KHẢO sát XOẮN KHUẨN LEPTOSPIRA và LEPTOSPIROSIS TRÊN CHÓ ở một số TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG cửu LONG

Đề tài thực hiện trên 4 nội dung là: 1 Điều tra tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó và chuột; 2 Phát hiện xoắn khuẩn Leptospira từ nước tiểu bằng kỹ thuật PCR và nuôi cấy, giải trình tự đoạn

MÃ SỐ: 62640102

LỜI CẢM TẠ

Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: Ban Giám hiệuTrường Đại học Cần Thơ, khoa Sau đại học, ban Chủ nhiệm Khoa NôngNghiệp, Bộ môn Thú y, các Quý thầy, cô đã giảng dạy, hướng dẫn, giúp đỡ,tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và thựchiện luận án

Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô hướngdẫn PGS.TS Hồ Thị Việt Thu đã động viên, giúp đỡ và tạomọi điều kiện thuận lợi cho tôi học tập, nghiên cứu, chăm bồi kiến thức vàhoàn thành luận án Xin cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Trần Đình Từ và PGS

TS Cao Thị Bảo Vân đã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn và tạo điều kiện thuận lợicho tôi thực hiện nuôi cấy xoắn khuẩn tại Viện Vệ Sinh Dịch Tễ Xin cảm ơnsâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Nhựt Xuân Dung và PGS.TS Nguyễn TrọngNgữ đã động viên và giúp đỡ trong việc xử lý số liệu và phân tích trình tựgene

Xin chân thành cảm ơn chị Nguyễn Thị Hạnh Lan đã tận tình hướng dẫntrực tiếp kỹ thuật nuôi cấy xoắn khuẩn tại phòng Sinh Học Phân Tử 3 củaViện Vệ Sinh Dịch Tễ (Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh) và em Trần Văn

Bé Năm phòng Sinh Học Phân Tử, Viện Công Nghệ Sinh Học Trường ĐHCT.Xin được bày tỏ lòng biết ơn các Quý thầy, cô trong hội đồngchấm luận án đã đóng góp cho tôi những ý kiến vô cùng quý giá để tôi có thểhoàn thiện hơn bản luận án của mình

Xin gởi lời cám ơn chân thành đến các bạn bè, đồng nghiệp của tôi đangcông tác tại Bộ môn Thú y, Trường Đại học Cần Thơ, các anh chị em lớp NCSkhóa 1 (2013-2017) đã động viên, khích lệ và giúp đỡ tôi trong suốt quá trìnhthực hiện và hoàn thành luận án

Tôi xin dành tất cả sự yêu thương và lời cám ơn tới gia đình, người thânyêu của tôi đã luôn ủng hộ, chia sẻ những buồn vui trong cuộc sống để tôi cóthể an tâm và có thêm nghị lực hoàn thành luận án

Tác giả luận án

Nguyễn Thị Bé Mườii

TÓM TẮT

Đề tài “Khảo sát xoắn khuẩn Leptospira và Leptospirosis trên chó ở

một số tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long” được thực hiện từ năm 2013 đến

2017, sử dụng phương pháp khảo sát huyết thanh học (MAT), lấy mẫu cắtngang được thực hiện trên 4 tỉnh Cần Thơ, Vĩnh Long, An Giang và Cà Mau

với 18 nhóm huyết thanh Leptospira phổ biến.

Tổng số mẫu kiểm tra huyết thanh chó 1.433, chia thành: giống chó nội

và giống chó ngoại; 3 nhóm tuổi: 4 tháng - 12 tháng tuổi, ≤ 1-6 năm và ≥ 6năm tuổi; giới tính đực và cái; nuôi thả rong và nuôi nhốt Tổng số mẫu huyếtthanh chuột 647, với 3 loại chuột: chuột cống, chuột xạ và chuột nhắt Đề tài

thực hiện trên 4 nội dung là: (1) Điều tra tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó và chuột; (2) Phát hiện xoắn khuẩn Leptospira từ nước tiểu bằng kỹ thuật PCR và nuôi cấy, giải trình tự đoạn gene 16S rRNA của xoắn khuẩn Leptospira; (3) Khảo sát những biến đổi bệnh lý bệnh Leptospirosis trên chó thông qua xét

nghiệm máu và nước tiểu và (4) nghiên cứu biện pháp điều trị bệnh

Leptospirosis với 3 phác đồ điều trị bằng Shoptapen, Amoxicillin và

Doxycycline

Việc phát hiện xoắn khuẩn Leptospira được thực hiện trên 63 mẫu nghi ngờ có Leptospira từ 111 mẫu nước tiểu của chó có MAT ≥ 1: 400 Các biến

đổi về bệnh lý thực hiện trên 13 chó (6 con không có và 7 có triệu chứng lâm

sàng) dương tính với Leptospira bằng kỹ thuật PCR và điều trị được thực hiện

tại 3 phòng mạch thú y tại TPCT

Kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm xoắn khuẩn Leptospira trung bình trên

chó là 23,1%; cao nhất ở TP Vĩnh Long là 26,59%, kế đến là Cần Thơ(24,46%), An Giang (20,15%) và thấp nhất là Cà Mau (18,94%) Serogroup

phổ biến là L icteroheamorrhagiae (35,05%), L canicola (18,34%), L.

hurstbridge (12,69%), L bataviae (12,08%) và L grypptophosa (12,08%) Tỷ

lệ nhiễm xoắn khuẩn Leptospira giữa nhóm giống chó nội (23,71%) và chó

ngoại (22,24%) (P=0,51) cũng như các lứa tuổi chó khác nhau, từ 4 tháng đến

12 tháng tuổi (22,51%), ≤ 1-6 năm tuổi (22,52%) và ≥ 6 năm tuổi (26,04%)

(P=0,32) Tỷ lệ nhiễm Leptospira giữa chó đực (24,20%) và con cái (22,01%)

(P=0,33) Tuy nhiên, phương thức nuôi có ảnh hưởng rất có ý nghĩa đến tỷ lệ

nhiễm Leptospira, chó thả rong là 25,92% trong khi nuôi nhốt là 17,56% (P<0,01) Chuột có tỷ lệ nhiễm Leptospira khá cao, chuột cống 46,32%, trong

khi chuột xạ và chuột nhắt lần lượt là 26,32 và 27,14% (P<0,01) Serogroup

nổi trội là L icteroheamorrhagiae (40,61%), L canicola (20,52%), L.

bataviae (13,97%), L panama (10,92%) và L hurstbridge (10,92%) Tỷ lệ

dương tính với Leptospira giữa chuột và chó có tương quan rất chặc chẻ (R2=0,90)

ii

Kỹ thuật PCR đã phát hiện 13/63 mẫu nước tiểu dương tính với

Leptospira (20,63%) và đã nuôi cấy thành công Leptospira từ 3/63 mẫu nước

tiểu này (4,76%) Kết quả định danh xác định các mẫu phát hiện thuộc hai loài

Leptospira interrogans (L interrogans serovar icterohaemorrhagie) thuộc

nhóm Leptospira gây bệnh và loài Leptospira fainei (L fainei serovar

hurstbridge) thuộc nhóm xoắn khuẩn trung gian gây bệnh cơ hội hiện diện

trong nước tiểu chó ở TPCT

Mười ba chó dương tính với Leptospira có bạch cầu tổng số, bạch cầu

trung tính, lâm ba cầu, urea, creatinin, AST, ALT và bilirubin tăng cao, trongkhi hồng cầu, hemoglobin, hematocrit và tiểu cầu giảm so với chỉ số bìnhthường, ngoài ra trong nước tiểu còn xuất hiện hồng cầu và protein cao Bảychó có triệu chứng lâm sàng như lừ đừ, ăn ít hoặc bỏ ăn (100%), niêm mạcnhợt màu (85,71%) và tiêu chảy (14,28%) Sáu mươi ba chó được điều trị với

ba phác đồ, kết quả Doxycycline có tỷ lệ khỏi bệnh cao nhất (61,90%), kế đến

là Amoxicilline (50%) và thấp nhất Shotapen (40%) (P=0,37)

Kết quả của đề tài chỉ rằng chó và chuột là hai động vật có mắc bệnh

Leptospirois, tỷ lệ nhiễm Leptospira giữa chúng có quan hệ tuyến tính rất cao.

Các số liệu thu được của đề tài là những dữ liệu cần thiết cho công tác phòng

và chống bệnh trên chó cũng như góp phần làm hạn chế bệnh trên các độngvật khác và trên người

Từ khóa: chó, chuột, Leptospira, serogroup, tỷ lệ nhiễm, điều trị.

ABSTRACT

The study of “Survey of Leptospira and Leptospirosis in dogs in some

provinces in the Mekong Delta" was carried out from 2013 to 2017, using

for a cross-sectional sero survey of the Leptospira prevalence by microscopic

agglutination test (MAT) on four provinces: Can Tho, Vinh Long, An Giangand Ca Mau with live antigens of 18 common serogroups

A total of serum samples was 1,433, in which dogs were divided twobreeds group: domestic and exotic dog’s breeds; three age groups, 4 months to

12 months, ≤ 1-6 years and ≥ 6 years-old dogs; male and female; free-raisingdogs and captive dogs A total of the tested serum samples was 647: three rat

species: Rattus norvegicus, Suncus murinus and Mus musculus The study consisted of four contents (1) Investigation the prevalence of Leptospira in dogs and rats; (2) Detection of Leptospira from urine by PCR technique and

by culturing methods, sequence of the 16S rRNA of Leptospira; (3) Survey of the pathological changes of Leptospirosis on dogs through blood and urine

tests and (4) examination of three antimicrobial therapies with Shoptapen,

Amoxicillin and Doxycycline in the treatment of Leptospira on dogs.

The detection of Leptospira was examined on 63 clinical suspicion cases

of Leptospira from 111 urine samples of dogs, all were tested by MAT ≥ 1:

400 The pathological changes were conducted on 13 dogs (6 without and 7

had clinical symptoms) that were positive for Leptospira by PCR technique

and the treatments were conducted at 3 veterinary clinics in Cantho city

Results showed that the average prevalence of Leptospira in dogs was

23.10%, the highest rate was reported in Vinh Long province (26.95%),followed by Can Tho city (24.46%), An Giang province (20.15%) and the

lowest was in Ca Mau city (18.94%) The common serogroups were L.

icterohaemorrhagiae (35.05%), L canicola (18.43%), L hurstbridge

(12.69%), L bataviae (12.08%) and L gryppotyphosa (12.08%) The seroprevalence of Leptospira between domestic dog’s breeds group was

(23.71%) and exotic dog’s breeds group (22.24%) (P=0.51) as well as amongage groups of dogs: from 4 months to 12 months (21.51%), ≤ 1-6 years old(22.52%) and ≥ 6 year-old dogs (26.04%) (P=0.32) The prevalence of

Leptospira between males dogs was 24.20% and 22.01% in female (P=0.33).

