Góp phần nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của nấm linh chi (ganoderma lucidum (lyess ex fr ) karst ) ở việt nam
Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 47 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
47
Dung lượng
16,55 MB
Nội dung
B ộ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI _ * rĐ m ^7h i r~Jltíi 'TơcưựỊ, GĨP PHẦNNGHIÊNcứuĐẶCĐIỂMTHỰCVẬT,THÀNHPHẦN HỐ HỌC • • • VÀMỘTSỐTÁCDỤNGSINHHỌCCỦANẤMLINHCHI(Ganodermalucidum(Lyessex Fr.) Karst.) ỞVIỆTNAM (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 1997- 2002) Hà Nội, tháng năm 2002 BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI _ * Sinh viên (ĩ)àjrvL & h ị ^7liu Tỉỗầntị GÓPPHẦNNGHIÊNcứuĐẶCĐIỂMTHỰCVẬT,THÀNHPHẦN HỐ HỌC • • • • VÀMỘTSỐTÁCDỤNGSINHHỌCCỦANẤMLINHCHI(Ganodermalucidum(Lyessex Fr.) Karst.) ỞVIỆTNAM (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 1997- 2002) Nẹười hướng dẫn: TSKH Trần Văn Thanh TS Nguyễn Viết Thân Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Thời gian thực hiện: 1/2002 - 5/2002 MỜ3 @ c Á M ơ 1.QQQ0 NML 800.00 : 190.00 “> 800.00 B a se lin e E rase Ụ ieu R e-scaĩẽ Zoom C ursor ilEVBir More U r i t e l a b e l s ,on t h e g r a p h _ Hình : Phổ hồng ngoại chất LC2 LC2- HANG FiND PEAKS: Spectrum: LC2 - HANG Region: 4000.00 400.00 Absolute threshold: 87 469 Sensitivity: 50 Peak list: Position: 2926.61 Intensity: Position: 2854 37 Intensitv: Number of sample scans: 32 Number of background scans: 32 Resolution: 4.000 Samplegain: 2.0 Mirror velocity: 0.6329 Aperture: 95.00 55.835 72*915 50 Detector: DTGS TEC 3.3 Nghiêncứutácdụng chống oxy hoá dịch chiết nấmLinhchi 3.3.1 Xác định hoạt độ chống oxy hoá theo phương pháp Blagodorop * Chuẩn bị dịch chiết: Cân xác khoảng 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 50ml, thêm nước, đun sơi, chiết chia làm lần (lần thứ 1,5 giờ, lần thứ hai 1,0 giờ, lần thứ ba 0,5 giờ) lần 30ml nước Gộp dịch chiết, cô thành cao - nước [1:1], lấy 1,5 ml dịch cao pha thành 100 ml ta dịch chiết cần thử nồng độ 1,5 % * Tiến hành: Trong lọ màu nâu loại, cho hỗn hợp phản ứng gồm: - ml Tween 80 1% - 0,2 ml dung dịch muối sắt II (FeS04) 10' M - 0,2 ml dung dịch acid ascorbic 10’2 M - 0,6 ml dịch chiết thuốc (mẫu đối chứng thay 0,6 ml nước cất) Đậy nút kín, lắc kỹ, ủ nhiệt độ 40°c 48 Lấy 2ml hỗn hợp sau ủ, thêm vào ml dung dịch acid tricloracetic 30%, để yên giờ, sau đem ly tâm phút với tốc độ 4200 vòng/phút Lấy 2ml dịch sau ly tâm, thêm 2ml dung dịch acid thiobarbituric 0,25%, đun cách thủy 15 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng Đo màu phức tạo thành bước sóng Ả = 532 nm Tính lượng MDA với hệ số tắt = 0,156 nm or'cm 'i Nếu mẫu thử có chất chống oxy hố lượng MDA tạo thành phải mẫu đối chứng (tức mật độ quang mẫu thử phải thấp mẫu đối chứng) Kết thực nghiệm thể bảng 9: 31 B ảng Kết hoạt độ chống oxy hoá theo phương pháp Blagodorop TT M ẫu M ật độ quang (E) MDA (nmol/1) H T C O (%) Mẫu chứng 0,121 4,659 Mẫu thử 0,050 1,925 58,68 Mẫu thử 0,049 1,887 59,50 Mẫu thử 0,053 2,041 56,19 Mẫu thử 0,051 1,964 57,85 Mẫu thử 0,047 1,810 61,15 Trung bình 58,67 ± 2,29 Với lượng MDA tính theo cơng thức: x= Trong đó: F 3 = 3%5 E 0,156 X: Lượng MDA (đơn vị nmol/1) E: Mật độ quang mẫu đo 4: Thể tích mẫu đo quang (ml) 3: Thể tích tồn phần mẫu phân tích (ml) 2: Thể tích dịch để xác định MDA (ml) 0,156: Hệ số tắt mol (nmol ' cm '];i) Hoạt độ chống oxy hố tính theo cơng thức: HCTO = Xc Xc Trong đó: X t X 100 HTCO: Hoạt độ chống oxy hoá x c Lượng MDA mẫu chứng x t : Lượng MDA mẫu thử 32 Trong thí nghiệm nồng độ chất thử dùng là: (0,6ml X 0,015 g/ml) : ml = 0,003 g/ml = mg/ml Nhán xét: NấmLinhchi trồng ViệtNam với hàm lượng mg dược liệu ỉ ml hỗn hợp phân tích có khả ức chế q trình peroxyd hố acid béo chưa no (Tween 80) với hoạt tính chống oxy hố 58,67 ± 2,29 % (so với mẫu đối chứng) 3.3.2 Nghiêncứutácdụng chơng oxy hố bảo vệ tê bào gan theo phương pháp Jawiga Robak Misno Tanaka * Chuẩn bị dịch chiết cần thử: Từ cao - nước [1:1] phần [3.3.1] ta pha dung dịch cần thử với nồng độ 3g dược liệu 100 ml nước cất (3%) * Chuẩn bị thuốc thử: - Dung dịch acid Thiobabituric: 160 mg/20ml - Dung dịch Tricloacetic: 40 mg/lOOml - Dung dịch KC1: U2g/\ - Dung dịch acid ascobic: 0,4325 g/1 - Dung dịch muối sắt II (FeS04): 0,0165 g/1 * Chuẩn bị dung dịch đồng thể gan chuột: - Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, mổ lấy gan Nghiền lạnh với dung dịch KC1 máy nghiền đồng thể theo tỷ lệ 400 mg gan/ 9,6 ml KC1, thu dung dịch đồng thể gan chuột * Cách tiến hành: - Chuẩn bị giá ống nghiệm ml, đánh số thứ tự cho vào ống dung dịch theo thứ tự bảng 10: 33 Bảng 10: Trình tự cho dung dịch vào ống nghiệm Ống Ống Mẫu Dịch đồng thể (ml) thử Ống thử Ống thử Ống thử4 Ống thử 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 Dung dịch thử (ml) 0,0 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 Muối sắt II 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 Acid ascobic (ml) 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 Dung dịch KC1 (ml) 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,0 - FeS04(ml) Sau buộc kín ống nghiệm, ủ nhiệt độ 37° c 30 phút, lấy ra, thêm vào ống ml dung dịch acid tricloacetic 40% Để yên giờ, tiếp đem ly tâm phút với tốc độ 3000 vòng/ phút Lấy ml dịch sau ly tâm thêm vào ỉ ml dung dịch acid thiobabituric 0.80 %, đun cách thuỷ 20 phút để nguội đến nhiệt độ phòng Đo màu phức tạo thành bước sóng X = 532 nm Tính lượng MDA thơng qua mật độ quang với hệ số tắt = 0,156 nmol' 1cnv'l Kết thực nghiệm thể bảng 11: Bảng 11: Kết hoạt độ chống oxy hoá bảo vệ tế bào gan (invitro) TT Mẫu Thể tích (mi) Nồng độ MDA HTCO (mg/ml) Mật độ quang (E) (nmol/1) Mẫu chứng 0,00 0,0 0,353 11,9 (%) 0,0 Mẫu thử 0,10 0,91 0,309 9,79 12,51 Mẫu thử 0,20 1,82 0,224 7,10 36,55 Mẫu thử 0,30 2,73 0,195 6,18 44,77 Mẫu thử 0,40 3,64 0,129 4.09 63,45 Mẫu thử 0,50 4,55 0,095 