tách biệt Nguyên nhân mẫu liposome không ổn định, tiểu phân kết tụ lại thành tiểu phân có kích thước lớn Hoặc cách xử lí mẫu trước quét SEM chưa phù hợp, mẫu bị ổn định cấu trúc nhiễm kim loại xử lí tiêu trước quét,… 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua trình khảo sát, thực nghiệm nghiên cứu, đạt kết sau: Đã xây dựng công thức qui trình bào chế liposome fluconazol phương pháp hydrat hóa màng PL với công thức đánh giá tốt PC : Chol tỉ lệ theo khối lượng : 0,8  tạo điều kiện cho nghiên cứu Đã đánh giá liposome fluconazol về:  Tỉ lệ liposome hóa với khảo sát tỉ lệ thành phần PL khác (PC : Chol) Kết cho thấy với tỉ lệ khối lượng PC : Chol = : 0,8 cho tỉ lệ liposome hóa cao 7,15%  Đã đánh giá hình thái, KTTP (vào khoảng 400nm - 4000nm)  Phân bố kích thước tiểu phân liposome fluconazol KIẾN NGHỊ Chúng xin đưa số đề xuất sau:  Đánh giá tỉ lệ liposome hóa dược chất phương pháp thích hợp  Nghiên cứu thêm biện pháp khác để tăng tỉ lệ liposome hóa  Đánh giá khả giải phóng fluconazol từ liposome ... Nghiên cứu bào chế liposome fluconazol thực với mục tiêu:  Xây dựng công thức qui trình bào chế liposome fluconazol  Đánh giá kích thước tiểu phân, phân bố kích thước tiểu phân liposome fluconazol. .. nghiên cứu bào chế dạng tiểu phân để tăng tác dụng điều trị bệnh Dạng bào chế thu hút mạnh mẽ quan tâm nhiều nhóm nghiên cứu, nhà khoa học Tại Việt Nam việc nghiên cứu nghiên cứu ứng dụng liposome. .. Nguyên liệu sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.2 Công thức bào chế liposome fluconazol 18 Bảng 3.1 Độ hấp thụ dung dịch fluconazol nồng độ 27 khác Bảng 3.2 Các công thức bào chế liposome fluconazol 32 Bảng