Howerver, keeping methods had significantly influenced on the prevalence of

Leptospira with 25.92% found in free-raising dogs, while in captive dogs was

17.56% (P<0.01) There was high positive prevalence of Leptospira observed

in rats (35.40%), in which the highest percentage found in Rattus norvegicus (46.32%), while Suncus murinus and Mus musculus were 26.32% and 27.14%, respectively (P<0.01) The common serogroups were L icterohaemorrhagiae

(40.61%), L canicola (20.52%), L bataviae (13.97%), L panama (10.92%), and L hurstbridge (10.92%) The positive prevalence Leptospira between rats

and dogs was highly correlated (R2=0.90)

The PCR technique detected 13/63 Leptospira positive urine samples (20.63%) and Leptospira was successfully cultured from 3/63 urine samples

(4.76%) Identification results based on homology and comparison of 16S

rNRA gene nucleotic sequences had identified the Leptospira detected samples belonged to two species of Leptospira interrogans (L interrogans serovar icterohaemorrhagiae), which is pathogenic Leptospira species and L.

fainei (Leptospira fainei serovar hurstbridge) is the associated pathogenic

spirochetes, occurred in dog urine in Can Tho city

Thirteen dogs positive for Leptospira had the white blood cell,

neutrophil, lymphocyte counts, urea, creatinine, AST, ALT and bilirubinlevels higher than normal ranges, whereas the red blood cell, hemoglobin,hematocrit and platelet counts were lower than those of normal; and therewere the presence of red blood cell and protein in urine Seven dogs with

clinical symptoms of Leptospirosis included lethargy, reluctant to eat and

anorexia (100%), colorless mucus (85.71%) and diarrhea (14.28%) three infected dogs treated with Doxycycline had the highest recovery rate(61.90%), followed by Amoxicillin (50%) and the lowest was Shoptapen(40%) (P=0.37)

Sixty-The study indicated that canine and rodent were two infected animal

species with Leptospirosis There was a high linearly correlated in the prevalence of Leptospira between dogs and rats This research is necessary for

the prevention, against as well as contributes to limit the bacteria potentialexposure of rodent to domestic animals and human

Keywords: dog, rat, Leptospira, serogroup, prevalence, treatment.

LỜI CAM KẾT KẾT QUẢ

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quảnghiên cứu được trình bày trong luận án là trung thực, khách quan và chưatừng dùng để bảo vệ ở bất kỳ nơi đâu Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡcho việc thực hiện luận án đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận

án này đều được chỉ rõ nguồn gốc

Cán bộ hướng dẫn Tác giả luận án

PGS.TS Hồ Thị Việt Thu Nguyễn Thị Bé Mười

MỤC LỤC

LỜI CẢM TẠ i

TÓM TẮT ii

ABSTRACT iii

LỜI CAM KẾT KẾT QUẢ vi

MỤC LỤC vii

DANH SÁCH BẢNG x

DANH SÁCH HÌNH xii

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT xiii

CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1

CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Lịch sử phát hiện bệnh Leptospirosis và xoắn khuẩn Leptospira 3

2.2 Đặc điểm vi sinh vật học của xoắn khuẩn Leptospira

3 2.2.1 Phân loại học 3

2.2.2 Cấu trúc hình thái 7

2.2.3 Đặc tính nuôi cấy xoắn khuẩn Leptospira 7

2.2.4 Sức đề kháng của mầm bệnh 9

2.4.5 Tính sinh miễn dịch 9

2.3 Đặc điểm dịch tễ học 10

2.3.1 Nguồn bệnh 10

2.3.2 Đường xâm nhập của mầm bệnh 11

2.3.3 Đặc tính gây bệnh của xoắn khuẩn Leptospira 12

2.4 Đặc điểm bệnh học và lâm sàng 13

2.4.1 Bệnh Leptospirosis trên chó 13

2.4.2.Bệnh Leptospirosis trên người 18

2.5 Tình hình nghiên cứu Leptospirosis trên thế giới 19

2.6 Tình hình nghiên cứu Leptospirosis trên gia súc và người ở Việt Nam 22

2.7 Một số phương pháp chẩn đoán Leptospira 24

2.7.1 Phương pháp kiểm tra xoắn khuẩn bằng kính hiển vi nền đen 25

2.7.2 Phương pháp nuôi cấy xoắn khuẩn Leptospira 25

2.7.3 Chẩn đoán huyết thanh học 26

2.8 Các biện pháp phòng và trị Leptospirosis 29

2.8.1 Các biện pháp phòng 29

2.8.2 Điều trị bệnh Leptospirosis 31

CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 33

3.2 Đối tượng nghiên cứu 34

3.3 Vật liệu thí nghiệm 36

3.3.1 Phương tiện và dụng cụ dùng trong phản ứng huyết thanh học 36

3.3.2 Phương tiện và dụng cụ dùng trong kỹ thuật PCR 38

3.4 Nội dung nghiên cứu 39

3.4.1 Nội dung 1: Xác định tình hình nhiễm xoắn khuẩn Leptospira trên chó và chuột ở 4 tỉnh ĐBSCL 39

3.4.2 Nội dung 2: Phát hiện xoắn khuẩn Leptospira từ nước tiểu 45

3.4.3 Nội dung 3: Khảo sát những biến đổi bệnh lý bệnh Leptospirosis 53

3.4.4 Nội dung 4: Nghiên cứu biện pháp điều trị bệnh Leptospirosis 55

3.5 Phân tích và xử lý số liệu 56

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 57

4.1 Kết quả khảo sát tình hình nhiễm Leptospira trên chó và chuột 57

4.2 Phát hiện xoắn khuẩn Leptospira từ nước tiểu 81

4.3 Khảo sát những biến đổi bệnh lý bệnh Leptospirosis trên chó 92

4.4 Nghiên cứu biện pháp điều trị bệnh Leptospirosis trên chó 99

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 103

5.1 Kết luận 103

5.2 Đề nghị 103

DANH MỤC LIỆT KÊ CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ 104

TÀI LIỆU THAM KHẢO 105

PHỤ LỤC MẪU PHIẾU ĐIỀU TRA 121

PHỤ LỤC THUỐC SỬ DỤNG 122

PHỤ LỤC THỐNG KÊ 124

KẾT QUẢ MỔ KHÁM BỆNH TÍCH 136

PHỤ LỤC HÌNH 143

ĐẶC ĐIỂM PHÂN BIỆT BA LOÀI CHUỘT 146

PHỤ LỤC GIẢI TRÌNH TỰ GENE 148

DANH SÁCH BẢNG

Bảng Tên bảng Trang

Bảng 2.1 Nhóm huyết thanh và một số serovar của L interrogans 5

Bảng 3.1 Danh mục bộ kháng nguyên dùng trong phản ứng MAT 37

Bảng 3.2 Số lượng mẫu huyết thanh chó trong nghiên cứu 40

Bảng 3.3 Phân bố mẫu huyết thanh chuột trong nghiên cứu 43

Bảng 3.4 Phân loại chuột trong nghiên cứu 43

Bảng 3.5 Số mẫu nước tiểu dùng cho kỹ thuật PCR 45

Bảng 3.6 Trình tự nucleotide cặp mồi dùng khuếch đại vùng gene 47

Bảng 3.7 Thành phần phản ứng PCR 47

Bảng 3.8 Quy trình nhiệt trong phản ứng PCR 48

Bảng 3.9 Số mẫu nước tiểu dùng cho nuôi cấy 49

Bảng 3.10 Phân bố mẫu khảo sát tại 3 địa điểm trên địa bàn TPCT 53

Bảng 3.11 Các chỉ tiêu sinh lý và sinh hóa máu 54

Bảng 3.12 Các chỉ tiêu sinh lý nước tiểu 54

Bảng 3.13 Số lượng chó được bố trí điều trị 55

Bảng 3.14 Bố trí thí nghiệm 56

Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó 57

Bảng 4.2 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 61

Bảng 4.3 Cường độ nhiễm các serogroup Leptospira trên chó 64

Bảng 4.4 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo giống chó 65

Bảng 4.5 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 66

Bảng 4.6 Tỷ lệ nhiễm Leptospira theo lứa tuổi chó 67

Bảng 4.7 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 69

Bảng 4.8 Tỷ lệ chó nhiễm Leptospira theo giới tính 70

Bảng 4.9 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 71

Bảng 4.10 Tỷ lệ chó nhiễm Leptospira theo phương thức nuôi 71

Bảng 4.11 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 73

Bảng 4.12 Tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chuột ở một số tỉnh ĐBSCL 74

Bảng 4.13 Tần suất xuất hiện kháng thể kháng các nhóm huyết thanh 76

Bảng 4.14 Cường độ nhiễm các serogroup Leptospira trên chuột 78

Bảng 4.15 Tỷ lệ dương tính các serogroup Leptospira trên chuột và chó 79

Bảng 4.16 Tỷ lệ phát hiện Leptospira trực tiếp từ nước tiểu 81

Bảng 4.17 Tỷ lệ Leptospira phát hiện được theo các địa điểm lấy mẫu 82

Bảng 4.18 Tỷ lệ chó nhiễm Leptospira theo độ tuổi, giới tính 83

Bảng 4.19 Tỷ lệ chó nhiễm Leptospira theo hiệu giá ngưng kết 86

Bảng 4.20 Kết quả định danh loài xoắn khuẩn Leptospira phát hiện 87

Bảng 4.21 Xác định loài xoắn khuẩn Leptospira 89

Bảng 4.22 Các chỉ tiêu sinh lý máu trên chó nhiễm Leptospira 92

Bảng 4.23 Các chỉ tiêu sinh hóa máu trên chó nhiễm Leptospira 94

Bảng 4.24 Các chỉ sinh lý nước tiểu trên chó nhiễm Leptospira 96

Bảng 4.25 Triệu chứng lâm sàng trên chó dương tính với Leptospira 98

Bảng 4.26 Tỷ lệ điều trị khỏi bệnh 100

Bảng 4.27 Các chỉ tiêu sinh lý sinh hóa máu và nước tiểu trước và sau 101

DANH SÁCH HÌNH

Hình Tên hình Trang

Hình 2.1 Hình dạng Leptospira interrogans dưới kính hiển vi 7

Hình 2.2 Leptospira interrogans dưới KHV nền đen (x400) 8

Hình 2.3 Sơ đồ lây truyền Leptospira 12

Hình 2.4 Hoại tử đầu lưỡi với bệnh Leptospira cấp tính 14

Hình 2.5 Vàng niêm mạc mắt ở chó bệnh Leptospira 15

Hình 2.6 Vàng niêm mạc miệng ở chó bệnh Leptospira 15

Hình 2.7 Hiện tượng vàng da ở người bệnh Leptospira 19

Hình 2.8 Đáp ứng kháng thể kháng của Leptospira trong máu 28

Hình 3.1 Các ống môi trường EMJH đang nuôi cấy 50

Hình 3.2 Xoắn khuẩn Leptospira đã phát triển trong môi trường EMJH 50 Hình 4.1 Quan hệ tuyến tính giữa tỷ lệ dương tính Leptospira 80