3,10 73,10 34 Lượng MDA tạo thành tính dựa vào mật độ quang theo cơng thức: Trong X : Lượng MDA (đơn vị nmol/1) E : Mật độ quang mẫu đo : Thể tích mẫu đo quang (ml) 3,3: Thể tích tồn phần mẫu phân tích (ml) : Thể tích dịch để xác định MDA (ml) 0,156: Hệ số tắt mol (n m o l'1 cm '1^) Hoạt độ chống oxy hố (HTCO) tính theo cơng thứcphần [3.3.1] Lượng MDA tạo thành hoạt độ chống oxy hoá dịch chiết nấmLinhchi thể biểu đồ biểu đồ Biểu đồ : Lượng MDA tạo thành Biểu đồ : Hoạt độ chống oxy hoá Hoạt độ’ » chống oxy hoá Lượng MDA tạo thành MDA 15 HTCO 11.19 9.79 10 Mẫ.u thử MO MI M2 M3 M4 M5 MO MI M2 M3 M4 M5 Nhân xét: Từ kết bảng biểu đồ cho thấy lượng MDA mẫu thử giảm rõ rệt nồng độ chất mẫu thử tăng Điều cho thấy dịch chiết nấmLinhchi trồng ViệtNam có chứa chất chống oxy hố với hoạt tính chống oxy hố cao (73,10 % với nồng độ4,55mg dược liệu m í hỗn hợp nghiên cứu) 36 Phần IV KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 4.1.Kết luận: *Sau thời gian nghiêncứu thu số kết sau: 4.1.1 Về đặcđiểmthực vật: - Đã phân tích đặcđiểm hình thái cấu trúc nấmLinhchi trồng ViệtNam Đã tiến hành so sánh thấy nấmLinhchi trồng ViệtNam có khác đặcđiểm hình thái so với nấmLinhchi hoang dại, Trung Quốc, Hàn Quốc cấu trúc bào tử đảm khơng thấy có khác biệt rõ rệt 4.1.2 Vê thànhphầnhoáhọc - Bằng phản ứng định tính sơ xác định nấm có số nhóm chất: Saponin, Sterol, Flavonoid, Acid amin, Polysaccharid, Alcaloid - Xây dựngsơ đồ chiết xuất hợp chất nấmLinhchi - Đã chiết xuất, phân lập chất LC1 LC2 tinh khiết từ nấmLinhchi 4.1.3 Vê tácđụngsinhhọc Đã chứng minh dịch chiết nấmLinhchi trồng ViệtNam có chứa hoạt chất có tácdụng chống oxy hố Linhchi với nồng độ mg dược liệu mỉ hỗn hợp nghiêncứu có khả ức chế q trình peroxyd hố lipid Tween 80 với hoạt tính chống oxy hố 58,67 ± 2,29%, dịch đồng thể gan chuột 52,29% Điều cho thấy thực nghiệm tiến hành hai chất khác cho kết khả quan 37 4.2 Đê xuất Với kết thu nhận thấy: NấmLinhchiViệtNam cần tiếp tục nghiêncứu sâu mặt thựcvật,hoáhọctácdụngsinh học, để sớm thức đưa Linhchi vào danh mục thuốc nước, gópphần khẳng định vị trí loại dược liệu quý 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Vũ Văn Chuyên - Bài giảng Thựcvật, trường Đại học Dược Hà Nội (Tr 124-144) Bài giảng Dược liệu tập 1, 2, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Anh Dũng - Gópphần vào nghiêncứuthành tố hố học Ganoderma lucidum, Tạp chí Dược họcsố 2/1996 (Tr 14-16) Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu - Phương pháp nghiêncứuhoáhọc thuốc Lê Trần Đức - Cây thuốc Việt Nam; NXB Nơng nghiệp/1997 (Tr 831833) Trương Thị Hồ, Trương Hương Lan - Nghiêncứu trích ly hoạt chất sinhhọc từ nấmLinh chi; International workshop on biology, Hanoi Vietnam 2-5, July 2001 (Tr 175-181) Trần Văn Mão, Phạm Quang Thu - Linhchi loại nấm chữa nhiều bệnh, Tạp chí Lâm nghiệp (Tr 20 -21) Đàm Nhận - Nghiêncứuthànhphần loài sốđặcđiểmsinhhọc họ Linhchi (Ganodermataceae Donk) Việt