Hình 4.2 Leptospira soi dưới kính hiển vi nền đen (X40) 84

Hình 4.3 Kết quả điện di sản phẩm PCR trên gel agarose 1,5% 84

Hình 4.4 Cây phả hệ phát sinh loài các serogroup Leptospira 90

Hình 4.5 Xuất huyết da 93

Hình 4.6 Vàng da ở chó bệnh Leptospirosis 95

Hình 4.7 Màu sắc các ống nước tiểu 97

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Bệnh xoắn khuẩn là bệnh truyền nhiễm chung cho nhiều loài gia súc và

người gây ra bởi một số loài xoắn khuẩn gây bệnh (Pathogenic Leptospira

species) Bệnh xảy ra phổ biến khắp thế giới, nhất là những vùng nhiệt đới cókhí hậu nóng ẩm, thuận lợi cho sự tồn tại của xoắn khuẩn ở bên ngoài cơ thể(Evangelista and Coburn, 2010) Xoắn khuẩn gây bệnh tồn tại trong ống thận

và bài thải qua nước tiểu làm vấy nhiễm môi trường (Adler and Moctezuma,2010) và trong tự nhiên chuột cống là nguồn tàng trữ xoắn khuẩn và là nguồn

truyền lây bệnh cho chó, con người và các loài động vật khác (Sykes et al.,

2011)

Ở Việt Nam trong thời gian qua có nhiều nghiên cứu về tình hình nhiễm

Leptospira trên các loài động vật và kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm Leptospira

khá biến động, phụ thuộc vào động vật khảo sát, thời gian và địa điểm khảosát như một số tác giả Vũ Đình Hưng (1995), Nguyễn Thị Ngân (2000), LêHuỳnh Thanh Phương (2001), Hoàng Mạnh Lâm (2002) và Hoàng Kim Loan(2013) đã khảo sát Tuy nhiên nghiên cứu về bệnh này trên chó rất ít, đặc biệt

là khu vực Đồng Bằng Sông Cửu Long chưa có nghiên cứu nào về Leptospira

và bệnh Leptospirosis trên chó.

Chó được xem là loài động vật cảm nhiễm nhất sau bò Leptospira lây

truyền qua tiếp xúc trực tiếp với nước tiểu bị nhiễm bệnh, qua đường sinh dục,qua những vết cắn trầy xước hay truyền gián tiếp thông qua thức ăn hay nước

uống bị nhiễm xoắn khuẩn Xoắn khuẩn Leptospira xuyên qua màng nhầy và

nhân lên nhanh chóng khi vào hệ thống mạch máu, lây lan đến các mô kháclàm ảnh hưởng đến các cơ quan như thận, gan, lách, hệ thống thần kinh, mắt

và đường sinh dục (Sykes et al., 2011) Bệnh do Leptospira gây ra có rất nhiều

triệu chứng lâm sàng phức tạp dễ nhầm lẫn với các bệnh khác như sốt, run,đau cơ, nôn mửa và mất nước nhanh chóng (Levett, 2001) Ở khu vực Đồng

Bằng Sông Cửu Long chưa có nghiên cứu nào về tình hình nhiễm Leptospira

trên chó do đó đề tài nghiên cứu “Khảo sát xoắn khuẩn Leptospira và

Leptospirosis trên chó ở một số tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long” được

thực hiện, để cung cấp thêm những thông tin khoa học về tình hình nhiễmcũng như khả năng gây bệnh của các serogroup này trên chó Những hiểu biết

1.2 Mục tiêu của đề tài

- Khảo sát sự lưu hành của xoắn khuẩn Leptospira trên chó và chuột.

- Nghiên cứu những biến đổi bệnh lý bệnh Leptospirosis trên chó.

- Nghiên cứu biện pháp điều trị bệnh Leptospirosis trên chó.

1.3 Những đóng góp mới của luận án

Đây là công trình nghiên cứu đầu tiên đã phát hiện 2 loài Leptospira

interrogans và Leptospira fainei hiện diện trên chó chưa tiêm phòng Leptospirosis ở một số tỉnh ĐBSCL.

1.4 Ý nghĩa khoa học của luận án

Đây là công trình nghiên cứu đầu tiên về tình hình dịch tễ bệnh

Leptospirosis trên chó, là cơ sở khoa học cho việc xây dựng qui trình phòng và

trị bệnh trên chó, hạn chế bệnh trên người và các loài động vật khác

CHƯƠNG 2TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2 1 Lịch sử phát hiện bệnh Leptospirosis và xoắn khuẩn Leptospira

Leptospirosis là bệnh truyền nhiễm chung giữa nhiều loài động vật và

người

(Zoonosis), do xoắn khuẩn Leptospira thuộc họ Spirochetaceae gây ra.

Năm

1886 lần đầu tiên Adolph Weil đã miêu tả những triệu chứng lâm sàng đặc

trưng của bệnh, trong đó đặc biệt có một số bệnh nhân bị nhiễm Leptospira

dạng cấp tính là vàng da nên bệnh được xếp vào bệnh truyền nhiễm Sau côngtrình nghiên cứu của Adolph Weil, một số nhà nghiên cứu khác đã phát hiện ranhiều ổ dịch có triệu chứng lâm sàng giống như Adolph Weil đã mô tả và

từ đó gọi là Weil’s disease Những năm sau này bệnh lại được phát hiện trêncác loài gia súc và con người ở nhiều nước trên thế giới

Dựa theo tài liệu của Adler (2015), từ những nghiên cứu về lâm sàng vàdịch tễ học, Vasiliep người Nga đã phân biệt được bệnh vàng da do nhiễmkhuẩn với bệnh vàng da do những nguyên nhân khác như viêm gan hay rốiloạn chuyển hóa sắc tố mật Năm 1916, hai nhà nghiên cứu người Nhật là Do

and Inada đã phát hiện được Leptospira gây bệnh cho người ở Nhật Bản Đến năm 1917, Noguchi đã tìm thấy serovar Leptospira trên chuột hoang ở Mỹ có hình thái và đặc tính miễn dịch giống như các serovar Leptospira ở Nhật Bản

và năm 1918 ông tiếp tục mô tả hình thái của serovar Leptospira này và gọi là

Dựa trên sự tương đồng của bộ gene, các xoắn khuẩn thuộc giống

Leptospira spp đã được chia thành 20 loài khác nhau (Nalam et al., 2010),

bao gồm những loài gây bệnh và không gây bệnh (hoại sinh):

Những loài xoắn khuẩn gây bệnh: L interrogans, L kirschneri, L.

borgpetersenii, L santarosai, L noguchii, L weilii, L alexanderi và L alstonii.

Những loài hoại sinh (không gây bệnh): L biflexa, L wolbachii, L.

kmetyi, L meyeri, L vanthielii, L terpstrae và L yanagawae.

Trước năm 1989, chi Leptospira được chia thành hai loài Leptospira

interrogans bao gồm tất cả các chủng gây bệnh và Leptospira biflexa gồm các

chủng hoại sinh (không gây bệnh) Sự phân chia này dựa trên các đặc tính kiểuhình và sự sinh trưởng của chúng như các chủng hoại sinh có khả năng mọcđược ở nhiệt độ 11-13oC và sinh trưởng với sự có mặt của 8-azaguanine (225

μgg/ml) (Sykes et al., 2011).

Một số loài trung gian gây bệnh hoặc hoại sinh: L inadai, L broomii, L.

fainei, L wolffii và L Licerasiae (Levett, 2001; Bharti et al., 2003) Tuy

nhiên, cũng có một số loài lại bao gồm cả các chủng xoắn khuẩn gây bệnh vàkhông gây bệnh Ngày nay hệ thống phân loại mới dựa vào kỹ thuật sinh họcphân tử và khác hẳn với hệ thống phân loại trước đây dựa trên khảo sát huyết

thanh học (Saito et al., 2013).

Các serovar Leptospira gây bệnh được xếp vào các nhóm khác nhau dựa

vào mối quan hệ kháng nguyên, thông qua việc xác định bằng phản ứng ngưngkết hay theo kiểu hấp phụ ngưng kết chéo với kháng nguyên tương đồng(Levett, 2001) Mặc dù không dựa vào nhóm huyết thanh để phân loại

Leptospira nhưng chúng có rất ý nghĩa về mặt dịch tễ học Các nhóm huyết

thanh của L interrogans và một số phân loài phổ biến được thể hiện qua Bảng

2.1

Theo các nhà nghiên cứu huyết thanh học, hiện nay có trên 260 serovargây bệnh được xếp vào 24 serogroup huyết thanh và 60 serovar thuộc nhómhoại sinh (Cerquerira and Picardeau, 2009) Các serovar gây bệnh được phânchia thành các serogroup dựa trên mối quan hệ kháng nguyên được xác địnhbằng phản ứng ngưng kết và tiếp theo được chia thành các serovar theo kiểuhấp thụ ngưng kết

Việc phân loại kiểu hình của Leptospira đã được thay thế bằng kiểu gene, trong đó gene phổ biến bao gồm tất cả các serovar của cả L interrogans

và L biflexa Hiện tại, các serovar gây bệnh còn được tìm thấy trong 10 loài

Leptospira interrogans, L noguchii, L santarosai, L meyeri, L borgpetersenii, L kirschneri, L weilii, L inadai, L fainei và L alexanderi.

Trong đó, có loài một loài và serovar mới được bổ sung L fainei serovar

hurstbridge (Pérolat et al., 1998), Hệ thống phân loại mới dễ bị lẫn lộn bởi vì

nhiều serovar và serogroup gây bệnh cũng như không gây bệnh có thể nằmtrong cùng một loài, ngược lại một serovar hoặc serogroup cũng có thể nằmtrong nhiều loài khác nhau Điều này cho thấy không có sự tương đồng giữa

hệ thống phân loại dựa trên cấu trúc kháng nguyên bề mặt và hệ thống phânloại dựa trên cấu trúc gene Sự nhận dạng và phân loại đến loài trong chi

Leptospira là rất quan trọng, bởi vì chúng có tính gây bệnh trên các loải động

vật khác nhau Việc tái phân loại Leptospira dựa trên nền tảng kiểu gene là

chính xác về mặt danh pháp và cung cấp cơ sở vững chắc cho định loại xoắnkhuẩn này trong tương lai Bên cạnh đó, việc phân loại dựa vào cơ sở phân tửcũng gặp một số khó khăn đối với các nhà nghiên cứu lâm sàng, bởi vì hệthống này không tương hợp rõ ràng với hệ thống serovar (chủng)/serogroups(nhóm huyết thanh) lâu nay đã được sử dụng trong chẩn đoán xác định xoắn

khuẩn Leptospira và trong các nghiên cứu về dịch tễ học (Albert et al., 2009).

Hiện nay một số kỹ thuật sinh học phân tử được ứng dụng để xác định và

mô tả đặc điểm của Leptospira spp đến nay đã xác định được 20 loài

Leptospira spp trong đó có 9 loài Leptospira gây bệnh (Cerqueira

and Picardeau, 2009) Việc phân loại này dựa trên kết quả phân tích phát sinhloài gene 16S rRNA được xem như thử nghiệm sàng lọc ban đầu để xác định

Leptospira trong các mẫu lâm sàng nghi ngờ nhiễm Leptospira (La Scola et al., 2006; Morey et al., 2006).

2.2.2 Cấu trúc hình thái

Leptospira là những vi khuẩn Gram âm, hiếu khí, có hình móc câu, xoắn,

chuyển động của Leptospira rất đa dạng không theo qui luật nào, có thể di chuyển thẳng, xoay tròn, theo hình sóng… Leptospira có kích thước: khoảng

rộng 0,1-0,2 µm; dài 6-20 µm, khoảng cách giữa các vòng xoắn là 0,5 µm(Levett, 2001)

Quan sát dưới kính hiển vi điện tử, Leptospira có hình ống xoắn tròn

xung quanh một trục dọc theo chiều dài thân và uốn cong thành móc ở hai đầu,

bộ phận di động của vi khuẩn gồm một trục ở giữa và thân xoắn như lò xoquanh trục Ngoài cùng có một vỏ mềm co giãn được, chứa nhiều khángnguyên, tiếp theo là màng bao bọc tế bào chất bao gồm 3-5 lớp, ở giữa là nhânkhông có màng ngăn cách với nguyên sinh chất đảm nhận chức năng di

truyền Do có cấu trúc đặc biệt như vậy nên Leptospira vận động rất uyển

chuyển và có khả năng co giãn dễ dàng, chúng có thể chui qua da, niêm mạccủa gia súc hoặc của người khi ngâm nước hoặc có vết trầy xước Khi cho qualọc Seitz với kích thước lổ lọc 0,1-0,45 µm, hầu hết các vi khuẩn đều bị giữ lại

nhưng chỉ có xoắn khuẩn Leptospira có thể chui qua được dễ dàng.

Hình 2.1 Hình dạng Leptospira interrogans dưới kính

hiển vi (KHV) điện tử quét (Levett, 2015)

2.2.3 Đặc tính nuôi cấy xoắn khuẩn Leptospira

Điều kiện nuôi cấy tối ưu để Leptospira sinh trưởng: môi trường đặc

hiệu, hiếu khí bắt buộc, nhiệt độ khoảng 28-300C, pH từ 6,8-7,4 (Bharti et al.,

2003) và thời gian phân chia của mỗi thế hệ kéo dài khoảng 7-10 ngày đối vớicác chủng mới phân lập, do vậy khó phát hiện bằng phương pháp nuôi cấy

thông thường ở phòng thí nghiệm Leptospira có thể sống được trong môi

trường ẩm ướt (đất, bùn, đầm lầy, suối và sông), trong các cơ quan và mô sống

hoặc động vật chết hoặc trong sữa pha loãng (Adler and Moctezuma, 2010).Xoắn khuẩn có thể phát triển trong môi trường Ellinghausen-

McCullough-Johnson-Harris (EMJH), nhưng sự phát triển của Leptospira rất

chậm, có đôi khi kéo dài đến 3 tháng Ở nhiệt độ 28-300C có thể nhận thấyđược sự phát triển của các chủng gây bệnh sau 4-7 ngày nuôi cấy, còn sự pháttriển của các chủng hoại sinh chỉ sau 2-3 ngày ở nhiệt độ 11-130C Do đó cóthể dựa vào khả năng phát triển ở 130C để phân biệt các loài Leptospira hoại sinh hay loài Leptospira gây bệnh (Levett, 2001).

Trong cùng một điều kiện môi trường nuôi cấy những loài hoại sinh sẽphát triển nhanh hơn các loài gây bệnh do chúng thường sống trong môitrường nước đọng hay hòa lẫn trong đất ẩm cho nên khi nuôi cấy phải thườngxuyên kiểm tra, ít nhất mỗi tuần 1 lần dưới kính hiển vi nền đen để có được

kết quả chính xác (Ganoza et al., 2006).

Hình 2.2 Leptospira interrogans dưới KHV nền đen (x400) (Lee et al., 2000)

Trong quá trình nuôi cấy Leptospira, để tránh sự vấy nhiễm của các vi

khuẩn trong giai đoạn đầu nuôi cấy, đặc biệt các mẫu có nguồn gốc từ độngvật bệnh có biểu hiện triệu chứng lâm sàng hoặc từ môi trường, cần bổ sungthêm kháng sinh 5-fluorouracil vào môi trường nuôi cấy, làm hạn chế sự pháttriển của các vi khuẩn vấy nhiễm khác nhưng không làm giảm sự tăng trưởng

của Leptospira (Levett, 2001; Adler and Moctezuma, 2010).

2.2.4 Sức đề kháng của mầm bệnh

Sự tồn tại của Leptospira gây bệnh trong môi trường phụ thuộc vào

nhiều yếu tố như pH hay nhiệt độ môi trường Trong điều kiện phòng thí

nghiệm, Leptospira trong nước ở nhiệt độ phòng vẫn duy trì được trong nhiều tháng ở pH=7,2 đến pH=8,0 Trong nước thải cống rãnh Leptospira có thể sống được trong vài tuần lễ Ở trong đất có tính acid (pH= 6,2) Leptospira serovar australis có thể sống sau 7 tuần và đất ngập nước mưa sống được ít nhất 3 tuần Trong đất ẩm ướt Leptospira có thể tồn tại 180 ngày và nhiều

tháng trong nước mặt và khi đất bị ô nhiễm nước tiểu từ chuột nhiễm

Leptospira, Leptospira sống được khoảng 2 tuần (Levett, 2001).

2.2.5 Tính sinh miễn dịch

Miễn dịch đối với Leptospira là miễn dịch đặc hiệu cho từng nhóm huyết thanh, một số trường hợp cho thấy có miễn dịch chéo giữa L sejroe

và L hardjo Khi mầm bệnh xâm nhập vào cơ thể gia súc, xoắn khuẩn có tác

động lên hệ miễn dịch của cơ thể ký chủ, kích thích cơ thể tạo ra kháng thể.Kháng thể là một globulin miễn dịch có phản ứng đặc hiệu với khángnguyên Globulin miễn dịch đuợc chia làm 5 nhóm IgA, IgG, IgE, IgM, vàIgD, trong đó IgG và IgM là quan trọng nhất Thường thì khi có tác động củakháng nguyên, sau 7 ngày trong cơ thể đã xuất hiện IgM và đạt cao nhất vàongày thứ 10, trong khi IgG xuất hiện sau khi nhiễm mầm bệnh vài tuần và đạtcao nhất vào ngày thứ 20-30 Sau đó hàm lượng kháng thể này giảm dần.Kháng thể IgM không đặc hiệu, có thể ngưng kết với nhiều chủng huyếtthanh, trong khi IgG có đặc tính đặc hiệu cao đối với từng chủng huyếtthanh gây bệnh Việc xuất hiện kháng thể IgM và IgG cho phép ta suy diễn

về các giai đoạn của bệnh Thời gian tồn tại của kháng thể động vật dài hayngắn tùy thuộc từng loại kháng thể và tính chất cùa bệnh Tuy nhiên, do

Leptospira thuờng khu trú ở hệ thống ống lượn của thận, dịch não tủy, dịch

của mắt và trong lòng ống cơ quan sinh dục cho nên tác động của kháng thể

ở những nơi này rất hạn chế Điều này giải thích cho sự tồn tại dai dẳng củamầm bệnh ở con vật bị nhiễm (Krawczyk, 2005)

Việc chủng ngừa Leptospira bằng vaccine có hiệu quả làm giảm tỷ

lệ nhiễm, nhưng không bảo vệ hoàn toàn chống lại sự nhiễm do có nhiềuchủng huyết thanh gây bệnh khác nhau Thú được tiêm vaccine có thể nhiễmmầm bệnh mà không thể hiện triệu chứng lâm sàng, chúng có thể bài thảimầm bệnh ở mức độ thấp và thời gian bài thải ngắn hơn thú không tiêmvaccine Tuy vậy, việc tiêm vaccine cho thú cái trước khi phối giống sẽ bảo vệ

được chúng trong suốt quá trình mang thai, thú non có thể được bảo hộ sau khi

được sinh ra 3-4 tháng Việc phòng bệnh do Leptospira trên chó tuy hiệu quả

không hoàn toàn nhưng có tác dụng làm giảm bớt bệnh xảy ra trên người(Pedro and Boris, 2001)

2.3 Đặc điểm dịch tễ học

2.3.1 Nguồn bệnh

Những nghiên cứu về dịch tễ học đã xác định gia súc mắc bệnh

Leptospirosis là nơi chứa xoắn khuẩn và thải xoắn khuẩn ra ngoài qua nước

tiểu và từ đây sẽ lây lan mầm bệnh cho con người Trong tự nhiên loài vậtmang xoắn khuẩn chủ yếu là loài gặm nhấm, chuột là loài vật có mặt khắp mọinơi và có tỷ lệ nhiễm xoắn khuẩn rất cao và thay đổi tùy theo từng nước, theotập quán chăn nuôi và tùy thuộc vào điều kiện vị trí địa lý Chuột chứa xoắn

khuẩn với tỷ lệ cao là chuột cống (Rattus norvegicus), kế đến là chuột nhà (Rattus flavipectus), chuột đồng (Rattus argentiventer) và chuột nhắt (Mus

musculus) (Levett, 2001).