Nam, Luận án PTS Khoa họcSinh học, 1996 Đàm Nhận, Trịnh Tam Kiệt - Khả phân lập nuôi cấy khiết số lồi họ nấm Ganodermataceae Donk, Tạp chí Dược họcsố 1/1995 (Tr 7-9) 39 10 Đàm Nhận, Lê Xuân Thám - Nghiêncứu tương đồng tính trạng hình thái hố sinh đại diện chi Ganoderma Karsten, Tạp chí Dược học ứng dụngsố 4/1999 (Tr 10 - 13) 11 Đàm Nhận, Lê Xuân Thám - Đặcđiểm tiến hoá cấu trúc bào tử đảm nấmLinh chi, Tạp chí Dược họcsố 5/1995 (T - 8) 12 Lê Xuân Thám - NấmLinhchi dược liệu quý ViệtNam - Khảo cứu kết hợp với phương pháp phóng xạ hạt nhân - NXB Mũi Cà Mau, 1996 13 Lê Xuân Thám - Nghiêncứuđặcđiểmsinhhọc q trình hấp thu khống nấmLinhchi Ganoderma lucidum (Leyss ex Fr.) Karst kỹ thuật hạt nhân - Luận án Phó Tiến sĩ Khoa họcSinh học, 1996 14 Lê Xuân Thám - Giả thuyết tiến hố hình thái phát sinh chủng loại họ Linh chi, Tạp chí Dược họcsố 10/1996 15 Lê Xuân Thám, Jean Mars Moncalvo - Hệ thống tiến hoánấmLinhchi Ganodermataceae sởphân tích cấu trúc ADN bào tử đảm, Tạp chíSinhhọc tháng 12/1999 16 Phạm Quang Thu - Nghiêncứusốđặcđiểmsinhhọcnấm Lim Ganoderma lucidum (Leyss ex Fr.) Karst vùng Đông Bắc ViệtNam Luận án Phó Tiến sĩ Nơng nghiệp, 1994 17 Phạm Quang Thu - Giá trị Dược liệu cải thiện chất lượng nuôi trồng nhân tạo nấmLinhchiViệt Nam, Thông tin Khoa học kỹ thuật Lâm nghiệp số 5/2001 18 Cổ Đức Trọng - Tìm hiểu ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng thể Linhchi - Luận văn Thạc sỹ Khoa họcSinh học, 1996 19 Thực tập Dược liệu (phần vi họchoá học) - Trường Đại học Dược Hà Nội 40 20 Thực tập Thực vật - Trường ĐH Dược Hà Nội 21 Nguyễn Quang Thường, Nguyễn Thị Bích, Nguyễn Gia Chẩn, Đỗ Ngọc Sơn - Thăm dò hoạt tính chống oxy Linh chi, Tạp chí Dược họcsố 8/1996 (Tr 18-21) 22.Kawagishi - From mycelia of the íungus Ganoderma lucỉdum, Phytochemistry, Vol 40, No (Tr 7-10) 23 Klyotaka Kyoama - Antinociceptic components of Ganoderma ỉucid Planta medica 63/1997 (Tr 224-227) 24 Raymond Chang - Eữective dose of Ganoderma in humans, 5th International mycological congress Vancouver, Auguts 14-21, 1994( Tr.117 - 121) 25 Yang Qing Yao - The effect of Ganoderma lucidum extract againt fatigue and endurance in the absence oxygen, 5* International mycological congress Vancouver, August 14 -21,1994 (Tr 101-104) 41 ... ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI _ * Sinh viên (ĩ)àjrvL & h ị ^7liu Tỉỗầntị GÓP PHẦN NGHIÊN cứu ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HỐ HỌC • • • • VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA NẤM LINH CHI (Ganoderma lucidum. .. dung sau: Nghiên cứu đặc điểm thực vật Nghiên cứu thành phần hoá học Thử tác dụng chống oxy hoá nấm Linh chi trồng Việt Nam Phần I TỔNG QUAN 1.1 Vài nét lịch sử hệ thông học họ Linh chi (Ganodermataceae... 1.3 Thành phần hoá học nấm Linh chi Trong Tây Âu, nhà khoa học sâu vào nghiên cứu hệ thống học, điều tra đặc điểm sinh học nấm Linh chi nước châu Á, nhà khoa học lại dẫn đầu nghiên cứu thành phần