Tính chất dịch tễ học của Leptospirosis rất đa dạng và phong phú, gia súc

và người có thể nhiễm bất kỳ một serovar gây bệnh, chính vì vậy Leptospira

có thể dễ dàng lây truyền từ gia sức này sang gia súc khácvà mức độ bệnh phụthuộc vào nhiều yếu tố khác nhau như cường độ nhiễm, tỷ lệ nhiễm và sức đềkháng của con vật Mỗi vùng hay mỗi quốc gia khác nhau có một số serovar

Leptospira gây bệnh khác nhau như chó thường mang Leptospira serovar canicola, chuột mang Leptospira serovar icterohaemorrhagiae và Leptospira

serovar copenhageni, heo thường mang Leptospira serovar pomona

Leptospira serovar tarassovi và có thể truyền lây Leptospira lẫn nhau (Bharti

et al., 2003.)

Trong tự nhiên Leptospira gây bệnh chủ yếu cho bò, chó, ngựa, cừu, dê, heo, mèo và các loài hoang dã khác như báo, chồn, khỉ,… Leptospira có thể gây nhiễm cho người do lây nhiễm từ sức vật (Mayer-Scholl et al., 2013) Tuy

nhiên, mức độ biểu hiện bệnh có thể khác nhau giữa các loài động vật và chuột

là ổ chứa serovar icterohaemorrhagiae trong khi đó chó là ổ chứa serovar

canicola (Klaasen et al., 2003; Miraglia et al., 2012).

Thời gian mang khuẩn và mức độ bài thải xoắn khuẩn qua nước tiểu thay

đổi tùy theo loài mang xoắn khuẩn và serovar Leptospira, có thể từ vài tháng đến 1 năm hoặc nhiều hơn như chó khi bị nhiễm bệnh serovar canicola có thể thải vi khuẩn qua nước tiểu trong nhiều tháng (Paul et al., 2009).

Ổ chứa mầm bệnh không thường xuyên chủ yếu là gia súc, nhưng không

phải bất cứ con vật nào cũng mang Leptospira Khi gia súc mang Leptospira,

nó không mang suốt đời như loài gặm nhấm nên mầm bệnh thải ra ngoài qua

nước tiểu lúc có lúc không Khi cơ thể gia súc nhiễm Leptospira sẽ thải xoắn

khuẩn ra bên ngoài qua nước tiểu, làm ô nhiễm môi trường xung quanh và

nguồn nước Khi Leptospira sống trong nước, đặc biệt là nơi nước đọng chúng

sống và giữ nguyên đặc tính gây bệnh Khi gặp điều kiện thuận lợi như độ ẩmthích hợp, pH trung tính hoặc kiềm mầm bệnh sẽ tồn tại lâu hơn và bệnh

Leptospira xảy ra trên người thường có tính chất nghề nghiệp, những công

nhân làm vệ sinh cống rãnh, người chăn nuôi, những người làm công tác địachất, lâm nghiệp,…là những người thường mắc bệnh này (Levett, 2001)

2.3.2 Đường xâm nhập của mầm bệnh

Leptospira xâm nhập trực tiếp vào cơ thể qua vết cắt hoặc vết trầy xước

trên da hoặc qua da còn nguyên vẹn khi ngâm nhiều giờ trong nước hoặc quaniêm mạc mắt, mũi, họng hay bộ phận sinh dục (Levett, 2001) Bệnh sẽ khởiphát từ 1 đến 4 tuần sau khi tiếp xúc và có thể kéo dài nhiều tháng Mức độ

biểu hiện lâm sàng của bệnh phụ thuộc vào loại serovar Leptospira nhiễm

cũng như tình trạng sức khỏe, miễn dịch và độ tuổi của vật nhiễm bệnh (Plankand Dean, 2000)

Leptospira xâm nhập vào gia súc khỏe thông qua đường giao phối; nếu

con đực (hoặc cái) nhiễm Leptospira sẽ truyền trực tiếp mầm bệnh qua giao phối Gia súc mẹ bị nhiễm Leptospira sẽ truyền cho con qua nhau thai, qua

sữa đầu làm cho con sơ sinh mắc bệnh (Nguyễn Thị Ngân, 2000)

Có rất nhiều loài động vật có vú là loài mang xoắn khuẩn Leptospira và

bài thải mầm bệnh liên tục ra môi trường bên ngoài thông qua nước tiểu trongnhiều tháng hoặc nhiều năm thậm chí cả đời Con người là vật chủ ngẫu nhiên

của Leptospira spp và khu trú ở ống thận của con người, có thể thải

Leptospira ra môi trường qua nước tiểu trong nhiều tuần hay nhiều tháng

(Albert et al., 2009) Động vật hoặc người bị nhiễm có thể do tiếp xúc trực

tiếp với nguồn bệnh như mô động vật, chất bài tiết cơ thể (đặc biệt là nướctiểu) hay tiếp xúc gián tiếp như đất hoặc nước bị ô nhiễm nước tiểu của động

vật mang xoắn khuẩn Leptospira (Musso and Scola, 2013) Bên cạnh đó, chuột là loài gặm nhấm thường nhiễm các serovar icterohaemorrhagiae và

ballum; bò sữa thường nhiễm serovar hardjo, pomona và gryppotyphosa; heo

có thể mang mầm bệnh pomona, tarassovi, hoặc bratislava; cừu có thể chứa

hardjo và pomona và chó có thể canicola (Bolin, 2000).

Nhiễm trùng Leptospira có thể xảy ra trên người thông qua mức độ tiếp

xúc nghề nghiệp, các khu giải trí hay những yếu tố phơi nhiễm, trong đó nghềnghiệp là yếu tố nguy cơ đáng kể cho con người Ví dụ như những nghề tiếpxúc trực tiếp với động vật nhiễm bệnh: nông dân, bác sĩ thú y, công nhân lò

mỏ hay tiếp xúc gián tiếp là những công nhân ống rãnh, thợ mỏ hay người

sống ở những khu vực có tình trạng vệ sinh kém có nguy cơ nhiễm Leptospira

hơn (Levett, 2001)

Bên cạnh đó, một rũi ro có thể xảy ra ở các khu giải trí ngoài trời như cácmôn thể thao dưới nước: bơi lội, chèo thuyền, câu cá, đặc biệt là các vùng

nhiệt đới có bệnh Leptospirosis đang lưu hành (Levett, 2001; Lau et al., 2010).

Hình 2.3 Sơ đồ lây truyền Leptospira ((https:// w w w m i c r ob i o l o gy b y t e s w o r d p r e s s c o m)

2.3.3 Đặc tính gây bệnh của xoắn khuẩn Leptospira

Sau khi Leptospira xâm nhập vào cơ thể, 12 giờ có thể phát hiện một lượng lớn Leptospira trong gan, xoắn khuẩn tập trung ở đây cho đến lúc gia súc có triệu chứng sốt Ngoài ra còn phát hiện Leptospira ở tuyến thượng thận

và cơ tim Một, hai ngày sau khi cảm nhiễm con vật xuất hiện triệu chứng sốt

cao do nhiễm trùng huyết, Leptospira có nhiều trong máu, dịch não tủy với số

lượng lớn và có thể kéo dài đến 1 tuần Sau khi nhiễm từ 5 đến 10 ngày, cơ thể

động vật bắt đầu sản sinh kháng thể (Andre´-Fontaine, 2006) và hàm lượng kháng thể trong máu cao nhất sau 3 tuần (Levett, 2001)

Triệu chứng của bệnh còn phụ thuộc vào độc lực của serovar gây nhiễm,

số lượng xoắn khuẩn, tuổi tác, sức khỏe và khả năng miễn dịch của con vật Ởđộng vật, các dấu hiệu lâm sàng thường nhẹ hoặc không có biểu hiện triệuchứng Tuy nhiên, một số trường hợp nhiễm trùng có thể xuất hiện các triệuchứng lâm sàng từ nhẹ đến nặng, đặc biệt ở động vật non bệnh nặng hơn so

với các động vật lớn tuổi Một số triệu chứng lâm sàng của bệnh Leptospirosis

thân nhiệt cao, lơ mơ, chán ăn, lông xù, viêm kết mạc mắt và đôi khi xuất hiệntiêu chảy Những trường hợp bệnh nặng có thể thấy dấu hiệu xuất huyết da,hemoglobin niệu và vàng da, sau khi khỏi bệnh con vật có thể sụt cân và suy

thận mãn (Sykes et al., 2011).

Các biểu hiện lâm sàng về bệnh Leptospirosis ở người có từ không triệu

chứng đến tử vong, với nhiều triệu chứng lâm sàng khác nhau (Levett, 2001).Các triệu chứng chung khởi phát được ghi nhận bao gồm sốt, nhức đầu, đau

cơ, viêm kết mạc mắt, buồn nôn và phát ban nhẹ trong thời gian ngắn Nhữngtrường hợp bệnh nặng dẫn đến các biến chứng như suy thận, suy gan, xuất

huyết phổi, viêm màng não và viêm cơ tim (Bharti et al., 2003) Phần lớn các

trường hợp thường có các triệu chứng rất nhẹ và không phải điều trị (Plankand Dean, 2000), đôi khi có triệu chứng lâm sàng giống triệu chứng của những

bệnh khác như sốt phát ban, bệnh cúm, nhiễm khuẩn Hantavirus (Levett,

2001) Do đó, bệnh thường bị chẩn đoán nhầm với các bệnh khác, gây khó

khăn trong việc xác định bệnh do Leptospira gây ra.

2.4 Đặc điểm lâm sàng của bệnh Leptospirosis

Ở các loài gia súc khác nhau giai đoạn nung bệnh sẽ khác nhau, thườnggiao động từ 2 đến 20 ngày Triệu chứng bệnh cũng rất đa dạng và đặc trưngcho mỗi loài gia súc, điển hình ở thể bệnh cấp tính

2.4.1 Bệnh Leptospirosis trên chó

Bệnh Leptospirosis trên chó có nhiều mức độ bệnh nghiêm trọng khác

nhau, tùy thuộc vào chủng gây bệnh, vị trí địa lý và đáp ứng miễn dịch của vật

chủ (Sykes et al., 2011) Thời gian nung bệnh từ 4-12 ngày, nhưng cũng có

thể ngắn khoảng 2 ngày (Andre´-Fontaine, 2013) Triệu chứng chung gồmsốt, nôn mửa, lưng cong, bỏ ăn, lười vận động, đầu lưỡi bị loét và hoại tử(hình 2.4) (Francey and Schweighauser, 2012)

Bệnh xảy ra trên chó ở mọi lứa tuổi, rất khó nhận biết triệu chứng banđầu vì không có các triệu chứng đặc trưng, rất dễ nhầm lẫn với dấu hiệucủa nhiều bệnh khác Thậm chí vài trường hợp, lúc đầu chó cũng không hề

có triệu chứng bệnh (Levett, 2001)

Thể cấp tính: hiện tượng bại huyết phát triển nhanh sau vài giờ nhiễm,

cơn sốt cao 40-41°C và suy nhược nặng nề Bệnh Leptospirosis trên chó có hai

dạng vàng da và không vàng da, hình thức vàng da được xem là nghiêm trọnghơn và bệnh tiến triển nhanh hơn (Levett, 2001)

Thể không vàng da: bệnh xảy ra trên chó trưởng thành Vật bệnh có biểuhiện xuất huyết trầm trọng, viêm kết mạc mắt với những điểm xuất huyết ởniêm mạc và da, ói ra máu và phân sậm màu, do niêm mạc bị lở nên thú thở

ra mùi hôi, thú bị mất nước rất nhanh và chết trong 2-4 ngày khi thân nhiệtgiảm thấp (36-36,5°C)

Hình 2.4 Hoại tử đầu lưỡi với bệnh Leptospira cấp tính

(Francey and Schweighauser, 2012)

Thể hoàng đản: thường thấy ở chó con, một số trường hợp bệnh pháttriển bất thình lình, phát triển từ từ cho đến khi vàng da, thân nhiệt lúc đầu39,5°C-40°C, khi xuất hiện vàng da thì thân nhiệt giảm còn 36-36,5oC và mức

độ vàng da thường tương ứng với mức độ nghiêm trọng của hoại tử gan, thôngthường chó nhỏ hơn sáu tháng tuổi dễ bị suy gan hơn chó lớn (Langston andHeuter, 2003) Nếu chó bệnh có biểu hiện viêm kết mạc mắt, hoàng đản(vàng da và niêm mạc), nước tiểu sậm màu, kém ăn, ói mửa, khó thở, hơi thởhôi và tiêu chảy thì chó có thể chết trong khoảng từ 5 đến 8 ngày mắc bệnh

Thể bán cấp tính và mãn tính

Thể này tương ứng với sự phát triển hội chứng sinh urê huyết hậu quảcủa viêm thận mà một trong những biểu hiện là chứng ti ể u nhiều, khátnước rất nhiều cùng với ói mửa và tiêu chảy Bệnh ở giai đoạn này sẽ gây ranhững biến chứng về thận và gan, và sau đó xoắn khuẩn khu trú trên bề mặt

của ống thận và thải Leptospira ra môi trường qua nước tiểu, con người hoặc các động vật khác có thể nhiễm Leptospira (Medeiros et al., 2010).

Hình 2.5 Vàng niêm mạc mắt ở chó bệnh Leptospira

(Francey and Schweighauser, 2012)

Hình 2.6 Vàng niêm mạc miệng ở chó bệnh Leptospira

(Francey and Schweighauser, 2012)

Cơ chế sinh bệnh

Sau khi xâm nhập vào cơ thể vật chủ qua nước tiểu hoặc gián tiếp từ

nước, đất bị ô nhiễm, xoắn khuẩn Leptospira gây bệnh có thể lẫn tránh được khả năng phòng vệ của cơ thể vật chủ (Fraga et al., 2011), Leptospira có thể

hiện diện trong máu đến 10 ngày sau khi nhiễm bệnh và phát triển nhanhchóng, hướng vào các cơ quan và mô và có thể tránh được phản ứng miễn dịch

của vật chủ (Albert et al., 2009) Sau giai đoạn ở trong máu, Leptospira đi

xuống ống thận và được bài thải qua nước tiểu, thời gian và cường độ bài thảikhác nhau ở mỗi chó và các serovar lây nhiễm Nếu chó nhiễm serovar

canicola thường thải xoắn khuẩn trong nước tiểu kéo dài cho đến hai năm và

nhiễm serovar khác thì thời gian ngắn hơn (Goldstein et al., 2006) Khi vào máu Leptospira sản xuất nội độc tố lipopolysaccharide kích thích sự kết dính

của bạch cầu trung tính và kích hoạt tiểu cầu, những độc tố này gây viêmmạch và tổn thương nội mô và kết quả làm tổn thương mạch, gây phù, xuấthuyết và rối loạn đông máu và gây suy thận Khi mô thận sưng sẽ làm giảm sựlưu thông của máu tại thận, giảm khả năng lọc của cầu thận, thiếu oxy huyết

và dẫn đến suy thận cấp (Langston and Heuter, 2003)

Các biểu hiện lâm sàng của chó nhiễm xoắn khuẩn Leptospira

Nhiễm trùng Leptospira không phải lúc nào cũng gây ra những dấu hiệu

lâm sàng Nếu dấu hiệu lâm sàng này phát triển thành bệnh thì mức độ bệnh sẽthay đổi và mức độ bệnh thay đổi tùy thuộc vào một số yếu tố như tuổi, phảnứng miễn dịch của vật chủ, các yếu tố môi trường và tính độc hại của cácserovar lây nhiễm Thông thường thời gian ủ bệnh khoảng từ 5 đến 15 ngày

Trong giai đoạn cấp tính Leptospira hiện diện trong máu và có thể làm cho

chó chết đột ngột với các triệu chứng viêm màng phổi cấp tính như sốt, run,yếu cơ, nôn mửa, mất nước (Langston and Heuter, 2003)

Dấu hiệu lâm sàng của bệnh Leptospirosis trên chó không đặc trưng một

số chó có biểu hiện bệnh nhẹ và tự qua khỏi, một số chó phát triển bệnh nặnghơn và tử vong do suy thận cấp (Levett, 2001) Khi chó bị suy thận cấp nhữngtriệu chứng có thể xảy ra nôn mửa, tiêu chảy, mất nước, lừ đừ, đa niệu hay

thiểu niệu và những dấu hiệu lâm sàng có thể nghi ngờ bệnh Leptospirosis gây

suy gan, vàng da, viêm kết mạc mắt, viêm màng bồ đào, thở nhanh hoặc khó

thở do hội chứng suy hô hấp cấp tính hoặc hội chứng xuất huyết phổi (Kohn et

al., 2010) Đôi khi có thể xảy ra máu khó đông do liên quan đến gan hoặc

viêm mạch máu ngoại biên và tràn dịch màng phổi, có thể do máu ứ lại trong

gan và gây hoại tử gan và cuối cùng phát triển thành viêm gan mãn tính Một

số chó có thể xảy ra ho, khó thở và viêm kết mạc mắt và chứng đa niệu, thiểuniệu hay khát nước nhiều, nước tiểu vàng sẫm có khi có máu do sự suy giảm

chức năng thận, suy gan (Claus et al., 2008) Phần lớn các trường hợp bệnh

Leptospirosis xảy ra trên chó ở mức độ nhẹ với các dấu hiệu như sốt, tiêu chảy

và nôn mửa giống như triệu chứng chung của một số bệnh nhiễm trùng khácnên thường ít được chú ý đến bệnh (Levett, 2001)

Những yếu tố rủi ro có liên quan đến chó nhiễm Leptospirosis: sau khi

Leptospira xâm nhiễm vào máu rồi khu trú ở ống thận và thải ra môi trường

ngoài qua nước tiểu Động vật nhiễm bệnh là do tiếp xúc trực tiếp với nước

tiểu bị ô nhiễm qua niêm mạc da bị trầy xước (Albert et al., 2009) Tỷ lệ chó mắc bệnh Leptospirosis cao nhất là chó thả rong, chó sống gần các khu vực nước thải sẽ có nguy cơ mắc bệnh Leptospirosis cao hơn và loài gặm nhấm cũng có thể lây nhiễm cho những chó này (Meeyam et al., 2006), những chó

nhỏ tuổi ít có cơ hội tiếp xúc với môi trường bên ngoài hơn nên nguy cơ mắcbệnh ít hơn và tỷ lệ mắc bệnh không phụ thuộc vào độ tuổi hay giống chó

(Adler et al., 2002).

Những serovar thường gây bệnh Leptospirosis ở chó là L canicola và L.

icterohaemorrhagiae có ảnh hưởng lớn đến sức khỏe cộng đồng đang diễn ra

ở các nước đang phát triển và lây nhiễm cho con người trên toàn thế giới

(Brod et al., 2005; Maciel et al., 2008) Ngoài ra, trên chó còn nhiễm một số serovar L autumnalis (Saravanan et al., 1999), serovar L pomona (Sonrier et

al., 2001), serovar L gryppotyphosa (Greenlee et al., 2004), serovar L.

bratislava (Greenlee et al., 2005).

Những bất thường về lâm sàng ở chó bệnh Leptospirosis: viêm thận kẽ

cấp tính và rối loạn chức năng ống thận, có thể gây viêm gan và hoại tử tế bào

gan (Albert et al., 2009) Xét nghiệm máu phát hiện những bất thường như

tăng bạch cầu trung tính, giảm tiểu cầu (chiếm 58%/tổng số chó nhiễm), tăngnồng độ ure huyết thanh và creatinine (chiếm 80-90%/tổng số chó nhiễm),tăng hoạt tính các enzym gan AST, ALT huyết thanh và nồng độ bilirubin

tổng số (Mastrorilli et al., 2007) Xét nghiệm nước tiểu có thể phát hiện

glucose niệu, protein niệu, bilirubin niệu và hồng cầu xuất hiện trong nước

tiểu (Goldstein et al., 2006).

2.4.2 Bệnh Leptospirosis trên người

Bệnh do Leptospira gây ra ở người nguy hiểm nhất là do các chủng huyết thanh L icterohaemorrhagiae và L copenhageni nhưng cũng có chủng huyết thanh khác gây bệnh nặng như L gryppotyphosa và L p yrogenes có

thể gây tử vong (Vũ Đình Hưng, 1995)

Thời gian ủ bệnh ở người từ 3 đến 21 ngày (thường từ 3-14 ngày) Bệnhxảy ra với các triệu chứng rất đa dạng, tùy thuộc vào tuổi, sức đề kháng của

cơ thể, chủng vi khuẩn cũng như số lượng vi khuẩn xâm nhập Người bệnhthường có biểu hiện theo hai giai đoạn:

Giai đoạn 1: sốt đột ngột (>39oC), kéo dài trong vài ba ngày; sau đó cócác triệu chứng giống như bị cúm Người bệnh mệt mỏi, đau đầu (>90%trường hợp), mắt có màu đỏ, đau cơ (đặc biệt cơ vùng lưng và bắp chân), buồnnôn, da nổi mần đỏ (30% trường hợp) giống như sốt xuất huyết (Zaki andShanbag, 2010) Người bệnh bị rối loạn tâm lý: chán nản, mệt mỏi hoặc trởnên hung hãn, dễ bị kích thích, mắc chứng ảo giác, và bệnh kéo dài trong 3-5ngày, người bệnh có thể dần dần hồi phục Trong giai đoạn này xoắn khuẩnnhân lên trong máu nên có thể sử dụng các xét nghiệm để phát hiện

Giai đoạn 2: ở các trường hợp nhẹ, giai đoạn này không biểu hiện hoặc

kéo dài trong một thời gian ngắn rồi qua khỏi; ở một số trường hợp nặng, bệnhtiến triển rất nhanh, người bệnh bị sốt trở lại, đau vùng bụng và đau ngực, rốiloạn hệ tiết niệu và rối loạn tâm lý; có các triệu chứng của viêm màng não nhưcứng cổ, nôn mửa; đau họng, ho khan và ho ra máu Nếu điều trị có thể khỏisau vài tuần; ở trường hợp nặng, các cơ quan bị tổn thương và xuất huyết vàtrong giai đoạn này xoắn khuẩn hiện diện trong nước tiểu nên có thể sử dụng

kỹ thuật sinh học phân tử để xét nghiệm (Chu et al., 1998).

Hội chứng Weil: là bệnh có biểu hiện lâm sàng nặng nhất của bệnh

nhiễm Leptospira, có thể xảy ra sau giai đoạn cấp của bệnh đặc trưng bởi tổn

thương gan và thận Nhiều trường hợp nặng bệnh tiến triển rất nhanh, sốt caotrên 40°C và khởi phát nhanh các biểu hiện suy gan và vàng da, suy thận, viêmphổi xuất huyết, loạn nhịp tim hay trụy tim mạch Tỷ lệ chết ở những người

bệnh nặng khoảng 5-40% và một số huyết thanh thuộc serogroup L.

icterohaemorrhagiae liên quan đến vàng da, tăng bilirubin và suy thận và gây

bệnh nặng trên người (Katz et al., 2001).

Hình 2.7 Hiện tượng vàng da ở người bệnh Leptospira (Adler, 2015)

2.5 Tình hình nghiên cứu Leptospirosis trên thế giới

Tại Hoa Kỳ, số ca bệnh Leptospirosis trên chó đã tăng lên từ những năm

1990, chủ yếu là serovar gryppotyphosa Đến năm 2002, serovar gây bệnh chủ yếu là serovar gryppotyphosa và pomona Năm 2003 là serovar bratislava và

pomona Hiện nay, vaccine ở Hoa Kỳ phòng Leptospirosis chứa 4 serovar là

L canicola, L gryppotyphosa, L icterohemorrhagiae và L pomona

(Greenlee, 2003; Ward et al., 2004).

Trong năm 2007 và 2008, Barmettler et al (2011) thực hiện cuộc khảo

sát huyết thanh học cắt ngang đối với đội ngũ nhân viên thú y và chủ nuôi chó

có tiếp xúc với chó bệnh Leptospirosis cấp tính, tổng số người tham gia trong

khảo sát gồm bác sĩ thú y, nhân viên kỹ thuật, nhân viên hành chính và chủ

nuôi chó có tiếp xúc với chó bệnh Leptospirosis vào bệnh xá thú y Đại học Bern Vetsuisse (Thụy Sĩ) Kết quả chó bị nhiễm bệnh Leptospirosis có huyết thanh dương tính với kháng thể kháng Leptospira serovar bratislava, australis,

gryppotyphosa và tất cả nhân viên và chủ nuôi chó đều âm tính với kháng thể

kháng Leptospira.

Bệnh Leptospirosis trên chó có thể truyền lây cho con người và tỷ lệ

bệnh sẽ khác nhau tùy theo vị trí địa lý Ở các nước đang phát triển, chó nuôi

thả rong và loài gặm nhấm (chuột) là yếu tố nguy cơ lớn nhất (Brod et al.,

2005; Strugnell et al., 2009) Ở các nước phát triển, hầu hết các trường hợp

bệnh Leptospirosis xảy ra trên người có liên quan đến các hoạt động giải trí

(Maciel et al., 2008; Reis et al., 2008) Ngoài ra, bệnh có liên quan đến tính

chất nghề nghiệp, khoảng 10% bệnh Leptospirosis xảy ra trên người là do tiếp

xúc với vật nuôi (Benschop et al., 2009).

Năm 2011, tại bang Minas của Brazil có xảy ra một trận lụt, đã làm gia

tăng tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó, đặc biệt là các khu vực bãi rác có chứa nhiều rác thải làm lây làm mầm bệnh rất nhanh chủ yếu các serogroup L.

autumnalis, L tarassovi và L canicola Tác giả cho rằng tỷ lệ dương tính với

xoắn khuẩn Leptospira trên chó ở khu vực này cao nhưng không biểu hiện triệu chứng lâm sàng (Castro et al., 2011) Ngoài ra, những loài động vật được nuôi trong cùng một khu vực cũng có thể lây truyền Leptospira spp cho nhau (Jorge et al., 2011).

Việc nuôi chó bằng hình thức thả rong cũng là yếu tố nguy cơ lây truyền

Leptospira cho con người và làm ô nhiễm môi trường sống hơn những chó

nuôi nhốt (Fonzar and Langoni, 2012; Márcia et al., 2013; Martins và Lilenbaum, 2013) và những chó khỏe mạnh chưa tiêm phòng Leptospirosis cũng có thể nhiễm xoắn khuẩn Leptospira với các serogroups phổ biến L.

canicola và L icterohaemorrhagiae (Lavinsky et al., 2012) Ở Tây Ban Nha,

Tuemmers et al (2013) và ở Mexico (Blum et al., 2013) chó nuôi thả rong có

tỷ lệ nhiễm Leptospira cao hơn chó nuôi nhốt với hai serogroup phổ biến L.

canicola và L icterohaemorrhagiae Những chó có biểu hiện nghi ngờ nhiễm

xoắn khuẩn Leptospira sẽ có tỷ lệ nhiễm Leptospira cao hơn những chó nuôi thả rong khi chưa thể hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh Leptospirosis (Suepaul et al., 2014; Ayral et al., 2014).

Ngoài phương pháp khảo sát huyết thanh học để phát hiện kháng thể

kháng Leptospira còn có phương pháp nuôi cấy và phát hiện xoắn khuẩn

Leptospira bằng kỹ thuật sinh học phân tử Julio et al (2004) thu thập 14 mẫu

nước tiểu chó tại phòng khám thú y của Brazil và quan sát dưới kính hiển vi tụ

quang nền đen có sự hiện diện xoắn khuẩn Leptospira trong nước tiểu, sau đó

các mẫu nước tiểu này được nuôi cấy trong môi trường EMJH và kết quả phát

hiện được 11 mẫu có xoắn khuẩn Leptospira phát triển, chiếm tỷ lệ 78,57% Một nghiên cứu khác ở Brazil, Oliveira et al (2012) đã khảo sát 253 chó bằng

kỹ thuật PCR để phát hiện xoắn khuẩn Leptospira hiện diện trong nước tiểu tại

3 địa điểm: bệnh viện thú y, sở thú và chó nuôi trong khu phố có người bị

bệnh Leptospirosis Kết quả khảo sát cho thấy trong nước tiểu chó có sự hiện

L canicola, L icterohaemorrhagiae và L copenhageni, hay khảo sát của

nước tiểu chó

Để so sánh sự khác nhau về tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó giữa khu vực thành thị và khu vực nông thôn, Dhliwayo et al (2012) đã khảo sát 250 mẫu

huyết thanh chó và kết quả xét nghiệm cho thấy những chó sống ở khu vực

thành thị có tỷ lệ nhiễm Leptospira cao hơn chó sống ở khu vực nông thôn,

tuy nhiên tỷ lệ nhiễm này không có sự khác biệt theo giới tính Khi xét nghiệmcác chỉ tiêu sinh lý sinh hóa máu và nước tiểu cho thấy những chó dương tính

với Leptospira và có xuất hiện triệu chứng bệnh Leptospirosis đều suy gan và

thận, giảm tiểu cầu, rối loạn đông máu, protein niệu hay glucose niệu

(Tangeman and Littman, 2013) Ở Chile, Thomé et al (2014) và Maud et al.

(2015) khảo sát chó nuôi ở các khu vực khác nhau và kết quả chó nuôi ở thành

thị có tỷ lệ nhiễm Leptospira cao nhất kế đến là chó nuôi khu vực nông thôn

và chó nuôi trang trại, trong đó chủ yếu là nhóm huyết thanh L interrogans (serovar icterohaemorrhagiae và copenhageni), L pomona và L.

gryppotyphosa Như vậy chó ở thành thị có tỷ lệ nhiễm xoắn khuẩn cao hơn so

với chó nuôi ở khu vực nông thôn có thể là do mật độ nuôi chó cao hơn, nhiềuloài động vật gặm nhấm hơn, làm tăng nguy cơ tiếp xúc giữa chó với các loàigặm nhấm này Hơn nữa, những chó sống vùng ven đô thị, nơi các điều kiện

vệ sinh kém, hỗn hợp rác thải sinh học, hệ thống cống rãnh và gần gũi với cácloài động vật khác tạo thành một quần thể đặc biệt có nguy cơ lây truyền bệnh

Leptospirosis cho con người.

Bên cạnh việc khảo sát tỷ lệ dương tính xoắn khuẩn Leptospira trên chó, một số tác giả còn khảo sát đồng thời tỷ lệ nhiễm xoắn khuẩn Leptospira trên

loài gặm nhấm (chuột) để biết được vai trò của chuột đối với sự lưu hành của

xoắn khuẩn Leptospira trên chó Trong tất cả các loài gặm nhấm thì chuột là loài mang xoắn khuẩn Leptospira với tỷ lệ rất cao, đặc biệt là chuột cống như

khảo sát Claudia e t al (2013) có 20,3% mẫu huyết thanh chuột dương tính với Leptospira hay khảo sát của Roqueplo et al (2013) có 100%, Desvars et al.

(2013) có 80% chuột có kháng thể kháng Leptospira, với các serogroups chủ yếu là L icterohaemorrhagiae, L australis và L canicola.

Năm 2010, Roach et al đã khảo sát tỷ lệ nhiễm Leptospira của những

chó sống chủ yếu ở các vùng ven biển của Nam Phi, và serovar xuất hiện nhất

là canicola và pyrogenes Hiện nay các loại vaccine ở Nam Phi chứa serovar

canicola, icterohaemorrhagiae, pomona và gryppotyphosa Tuy nhiên, sự hiện

diện của serovar pyrogenes trong vài con chó, có thể mở cuộc điều tra rộng hơn để có thể đưa serovar pyrogenes vào trong vaccine phòng bệnh

Leptospirosis cho chó ở Nam Phi Theo khảo sát của Benkirane et al (2014),

ở khu vực Rabat-Temara, Sidi Kacem và Oulmes, nhóm huyết thanh phổ biến

nhất trên chó là australis, ballum và canicola.

Để biết được sự lưu hành Leptospira có khác nhau giữa các giống chó và

độ tuổi hay không, tác giả Harland et al (2013) đã khảo sát tỷ lệ nhiễm

Leptospira trên chó ở phía Bắc và phía Nam của New Zealand và tác giả

Anabel et al (2013) khảo sát ở Mexico cho thấy không có sự khác biệt về tỷ lệ nhiễm Leptospira giữa các giống chó, và tuổi nhiễm Leptospira cao nhất từ 6

đến 10 năm tuổi, kế đến từ 1 đến 5 năm tuổi và thấp nhất là nhóm chó < 1 năm

tuổi nhưng khác biệt không ý nghĩa thống kê (Mayer-Scholl et al., 2013).

Ở Nhật, Koizumi et al (2013) thực hiện cuộc khảo sát 283 mẫu huyết thanh chó nghi ngờ bệnh Leptospirosis được thu thập từ 2007 đến tháng 3 năm

2011, kết quả chó cái nhiễm Leptospira cao hơn chó đực với nhóm huyết thanh chủ yếu là hebdomadis, tiếp theo là australis và autumnalis Ngày xưa nhóm huyết thanh L canicola và L icterohaemorrhagiae được xem là serovar gây bệnh chủ yếu trên chó, nhưng ngày nay L hebdomadis đã trở thành

serovar chủ yếu gây tử vong cao trên chó ở Nhật Bản

Tình hình nhiễm Leptospira trên người: nghiên cứu bệnh Leptospirosis trên người của Laras et al (2002), ở các thành phố thuộc khu vực Đông Nam

Á, bao gồm Indonesia, Lào, Irian, Campuchia và Việt Nam Chủng huyết thanh chiếm ưu thế là L hurstbridge, L bataviae và L icterohaemorrhagiae Sau

đó năm 2003, Karande et al đã xác định trẻ lớn hơn 5 năm tuổi ở Mumbai có

tỷ lệ nhiễm Leptospira cao hơn trẻ từ 1 đến 5 năm tuổi.

2.6 Tình hình nghiên cứu Leptospirosis trên gia súc và người ở Việt

Nam

Ở Việt Nam, năm 1934 Vaucel là người đầu tiên phát hiện bệnh

Leptospirosis với triệu chứng của bệnh Weil’s và đến năm 1937 ông đã phát

hiện được mầm bệnh từ nhiều ổ dịch được phát hiện ở Hà Nội, Hải Phòng,Phú Thọ và Tuyên Quang Đến năm 1953, Viện Pasteur Sài Gòn xét nghiệm

và thu được kết quả 30/30 mẫu huyết thanh trâu dương tính với các serovar L.

mitis, L pomona, L canicola, 29/39 mẫu huyết thanh chó dương tính chủ yếu

với L bataviae, L canicol và L pomona Đến năm 1965, Đào Trọng Đạt và

ctv tỷ lệ nhiễm Leptospira trên chó ở một số địa phương phía Bắc là 25%

(trích Lê Huỳnh Thanh Phương, 2001)

Lê Thanh Hải (1988), nghiên cứu về tình hình nhiễm Leptospira ở đàn

chó nghiệp vụ trong các trại giam ở Hải Phòng, kết quả cho thấy đàn chó ở trại

V21 có tỷ lệ dương tính với Leptospira cao hơn trại T24 và chó nghiệp vụ của

công an Hải Phòng cũng dương tính với Leptospira và chủ yếu là chó đực trên

1 tuổi (trích Lê Huỳnh Thanh Phương, 2001)

Theo Vũ Đạt và Lê Huỳnh Thanh Phương (1999), chó ở các địa phương

vùng phụ cận Hà Nội cũng dương tính Leptospira và các serovar nhiễm chủ yếu là L bataviae, L canicola, L gryppotyphosa và L icterohaemorrhagiae Giống chó ngoại có tỷ lệ nhiễm Leptospira cao hơn giống chó Việt Nam (chó

nội) và chó đực có nhiễm cao hơn chó cái Đến năm 2001, Lê Huỳnh Thanh

Phương đã nghiên cứu tình hình nhiễm Leptospira trên chó ở một số địa

phương phía Bắc Việt Nam, cho thấy chó nuôi ở vùng chiêm trũng (Nam Định

và Hải Dương) có tỷ lệ nhiễm cao nhất so với vùng trung du và miền núi (HàTây, Phú Thọ và Vĩnh Phúc) và thành phố và phụ cận (Hà Nội và Hải Phòng)

Các serogroup chiếm chủ yếu là L canicola, L bataviae, L gryppotyphosa và

L icterohaemorrhagiae.

Sau đó Hoàng Mạnh Lâm (2002), khảo sát ở khu vực Tây Nguyên

(ĐakLak), xác định chuột nhiễm Leptospira cao nhất kế đến chó và người Với 4 serovar mới công bố lần đầu ở Việt Nam trên chuột là L cellendoni, L.

panama, L sejroe và L semaranga Ở chó có 3 serovar mới phát hiện là L pyrogenes, L mini và L javanica và trên người với 4 serovar mới phát hiện

là L panama, L sejroe, L tarassovi và L semaranga.

Wagenaar et al (2004) nghiên cứu sự hiện diện của kháng thể IgM chống lại Leptospira trên người ở tỉnh Bình Thuận, là một tỉnh nằm ở phía nam của

Việt Nam có nhiều điều kiện thuận lợi cho Leptospira bùng phát Kết quả có35% mẫu huyết thanh của những người khỏe mạnh và 40% mẫu huyết thanhcủa những người bị sốt đã có sự hiện diện của kháng thể IgM chống

Leptospira.

Ở khu vực đồng bằng sông Cửu Long, Lý Thị Liên Khai (2012), điều tra

về tình hình nhiễm khuẩn Leptospira trên đàn bò sữa, trên chó và trên chuột

tại Công ty cổ phần thủy sản sông Hậu Cần Thơ, kết quả cho thấy tỷ lệ nhiễm

Leptospira trên chuột cao nhất, kế đến là chó và đàn bò sữa là thấp nhất Tỷ lệ

nhiễm này không phụ thuộc vào lứa tuổi và giới tính, với 6 serogroup phổ biến

L bataviae, L ballum, L pyrogenes, L icterohaemorrhagiae, L sejroe và L tarassovi Chuột có thể là nguồn làm lây nhiễm Leptospira cho bò và chó

trong trại bò sữa với hệ số tương quan rất chặt chẽ.

Hoàng Kim Loan et al (2013) điều tra tình hình nhiễm Leptospira trên

người từ 2004 đến 2013 và trên động vật gặm nhấm từ 2005 đến 2013 ở MiềnNam Việt Nam Dựa trên sự chỉ định của bác sĩ lâm sàng, kết quả có 4,4%

người dương tính với Leptospira với các serogroup chiếm tỷ lệ nhiễm cao là L.

bataviae, L hurstbridge, L canicola, L cynopterie và L gryppotyphosa và

động vật gặm nhấm là 7,14% với các serogroup: L bataviae, L hurstbridge,

L pantoc và L javanica.

Năm 2014, ở huyện Châu Thành A, tỉnh Hậu Giang có một trường hợp

dương tính với Leptospira, với những triệu chứng ban đầu lúc nhập viện vàng

da toàn thân, vàng mắt, lừ đừ, đau cơ và phù hai chi dưới Hai ngày trước khinhập viện, bệnh nhân có triệu chứng sốt nhẹ, ăn uống kém, nôn ói và tiêuchảy Đây là trường hợp đầu tiên ở vùng Đồng Bằng Sông Cửu Long, con

người nhiễm Leptospira, nguyên nhân có thể từ nước tiểu chuột Do đây là nơi

thường xuyên bị ngập nước và người dân có thói quen đi chân đất nên dễ có

nguy cơ nhiễm xoắn khuẩn Leptospira từ môi trường ẩm ướt hay tiếp xúc gần với súc vật như heo, chuột (https://tuoitre.vn/nhiem-xoan-khuan-Leptospira-

tu-nuoc-tieu-chuot-644155.htm)

Tóm lại, ở Việt Nam bệnh Leptospirosis trên chó rất ít được nghiên cứu

và chẩn đoán chính xác do bệnh không có triệu chứng đặc trưng, đặc biệt bệnhlây truyền cho người cho nên khi bệnh cần phải được quan tâm và còn nhiều

vấn đề chưa được giải quyết như: (1) tình hình nhiễm Leptospira trên chó và chuột, (2) phát hiện xoắn khuẩn Leptospira từ nước tiểu và (3) những biến đổi bệnh lý trên chó bệnh Leptospirosis Nghiên cứu này sẽ góp phần giải quyết

các câu hỏi trên, tập trung chủ yếu ở thành phố Cần Thơ và một số tỉnh củaĐồng Bằng Sông Cửu Long

2.7 Một số phương pháp chẩn đoán Leptospira

Leptospirosis là bệnh có nhiều triệu chứng lâm sàng và giống như bệnh

“cảm cúm", ở người bệnh Leptospirosis ít khi được chẩn đoán phân biệt trước

khi điều trị hoặc chẩn đoán nhầm với các bệnh khác như hội chứng sốt của

một số bệnh như viêm màng não, bệnh cúm, bệnh gan, bệnh do Hantavirus

(Plank and Dean, 2000; Levett, 2001) Ở gia súc, hầu hết các trường hợp đềukhó chẩn đoán nếu chỉ dựa vào các dấu hiệu lâm sàng, do các triệu chứng của

bệnh Leptospirosis biểu hiện đặc trưng không rõ ràng (Adler et al., 2010) Do

đó, để chẩn đoán được bệnh Leptospirosis ở cả người và động vật phải được